Rekombinante Adeno-assoziierte virusbasierte Genverabgabung: Eine Technik für die transgene Verabreichung und kardiospezifische Expression im Nagetiermodell

Das rekombinante Adeno-assoziierte Virus, rAAV, ist ein kleines, einzelsträngiges DNA-Virus, das gentechnisch so verändert wurde, dass es auf einen bestimmten Zelltyp abzielt und seine genetische Fracht zur Genexpression in den Zellkern der Wirtszelle transportiert.

Beginnen Sie damit, ein kryo-anästhesiertes Mausjunges zurückzuhalten. Sterilisieren Sie die Rückenhaut und injizieren Sie subkutan den rAAV-Vektor, der das gewünschte Transgen entlang eines herzspezifischen Promotors trägt. Der Vektor wird in das Gefäßsystem aufgenommen und erreicht entfernte Organe, einschließlich des Herzens.

Hier heftet sich das rekombinante Virus an die Oberfläche des Kardiomyozyten und wird über Endozytose in ein Endosom internalisiert. Innerhalb des Endosoms zerlegt sich das virale Kapsid teilweise und legt die viralen lytischen Proteine frei. Dieses Protein induziert Poren in der endosomalen Membran, durch die der Vektor in das Zytoplasma entweicht.

Der Vektor wandert durch zytoplasmatische Mikrotubuli und tritt durch die Kernpore ein. Im Zellkern zerlegt sich das virale Kapsid, um sein Genom freizusetzen. Die einzelsträngige DNA, die das Zielgen trägt, wird dann in doppelsträngige DNA umgewande