Isolierung von Rückenmarksneuronen: Ein Dichtegradientenverfahren zur Isolierung von neonatalen Rückenmarksneuronen für In-vitro-Studien
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Krebsforschung
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[HIER FIGURE1 EINFÜGEN]
Abbildung 1: Präparierung der Wirbelsäule und Freigabe des Rückenmarks einer 3 Tage alten neugeborenen Maus. Der Pfeil in (a) zeigt auf das kaudale Ende der Wirbelsäule, wo eine Nadel eingeführt wird, um das Rückenmark zu lösen. Ein gelöstes Rückenmark (b) ist in PBS subgetaucht dargestellt.
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Abbildung 2: Dichtegradient mit Zellen, die nach der Zentrifugation hinzugefügt werde
Um Neuronen des Rückenmarks zu isolieren, nehmen Sie eine Wirbelsäule einer neugeborenen Maus und legen Sie sie auf eine Petrischale. Spülen Sie die Wirbelsäule mit Kochsalzlösungspuffer, um das Rückenmark zu lösen. Übertragen Sie das Rückenmark in ein kaltes neuronales Medium, um das Überleben der Zellen zu fördern.
Als nächstes hacken Sie das Rückenmark und übertragen die Fragmente in ein Röhrchen mit frischem neuronalem Medium. Inkubieren Sie das Röhrchen zur Akklimatisierung in einem Shaker-Wasserbad. Nach der Inkubation das verbrauchte Medium entfernen und das Aufschlussmedium hinzufügen. Verdauungsenzyme spalten die Gewebematrix, um die Zellen aufzulockern.
Führen Sie die Verreibung durch, indem Sie die Gewebefragmente in die Pipette aspirieren und die Komponenten schnell entleeren, wodurch einzelne Zellen in Suspension freigesetzt werden. Übertragen Sie dann diese Suspension in ein Röhrchen, das das Dichtegradientenmedium und die Zentrifuge enthält.
Nach der Zentrifugation enthält die oberflächliche Schicht des Röhrchens Gewebereste. Die erste Schicht umfasst Oligodendrozyten und Astrozyten. Die zweite und dritte Schicht bestehen aus Neuronen, wobei die dritte Schicht die hö
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