Ex-vivo-Elektroporation von Kleinhirnschnitten von Kükenembryonen: Eine Methode zur Einführung von Plasmid-DNA, die für grün fluoreszierendes Protein kodiert, um die Entwicklung granularer Zellen zu visualisieren

Kleinhirn-Körnerzellen sind die am häufigsten vorkommende Art von Neuronen im Gehirn. Die äußere granulare Schicht, EGL, besteht ausschließlich aus granularen Zellvorläufern, GCPs, die sich differenzieren und nach innen wandern, um die innere granulare Schicht, IGL, zu bilden.

Um die Entwicklung granularer Zellen zu visualisieren, bereiten Sie eine Elektroporationskammer vor, indem Sie eine Anode an der Basis einer Petrischale anbringen. Geben Sie Kulturmedium hinzu, um die Elektrode abzudecken. Platzieren Sie nun einen Kultureinsatz auf der mediumbedeckten Elektrode. Übertragen Sie die Kleinhirnscheiben des Hühnerembryos in sagittaler Ausrichtung auf den Kultureinsatz.

Die Sagittalebene ermöglicht es, die Zielschicht-EGL gegen verschiedene Kleinhirnschichten zu identifizieren. Geben Sie eine viskose Farbstofflösung, die eine GFP-Plasmid-DNA über EGL enthält. Die GFP-Plasmid-DNA kodiert für ein grün fluoreszierendes Protein, das sich homogen im Zellzytoplasma verteilt und die Bildgebung lebender Zellen ermöglicht.

Platzieren Sie anschließend eine Kathode im Medium in der Nähe von EGL, jedoch nicht direkt auf dem Gewebe. Wenden Sie dann mehrere elektrische Impulse an verschiedene EG