Name: Windowing Chicken Eggs für Developmental Studies (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 1 s
Description: Lernen Sie eine optimierte Methode zur Vorbereitung von Hühnereiern für neurobiologische Experimente. Diese Technik ermöglicht längere Überlebenszeiten des Embryos und erleichtert Zellfate-Mapping-Studien.

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1. Entfernen Sie Eier aus Inkubator <ol><li> Halten bei 37 ° C bei einer relativen Luftfeuchtigkeit von über 60% gesetzt. </li><li> Entfernen Sie die Eier, Eier wiederum 90 °, so dass die große Basis horizontal liegt. </li></ol> 2. Swab Eier zu sterilisieren <ol><li> Tränken Sie einen Stapel von nicht-steriler Gaze mit 70% Ethanol. </li><li> Verwenden Sie zwei vor drei Stücke Tupfer bis zu 5 Eier. Verwerfen, wenn die Gaze verschmutzt ist. </li></ol> 3. Vorbereitung Eiweiß Entnahmestelle <ol><li> Cut und setzen Sie eine 1 &quot;x 1&quot; Stück von 3M Kunststoffband nur von der Basis nach links, um den Bereich, wo die Albumin durchgeführt wird, gezogen zu schützen. </li></ol> 4. Entfernung von Eiweiß <ol><li> Verwenden Sie die Spitze einer Schere ein kleines Loch in der Mitte des Bandes machen. </li><li> Mit einem 10-ml-Spritze mit einer 18-Gauge-, 1-Zoll-Nadel langsam bohren die Nadel durch das Loch von der Schere gemacht. </li><li> Fahren Sie die Nadel in einem 45 ° C Winkel in Richtung der Unterseite des Eies. </li><li> Kippen Sie die Nadel gegen die Mitte und erarbeiten von 3 bis 4 ml Albumin. </li></ol> 5. Windowing <ol><li> Schneiden Sie ein 3 &quot;x 3&quot; Stück Plastik Band und ziehen Sie es auf die Spitze des Eis fit. Verlängern Sie die Ecken des Quadrates um die abgerundeten Enden der horizontalen Fläche der Eier, man aufpassen, nicht zu ziehen zu hart. Ziehen Sie das Band so, dass es eng an der Oberfläche der Eier ohne Falten. </li><li> Mit ein paar scharfen geraden 4 &quot;dissection Scheren, Torsion ein Loch in der unteren Mitte des Gebietes, wo das Band gelegt wurde. Langsam Führer der unteren Klinge der Schere in die Eizelle wird unbedingt die Tipps halten gegen die Innenseite des die Schale. Direkte das Blatt gegen die Basis und langsam beginnen, um die Schale geschnitten. entgegen dem Uhrzeigersinn um den bis kurz vor Erreichen der Spitze entfernt. Nehmen Sie die Schere und wiederholen Sie gehen in die entgegengesetzte Richtung, bis nur noch ein kleines Stück des Ei haften bleibt. Überprüfen Sie, ob das Ei befruchtet wird. Shut the window. </li></ol> 6. Closing, Wiedereröffnung und Abdichtung des Eies. <ol><li> Cut über ein 2-3 &quot;lang und 1 / 2&quot; breite Plastikband und schloss das Fenster so wieder passt in das Loch, das geschnitten wurde. Nehmen wir ein anderes 1 x 1 &quot;Stück Klebeband und Siegel das Loch, aus dem das Ei abgelassen wurde. Verwenden einer Pinzette, um das Ei zu Manipulationen zu tun öffnen. Wenn Sie bereit sind, um die Eier in den Inkubator zurück sind, schneiden Sie ein Stück der Band, das groß genug, um das Fenster zu versiegeln und decken die gesamte horizontale Fläche des Eies ist. </li></ol>

<ol><li>Cramer, K. S., Fraser, S. E., Rubel, E. W. Dev Biol. 224, 138-151 (2000).</li>
<li>Cramer, K. S., Bermingham-McDonogh, O., Krull, C. E., Rubel, E. W. Dev Biol. 269, 26-35 (2004).</li>
<li>Cramer, K. S., Cerretti, D. P., Siddiqui, S. A. Dev Biol. 295, 76-89 (2006).</li>
<li>Huffman, K. J., Cramer, K. S. Dev Neurobiol. 67, 1655-1668 (2007).</li>
<li>Krull, C. E. Dev Dyn. 229, 433-439 (2004).</li>
<li>Gerlach-Bank, L. M., Cleveland, A. R., Barald, K. F. Dev Dyn. 229, 219-230 (2004).</li>
</ol>

Diese Methode ermöglicht eine lange Überlebenszeit folgenden experimentellen Manipulationen. Zum Beispiel erlaubt Farbstoff-Kennzeichnung Studien Überleben E10 oder später in ein Schicksal, Mapping-Studie (1). Darüber hinaus hat es für in ovo Elektroporation Studien, die Veränderung der Genexpression und Entwicklung erforderlich, um zu späteren Entwicklungsstadien (2-6) weiter verfahren werden eingesetzt. Diese Fenstertechnik können in Kombination mit jedem Verfahren, das Überleben nach Manipulationen am Embryo braucht eingesetzt werden.

<table><tbody><tr><td>Rotierender Inkubator</td><td> </td><td>Profi</td><td></td><td>Auf 37&amp;deg; Celsius mit relativer Luftfeuchtigkeit über 60 % halten</td></tr><tr><td>70 % EtOH</td><td> </td><td></td><td></td><td> </td></tr><tr><td>Gaze</td><td> </td><td></td><td></td><td> </td></tr><tr><td>3M-Klebeband aus Kunststoff</td><td> </td><td></td><td></td><td> </td></tr><tr><td>10-cc-Spritze</td><td> </td><td></td><td></td><td>1/Sprung</td></tr><tr><td>18G-Nadeln</td><td> </td><td></td><td></td><td>1&amp;#189; Zoll lange Nadel, 1/Spritze</td></tr><tr><td>Präzisionsschere</td><td> </td><td></td><td></td><td>4&quot; scharfe gerade Klingen</td></tr><tr><td>Befruchtete Eier</td><td> </td><td></td><td></td><td> </td></tr></tbody></table>

windowing chicken eggs für developmental studies

Windowing Chicken Eggs for Developmental Studies

Das Studium der Entwicklung wurde stark durch die Verwendung des Hühnerembryo als experimentelles Modell unterstützt. Die leichte Zugänglichkeit des Embryos ist für Experimente erlaubt Zellanlagen verschiedene Möglichkeiten, einschließlich Küken Wachtel Chimären und Schwerpunkte Farbstoffmarkierung Karte. Darüber hinaus ermöglicht es der molekularen Störungen von mehreren Arten, darunter Vermittlung von Protein-beschichteten Beads und Einführung von Plasmid-DNA mit in ovo Elektroporation. Diese Experimente haben wichtige Daten über die Entwicklung des zentralen und peripheren Nervensystems ergab. Für viele dieser Studien ist es notwendig, die Eierschale öffnen und wieder ohne Störung des Embryos Wachstum. Der Embryo kann in aufeinanderfolgenden Entwicklungsstadien durch erneutes Öffnen der Eischale untersucht werden. Es gibt zwar mehrere ausgezeichnete Methoden für die Öffnung der Hühnereier, die in diesem Artikel werden wir zeigen, eine Methode, die für lange Überlebenszeiten optimiert wurde. Bei dieser Methode liegt das Ei auf seiner Seite und ein kleines Fenster in die Schale geschnitten. Nach dem experimentellen Verfahren wird die Shell benutzt, um das Ei für die Dauer ihrer Entwicklung zu decken. Klare Plastikband über der Eierschale schützt den Embryo und halten die Feuchtigkeit während der Rest der Inkubationszeit. Diese Methode wurde Anfang an zwei Tagen der Inkubation eingesetzt und ermöglichte das Überleben durch ausgereifte embryonalen Alters.

Die leichte Zugänglichkeit des Embryos ist für Experimente erlaubt Zellanlagen verschiedene Möglichkeiten, einschließlich Küken Wachtel Chimären und Schwerpunkte Farbstoffmarkierung Karte. In diesem Artikel zeigen wir ein Ei Herstellungsmethode, die für längere Überlebenszeiten optimiert wurde.

Windowing Chicken Eggs für Developmental Studies

Die Untersuchung der Entwicklung wurde durch die Verwendung des Hühnerembryos als experimentelles Modell erheblich unterstützt. Die leichte Zugänglichkeit des Embryos hat ...

Willkommen im Kramer-Labor. Ich bin Matt Korn, Abteilung für Neurobiologie und Verhalten an der University of California Irvine. Heute zeige ich Ihnen, wie man Hühnereier für verschiedene Manipulationen vorbereitet, einschließlich der Platzierung von Kügelchen, der Injektion von Farbstoffen oder der Untersuchung im Ei.Ohne weiteres Zögern wollen wir also beginnen. In Ordnung, wir werden nun fortfahren und das Ei reinigen. Der Grund dafür ist, dass sich viele Substanzen im Inkubator anhaften können.Wir werden dies mit Klebeband versiegeln. Wir möchten vermeiden, dass kleine Partikel in den Bereich gelangen, in dem das Fenster angebracht wird, da dies die Eizelle erreichen und die Wahrscheinlichkeit erhöhen könnte, dass der Embryo stirbt, bevor wir ihn entnehmen. Wie Sie aus dem Inkubator gesehen haben, liegen die Eier mit der größeren Seite nach oben.Was wir nun tun werden, ist, das Ei zur Seite zu drehen. Dies hat zwei Vorteile: Erstens wird sich das Fenster genau hier befinden, und zweitens muss der Embryo an die Oberseite aufsteigen, damit wir ihn gegebenenfalls manipulieren können.Ich werde nun einige Eier aus dem Rack, das im Inkubator stand, in einen Papp-Eierhalter umsetzen.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Ein Ansatz zur Analyse von Migration und schließlich das Schicksal der aviären Neuralleistenzellen in Wachtel-Küken chimären Embryos beschrieben wird. Diese Methode ist eine einfache und unkomplizierte Technik zum Aufspüren Neuralleistenzellen während der Migration und Differenzierung, die sonst schwer zu unmanipulierten innerhalb eines Hühnerembryo zu unterscheiden sind.

Die Analyse der Neuralleiste Migration und Differenzierung von Cross-Spezies Transplantation

In diesem Video beschreiben wir eine Technik, um die Eierschale eines befruchteten Hühnereis zu öffnen, um seine chorioallantoische Membran oder CAM freizulegen, die ein Netzwerk von verzweigten Blutgefäßen trägt. Das freiliegende CAM kann für die Modellierung von In-Ovo-Tumoren verwendet werden.

Egg Windowing: Eine Methode zum Öffnen befruchteter Hühnereischalen, um das Gefäßsystem der chorioallantoischen Membran freizulegen

Den Hühnerembryo während der Entwicklung zu betrachten und darauf zuzugreifen, kann eine Herausforderung sein. Wir haben eine Ex-Ovo-Methode entwickelt, die einfach und kostengünstig ist und problemlos in einem Klassenzimmer oder in der Forschung eingesetzt werden kann. Diese Methode ermöglicht den Zugang zum Embryo bis in die späten Stadien der Embryonalentwicklung (HH 40).

Optimierte Ex-ovo Züchtung von Hühnerembryonen zu fortgeschrittenen Entwicklungsstadium

Dieses Protokoll beschreibt drei Methoden zur Gewinnung und Verwendung von 5 bis 8 Tage alten Hühnerembryonen und ihrer Chorioallanto-Membran (CAM) als In-vivo-Modell zur Untersuchung der kontrastverstärkten Ultraschallbildgebung und der Mikroblasen-vermittelten Wirkstoffabgabe.

Die Herstellung von Hühner-Ex-Ovo-Embryonen und chorioallantoischen Membrangefäßen als In-vivo-Modell für kontrastmittelverstärkte Ultraschallbildgebung und Mikroblasen-vermittelte Arzneimittelabgabestudien

Dies ist eine effektive Methode, um nach Suppressoren oder Treibern von Krebsmetastasen zu suchen. Zellen, die mit einer Expressionsbibliothek transduziert werden, werden in das Gefäßsystem der Chorioallanto-Membran des Huhns injiziert, um metastatische Kolonien zu bilden. Kolonien mit verminderter oder erhöhter Invasivität werden herausgeschnitten, erweitert, neu injektiert, um ihren Phänotyp zu bestätigen, und schließlich mit Hochdurchsatzsequenzierung analysiert.

Entdeckung metastasierender Regulatoren mit einem schnellen und quantitativen intravitalen Chick Chorioallantoic Membrane Model

Hühnerembryonen werden als klassisches Entwicklungsmodell in unserem Labor verwendet, um Entwicklungskardiotoxizitäten nach Exposition gegenüber verschiedenen Umweltkontaminanten zu bewerten. Expositionsmethoden und morphologische/funktionelle Bewertungsmethoden werden in diesem Manuskript beschrieben.

Verwendung von Hühnerembryon als leistungsfähiges Werkzeug bei der Beurteilung von Entwicklungskardiotoxizitäten

Es wurde eine robuste Methodik für die Durchführung von Forschungsversuchen im Bereich der Ovo-Fütterung entwickelt, bei denen nicht bebrütete kommerzielle Masthähncheneier verwendet werden, um die Fähigkeit natürlicher und synthetischer Verbindungen, in diesem Fall Nicotinamid-Ribosid, zu testen, die Muskelentwicklung und das Muskelwachstum zu beeinflussen.

In Ovo Fütterung von kommerziellen Masthähncheneiern: eine genaue und reproduzierbare Methode, um die Muskelentwicklung und das Muskelwachstum zu beeinflussen

Der durchnässte Perlenassay beinhaltet die gezielte Abgabe von Testreagenzien zu jedem Entwicklungszeitpunkt, um die Regulation der Zelldifferenzierung und Morphogenese zu untersuchen. Es wird ein detailliertes Protokoll vorgestellt, das auf jedes Versuchstiermodell anwendbar ist, um drei verschiedene Arten von getränkten Perlen herzustellen und diese in die Zwischenziffer eines Hühnerembryos zu implantieren.

Analyse der Zelldifferenzierung, Morphogenese und Musterung während der Hühnerembryogenese mit dem Soaked-Bead-Assay

Wir haben Standardtechniken der auditiven Hirnstammreaktion (ABR) verwendet und sie auf Junghühner angewendet, ein frühreifes Vogelmodell für die auditive Funktion. Das Protokoll beschreibt die Tierpräparation und ABR-Erwerbstechniken im Detail, mit Schritten, die auf andere Vogel- oder Nagetiermodelle übertragen werden können.

Bewertung der auditiven Hirnstammreaktion bei Hühnerschlüpflingen

Das Küken ist ein kostengünstiger, zugänglicher und weit verbreiteter Modellorganismus für eine Vielzahl von Studien. Hier wird eine Reihe von Protokollen detailliert beschrieben, um die molekularen Mechanismen zu verstehen, die der Entwicklung und Regeneration des Vogelinnenohrs zugrunde liegen.

In Ovo und Ex Ovo Methoden zur Untersuchung der Entwicklung des Vogelinnenohrs

Lernen Sie eine optimierte Methode zur Vorbereitung von Hühnereiern für neurobiologische Experimente. Diese Technik ermöglicht längere Überlebenszeiten des Embryos und erleichtert Zellfate-Mapping-Studien.

Windowing Chicken Eggs für Developmental Studies

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