Biolistisch-vermittelter Gentransfer: Eine Technik zur Verabreichung von Genen von Interesse in Zielzellen über eine biolistische Genkanone

Beginnen Sie mit einem optimalen Volumen an Goldkügelchen - biologisch inerten und ungiftigen Gentransportvehikeln - in einem Mikrozentrifugenröhrchen. Fügen Sie dann kationische Wirkstoffe - Spermidin und Calciumchlorid - hinzu, gefolgt von den gewünschten DNA-Fragmenten zu den Goldkügelchen. Bewegen Sie das Röhrchen vorsichtig und inkubieren Sie.

Calciumchlorid bindet an die DNA-Fragmente und erleichtert deren Beschichtung über Goldkügelchen über Spermidinreste. Als nächstes zentrifugieren und das Lösungsmittel entfernen. Suspendieren Sie die DNA-beschichteten Kügelchen in Ethanol. Pipettieren Sie die Kügelchen vorsichtig auf einer sterilen Makroträgerscheibe. Trocknen lassen.

Richten Sie eine biolistische Genkanone ein, die aus einer Heliumgasbeschleunigungsröhre und einer Beschusskammer mit einer Berstscheibe und einem Stoppschirm in ihren jeweiligen Schlitzen besteht. Als nächstes kehren Sie die Makroträgerscheibe um und laden sie unterhalb der Berstscheibe.

Danach werden die kultivierten Zielwirtszellen in ein geeignetes festes Medium gelegt, das mit Sorbit - einem osmotischen Stabilisator zur Verbesserung der Transformationseffizienz - versetzt wird. Sobald das Setup fertig