Bead Loading zum Einbringen von Nukleinsäuren in adhärente kultivierte Zellen: Eine Technik zum Laden von fluoreszierenden Protein-kodierenden Plasmiden in adhärente Säugetierzellen

Beginnen Sie mit einer Kultur von anhaftenden Säugetierzellen in einer Kulturplatte. Übertragen Sie sterilisierte, alkalibehandelte, mikrometergroße Glasperlen in die Kammer einer kundenspezifischen Bead-Loader-Vorrichtung. Decken Sie die Kammeröffnung mit einem Netz mit Öffnungen in optimaler Größe ab, damit die Perlen während des Ladevorgangs passieren können. Sichern Sie das Netz mit einer Bildgebungskammer.

Entfernen Sie das Medium von der Platte. Pipettieren Sie eine Suspension von fluoreszierender Reporterprotein-kodierender Plasmid-DNA in die Platte, um sie gleichmäßig über die Zellen zu verteilen. Mit dem Bead-Loader-Gerät wird eine Monoschicht aus Glasperlen vorsichtig auf die Zellen verteilt. Klopfen Sie mit passender Kraft kurz auf die Kulturplatte.

Die Glaskügelchen rollen kurz auf die adhärenten Zellen, während sie durch die Alkalibehandlung weniger an den Zellen haften. Der Aufprall von Kollisionen zwischen Kügelchen und Zellen überträgt eine angemessene Spannung, die zu lokalisierten Störungen in den Zellmembranen führt. Diese gebildeten transienten Poren von kleinen Abmessungen erleichtern die Aufnahme von Plasmid-DNA in die Zellen und verhindern gleichzeitig das Ei