Methylenblau-Färbung zur Beurteilung der Bildung metastasierender Kolonien in vitro: Ein Färbeverfahren zur Beurteilung der Metastasierung durch Quantifizierung geernteter Krebszellen aus einem Krebsmausmodell

Während der Krebsmetastasierung wandern Tumorzellen aus einem Primärtumor durch das Kreislaufsystem, extravasieren in entfernte Organe und etablieren Sekundärtumoren.

Um die Lungenmetastasierung in einem Brustkrebs-Mausmodell zu bewerten, dem 4T1-Zellen, hochmetastasierende Brustkrebszellen, injiziert wurden, wird eine Zellsuspension hergestellt, die 4T1-Zellen enthält, die aus der entnommenen Lunge isoliert wurden. Zentrifugieren Sie die Suspension und resuspendieren Sie die Zellen in Medien, die 6-Thioguanin, 6-TG - ein Guanin-Analogon - enthalten. Die Zellsuspension in einer Kulturplatte aussäen.

6TG gelangt in normale Zellen, wo es durch ein spezifisches Transferase-Enzym in 6-TG-Nukleotid, ein toxisches Nukleotid, umgewandelt wird. Diese zytotoxischen Nukleotide werden in die DNA eingebaut, verursachen DNA-Schäden und eliminieren selektiv Zellen aus der Kultur. 4T1-Zellen haben eine verminderte Fähigkeit, toxische Nukleotide zu bilden, was ihr Überleben und ihre Adhärenz an der Platte erleichtert. Abhängig von der Proliferationsfähigkeit der Zellen bilden sie Kolonien.

Behandeln Sie die Zellen mit Methanol. Methanol permeabilisiert die Zellen und denaturiert die zellulären Pro