Kapselbasierte Negativfärbung von Virusproben auf TEM-Gittern: Eine Schwermetallfärbetechnik zur Visualisierung der Ultrastruktur behüllter Viren
JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Biologische Techniken
0 Aufrufe • 3:50 Min. • July 8th, 2025
Für eine negative Färbung von behüllten Viren beginnen Sie mit der gewünschten Virussuspension. Inkubieren Sie die Viren mit Glutaraldehyd, einem chemischen Fixiermittel. Bei der Penetration vernetzt Glutaraldehyd die viralen Proteine und Nukleinsäuren, inaktiviert Viren unter Beibehaltung der Morphologie und erleichtert so einen sicheren Umgang mit dem Virus. Füllen Sie diese Mischung in eine Multiwell-Platte.
Befestigen Sie die Transmissionselektronenmikroskopie, TEM, Gitter mit Kapsel über einen Koppler an einer Pipette. Aspirieren Sie mit der Pipette das Virus-Fixiermittel-Gemisch in die Kapsel. Inkubieren Sie die Pipettenanordnung, damit Viren an den Gitteroberflächen adsorbieren können.
Die Mischung entfernen. Waschen Sie die Kapsel und entfernen Sie nicht anhaftende Viren und Fixiermittel. Pipettieren Sie eine Lösung von Uranylacetat, einem Fleck auf Schwermetallbasis, in die Kapsel. Inkubieren, damit der Fleck mit den Viren in Kontakt kommen kann.
Uranyl-Ionen binden an spezifische Membranglykoproteine und Phospholipide auf Virusoberflächen. Ionen können Viren durchdringen und an die Nukleokapsidproteine binden, die das Genom umschließen. Diese Bindung induziert die Aggrega
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