Name: Anreicherung von NK-Zellen aus menschlichem Blut mit der RosetteSep Kit von StemCell Technologies (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 52 s
Description: Lernen Sie die Anreicherung von NK-Zellen aus menschlichem Blut mit dem RosetteSep Kit von StemCell Technologies. Diese negative Selektionsmethode gewährleistet hohe Reinheit und Lebensfähigkeit der Zellen für immunologische Forschung.

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Ein detailliertes Protokoll wird mit jeder Rosette September Isolation Cocktail enthalten und ist online verfügbar auf der Website StemCell Technologien 1.

<ol><li>Procedures and instruction manuals. , 
	
 <a target="_blank" href="http://www.stemcell.com/technical/technicalrsproc.aspx">http://www.stemcell.com/technical/technicalrsproc.aspx</a> Forthcoming.</li>
</ol>

Die Zellen isoliert mit dieser Technik lassen sich weiter in verschiedenen Populationen mit anderen Zellseparation Kits getrennt werden.

PBS ergänzt mit 2% FCS und Histopaque Lösungen müssen auf Raumtemperatur vor dem Beginn des Verfahrens gebracht werden.

anreicherung von nk-zellen aus menschlichem blut mit der rosettesep kit von stemcell technologies

Enrichment of NK Cells from Human Blood with the RosetteSep Kit from StemCell Technologies

Natürliche Killerzellen (NK)-Zellen sind große granuläre zytotoxischen Lymphozyten, die das angeborene Immunsystem gehören und eine wichtige Rolle spielen im Kampf gegen Krebs und Infektionen, sondern auch in den frühen Stadien der Schwangerschaft und die Abstoßung von Transplantaten verwickelt. Diese Zellen sind derzeit im peripheren Blut, aus dem sie isoliert werden können. Die Zellen können isoliert werden entweder positive oder negative Selektion werden. Für die positive Selektion verwenden wir Antikörper, die gegen einen Oberflächenmarker derzeit nur auf die Zellen von Interesse, während für negative Selektion verwenden wir Cocktails von Antikörpern gezielt an die Oberfläche Marker auf allen Zellen, aber die Zellen von Interesse. Diese letztere Technik zeigt den Vorteil, dass die Zellen von Interesse frei von Antikörpern, wodurch das Risiko von unerwünschten Zell-Aktivierung oder Differenzierung. In diesem Video-Protokoll zeigen wir, wie NK-Zellen aus menschlichem Blut durch negative Selektion zu trennen, mit dem RosetteSep Kit von StemCell Technologien. Das Verfahren beinhaltet den Erhalt menschlichen peripheren Blut (unter einem Institutional Review Board genehmigte Protokoll zum Schutz von Testpersonen) und Mischen mit einem Cocktail aus Antikörpern, die Markierungen fehlen auf NK-Zellen binden, sondern an allen anderen mononukleären Zellen im peripheren Blut (zB T-Lymphozyten, Monozyten ...). Die Antikörper sind in der Cocktail-konjugiert sind, um Antikörper, die gegen A auf Erythrozyten Glycophorin. Alle unerwünschten Zellen und roten Blutkörperchen wird daher in Komplexen gefangen werden. Die Mischung aus Blut und Antikörper-Cocktail wird dann verdünnt, überlagert auf einem Histopaque Steigung, und zentrifugiert. NK-Zellen (&gt; 80% rein) können an der Schnittstelle zwischen den Histopaque und die verdünnte Plasma gesammelt werden. Ähnliche Cocktails sind für die Anreicherung von anderen Zellpopulationen, wie das humane T-Lymphozyten zur Verfügung.

Natürliche Killerzellen sind eine kleine Population von Lymphozyten. Hier zeigen wir, wie diese Zellen aus menschlichem Blut durch negative Selektion zu isolieren, unter Verwendung eines Kits von StemCell Technologies. Die erhaltenen Zellen lebensfähig sind und unberührt von Antikörpern, und deshalb bereit, für eine Reihe von Prozeduren verwendet werden.

Anreicherung von NK-Zellen aus menschlichem Blut mit der RosetteSep Kit von StemCell Technologies

Natürliche Killerzellen (NK-Zellen) sind große granuläre zytotoxische Lymphozyten, die zum angeborenen Immunsystem gehören und eine wesentliche Rolle bei der Bekämpfung von Krebs spielen ...

Hallo, ich bin Christine Beaton. Ich bin wissenschaftliche Mitarbeiterin im Labor von George Chen am Department für Physiologie und Biophysik der University of California in Irvine. Heute zeige ich Ihnen, wie man natürliche Killerzellen aus menschlichem Blut durch negative Selektion mit den Cocktail-Kits von Stem Cell Technologies isoliert.Der Grund, warum wir dieses Kit von Stem Cell Technologies verwenden, liegt in der sehr hohen Reinheit der Zellen, die wir erhalten, und der negativen Selektion, die es uns ermöglicht, Zellen zu gewinnen, die nicht an einen Antikörper gebunden wurden. So treten keine unerwarteten Effekte bei diesen Zellen auf. Die Funktionsweise des Tsep-Kits beruht darauf, dass Antikörper vorhanden sind, die an alle Zellen im Blut binden, die für uns nicht von Interesse sind.Im vorliegenden Fall binden Antikörper an Glycophorin A auf roten Blutkörperchen, wobei T-Zellen, B-Zellen und Monozyten beteiligt sind. Es wurde ein Antikörper gegen eine weiße Blutkörperchenart mit einem Antikörper gegen eine rote Blutkörperchenart verknüpft. Dadurch entsteht ein Komplex aus einer unerwünschten weißen Blutkörperchenzelle und mehreren roten Blutkörperchen. Da rote Blutkörpe

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Forschung

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Biology

Biologie

Hier beschreiben wir eine Methode, um effizient zu erweitern und zu reinigen eine große Anzahl von menschlichen NK-Zellen und beurteilen ihre Funktion.

Expansion, Reinigung und Functional Assessment of Human peripheren Blut NK-Zellen

Dieses Video demonstriert die Methode zur Analyse des Energiestoffwechsels in aktivierten menschlichen NK-Zellen mit einem extrazellulären Flussanalysator. Verschiedene Inhibitoren der Elektronentransportkettenkomplexe beeinflussen die ATP-Synthese, die über die Sauerstoffverbrauchsrate (OCR) gemessen wird und Einblicke in den Zellstoffwechsel und die Bioenergetik gibt.

Echtzeit-Überwachung des Energiestoffwechsels in humanen NK-Zellen mit einem extrazellulären Flussanalysator

Dieses Video demonstriert eine Technik zur Cas9-Ribonukleoprotein-vermittelten genetischen Modifikation von primären natürlichen Killerzellen (NK). Ein Cas9-Ribonukleoprotein, bestehend aus einer Cas9-Endonuklease, die an eine durch Basenpaarung gebildete Guide-RNA (gRNA) gebunden ist, eine CRISPR-RNA (crRNA) und eine trans-aktivierende crRNA (tracrRNA), wird mittels Elektroporation in primäre natürliche Killerzellen eingebracht. Das Ribonukleoprotein zielt auf die Wirts-DNA ab und spaltet sie...

Eine Technik zur Gen-Editierung in natürlichen Killerzellen mit CRISPR Cas9

Dieses Protokoll beschreibt die Entwicklung, Expansion und in-vivo-Bildgebung von NK-Zellen aus hES-und iPS-Zellen abgeleitet.

Entwicklung, Erweiterung und<em&gt; In vivo</em&gt; Monitoring von humanen NK Zellen aus humanen embryonalen Stammzellen (hES-Zellen) und und induzierten pluripotenten Stammzellen (iPS-Zellen)

Eine einfache und zuverlässige Methode wird hier beschrieben eine Reihe von NK-Zellfunktionen wie Degranulierung, Zytokin und Chemokin-Produktion in verschiedenen NK-Zelluntergruppen zu analysieren.

Durchflusszytometrie-basierte Assay zur Überwachung von NK-Zell-Funktionen

Das Ziel dieser Studie war es, Technologien zu formulieren, die für erfolgreiche gen Transduktion in primären natürlichen killer (NK) Zellen ermöglichen. Die Dextran-vermittelten Lentivirale Transduktion von Mensch oder Maus primären NK Zellen führt zu höheren Wirkungsgraden der gen-Expression. Diese Methode des Gens Transduktion wird NK Zelle genetischen Manipulation erheblich verbessern.

Dextran erhöht die Effizienz der Lentivirale Transduktion von murinen und menschliche primäre NK-Zellen

Hier präsentieren wir Ihnen ein Protokoll zur Gen-silencing murine NK-Zellen durch ein Feeder-freie Unterscheidung System für mechanistischen Studie in Vitro und in Vivoin Serienfertigung herzustellen.

Ein neuartiges Feeder-freie System für die Massenproduktion von murinen Natural Killer Cells In Vitro

Hier präsentieren wir Ihnen ein Protokoll zur primären oder erweiterten menschlichen natürlichen (NK) Killerzellen mit Cas9 Ribonucleoproteins (Cas9/RNPs) genetisch zu verändern. Mithilfe dieses Protokolls erzielten wir menschliche NK-Zellen für Umwandlung Wachstumsfaktor-b-Rezeptor 2 (TGFBR2) und Hypoxanthin-Phosphoribosyltransferase 1 (HPRT1) mangelhaft.

Generation von Knock-out-Grund- und erweiterten menschlichen NK-Zellen mit Cas9 Ribonucleoproteins

Ein Protokoll zur Untersuchung von FcγRIIIa-gesteuerten Ereignissen durch therapeutische Antikörper in menschlichen natürlichen Killerzellen wird hier beschrieben. Diese künstliche Stimulationsplattform ermöglicht die Abfrage nachgeschalteter Effektorfunktionen wie Degranulation, Chemokin/Zytokin-Produktion und Signalwege, die durch die FcγRIIIa- und Fc-Anteile von Antikörpern, die an der Bindung beteiligt sind, vermittelt werden.

Bewertung menschlicher natürlicher Killerzellereignisse, die durch fcγRIIIa Engagement in Gegenwart therapeutischer Antikörper angetrieben werden

Das vorliegende Protokoll zeigt, wie CD3−/CD45+CD56+-Zellen mit leichter Zytotoxizität von humanen Stammzellen mit expandiertem Potenzial (hEPSCs) sowohl unter 3D- als auch unter 2D-Kulturbedingungen unterschieden werden können. Dies ermöglicht eine routinemäßige phänotypische Validierung, ohne die komplexe Mikroumgebung zu zerstören.

Generierung natürlicher Killerzellen aus humanen Stammzellen mit erweitertem Potenzial

Hier stellen wir eine Methode zur Differenzierung und Erweiterung von humanen iPSC-abgeleiteten chimären Antigenrezeptoren (CAR)-exprimierenden natürlichen Killerzellen mit verbesserter Abtötung gegen verschiedene Malignome vor. Dieses Protokoll demonstriert die Differenzierung und Expansion von für natürliche Killer (NK) optimierten iPSC-abgeleiteten CAR-NK-Zellen und die Messung der Antitumoraktivität gegen verschiedene Tumorzelllinien.

Fortschritte bei humanen induzierten pluripotenten Stammzellen, die von chimären Antigenrezeptoren abgeleitet werden und natürliche Killerzellen exprimieren

Lernen Sie die Anreicherung von NK-Zellen aus menschlichem Blut mit dem RosetteSep Kit von StemCell Technologies. Diese negative Selektionsmethode gewährleistet hohe Reinheit und Lebensfähigkeit der Zellen für immunologische Forschung.

Anreicherung von NK-Zellen aus menschlichem Blut mit der RosetteSep Kit von StemCell Technologies

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