Zweidimensionale semi-denaturierende Agarose-Gelelektrophorese: Eine Technik zur Trennung polymorpher Amyloidfasern basierend auf Größenheterogenität

Amyloidfasern sind Aggregate aus fehlgefalteten Proteinen, die eine Größenheterogenität aufweisen. Diese Fasern, die gegen anionische Detergenzien wie SDS resistent sind, können mit Hilfe einer zweidimensionalen halbdenaturierenden Agarosegelelektrophorese analysiert werden.

Nehmen Sie zu Beginn ein vormontiertes, großporiges Agarose-Gel, das SDS enthält. Die hohe Porosität ermöglicht die Trennung von intakten Fasern während des Laufs. Überlagern Sie das Gel mit einem Laufpuffer, der SDS enthält.

Laden Sie ein Zelllysat, das Amyloidfasern enthält, in das Gel. Das Vorhandensein von SDS und das Fehlen eines Probenerhitzungsschritts schafft halbdenaturierende Bedingungen, unter denen das Reinigungsmittel an hochresistente Amyloide bindet und den intakten Fasern eine gleichmäßige negative Ladung verleiht.

Lassen Sie das Gel in der ersten Dimension mit der entsprechenden Spannung laufen. Das elektrische Feld bewirkt die Wanderung von negativ geladenen Amyloiden in Richtung der positiv geladenen Anode.

Während des Laufs wandern kleinere Fasern im Vergleich zu größeren schnell und bilden ein schmierartiges Bandenmuster, das auf Größenheterogenität hinweist.

Drehen Sie das Gel nach Fertigs