Windowing Chicken Eggs für Developmental Studies

Herzlich Willkommen im Kramer Lab. Ich bin Matt Korn, Abteilung für Neurobiologie und Verhalten an der University of California Irvine. Heute zeige ich Ihnen, wie Sie Hühnereier für eine Vielzahl von Manipulationen vorbereiten, einschließlich der Platzierung von Perlen, der Injektion von Farbstoffen oder der In-Ovo-Erkundung.

, ohne weitere Umschweife, fangen wir an. Okay, wir machen weiter und reinigen das Ei. Der Grund dafür ist, dass es viele Dinge gibt, die im Inkubator platziert werden könnten.

Wir werden das mit Klebeband versiegeln. Wir wollen nicht, dass kleine Stücke an der Stelle herumgelangen, an der das Fenster die Eizelle aufnimmt, und die Wahrscheinlichkeit erhöhen, dass der Embryo stirbt, wenn wir ihn herausnehmen wollen. Wenn man also aus dem Brutkasten sieht, sitzen die Eier mit der großen Seite nach oben.

Was wir also tun werden, ist, dass wir das Ei nehmen und es einfach zur Seite drehen. Und das wird zwei Dinge bewirken. Erstens, unser Fenster wird genau hier sein, und zweitens, der Embryo muss nach oben schweben, damit wir jede Art von Manipulation vornehmen können.

Also werde ich hier ein paar davon auslegen, von dem Gestell, das sich im Brutkasten befand, bis hin zu einem Eierhalter aus Pappe. Dies ist eigentlich das Stück, das in die Schachtel kommt, wenn die Eier geliefert werden. Für heute werden wir es also nur zum Halten der Eier verwenden.

Nun ist das Arrangement, liegt bei Ihnen. Ich mache es gerne so, weil ich jederzeit auf alle Eier zugreifen kann und keines von ihnen sich berührt. Für den Fall, dass ich eines finde, das locker ist, das einen Riss hat und es fallen lässt, haben sie alle irgendwie ein bisschen Abstand voneinander.

Also nehme ich hier meine Gaze und nehme einfach einen schönen Stapel wie diesen heraus und teile ihn in zwei Teile. Ich werde hier 70% Alkohol nehmen und ihn einfach auffüllen, bis ich spüre, wie der Boden feucht wird. Und das liegt daran, dass ich diesen ganzen Stapel verwenden werde, um alle Eier abzutupfen.

Also nehme ich einfach ein paar von der Spitze, mache weiter und mache wirklich die Spitze, aber im Grunde genommen komme ich hier fast um das ganze Ei herum. Und nachdem das erledigt ist, trocknet der Alkohol ziemlich schnell und dann können wir ihn mit Klebeband bekleben. Das Klebeband klebt gut und wenn ich ein Set fertig habe, ist das erste in der Regel trocken und wir können mit dem nächsten Schritt in unserer Eizubereitung fortfahren.

Also noch einmal, legen Sie es wieder in den Müll und wir sind bereit, zum nächsten Schritt überzugehen. Okay, jetzt, da alle unsere Eier mit dem Alkohol abgetupft wurden, können wir ein Abflussloch an der großen Seite des Eies machen, dem Boden des Eies. Und das wird es uns ermöglichen, etwas Albumin zu extrahieren, denn wenn wir das Albumin nicht extrahieren, sitzt der Embryo nicht richtig.

Wir können keine Manipulationen vornehmen. Das bedeutet also nur, dass ich eine Klinge nehme und dieses Plastikband nehme. Es ist ein bisschen elastisch, was großartig ist.

Es ermöglicht uns nicht nur, uns über ein Loch auszudehnen, wenn es etwas größer ist, als wir möchten, sondern wenn wir tatsächlich das gesamte Ei bedecken, müssen wir es dehnen. Der Bereich, in dem das Fenster sein wird, ist also vollständig abgedeckt. Also werde ich einfach weitermachen und das Stück so abschneiden und dann etwa einen Millimeter Streifen machen.

Und daraus kann ich dann etwa einen Millimeter quadratisches Stück Klebeband machen. Und dann werde ich einfach weitermachen und es direkt über dem Datum links neben dem Datum platzieren. Legen Sie es einfach genau dort hin und Sie können es sehen.

Es klebt sehr gut. Dann kann ich zu dem Streifen zurückkehren, den ich bereits gemacht habe, und einen weiteren Millimeter Stück Klebeband abschneiden. Und auch hier kannst du sie einfach links von der Zahl dort platzieren, die eigentlich die Oberseite des Eies ist.

Jetzt, da wir ihn zur Seite gedreht haben, ist er nach rechts. Und noch ein Stück hier. Jetzt trage ich keine Handschuhe mehr, weil das Tragen von Handschuhen dazu führt, dass dieses Klebeband an den Handschuhen klebt und ich mir die Hände gewaschen habe.

Ich mache mir zu diesem Zeitpunkt keine Sorgen, dass irgendetwas anderes den Wirkstoff kontaminiert. Also mache ich weiter und nehme eine Schere mit der scharfen Spitze. Ich gehe in die Mitte, wo ich das Klebeband platziert habe, und drehe es einfach gegen den Uhrzeigersinn, bis ich es fülle und nur ein wenig breche.

Und Sie werden sehen, dass da ein kleines Loch ist. Jetzt muss das Loch nicht sehr groß sein, denn sobald wir diese Spritze hineinbekommen, wird das Loch groß genug. Aber das ist so, dass wir nicht direkt mit einer Nadel hineingehen und versuchen, das Ei damit zu zerbrechen, denn das führt oft dazu, dass die ganze Seite des Eies auseinanderbricht.

Dann können wir das Ei nicht mehr verwenden. Okay, jetzt werde ich das Ei abtropfen lassen. Wir haben dieses schöne kleine Loch an der Seite und ich werde diese 10-Milliliter-Spritze und eine ziemlich große Nadel verwenden, um das Albumin zu extrahieren.

Jetzt will ich etwa drei oder vier Milliliter, definitiv mehr als drei, nicht viel mehr als viereinhalb oder fünf. Dies ermöglicht es unserem Embryo, der jetzt oben sitzt, ein wenig von der Schale wegzufallen. Und dann werden wir in der Lage sein, unsere Manipulationen vorzunehmen.

Indem ich also in einem 45-Grad-Winkel hineingehe, bin ich unter dem Eigelb. Und dann möchte ich es nur ein wenig nach rechts drehen, nur um mich dort hinunter zu schleichen, und man kann irgendwie spüren, wie die Nadelspitze gerade den Boden des Eies berührt. Und ich werde weitermachen und nur etwa drei oder vier extrahieren, und es kommt ziemlich gut heraus.

Ich werde das Albumin hier in meinen Hüfteimer geben und jetzt kann ich mit den anderen Eiern fortfahren. Okay, ich werde also weitermachen. Und Sie werden hier sehen, dass das Loch, das ich für die Entwässerung gemacht habe, etwas größer ist, als ich es gerne hätte, aber dass sich das als okay herausstellt.

Worüber ich mir Sorgen machen möchte, ist, dass ich, wenn ich die Nadel hineinstecke, sie nicht mehr knacke. Also werde ich weitermachen und das tun. Okay, ich kann schon sehen, dass das Ei einen kleinen Riss hat.

Jetzt sind kleine Risse in Ordnung, aber Sie müssen sich Sorgen machen, wenn sie sich auf eine andere Ebene des Eies erstrecken. Und in diesem Fall tut es das. Das sieht man an dem Loch.

Es erstreckt sich ziemlich bis nach oben. Und tatsächlich wird hier unser Fenster sitzen. Unglücklicherweise für dieses Ei müssen wir also gehen und dieses wegwerfen.

Und es ist nichts Besonderes, es wegzuwerfen. Sie müssen kein bestimmtes Protokoll oder ähnliches aufschreiben. Mach einfach weiter und lege es in den Mülleimer.

Wir verwenden diese schwarzen Mülleimer, um sie als tierische Abfälle zu kennzeichnen, aber abgesehen davon wurde sich bereits um sie gekümmert. Wir können zum nächsten Ei übergehen. Okay, jetzt, da wir alle unsere Eier abgelassen haben, können wir das Abflussloch abdecken.

Das ist wichtig, denn wenn wir das Innere des Inkubators nicht tun, können wir eine enorme Verdunstung des Rests des Albumins erreichen. Und dann ist ein trockenes Ei ein totes Ei. Wir machen also weiter und nehmen einfach ungefähr die gleiche Größe Klebeband und legen es über das Loch, und wir müssen uns keine Sorgen machen, wieder in dieses Loch zu gehen.

In einigen Fällen, wenn Sie versuchen möchten, mehr Albumin aus einem Ei abzulassen, fungiert dieses Loch nach dem Öffnen als eine Art versiegelter Bereich, in den Sie dann eine Nadel stecken können und Sie werden nicht viel Albumin verlieren. Okay, oder? Okay, jetzt machen wir weiter und decken die Eier mit einem schön großen Stück Klebeband ab.

Und ich vergleiche das ein bisschen so, als würde man ein Stück Klebeband über einen Luftballon kleben, bevor man eine kleine Stecknadel hineinsteckt. Das Coole ist, dass der Luftballon nicht platzt und in diesem Fall ein kleines Klebeband über das Ei gelegt wird. Das Ei zerbricht nicht an mehreren Stellen und dann kann das Fenster versiegelt werden, und wenn sich das Fenster schließt, weil wir es mit Klebeband versehen haben, entsteht eine schöne kleine Abdichtung und wir müssen uns keine Sorgen um Verdunstung machen.

Sie können also sehen, wie groß das Klebeband ist, es ist wahrscheinlich das größte, das ich bisher geschnitten habe, aber selbst dann werde ich es nur ein wenig dehnen und wirklich nur daran ziehen, ein wenig Spannung dort haben und es über das Ei legen. Und ich werde hier hinten herumkommen und es ganz vorsichtig über das Ei spannen, damit es keine Falten gibt, genau dort, wo mein Fenster sein wird. Und Sie können das Band ein wenig zurücksetzen.

Es ist nicht so wichtig, dass man sich Sorgen machen muss, dass es klebt. Wenn es einmal feststeckt, steckt es fest. Und Sie können diesen allgemeinen Bereich sehen, hier werde ich weitermachen und das Fenster ausschneiden.

Okay, jetzt, da wir alle Eier mit Klebeband versehen haben, können wir ein Fenster auf der Oberseite schneiden. Dies kann der schwierigste Teil sein und oft ist dies der Punkt, an dem Sie den Großteil Ihrer Eizellen verlieren. Also werde ich einfach weitermachen und meine Schere mit Gaze, auf der Alkohol war, gut abwischen und dann einfach trocknen.

Alkohol trocknet so gut wie von selbst aus, aber Sie möchten nicht, dass der Alkohol direkt in das Ei gelangt. Ich gehe also einfach in die Mitte der Stelle, an der sich das Band befindet, und verwende erneut diese Bewegung im Uhrzeigersinn gegen den Uhrzeigersinn, bis ich höre, dass es ein wenig knackt. Und dann weiß ich, dass meine Klinge drin ist.

Und dann möchte ich meine Schere irgendwie so herausbewegen, dass sie fast flach auf der Oberfläche des Eies anliegt. Und dann mache ich einfach winzige Schnitte, bis ich das ganze Stück Schere hineinbekomme. Und ich werde in die andere Richtung zurückkommen, sobald ich es etwa einen Halbkreis geschafft habe und ich den Kreis nicht vervollständigen möchte, weil ich ein Fenster haben möchte, aber dann kann ich einfach weitermachen und das Ei öffnen.

Und im Moment sieht es so aus, als gäbe es ungefähr das Alter, das ich erwartet habe, sie haben nicht viele Blutgefäße, aber es gibt ein bisschen Blut um die Stelle, wo der Embryo sitzt, hauptsächlich aus der Delienregion, in der das Blut jetzt begonnen hat und der Herzschlag verschwunden ist. Also werde ich das einfach schließen, es einfach so oben sitzen lassen und wieder zu mir kommen, und ich werde weitermachen und die Fenster schließen. Und wieder, einfach, nur flach an die Oberfläche und zurück in die andere Richtung.

Und okay, wir haben hier ein paar Blasen und es stellt sich heraus, dass der Embryo zur Seite liegt. Jetzt gibt es zwei Dinge, die wir jetzt tun können. Wenn wir viele Eier haben und uns keine Sorgen machen, jedes einzelne zu verwenden, können wir das hier wegwerfen.

Oder wir können das Fenster schließen und es einfach so einstellen, dass der Embryo sozusagen nach oben schwebt, wo wir ihn wieder haben wollen. Und wenn wir in unseren Manipulationen dazu kommen, könnte es dort sein, wo wir es haben wollen. Wenn nicht, können wir es zu diesem Zeitpunkt verwerfen.

Was ich hier also gemacht habe, ist, es einfach in einem Winkel zu platzieren. Sie werden ein wenig Albuminabfluss haben, aber es wird dem Embryo helfen, wieder dorthin zu gelangen, wo er sein muss. Okay, jetzt, da wir all diese Fenster haben, müssen wir sicherstellen, dass sie geschlossen sind, und wir wollen sie nur geschlossen haben, bevor wir irgendwelche Manipulationen vornehmen.

Und dann können wir das Ei wieder verschließen. Aber wenn wir ein offenes Fenster haben, kann manchmal das Joch herausrutschen. Wenn du weißt, dass das Ei nur ein wenig kippt, wenn du von einem Raum in den anderen gehst, willst du nicht, dass das ganze Ding herausfällt.

Alles, was ich also tue, ist, ein weiteres millimeterlanges oder leider millimeterbreites Stück des Plastikbandes abzuschneiden, wahrscheinlich etwa drei, zwei oder drei Millimeter und eine Länge. Und ich mag es, es dort genau in der Mitte zu platzieren. Und wenn ich es vor dem Ei nach unten ziehen kann, dann wird es irgendwie eng.

Und man kann sehen, wo das Fenster hinpasst, genau dort, wo das andere Klebeband war, wo wir das Fenster geschnitten haben und es für diese Zeit ziemlich dicht macht. Ich meine, wir werden in nur einer Minute einige Manipulationen vornehmen, damit es nicht völlig wasserdicht sein muss. So bereiten Sie also Ihre Eier vor und legen sie in Fenster.

Also viel Glück bei Ihren Experimenten.