Glioblastom-Induktion mittels SB-vermittelter Transposition: Eine Technik zur Generierung eines neuartigen Mausmodells unter Verwendung der Transposon-vermittelten Integration von SB-Plasmid in das Gehirn von Neugeborenen

Beginnen Sie damit, ein Röhrchen zu nehmen, das eine Mischung aus Plasmiden enthält. Das Dornröschen- oder SB-Transposon-Plasmid ist so konstruiert, dass es ein transponierbares Element trägt, das ein vom Menschen stammendes Glioblastom-induzierendes Onkogen umfasst, das zwischen zwei invertierten Wiederholungssequenzen eingebettet ist. Darüber hinaus enthält diese Mischung ein SB-Transposase-Plasmid, das ein Transposase-Enzym-exprimierendes Element aufweist.

Geben Sie nun ein geeignetes Transfektionsreagenz in das Röhrchen. Die Injektionsmischung wird in eine Spritze mit einer Mikronadel aspiriert. Befestigen Sie als Nächstes einen anästhesierten Mauswelpen in Bauchlage auf einem stereotaktischen Rahmen. Visualisieren Sie die Kopfregion des Welpen, um die Schädelnähte zu lokalisieren. Positionieren Sie die Mikronadel über den Schädelnähten.

Injizieren Sie die Mischung in den Seitenventrikel - einen Hohlraum im Hirnparenchym. Anschließend wird die Lösung in das Hirnparenchym dispergiert, wo die Transfektionsreagenzmoleküle den Eintritt von Plasmiden in die Zellen erleichtern. Sobald sich das Transposase-Plasmid in der Zelle befindet, exprimiert es die Transposase-Enzymmoleküle, die