Mit einem vergleichenden Arten Ansatz zur Neurobiologie der väterlichen Responses Untersuchen

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, einen vergleichenden Artansatz zu verwenden. Um mehr über die Gehirnareale und Neurochemikalien zu erfahren, die mit dem väterlichen Verhalten verbunden sind, besteht der erste Schritt darin, zwei eng verwandte Spezies zu identifizieren, die sich in der Ausprägung des interessierenden Verhaltens erheblich unterscheiden. Als nächstes dürfen beide Arten mit den Welpen interagieren und das Verhalten innerhalb der elterlichen Reaktion beobachten.

Eth-Echogramm. Diese Verhaltensweisen werden zur weiteren Analyse auf Video aufgezeichnet. Der nächste Schritt des Verfahrens besteht darin, Gehirnproben zu sammeln und diese auf das Vorhandensein von immunreaktivem Vasopressingewebe im Zielbereich zu analysieren.

Neuroimaging-Software wird dann verwendet, um speziesspezifische Unterschiede in den Zielbereichen des Gehirns zu bestimmen. Letztendlich können Ergebnisse erzielt werden, die speziesbedingte Unterschiede in der väterlichen Reaktion und der Vasopressin-Immunreaktivität in bestimmten Hirnarealen zeigen. Der Hauptvorteil des Ansatzes der vergleichenden Spezies im Gegensatz zu anderen bestehenden Methoden, wie z. B. pharmakologisch manipulierten oder gentechnisch veränderten Arten, besteht darin, dass Sie natürlich vorkommende Unterschiede zwischen eng verwandten Spezies nutzen können, anstatt künstlich induzierte Verhaltensweisen zu verwenden.

Ich dachte, dass diese Methode einen Einblick in väterliches Verhalten geben kann. Es kann auch auf andere Verhaltensweisen wie Aggression, Sexualverhalten oder Körperpflege vor dem Test angewendet werden. Mäuse von zwei eng verwandten Spezies werden in Testgruppen von biologischen Vätern eingeteilt: Jungfrauen ohne Erziehungserfahrung und Jungfrauen mit begrenzter Exposition gegenüber Jungtieren.

Bereiten Sie zunächst den Käfig und das Videoaufzeichnungssystem vor. Setze als nächstes einen Welpen in die Mitte des Käfigs. Sobald alles vorbereitet ist, führen Sie die Testmail mit dem Welpen in den Käfig ein und zeichnen Sie das Verhalten fünf Minuten lang auf.

Wenn aggressive Reaktionen beobachtet werden, entfernen Sie den Welpen sofort. Die Kalifornische Hirschmaus pflegt die Jungen, genau wie die Mütter, indem sie sich über sie beugt, so dass es aussieht, als würden die Jungtiere säugen. Im Gegensatz dazu zeigt die gemeine Hirschmaus wenig Interesse an den Jungtieren und versucht oft, ihnen zu entkommen oder sie anzugreifen.

Alle Gruppen werden auch einer Spielzeugmaus ausgesetzt, um sicherzustellen, dass die beobachteten sozialen Interaktionen spezifisch für einen Welpen und nicht eine allgemeine Reaktion sind. Bereiten Sie nach dem Beobachtungszeitraum die Verhaltensbewertungsbögen vor. Wenn mehr als ein Beobachter die Videobänder bewertet.

Es ist wichtig, die Interrater-Reliabilität zu etablieren. Das hier gezeigte Rogramm des väterlichen Verhaltens wird verwendet, um Verhaltensweisen zu bewerten. Beispiele hierfür sind das Ducken über den Welpen, das Pflegen der Welpen oder das Zeigen von Angstverhaltensweisen wie Dehnungsreaktionen.

Mikrosequenzierungssoftware kann verwendet werden, um die Feinheiten zwischen bestimmten Verhaltensweisen aufzudecken. Hier werden Daten von Cacus-Mäusen als Beispiel verwendet, die zeigen, dass wir einem Raubtiergeruch ausgesetzt sind. Kombinieren Sie zunächst das Verhalten in binären Zuständen IE-Grooming und Nicht-G-Grooming, und erstellen Sie dann eine Zeitreihe.

Berechnen Sie abschließend den Grad der Fluktuation. Mit einer vorgegebenen Formel können viele wichtige Verhaltensweisen übersehen werden. Unter Verwendung gängiger Beobachtungstechniken ist es am besten, die Verhaltensweisen auf Video aufzuzeichnen, damit die Antworten in Zeitlupe angezeigt werden können.

Für eine genauere Betrachtung ermöglicht eine spezielle Software den Forschern, Mikrosequenzen von Verhaltensweisen zu analysieren und Daten zu liefern, die bei einem menschlichen High in Echtzeit übersehen würden. Diese Methode kann helfen, Schlüsselfragen im Bereich der Verhaltensneurowissenschaften zu beantworten, z. B. welche neurochemischen Systeme spezifische Verhaltensweisen vermitteln, die bei den Tieren nach der Exposition von Jungtieren beobachtet werden. Verwenden Sie ein Standard-Perfusionsprotokoll, um das Gehirn zu isolieren und einzufrieren, bevor Sie das Gehirn im Trimmmodus schneiden, bis bestimmte Orientierungspunkte identifiziert sind.

Ein Standard-Maushirnatlas wird verwendet, um den paraventrikulären Kern im Hypothalamus zu lokalisieren, einem Bereich, von dem bekannt ist, dass er reich an Zellen ist, die das Neuropeptid Vasopressin oder ein VP produzieren. Sobald das Paar des ventrikulären Kerns erreicht ist, nehmen Sie 30-Mikrometer-Schnitte für die weitere Analyse. Legen Sie die Gehirnabschnitte vorsichtig in gut gefüllte Platten, die zuerst mit phosphatgepufferter Kochsalzlösung oder PBS gefüllt sind. Waschen Sie die Gehirnabschnitte mit PB S3 bis fünfmal und legen Sie die Platten nach der Zugabe von frischem PBS 10 Minuten lang auf eine Wippe.

Geben Sie dann eine Lösung mit der primären Antikörperlösung auf die Platten und lagern Sie sie über Nacht bei vier Grad Celsius, wobei Sie am nächsten Tag schaukeln. Waschen Sie die Scheiben, bevor Sie den Sekundärantikörper hinzufügen. Lassen Sie die Proben eine Stunde lang bei Raumtemperatur schaukeln. Nach einer abschließenden Wäsche setzen Sie die Gehirnschnitte einer Aden-Biotin-Komplexlösung aus, die die Visualisierung der neurochemisch positiven Zellen unterstützt.

Der letzte Schritt im Visualisierungsverfahren besteht darin, DAB nach der DAB-Belichtung vorsichtig hinzuzufügen. Unterziehen Sie die Gehirnschnitte einer letzten Reihe von Wäschen. Legen Sie sie vorsichtig auf untergetauchte Objektträger und lassen Sie sie über Nacht trocknen.

Nach dem Trocknen die Objektträger durch eine Reihe von Waschgängen mit destilliertem Wasser und Alkohol reinigen, tauchen Sie die Scheibe nach dem Waschen in Zitruslösung. Bringen Sie abschließend Deckgläser an und bewahren Sie die Objektträger zur sicheren Aufbewahrung in einer Schachtel auf. Es gibt viele Methoden für den immunchemischen Prozess.

Der Schlüssel zum Erfolg liegt darin, ein klares Protokoll zu erstellen und zu befolgen. Die Objektträger sind nun bereit, mit einer speziellen Neuroquantifizierungssoftware analysiert zu werden. Hier. Die Bio-Quant-Software wird verwendet, um die Vasopressin-positiven Zellen und Fasern im paraventrikulären Kern der Maus zu quantifizieren. Gehirne.

Nutzen Sie die Messoption, um den spezifischen Interessenbereich zu identifizieren und das Gesichtsfeld für die Neuroquantifizierung festzulegen. Hier sind das dunkel gefärbte VA-Suppressivum, immunreaktive Zellkörper und Fasern sichtbar. Verwenden Sie die Lichtschwellenwertfunktion der Software, um die Gesamtmenge an positiv gefärbtem Gewebe in einem bestimmten Bereich zu bestimmen.

Dieser Schwellenwert sagt uns, wie viel Vasopressin-positives Gewebe vorhanden ist. Wie hier zu sehen ist, verbrachten die Californicus-Männchen mehr Zeit damit, die Jungen zu pflegen und sich über sie zu beugen, zwei Kennzeichen väterlicher Reaktionen im Vergleich zu einer ähnlichen Art. Die Mikrosequenzierungsanalyse zeigt, dass väterliche kalifornische Mäuse im Vergleich zu jungfräulichen Tieren weniger Unterbrechungen in ihrer Pflegesequenz aufweisen.

Bei der Exposition gegenüber Raubtiergeruch, um festzustellen, ob neurobiologische Variablen bei väterlichen Reaktionen eine Rolle spielen, wurde die Menge an Vasopressin-positivem Gewebe für mehrere relevante Hirnareale quantifiziert. Wie hier zu sehen ist, haben die väterlichen Californicus-Tiere in mehreren dieser Hirnareale mehr immunpositives Gewebe. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass der Ansatz der vergleichenden Spezies es die Identifizierung wichtiger neurobiologischer Systeme ermöglicht, die mit einem bestimmten Verhalten von Interesse verbunden sind.

Die Art der Daten ist jedoch korreliert, daher ist es wichtig, zusätzliche methodische Techniken hinzuzufügen, um die Rolle des neurobiologischen Systems und das interessierende Verhalten weiter zu bestätigen.