Name: Zerkarien Transformation und In-vitro- Anbau von Schistosoma mansoni Schistosomules (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-08-16T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 30 s
Description: Lernen Sie die Transformation von Zerkarien in Schistosomula von Schistosoma mansoni für die Parasitologie-Forschung. Diese Methode ermöglicht die sichere In-vitro-Kultur bis zu sechs Wochen.

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Dieses Projekt wurde von der Case Western Reserve University Start Mittel bereitgestellt, um E. Jolly finanziert. Infizierte Schnecken wurden von der Bilharziose Resource Center, NIH-NIAID (NIAID Contract No HHSN272201000009I) zur Verfügung gestellt. Wir danken auch Chris King und Ronald Blanton für die Unterstützung bei der Sicherung infiziert schistosome Schnecken und für hilfreiche Diskussionen.

Schutzmaßnahmen: Schistosome Cercarien können direkt in die Haut eindringen, ohne die Bedürfnisse eines Schnittes oder Poren, und verursachen die chronische Krankheit Bilharziose. S. mansoni ist eine Sicherheitsstufe 2 Organismus, also richtige persönliche Schutzausrüstung und geeignete Schutzmaßnahmen zu beachten bei der Arbeit mit infektiösen Zerkarien werden. Die meisten der Geräte notwendig, um zu wachsen und verwandeln schistosomes ist Standard, mit ein paar wichtigen Ausnahmen in der Tabelle am Ende des Protokolls zur Kenntnis genommen. Alle Zerkarien Arbeit sollte in einem isolierten Raum durchgeführt werden. Schistosomules sollten in einem sterilen, genehmigt Biosicherheit Haube kultiviert werden. Zwei Schichten von Nitril-oder Latexhandschuhe getragen werden, da sollte ein Kittel, eine wasserdichte Schuhe, Hosen ohne Löcher oder Risse, und wasserdicht Ärmelschoner für Ihre Handgelenke und Arme. Im Falle eines unbeabsichtigten Ausbringens sofort Spray kontaminierten Bereich mit 70% Ethanol oder 10% Bleichmittel, reibt energisch, wenn auf Ihre Person. Dies wird ausreichen, um die Parasiten zu deaktivieren, sondern alle möglichen Infektionen sollten gemeldet und ernst genommen werden. Obwohl schistosomules nicht angeboren infektiöse, variieren institutionelle Vorgaben, und sollte konsultiert werden, um festzustellen, ob BSL2 Vorsichtsmaßnahmen bei infektiösen Lebensphasen erforderlich sind. Desinfizieren Sie alle Flächen, die in Kontakt mit potentiell infektiösen Substanz nach dem Experiment durchgeführt und entsorgen Abfälle in einem genehmigten geltenden Bestimmungen. HINWEIS: Cover Schnecke Host bins 1 bis 2 Tage vor dem Vergießen und vor Licht schützen 1. Harvesting Cercarien aus der Schnecke Host <ol><li> Füllen Sie ein sauberes, 500ml Becher frei von Waschmittel halbwegs voll mit destilliertem Wasser auf Raumtemperatur gebracht. Bei der Arbeit mit Host-Schnecken mit Miracidien zu verschiedenen Zeitpunkten infiziert, verwenden Sie einen separaten Becher für jede Infektion date (Dies ist besonders wichtig, wenn die Schnecken für zukünftige Experimente wieder verwendet werden). Die Größe der Becher kann auch kleiner sein je nach Erfahrung des Anwenders. </li><li> Sammeln infizierten Schnecke Hosts, die Sie wollen, Schuppen und sorgfältig hinterlegen sie in das Becherglas mit einem Standard-Aquarienfische net und für allgemeine Zwecke Pinzette nach Bedarf. </li><li> Legen Sie Becherglas auf einen Notfall Auffangwanne ca. 8 bis 12 cm unterhalb Lichtquelle eine Glühlampe. Lassen Sie Standplatz für 1-2 Stunden unter dem Licht. Cercarien verlassen die Schnecke Host, wenn sie hellem Licht ausgesetzt. </li><li> Sorgfältig herauszufiltern Schnecken aus der Cercarien Mischung. Nehmen Sie zusätzliche Sicherheitsvorkehrungen, als Gemisch ist hochgradig ansteckend. Denken Sie daran, Cercarien können direkt durchdringen die menschliche Haut! </li><li> Ersetzen Mischung unter Lichtquelle für ca. 15 Minuten, so dass keine Partikel Abfallstoffe zu begleichen. </li><li> Transfer Cercarien in einen sauberen Erlenmeyerkolben mit einer Pipette, die Vermeidung der Ablagerungen am Boden des Bechers. Der Kolben wird bei ca. 45 °-Winkel auf Eis im Dunkeln für 45 bis 60 Minuten, so dass Cercarien in einer Ecke zu begleichen. </li><li> Verwenden Sie eine 50-ml-Pipette von 75 bis 90% der Überstand zu entfernen und lagern es in Becherglas mit 10% Bleichmittel oder 70% Ethanol, dabei nicht zu lassen Wassertropfen mit Cercarien Tropfen aus der Pipette. </li><li> Swirl den Erlenmeyerkolben mit Cercarien sanft auf die Cercarien in Lösung zu resuspendieren. Verwenden einer Pipette auf die Probe zu sterilen 50 ml konische Röhrchen übertragen. Die Röhrchen wieder auf Eis für 20 Minuten im Dunkeln. Cercarien wird zum Boden des Röhrchens im Dunkeln zu begleichen. </li></ol> 2. Manuelle Umwandlung von Cercarien zu schistosomules Bevor Sie beginnen: Stellen Sie RPMI 1640 komplett (RPMI, 5% fötalem Rinderserum, 1X Pen / Strep) und warm bis 37 ° C. (Es ist wichtig, dass die Rinderfötenserum verwendet durch Inkubation inaktiviert wurde ein 56 ° C für 1 Stunde als schistosomes können empfindlich zu ergänzen). <ol><li> In einem biohazard Kapuze, entfernen Überstand bis auf 5 bis 10 ml Lösung in je 50 ml konische mit einer Pipette oder Vakuum-Gerät. </li><li> Bringen Sie einen 22-Gauge-double-ended, Luer-lok Emulgieren Nadel zu einem entsprechend dimensionierten Spritze. </li><li> Langsam ziehen Mischung in die Spritze. Sammeln Cercarien aus allen 50 ml-Tuben in einer Spritze. Seien Sie aufmerksam der tropfen. </li><li> Drehen Sie vorsichtig Spritze über eine solche mit dem freien Nadel am Ende ist. Bringen Sie eine weitere Spritze aus auf diese Seite des emulgierenden Nadel. </li><li> Pass die Mischung durch die Nadel insgesamt 40-mal (20 mal hin und her), um die Cercarien verwandeln. </li><li> Positionieren Sie die Kartusche so dass die Mischung in der unteren Spritze enthalten ist und die obere Spritze leer ist. Entfernen Sie die obere Spritze und desinfizieren in 70% Ethanol. </li><li> Kaution Mischung tropfenweise in ein sauberes hoch ummauerten 100mm x 50mm Pyrex Schüssel oder Kristallisierschale. Desinfizieren Sie Nadel und Spritze in 70% Ethanol. </li><li> Fügen Sie 37 ° C RPMI 1640 komplette Medien, so dass dieBoden der Petrischale ist komplett abgedeckt, als ob Gießen einer Luria Broth Platte. </li><li> Vorsichtig, um schistosomules in der Mitte der Petrischale zu sammeln. Vermeiden Sie Spritzer. Hinweis: Es kann sinnvoll sein, schalten Sie die Haube Licht für diesen Schritt, um weitere angemessene Visualisierung des schistosomules in der Mitte. </li><li> Unmittelbar Kaution konzentriert schistosomules in ein frisches 12-well Zellkulturplatte auch mit einer sterilen Pipette. </li><li> Wiederholen 2.9 und 2.10 bis schistosomules nicht mehr vorhanden sind in der Mitte der Schale (etwa 10 mal). Kaution jeweils anschließende Sammlung in ein frisches gut. </li><li> Füllen Sie jede Vertiefung bis zur Hälfte (~ 1,5 ml) mit vorgewärmtem RPMI komplette Medien. </li><li> Visualisieren Sie auf einem inversen Mikroskop auf Anwesenheit von schistosomules und Abwesenheit von Cercarien zu überprüfen. </li><li> Wachsen die schistosomules in einer CO 2-Inkubator eingestellt auf 37 ° C und 5% CO 2. </li></ol> 3. Repräsentative Ergebnisse: Bis Transfer von transformierten schistosomules in Kulturmedien, Visualisierung unter einem inversen Hellfeld-Mikroskop (siehe Geräte-Tisch für ein Beispiel) sollte Ausbeute ein Bild ähnlich 1, in denen nur umgewandelt schistosomules sind in der Abbildung gut. Mögliche Verunreinigungen könnten intakt Cercarien, durchtrennt Zerkarien Schwänze, oder andere Fremdkörper. Wenn keine inverse Mikroskop zur Verfügung steht, wird eine Standard-Mikroskop oder sogar eine Dissektion Umfang ausreichen, um die schistosomules visualisieren. Beachten Sie, dass dieses Verfahren nicht immer zu verwandeln 100% der Cercarien. <img src="/files/ftp_upload/3191/3191fig1.jpg" alt="Abbildung 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 1"> Abbildung 1: Transformierte schistosomulum <img src="/files/ftp_upload/3191/3191fig2.jpg" alt="Abbildung 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 2"> Abbildung 2: Cercarien und Severed Tails

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</ol>

Keine Interessenskonflikte erklärt.

Mehrere potenzielle Probleme könnten bei der Transformation Verfahren entstehen, aber dieses Protokoll wurde entwickelt, um die meisten dieser Probleme zu vermeiden. Eine mögliche Gefahr ist die Verstopfung der emulgierenden Nadel, die in der Regel entsteht durch Ablagerungen in der Ernte in Schritt 1.3 links. Achten Sie darauf, damit alle Partikel bis in Schritt 1.5 zu lösen und den Cercarien sorgfältig Transfer in Schritt 1.6, um dieses Problem zu vermeiden. Auch, wie zuvor beschrieben, arbeitet in einem biologischen Sicherheitsschrank, der persönlichen Schutzausrüstung verwenden (auch Gesichtsschutz) und Vermeidung von übermäßigen Druck auf die Spritzen ist ratsam. Freistehendes Zerkarien Schwänzen kann in den Medien, was auf schlechte Trennung in Schritt 2,9 visualisiert. Die Schwänze weisen einen Krampf-wie Bewegung und haben einen ausgeprägten Form (siehe Abbildung 2), und auf diese Weise erkennt man leicht die schistosomules. Die Schwänze können durch Waschen der schistosomules über RPMI komplett so dass die schistosomules absetzen entfernt werden. Die Schwänze bleiben schwebend und kann abgesaugt werden. Wenn intakt Cercarien in den Medien präsent sind, war die Umwandlung in Schritt 2.5 nicht ordnungsgemäß ausgeführt. Ein Bild von einer intakten Cercarie ist in Abbildung 3b als Referenz dargestellt. Wenn dieses Problem auftritt, sicherzustellen, dass die emulgierende Nadel verwendet der richtigen Größe ist. Auch kann die Anzahl, wie oft die Zerkarien Mischung durch die Nadel geführt wird erhöht werden, obwohl 40 Mal wird in der Regel viel mehr als genug, um 100% Scherung der Zerkarien Schwänze Ansatz. Transformation von Cercarien in schistosomules wurde erstmals 1974 von Colley und Wikel (13) beschrieben. Seitdem hat Vorbereitung schistosomules getan entweder mit der Scher-Strategie mit einer Nadel und Spritze, wie in diesem Protokoll beschrieben ist, oder mit Hilfe eines Vortex-Ansatz und getrennt mit Steigungen von Percoll (14, 15) oder wirbelnden wie in diesem Papier gezeigt. Diese beiden Techniken zur Herstellung schistosomules sind wunderschön von Fred Lewis (16) und weitere Informationen für die weitere Züchtung von schistosomules für langfristiges Wachstum kann am NIAID schistosome Resource Center (gefunden werden beschrieben <a href="http://www.schisto-resource.org/">www.schisto-resource.org</a> ).

<table border="1"><tbody><tr><th> Name des Reagenz </th><th> Firma </th><th> Katalog-Nummer </th></tr><tr><td> 22g x 2-7/8 &quot;Emulgieren Nadel </td><td> Fisher Scientific </td><td> 14 bis 825-17G </td></tr><tr><td> RPMI 1640 Medium 1X (500ml) </td><td> Invitrogen </td><td> 11835030 </td></tr><tr><td> Fetal Bovine Serum (FBS) hitzeinaktiviertem </td><td> Invitrogen </td><td> 10082139 </td></tr><tr><td> Penicillin / Streptomycin (100X) </td><td> Invitrogen </td><td> 15070063 </td></tr><tr><td> Kristallisierschale (100mm) </td><td> Fisher Scientific </td><td> 08-741D </td></tr><tr><td> General Purpose Tweezers </td><td> Fisher Scientific </td><td> 10-316C </td></tr><tr><td> Petco Aquarium net für Artemia </td><td> Petco </td><td> SKU: 1190954 </td></tr></tbody></table>

zerkarien transformation und in-vitro- anbau von schistosoma mansoni schistosomules

Cercarial Transformation and in vitro Cultivation of Schistosoma mansoni Schistosomules

Schistosome Parasiten sind die Erreger der Bilharziose, eine chronische Invalidität nach Krankheit, die mehr als 200 Millionen Menschen betroffen sind weltweit an zweiter Stelle die Malaria unter parasitäre Krankheiten im Bereich der öffentlichen Gesundheit und sozio-ökonomischen Auswirkungen (1-4). Schistosome Parasiten sind Trematoden Würmer mit einem komplexen Lebenszyklus Austausch zwischen einem parasitären Leben in Mollusken und Säugetieren Gastgeber mit dazwischen frei schwimmenden Bühnen. Kurz gesagt, infizieren freischwimmenden Cercarien einen Säugerwirt durch Eindringen in die Haut mit Hilfe von sekretierten Proteasen, während welcher Zeit die Cercarien ihre Schwänze zu verlieren, die Umwandlung in schistosomules. Die schistosomules muss nun entziehen dem Immunsystem des Wirts, die Entwicklung einer gut für die Verdauung der roten Blutkörperchen, und migrieren wenn die Lunge und Pfortaderkreislauf dem Weg zu ihrem endgültigen Bestimmungsort in der Leberpforte und schließlich die Mesenterialvenen (für S. mansoni) wo männliche und weibliche Würmer Paar und mate, Produktion von Hunderten von Eiern täglich. Einige der Eier sind aus dem Körper in frisches Wasser, wo die Eier schlüpfen freischwimmende Miracidien (5-10) ausgeschieden. Die Miracidien infizieren bestimmte Schneckenarten und verwandeln sich in Mutter und Tochter Sporocysten, die ihrerseits produzieren infektiöse Cercarien, die Vollendung des Lebenszyklus. Leider kann die gesamte schistosome Lebenszyklus nicht in vitro kultiviert werden, sondern infektiöse Zerkarien können in schistosomules umgewandelt werden, und die schistosomules können Wochen für die Analyse von schistosome Entwicklung in vitro oder Mikroarray-Analyse kultiviert werden. In diesem Protokoll, bieten wir eine visuelle Beschreibung der Zerkarien Transformation und In-vitro-Kultivierung von schistosomules. Wir werfen infektiösen Zerkarien aus der Schnecke Host Biomphalaria glabrata und manuell wandeln sie in schistosomules durch Lösen die Schwänze mit einem Emulgator Doppel-Nadel. Die in vitro Zerkarien Transformation und schistosomules Kultur beschriebenen Techniken vermeiden die Verwendung eines Säugetier-Wirt, die Visualisierung von schistosomes vereinfacht und erleichtert die Sammlung des Parasiten für experimentelle Analyse. In-vitro-Transformation und Kultivierung von Techniken der schistosomes schon seit Jahren getan (11, 12), aber keine visuelle Protokolle entwickelt worden, die verfügbar sind, die gesamte Gemeinde.

Wir beschreiben einen<em&gt; In-vitro-</em&gt; Verfahren zur Kultivierung von Schistosomula der flatworm Parasiten<em&gt; Schistosoma mansoni</em&gt;, Über die Ernte und Umwandlung von infektiösen Cercarien aus der Süßwasserschnecke Zwischenwirt Biomphalaria glabrata.

Zerkarien Transformation und In-vitro- Anbau von Schistosoma mansoni Schistosomules

Schistosomen-Parasiten sind die Erreger der Schistosomiasis, einer chronisch schwächenden Erkrankung, von der weltweit über 200 Millionen Menschen betroffen sind und ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, infektiöse CRC e in Shisom umzuwandeln. Dies wird erreicht, indem zunächst infektiöse CRC aus dem Wirtsschnecke gewonnen werden. Die infektiösen CRC werden angereichert und anschließend mittels einer doppelschneidigen Nadel in nicht-infektiöse Shisom umgewandelt.Schließlich werden die Shisome konzentriert und in einer Kulturplatte gesammelt und in RPMI bei 37 Grad Celsius und 5 % Kohlendioxid inkubiert. Mit dieser Methode können transformierte Shisome mit FU-zitierten oder zitierten Schwanzkontaminationen erhalten werden. Eine visuelle Demonstration dieser Methode ist entscheidend, da ein Transformationsverfahren schwierig zu erlernen und potenziell gefährlich sein kann.Cica sind infektiös und in hoher Konzentration vorhanden, und ihre Isolierung erfordert eine sorgfältige und präzise Handhabung, um sicher und effektiv vorzugehen. Die Durchführung des Verfahrens wird John, ein wissenschaftlicher Mitarbeiter in meinem Labor, demonstrieren. Füllen Sie einen sauberen 500-Milliliter-Becher zur Hälfte mit destilliertem Wasser von Raumtemperatur, indem Sie ein standardmäßiges Aquarium-Handnetz und Pinzette verwenden. Überführen Sie die infizierten Schnecken in den Becher.Stellen Sie das Becherglas auf eine Notfall-Auffangschale, die sich acht bis zwölf Zoll unterhalb einer Glühlampe befindet, und lassen Sie es dort für eine bis zwei Stunden stehen. Die Exposition gegenüber hellem Licht bewirkt, dass die CRC den Schneckenwirt verlassen. Um die Schnecken zu entfernen, müssen zusätzliche Sicherheitsvorkehrungen getroffen werden, um jeglichen Kontakt mit dem infektiösen Wasser zu vermeiden, das CRC enthält, die direkt durch die menschliche Haut eindringen können.Entfernen Sie die Schnecken und ersetzen Sie die Lösung anschließend unter einer Lichtquelle für etwa 15 Minuten, damit Partikelabfälle auf den Boden des Kolbens absinken können. Sobald sich die Abfälle abgesetzt haben, überführen Sie das Circ mit einer Pipette in einen sauberen Erlenmeyerkolben, wobei Sie die Rückstände am Boden des Bechers vermeiden.Stellen Sie den Kolben im 45-Grad-Winkel auf Eis. Inkubieren Sie die Lösung 45 bis 60 Minuten im Dunkeln, damit sich der CRC in einer Ecke absetzen kann. Sobald sich die Parasiten abgesetzt haben, entfernen Sie mithilfe einer 50-Milliliter-Pipette den größten Teil des Snat und entsorgen Sie ihn vorsichtig.In einem Becher mit 10 % Bleiche oder 70 % Ethanol die Erlenmeyerkolben vorsichtig schwenken, um die Parasiten erneut in Suspension zu bringen. Anschließend mit einer Pipette die Probe in sterile kegelförmige 50-Milliliter-Röhrchen überführen. Die Röhrchen auf Eis stellen und erneut 20 Minuten im Dunkeln inkubieren, damit sich der CRC absetzen kann.Nachdem sich die Parasiten abgesetzt haben, entfernen Sie mit einer Pipette den größten Teil der Überstände, wobei fünf bis zehn Milliliter Flüssigkeit in jedem Reagenzglas verbleiben. Befestigen Sie danach eine Emulsionsnadel mit doppeltem Ende und Luer-Lock-Anschluss (22 gauge) an einer Spritze. Ziehen Sie langsam die Lösung mit den Parasiten aus jedem Reagenzglas in die Spritze auf.Darauf achten, dass die infektiöse Mischung nicht im Gehäuse tropft. Die Spritze vorsichtig drehen, sodass die Nadel nach oben zeigt, und eine zweite Spritze an das freie Ende der Nadel anschließen. Die Mischung etwa 20-mal zwischen den beiden Spritzen hin und her bewegen, um die crc umzuwandeln.Danach die Spritzen vertikal positionieren, sodass die leere Spritze oben ist. Die obere Spritze vorsichtig entfernen und in 70 % Ethanol desinfizieren. Die Parasiten tropfenweise in eine saubere, hochwandige Pyrex-Kristallisationsschale geben.Desinfizieren Sie anschließend die Nadel und die Spritze in 70 %igem Ethanol. Stellen Sie danach die Schale auf einen weißen Hintergrund, um die Parasiten besser sichtbar zu machen, und geben Sie vorgewärmtes RPMI bei 37 Grad Celsius hinzu, sodass der Boden der Pyrex-Schale vollständig bedeckt ist.Vorsichtig schwenken, um das Shisom in der Mitte zu sammeln, und mit einem sterilen Tropfer etwas des konzentrierten Shisoms aufnehmen. Die Parasiten in eine frische 12-Loch-Zellkulturplatte überführen. Diesen Spülschritt wiederholen, bis keine Parasiten mehr übrig sind.Nachdem die Parasiten übertragen wurden, füllen Sie jedes Loch etwa zur Hälfte mit warmem RPMI auf, um das Vorhandensein von Shisom zu überprüfen. Visualisieren Sie die Platte mit einem invertierten Lichtmikroskop. An diesem Punkt sollten sich die meisten Parasiten in Shisom umgewandelt haben, die sich von CRC E dadurch unterscheiden, dass sie weniger modal sind und den charakteristischen cial-Schwanz fehlen lassen.Eine geringe Anzahl intakter CRC-e- und CRC-cial-Schwänze oder anderer Rückstände kann ebenfalls vorhanden sein. Shta kann anschließend bis zu sechs Wochen lang in einem Inkubator bei 37 Grad Celsius und 5 % Kohlendioxid kultiviert und gehalten werden, wobei wöchentlich das Medium gewechselt wird. Vergessen Sie nicht, dass die Arbeit mit infektiösen Aria äußerst gefährlich sein kann, und ergreifen Sie stets Vorsichtsmaßnahmen wie das Tragen von doppelten Handschuhmanschetten, Schutzvorrichtungen sowie die ordnungsgemäße Nutzung von Einrichtungen und Biosicherheitswerkbänken, während Sie dieses Verfahren durchführen.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Schistosoma mansoni Eier sind potente Stimulatoren der T-Helferzellen vom Typ 2 (Th2) Immunantwort, die charakteristisch für Parasitenbefall, Asthma und allergische Entzündung. Dieses Protokoll nutzt S. mansoni Ei Injektion an einen CD4 Th2-Zytokin-induzierte Entzündungsreaktion in der Lunge, Lunge durch Granulombildung um das Ei gekennzeichnet, Eosinophilie und Makrophagen-Aktivierung Alternative zu generieren.

Mit den Eizellen<em&gt; Schistosoma mansoni</em&gt; Als ein<em&gt; In vivo</em&gt; Modell von Helminthen-induzierten Lungenentzündung

Dieser Artikel beschreibt ein Protokoll für die groß angelegte axenic Isolierung und Sammlung von freischwimmenden Miracidia der menschlichen Blut Egel Schistosoma Mansoni und deren Weiterverarbeitung für Einführung in die in-vitro- Kultur.

Masse isoliert und In-vitro- Kultivierung von Intramolluscan Stadien der menschlichen Blut Fluke Schistosoma Mansoni

Die Trypanosomen Trypanosoma Agent der Chagas-Krankheit produziert langlebige asymptomatische Infektionen, die abrupt in klinisch anerkannten Pathologie zu entwickeln. Die folgenden Forschungs-Protokoll beschreibt eine kurzfristige familienbasierte epidemiologische Studie um die T. Trypanosoma Infektion, sexuell übertragbare von übergeordneten an Nachkommen zu entwirren.

Sexuelle Übertragung von amerikanischen Trypanosomen von Männchen und Weibchen zu Naive Mates

Hier boten wir eine Methode zur Erreichung einer stabilen Transfektion von Eimeria-Parasiten durch Nukleofektive Sporozoite oder Merozoitder der zweiten Generation. Genetisch veränderte eimerische Parasiten, die heterologe antigene Gene exdrücken, könnten als Impfstoff-Liefervehikel verwendet werden.

Nukleofection und In Vivo Propagation von Hühner Eimeria Parasiten

Detaillierte Untersuchungen an Mückenstadien von Malariaparasiten sind entscheidend, um wirksame Strategien zur Blockierung der Übertragung zu entwickeln. Dieses Protokoll zeigt, wie man infektiöse Gametozyten effektiv kultiviert und diese Gametozyten dann an Moskitos verfüttert, um Mückenstadien von P. falciparumzu erzeugen.

Plasmodium falciparum Gametozytenkultur und Mückeninfektion durch künstliche Membranfütterung

Wir beschreiben eine schnelle transiente Transduktionstechnik in verschiedenen Entwicklungsstadien von Echinococcus granulosus unter Verwendung von lentiviralen Vektoren der dritten Generation.

Transiente Transduktion der strobatierten Formen von Echinococcus granulosus

In dieser Arbeit beschreiben wir die Methodik, die zur Generierung von L. panamensis- und L . donovani-Stämmen verwendet wird, die das Gen für eGFP als stabiles integriertes Transgen unter Verwendung des pLEXSY-Systems exprimieren. Transfizierte Parasiten wurden unter Begrenzung der Verdünnung kloniert, und Klone mit der höchsten Fluoreszenzintensität in beiden Spezies wurden für die weitere Verwendung in Wirkstoff-Screening-Assays ausgewählt.

Entwicklung von Leishmania-Speziesstämmen mit konstitutiver Expression von eGFP

Malaria wird durch Inokulation des Sporozoitenstadiums von Plasmodium durch infizierte Stechmücken übertragen. Transgenes Plasmodium hat es uns ermöglicht, die Biologie der Malaria besser zu verstehen und hat direkt zur Entwicklung von Malaria-Impfstoffen beigetragen. In dieser Arbeit beschreiben wir eine optimierte Methodik zur Generierung transgener Plasmodium berghei-Sporozoite.

Gentechnisch veränderte Plasmodium berghei Sporozoiten

Diese Studie zeigt ein detailliertes Protokoll zur Durchführung der Ultrastrukturexpansionsmikroskopie in drei in vitro Lebenszyklusstadien von Trypanosoma cruzi, dem Erreger, der für die Chagas-Krankheit verantwortlich ist. Wir schließen die optimierte Technik für Zytoskelettproteine und die Pan-Proteom-Markierung ein.

Ultrastrukturelle Expansionsmikroskopie in drei in vitro Lebenszyklusstadien von Trypanosoma cruzi

Die chemische Genetik beinhaltet die Substitution eines Gatekeeper-Rests durch eine Aminosäure, die eine andere Seitenkette am Zielort enthält. In dieser Arbeit haben wir einen mutierten Parasiten generiert, der ein hypomorphes Allel von cdpk1 enthält, und kompensatorische Signalwege identifiziert, die der Parasit im mutierten Hintergrund einnimmt.

Verständnis der Entwicklung von Kompensationswegen in einem mutierten Malariaparasiten mit hypomorphem Allel pflanzenähnlicher Kinasen

Hier beschreiben wir die in vitro Kulturbedingungen, die Isolierung und die verstärkte Bildung von extrazellulären Vesikeln (EVs) aus Echinococcus granulosus. Die kleinen EVs wurden durch dynamische Lichtstreuung und Transmissionselektronenmikroskopie charakterisiert. Die Aufnahme durch dendritische Zellen aus dem Knochenmark und ihre phänotypische Modulation wurden mittels konfokaler Mikroskopie und Durchflusszytometrie untersucht.

Isolierung und dendritische Zellaufnahme von kleinen extrazellulären Vesikeln aus Echinococcus granulosus

Lernen Sie die Transformation von Zerkarien in Schistosomula von Schistosoma mansoni für die Parasitologie-Forschung. Diese Methode ermöglicht die sichere In-vitro-Kultur bis zu sechs Wochen.

Zerkarien Transformation und In-vitro- Anbau von Schistosoma mansoni Schistosomules

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