Name: CD4 + T-Lymphozyten Erfassen mit einem Einweg-Mikrofluidik-Chip für HIV (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T13:03:52.000+00:00
Duration: 12 min 44 s
Description: Lernen Sie die Erfassung von CD4+ T-Helferzellen mit einem PDMS-Mikrofluidik-Chip für HIV-Diagnostik in ressourcenarmen Gebieten. Diese präzise Methode ermöglicht eine effiziente Quantifizierung spezifischer Lymphozyten.

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<ol><li> Bereiten mikrofluidischen Kanal mit anti-CD4 + biotinlayted Oberfläche. </li><li> Injektion von 10 ml Probe Blut bei 5 ml / min in den mikrofluidischen Kanal mit Spritzenpumpe. </li><li> Spülen Sie das Blut bei 20 ml / min für 20 min mit PBS. </li><li> Inject verdünnt FACS Lyse-Lösung (verdünnt auf 10% von Stammlösung mit PBS) bei 5ul/min für 15 min. </li><li> Inkubation: 15 min. </li><li> Inject primären CD3 +-Antikörper-Lösung (verdünnt auf 10% von Stammlösung mit PBS) bei 5 ml / min für 20 min. </li><li> Inkubieren für 2 Stunden. </li><li> Spülen Sie Kanal mit PBS auf 5 ml / min für 15 min. </li><li> Inject 20% AF488 CD4 +-Antikörper, 0,2% DAPI-Stammlösung und 10% sekundäre CD3 + Antikörper bei 5 ml / min für 20 min zur gleichen Zeit. </li><li> Inkubieren für 20 min. </li><li> Spülen Sie den Kanal mit PBS auf 5 ml / min für 15 min. </li><li> Zählen von Zellen unter Fluoreszenzmikroskop: <ol><li> White (optisch) - Schwarz und Weiß: Zell-und Staub </li><li> UV (DAPI) - Blue: Zelle nur </li><li> Blue (CD4 +) - Grün: T-Lymphozyten und Monozyten </li><li> Green (CD3 +) - Rot: T-Lymphozyten nur </li></ol></li></ol>

<table><tbody><tr><td>PDMS-Mikrokanal</td><td></td><td></td><td></td><td>Herstellung mittels SU-8-Form</td></tr><tr><td>Blut</td><td></td><td></td><td></td><td>Gespendetes Blut von gesunden menschlichen Probanden. Mass General Hospital, 10× hohe Leukozytenkonzentration oder Brigham and Women&amp;rsquo;s Hospital.</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Puffer</td><td>Invitrogen</td><td>14190</td><td>1× Dulbecco&amp;rsquo;s phosphatgepufferter Salzlösung.</td></tr><tr><td>FACS-Lyselösung</td><td></td><td>BD Biosciences</td><td>349202</td><td>Mit PBS auf 10 % der Stammlösung verdünnt.</td></tr><tr><td>Anti-CD4+-Antikörper, biotinyliert</td><td></td><td>Beckman Coulter Inc.</td><td>IM0704</td><td>Oberfläche beschichtet mit biotinyliertem Anti-CD4+-Antikörper, nach Zugabe von 0,2 mg Stammlösung und 1 ml deionisiertem Wasser mit PBS/BSA auf 10 % verdünnt.</td></tr><tr><td>goat anti-hCD3delta</td><td>pAB</td><td>Santa Cruz Biotechnology, Inc.</td><td>sc-1128</td><td>Mit PBS auf 10 % der Stammlösung verdünnt</td></tr><tr><td>Kaninchen-anti-Ziege-IgG-PE</td><td></td><td>Santa Cruz Biotechnology, Inc.</td><td>sc-3755</td><td>Sekundärantikörper für anti-CD3-Antikörper, mit PBS auf 10 % der Stammlösung verdünnt</td></tr><tr><td>anti-menschlicher CD4+</td><td></td><td>BD Biosciences</td><td>557695</td><td>Mit Alexa Fluor 488 markiert, mit PBS auf 20 % der Stammlösung verdünnt.</td></tr><tr><td>DAPI</td><td></td><td>Invitrogen</td><td>D1306</td><td>4&amp;rsquo;,6-Diamidino-2-phenylindol, Dihydrochloridlösung, mit PBS auf 0,2 % der Stammlösung verdünnt.</td></tr></tbody></table>

cd4 + t-lymphozyten erfassen mit einem einweg-mikrofluidik-chip für hiv

CD4+ T-Lymphocyte Capture Using a Disposable Microfluidic Chip for HIV

CD4 + T-Lymphozyten Erfassen mit einem Einweg-Mikrofluidik-Chip für HIV

Hallo, mein Name ist Richard Lin und ich bin Forscher in der Gruppe von Professor TI Mercy in der Harvard-MIT-Abteilung für Gesundheitswissenschaften und Technologie. Das Projekt, an dem ich arbeite, zielt darauf ab, CD4-positive und C3-positive T-Lymphozyten in Patientenblut zu quantifizieren und nachzuweisen, um sie in ressourcenarmen Umgebungen einzusetzen.Gleich vor mir haben wir ein Microfill-Gerät, das aus PDMS besteht, also aus Polymethylsiloxan. Das Gerät, der Kanal selbst, ist 50 Mikrometer hoch, und das Gesamtvolumen des Geräts beträgt 10 Mikroliter. Dies ist also ein äußerst präzises Gerät, das wir verwenden werden, um T-Helfer-Lymphozyten zu erfassen.Im Grunde genommen das diagnostische Referenzverfahren für HIV-Patienten. Die Oberfläche des mikrofluidischen Geräts wurde bereits mit Protein und CD4-positiven Antikörpern in der Spritze präpariert. Derzeit befindet sich lediglich Puffer (PBS) mit einem pH-Wert von 7,4 in der Spritze, der nun durch den Kanal geleitet wird, um überschüssige CD4-positive Antikörper auszuspülen.In diesem Stadium muss die Fließgeschwindigkeit nicht kontrolliert werden, da wir lediglich versuchen, die überschüssigen Bestandteile auszuspülen, un

cd4-t-lymphocyte-capture-using-a-disposable-microfluidic-chip-for-hiv

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Zell-Capture mit einer mikrofluidischen Vorrichtung

Diese visualisiert Experiment ist ein Leitfaden für die Verwendung eines fluoreszierenden molekularen Klon des HIV für Live-konfokale Abbildung Experimente.

Visualizing Zell-Zell-Transfer von HIV unter Verwendung von fluoreszierenden Klone von HIV und Live-konfokale Mikroskopie

Wir haben einen lentiviralen Vektor, besitzt neben dem Tat-responsive LTR entwickelt, das Rev-Response-Element (RRE), dass die Expression des Reportergens in einer HIV-1 Tat-und Rev-abhängigen Weise regulieren können. Der Vektor erlaubt den spezifischen Nachweis von HIV Replikation in lebenden Zellen über die Expression von GFP.

Spezielle Kennzeichnung von HIV-1 positiven Zellen mit Hilfe eines Rev-abhängigen Lentivirale Vector mit dem Ausdruck des Green Fluorescent Protein

Eine integrierte Mikrofluidvorrichtung thermoplastischen Chip zur Verwendung als molekulare Diagnostik entwickelt. Der Chip führt Nukleinsäureextraktion, reverse Transkriptase und PCR. Methoden zur Herstellung und den Betrieb der Chip beschrieben.

Mikrofluidischen Chip Herstellung und Verfahren zur Influenza Detect

In diesem Artikel präsentieren wir ein Mikrofluidik-Chip für Einzelzellanalyse. Es ermöglicht die Quantifizierung der intrazellulären Proteine, Enzyme, Cofaktoren und zweiten Boten mittels Fluoreszenzassays oder Immunoassays.

Eine mikrofluidische Chip für die vielseitige chemische Analyse von Einzelzellen

Dieses Protokoll beschreibt die Methoden zur Konstruktion eines humanisierten Knochenmark-/Leber-/Thymus-Mausmodells mit stammzellbasierter künstlicher Immunität gegen HIV-Infektionen.

Stammzellen Basierend Engineered Immunität gegen HIV-Infektion in der humanisierten Maus-Modell

Beschrieben ist eine Methodik, die Expression von Genen 96 quantitate und 18 Oberflächenproteine von einzelnen Zellen Ex Vivo, ermöglicht die Identifizierung von differenziell ausgedrückt, Genen und Proteinen in Virus-infizierten Zellen im Verhältnis zu nicht infizierten Zellen. Wir wenden das Konzept Studie SIV-infizierten CD4+ T Zellen isoliert von Rhesus-Makaken.

Einzellige Quantifizierung der mRNA und Oberfläche Protein-Expression in Simian Immunodeficiency Virus-infizierten CD4+ T Zellen isoliert von Rhesus-Makaken

Hier wird ein Protokoll für einen Fluoreszenzbildgebungsansatz vorgestellt, multiplex immunofluorescent cell-based detection of DNA, RNA, and protein (MICDDRP), eine Methode, die in der Lage ist, gleichzeitig Fluoreszenz-Einzelzellvisualisierung von viralen Proteinen und Nukleinsäuren unterschiedlicher Art und Strandung zu visualisieren. Dieser Ansatz kann auf eine Vielzahl von Systemen angewendet werden.

Einzelzell-Multiplex-Fluoreszenzbildgebung zur Visualisierung viraler Nukleinsäuren und Proteine und zur Überwachung von HIV-, HTLV-, HBV-, HCV-, Zika-Virus- und Influenza-Infektionen

Hier stellen wir ein Protokoll vor, in dem einzelne Zellen auf akute Ereignisse und produktive HIV-1-Infektionen auf einem nanofluidischen Gerät überwacht werden. Bildgebende Daten definieren Virus-Wirt-Rezeptor-Interaktionen und Signalwegdynamik. Dies ist die erste Methode für nanofluidische Hochdurchsatz-Längskultur und Bildgebung von Einzelzellen, um Signalkinetik und molekulare Wechselwirkungen zu untersuchen.

Einzelzellcharakterisierung von Kalziumzufluss und HIV-1-Infektion mit einer multiparametern optofluidischen Plattform

Der klinische Mikrofluidik-Chip ist eine wichtige biomedizinische Analysetechnik, die die Vorverarbeitung klinischer Patientenblutproben vereinfacht und zirkulierende Tumorzellen (CTCs) in situ auf dem Chip immunfluoreszent färbt, was den schnellen Nachweis und die Identifizierung eines einzelnen CTC ermöglicht.

Klinische Mikrofluidik-Chip-Plattform zur Isolierung vielseitig zirkulierender Tumorzellen

Zirkulierende Tumorzellen (CTCs) sind entscheidend für die Untersuchung des Fortschreitens und der Metastasierung von Krebs. In diesem Artikel wird ein integriertes Protokoll mit hohem Durchsatz für die CTC-Anreicherung und die Einzel-CTC-Sequenzierung vorgestellt, das die Abscheidungseffizienz und CTC-Reinheit verbessert und gleichzeitig die Kontaminations- und Sequenzierungskosten senkt und so die Präzisionsonkologieforschung und klinische Anwendungen voranbringt.

Mikrofluidik-basierte Hochdurchsatz-Sortierung von zirkulierenden Tumorzellen und Einzelzellsequenzierungstechnologie

Lernen Sie die Erfassung von CD4+ T-Helferzellen mit einem PDMS-Mikrofluidik-Chip für HIV-Diagnostik in ressourcenarmen Gebieten. Diese präzise Methode ermöglicht eine effiziente Quantifizierung spezifischer Lymphozyten.

CD4 + T-Lymphozyten Erfassen mit einem Einweg-Mikrofluidik-Chip für HIV

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