Mikroinjektion von Mückenembryonen: Eine Technik zur Verabreichung exogener DNA in das Eigelb des Embryos von Anopheles gambiae, um Keimbahnmutationen zu erzeugen

Um exogene DNA in den Anopheles-Embryo zu mikroinjizieren, nehmen Sie die gewünschte Anzahl frisch geernteter Mückeneier vor dem Blastoderm. In diesem frühen Entwicklungsstadium enthält die Eizelle Zellkerne, ohne zelluläre Strukturen zu bilden.

Legen Sie die bootsförmigen Eier an den Rand eines feuchten Löschpapiers, das sich auf der Oberfläche eines Objektträgers befindet. Dieser Schritt gewährleistet eine ausreichende Hydratation des Embryos, um die Injektion in den nachfolgenden Schritten zu erleichtern. Richten Sie die Eier nebeneinander aus, wobei die Bauchfläche nach außen zeigt.

Nehmen Sie nun eine Mikroinjektionsnadel mit schmaler Bohrung, die die gewünschte Plasmidlösung enthält. Positionieren Sie die Nadel mit einem Präpariermikroskop in der Nähe des hinteren Pols der Eizelle - einer Stelle für die Keimzellvorläufer. Führen Sie die Nadel in einem geeigneten Winkel ein, in dem sie das Exochorion - die äußere Schicht - und das Endochorion - eine innere Schicht der Eierschale - durchbohrt und schließlich den Embryo erreicht.

Injizieren Sie die Plasmidmischung in das Eigelb des Embryos. Ziehen Sie die Nadel vorsichtig zurück und lassen Sie die Eier unter geeigneten Bedingung