Lasergestützte lentivirale Genabgabe: Eine Technik zur Permeabilisierung von befruchteten Eiern von Mäusen, um die lentivirale Genübertragung zu erleichtern

Die lasergestützte lentivirale Genverabreichung ist eine Technik, um ein Transgen in ein Wirtssystem zu übertragen.

Um transgene Mäuse herzustellen, beginnen Sie mit isolierten von Mäusen befruchteten Eiern in einem geeigneten Nährmedium. Stellen Sie die befruchtete Ei-haltige Kulturschale auf einen Mikroskoptisch, auf dem ein Lasergerät vorinstalliert und an eine Steuerungssoftware angeschlossen ist. Bei geeigneter Vergrößerung beobachten.

Befruchtete Eizellen sind von Zona pellucida umgeben, einer schützenden Glykoproteinschicht, die lentivirale Partikel abschließt. Um diese Barriere zu durchdringen, schalten Sie das Lasergerät ein und stellen Sie sicher, dass die Laser-LED über der Zona pellucida sichtbar ist. Zünden Sie den Laser mit der Steuerungssoftware ab. Passen Sie die Brenndauer an den gewünschten Perforationsdurchmesser an.

Lege die Eier zur Erholung in einen Inkubator. Nach kurzer Inkubation werden die Eier entnommen und Lentiviruspartikel hinzugefügt, die das Gen von Interesse und einen fluoreszierenden, selektierbaren Marker tragen.

Wenn die Zona pellucida perforiert ist, diffundiert das Lentivirus leicht zur Eizellmembran und gelangt über die Endozytose in die Eizel