Aufreinigung von selbstorganisierenden Protein-Nanopartikeln mittels Affinitätschromatographie

Nehmen wir eine Suspension von manipulierten Bakterien, die rekombinante, selbstorganisierende Protein-Nanopartikel mit Polyhistidin-Markierungen exprimieren.

Beschallt, um intrazelluläre Bestandteile freizusetzen.

Zentrifuge zur Auffangung des Überstands, der Protein-Nanopartikel enthält. Verdünnen Sie es mit einem Imidazol-freien Puffer.

Nehmen Sie eine Affinitätschromatographiesäule, die Agarosekügelchen mit immobilisierten Nickelkationen enthält.

Fügen Sie einen Puffer mit einer niedrigen Imidazolkonzentration für die Säulenäquilibrierung hinzu.

Geben Sie das bakterielle Lysat auf die Säule.

Während des Laufs bindet das Polyhistidin auf Protein-Nanopartikeln stark an Nickelkationen.

In der Zwischenzeit binden Verunreinigungen wie bakterielle Lipopolysaccharide und andere Proteine schwach an die Säule.

Mit einem Puffer waschen, der eine niedrige Imidazolkonzentration enthält, um die schwach gebundenen Proteine zu entfernen.

Führen Sie Isopropanol ein, um Lipopolysaccharide zu entfernen, und waschen Sie es dann.

Als nächstes führen Sie einen Puffer mit einer mittleren Imidazolkonzentration ein. Das Imidazol konkurriert mit Histidin um die Bindung an das Nickelkation und setzt geb