Giemsa-Färbung für den Koloniebildungsassay: Ein In-vitro-Färbeverfahren zur Beurteilung der proliferativen Fähigkeit mesenchymaler Stammzellen

Assays zur Koloniebildung messen die proliferative Fähigkeit von Zellen, zu Kolonien heranzuwachsen.

Zuerst wird aus dem Knochenmark gewonnene Zellsuspension aus Samenknochenmark, die Erythrozyten und mononukleäre Zellen, einschließlich mesenchymaler Stammzellen oder MSCs, umfasst, in Medien auf einer Kulturplatte inkubiert und inkubiert. MSCs haften am Plattenboden, während Erythrozyten und mononukleäre Zellen in Suspension bleiben und verworfen werden.

Fügen Sie frische Medien hinzu, die Wachstumsfaktoren enthalten, um das Überleben von MSC zu unterstützen. Abhängig von ihrem individuellen proliferativen Potenzial vermehren sich MSCs zu Kolonien.

Behandeln Sie anschließend die Völker mit Methanol. Methanol permeabilisiert die Zellen, verdrängt Wasser aus der intrazellulären Umgebung und denaturiert Proteine, wodurch die Zellarchitektur erhalten bleibt.

Inkubieren Sie die fixierten Kolonien mit Giemsa-Färbelösung - einer Mischung aus Oxidationsprodukten von Methylenblau, hauptsächlich Azurblau B, einem basischen Farbstoff, und Eosin Y, einem sauren Farbstoff. Bei der Diffusion in die Zellen binden positiv geladene Azur-B-Dimere durch Interkalation an negativ geladene DNA im Zellke