Name: Eine allgemeine Methode zur Bewertung der Inkubation von Saccharose Craving in Ratten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-11-04T12:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 44 s
Description: Erfahren Sie, wie man das Inkubieren von Saccharose-Craving bei Ratten nach erzwungener Abstinenz bewertet. Diese Methode nutzt selbstverabreichten Zucker und Hinweisreize, um neurologische Mechanismen von Sucht und Rückfall zu untersuchen.

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Die Produktion dieses Manuskript und Video wurde von National Institute on Drug Abuse / National Institutes of Health gewähren R15 DA016285-02, der Western Washington University Biomedical Research Activities in Neuroscience Initiative und Western Washington University unterstützt.

1. Tierische Themen <ol><li> Männlich Long-Evans-Ratten sind 3 Monate alt bei Beginn der Studie. Ratten sind Simonsen-derived (Gilroy, Kalifornien, USA) gezüchtet in der Western Washington University Vivarium und werden einzeln auf einem 12-h rückwärts Tag / Nacht-Zyklus (Lichter aus in 0700) mit Purina Mills Inc. Mazuri Nager Pellets (Gray Summit untergebracht , MO, USA) und Wasser ad libitum zur Verfügung. </li><li> Alle Ausbildung und Prüfung findet zwischen 0900-1300 mit Kohorten von Ratten immer ausgebildet und geprüft gleichzeitig täglich. </li><li> Ratten sind gewogen jeden Montag, Mittwoch und Freitag für die Dauer der Studie. </li><li> Unmittelbar vor der Trainingsphase werden Ratten von Wasser für ca. 20 h beraubt zu Saccharose Selbstverwaltung am ersten Tag der Ausbildung zu fördern. </li></ol> 2. Behavioral Procedures Alle operante Verhaltenstherapie Verfahren verwenden Standard operante Konditionierung Kammern (Med Associates Inc., St. Albans, VT, USA) mit einer Infusionspumpe (Razel Scientific Instruments, St. Albans, VT, USA) auf der jeweils operante Konditionierung Kammer. Operante Konditionierung Kammern sind in geschlossenen schallschwächende Schränke mit Ventilatoren (Western Washington University, USA). Alle experimentellen Bedingungen und die Datenerhebung durch Med PC IV-Software (Med Associates Inc., St. Albans, VT, USA) kontrolliert. Operante Konditionierung Kammern (30 x 20 x 24 cm) enthalten zwei Hebel (einer stationären und einer versenkbaren), ein Klangerzeuger, ein weißer Stimulus Licht über dem einziehbaren Hebel, und ein rotes Haus Licht an der gegenüberliegenden Wand. Die Infusionspumpe liefert Saccharose in eine Belohnung Behälter auf der rechten Seite des aktiven Hebel. Hebel sind 10 cm aus dem Netz Boden. Vier Infrarot-photobeams kreuz und quer durch jede Kammer. Der vordere Balken sind jeweils 10,5 cm von den Seitenwänden und die Längsträger jeweils 6 cm von den Seitenwänden. Jeder Strahl ist 4,5 cm oberhalb des Edelstahl-bar Stock. Die Balken einere gesetzt, die Anzahl der vollständigen Pausen zählen. Die Gesamtzahl der Strahl Pausen während des Trainings und Verlangen Testing aufgenommen. Mit Ausnahme von Wasser Einschränkung vor der ersten Trainingseinheit werden Ratten Futter und Wasser ad libitum sowohl in Käfige und in die operante Konditionierung Kammern vorgesehen. Die Kammern sind in einem speziellen Prüfraum, dass, wie mit dem Vivarium, befindet sich auf einem Rückfahrscheinwerfer Zyklus. Ratten sind in Käfige zwischen den Zimmern auf einem Wagen, der mit lichtundurchlässigen Stoff bespannt transportiert wird. Am Ende jeder Sitzung werden Ratten zu Hause Käfige zurück. Es gibt drei Phasen, die typischen Experiment: Training, erzwungene Enthaltsamkeit und Testen. Testing wird die Sitzung, bei Verlangen beurteilt wird. Wir bewerten Begierde in zwei allgemeine Testverfahren, je nach Studie. Diese beiden Verfahren sind in den Abschnitten 2.3.1 und 2.3.2 beschrieben. <ol><li> Training <ol><li> In den typischen Experiment verbringen Ratten 2 h / Tag für10 aufeinander folgenden Tagen in operante Konditionierung Kammern, wo sie erlaubt, die versenkbare (aktiv) Hebel für eine 0,2 ml Lieferung von 10% Saccharose-Lösung in den Behälter auf der rechten Seite des Hebels drücken sind. </li><li> Diese Reaktion aktiviert auch eine Verbindung Stimulus, bestehend aus einem Ton (2 kHz, 15 dB über Umgebungslärm) und das weiße Licht. Die Verbindung Reiz dauert 5 s und wird von einem 40-s time out, gefolgt, während der drückt auf den aktiven Hebel aufgezeichnet werden, haben aber keine programmierten Folge. </li><li> Eine Antwort auf die inaktiven (stationär) Hebel hat keine programmierte Folge, sondern drückt werden aufgezeichnet. Die Zahl der Balken bricht während Training und Testing aufgenommen. Alle Reaktions-und Bewegungsapparates Maßnahmen werden als Zeit-Verläufe (2 Minuten bins) erfasst, sind aber meist als Gesamtwerte pro Sitzung berichtet. </li></ol></li><li> Erzwungene Enthaltsamkeit. Rats bleiben in Käfige für die Dauer von Zwangs-Abstinenz. Die typische erzwungene Enthaltsamkeit Perioden wir benutzen, sind an Ratten th getestet habene Tag direkt nach dem letzten Tag der Ausbildung (Tag 1 von Zwangs-Abstinenz) oder 30 Tage nach dem letzten Tag der Ausbildung (Tag 30 der erzwungenen Abstinenz). </li><li> Testen <ol><li> Extinction ohne Cues. In diesem Prüfverfahren, Ratten zunächst erlaubt, die aktive Hebel in identischen Bedingungen Training mit der Ausnahme, dass die Antwort keine Konsequenzen und die Dauer der Sitzung hat Presse ist 1 h. Rats Erfahrung mindestens sechs dieser vom Aussterben Sitzungen auf dem Test-Tag. Jeder Aussterben Sitzung wird von einem Zeitraum von 5 Minuten, wo die aktive Hebel zurückgezogen und das Haus ist Licht ausgeschaltet wird getrennt. "Extinction" ist indiziert, wenn aktive Hebel reagiert auf weniger als 20 Pressen / h. wurde reduziert Einige Ratten benötigen eine siebte Sitzung. Die nächste Sitzung (nach weiteren 5 Minuten Verspätung) ist der Test-Session, wo Ratten dann kann der Ton drücken + Licht Fingerzeig, dass zunächst mit jeder Lieferung von Saccharose während des Trainings war gepaart. </li><li> Extinction mit Hinweisen. In diesem abkürzend Prüfverfahren, Ratten dürfen die aktiven Hebel in identischen Bedingungen zu Training, außer dass Saccharose nicht zugestellt drücken. </li></ol></li><li> Inaktive Hebel drücken wird als Maß der Hebel Diskriminierung eingesetzt. Es ist auch, zusammen mit photobeam Pausen, als Maß der unspezifischen motorischen Aktivierung. Motorische vs motivationalen Veränderungen erschweren die Interpretation der Begierde Verhalten. Die inaktiven Hebel reagiert und photobeam Pause Daten sind nützlich bei der Klärung Motors vs Motivation Beiträge zur Sucht, ebenso wie Vergleichsgruppen in pharmakologischen Studien, in denen Ratten reagieren mit einer hohen Rate für Saccharose oder anderen Lebensmitteln mit einem potenziellen Sucht beeinflussen Verbindung in Frage gestellt werden (zB 7 , 8). </li></ol> 3. Vertreter Manipulationen an Saccharose Craving nach Variable Zeiten der erzwungene Enthaltsamkeit Affect Die allgemeine hier beschriebene Methode bietet eine Möglichkeit, die Verhaltens-und Neurobiologie Bestimmung Sondents des Verlangens nach der variable Zeiträume erzwungene Enthaltsamkeit. Hier beschriebenen Methoden in Bezug auf repräsentative Ergebnisse in Abschnitt 4 zur Verfügung gestellt. <ol><li> Sättigung. Einige Ratten erhielten Flaschen 10% Saccharose in ihre Käfige für die 17 h unmittelbar vor der Prüfung 8. Ratten in dieser Studie wurden mit dem Extinction ohne Hinweise Verfahren. </li><li> Environmental Enrichment. Während der erzwungenen Abstinenz-Zeitraum blieb einige Ratten in individuelle Gehäuse (Controls), während andere in eine große verschoben wurden (36 "Breite x 20" Tiefe x 40 "height; Qualität Cage Produkte, Portland, OR, USA) Käfig mit drei Kohorten (angereichert). Die Enriched Tiere hatten mehrere Spielzeuge in ihrer Umgebung, einschließlich PVC-Schlauch und waren auch da neue Spielzeuge jedes M, W, F 10. Ratten in dieser Studie getestet wurden, mit dem Extinction ohne Hinweise Verfahren. </li><li> Pharmakologische Herausforderung. Am Testtag wurden Ratten vorbehandelt mit einer Dosis des Dopamin-D1-Antagonisten SCH 23390. Ratten in dieser Studie were unter Verwendung des Extinction mit Hinweisen Verfahren. </li></ol> 4. Repräsentative Ergebnisse: <img alt="Abbildung 1" src="/files/ftp_upload/3335/3335fig1.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 1"> Abbildung 1 Representative Training und Testing für eine Inkubationszeit von Saccharose Verlangen zu experimentieren. Die Datenpunkte zeigen Mittelwerte ± SEM. Gruppengröße für Abbildung 1a ist 77 Ratten und Abbildung 1b Gruppe Größen reichten von 11 bis 12 pro Gruppe. * Signifikanter Unterschied von Tag 1 Gruppe, p &lt;0,05. Diese Zahl ist aus den Daten in 8 mit freundlicher Genehmigung des Springer angepasst. <img alt="Abbildung 2" src="/files/ftp_upload/3335/3335fig2.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 2"> Abbildung 2: Wirkung von Saccharose Sättigung auf Saccharose Verlangen nach 1 oder 30 Tagen erzwungene Enthaltsamkeit. Gruppe Größen sind 8-9 pro Gruppe. * Signifikanter Unterschied von Tag 1 Gruppe, † signifikanter Unterschied Kontrollgruppe, p &lt;0,05. Diese Zahl ist angepasstvon 9 mit freundlicher Genehmigung von Elsevier. <img alt="Abbildung 3" src="/files/ftp_upload/3335/3335fig3.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 3"> Abbildung 3 Ein Monat Anreicherung der Umwelt reduziert Saccharose Begierde. Gruppe Größen sind jeweils 8 Ratten. * Signifikanter Unterschied von Tag 1, † signifikanter Unterschied Kontrollgruppe, p &lt;0,05. Diese Zahl ist von 10 mit freundlicher Genehmigung von Wolters Kluwer Health angepasst. <img alt="Abbildung 4" src="/files/ftp_upload/3335/3335fig4.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 4"> Abbildung 4 Systemische SCH 23390 zurückgegangen Saccharose Lust auf mehr effektiv nach einem Tag der erzwungenen Abstinenz. Gruppe Größen 8-12 Gruppe. * Signifikanter Unterschied von Tag 1 Gruppe, † signifikanter Unterschied zwischen 0 und Dosis-Gruppe, p &lt;0,05. Diese Zahl ist von 8 mit freundlicher Genehmigung von Springer angepasst. <ol><li> Abbildung 1 zeigt repräsentative Ausbildung und Prüfung von Daten für Ratten selbst verwalten Saccharose (Abbildung1 TOP) und dann reagiert in Extinction mit der Saccharose-gepaart Cue zur Verfügung (Abbildung 1 unten). Wie gezeigt, Ratten selektiv reagieren auf die aktive Hebel während des Trainings und während der Prüfung. Interessanterweise inaktiv reagiert und Bewegungsaktivität zeigen einige Inkubation, obwohl der Effekt ist robust im aktiven Hebel reagiert. </li><li> Abbildung 2 zeigt den Effekt der Sättigung mit Saccharose auf Saccharose Verlangen nach 1 oder 30 Tagen erzwungene Enthaltsamkeit. Sättigung reduziert Extinction ohne Hinweise reagiert, nachdem entweder Periode der erzwungenen Abstinenz, sondern nur reduziert reagiert für die Saccharose-Cue allein in Ratten, die nur einen Tag der erzwungenen Abstinenz hatte. </li><li> Wie in Abbildung 3 dargestellt, reduzierte Anreicherung der Umwelt inkubiert Extinction ohne cue reagiert und die Reaktion für die Saccharose-Cue-alone Verhaltensweisen auf ein Niveau nach nur einem Tag der erzwungenen Abstinenz gefunden. </li><li> Abbildung 4 zeigt eine Abstinenz-abhängige Wirkung von SCH 23390 auf Extinction mit Hinweisen reagiert. SCH 23390 wurde am effective zur Reduzierung Saccharose Verlangen nach 1, V. 30, Tage der erzwungenen Abstinenz. </li></ol>

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<li>Holland, P. C., Bouton, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippocampus+and+context+in+classical+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Hippocampus and context in classical conditioning.</a> Curr. Opin. Neurobiol. 9, 195-202 (1999).</li>
<li>Epstein, D. H., Preston, K. L., Stewart, J., Shaham, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toward+a+model+of+drug+relapse%3A+an+assessment+of+the+validity+of+the+reinstatement+procedure%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology+%28Berl%29%22%5BJournal%5D)">Toward a model of drug relapse: an assessment of the validity of the reinstatement procedure.</a> Psychopharmacology (Berl). 189, 1-16 (2006).</li>
<li>Kupferschmidt, D. A., Brown, Z. J., Erb, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Procedure+for+Studying+the+Footshock-Induced+Reinstatement+of+Cocaine+Seeking+in+Laboratory+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">A Procedure for Studying the Footshock-Induced Reinstatement of Cocaine Seeking in Laboratory Rats.</a> J. Vis. Exp. (47), (2011).</li>
</ol>

Alle Verfahren die Richtlinien befolgt, in den &quot;Principles of Laboratory Animal Care&quot; (NIH Publikation Nr.. 86 bis 23) beschrieben und wurden von der Western Washington University Institutional Animal Care und Verwenden Committee genehmigt.

Die Verfahren, die wir hier beschreiben, könnte als Wiedereinsetzung Verfahren identifiziert werden, obwohl dies technisch ungenau als Hebel drücken für den Cue ist nicht ausgelöscht vor der Begierde Testfahrten. In einem typischen Wiedereinsetzung Verfahren, reagiert mit Belohnung gepaart Cues gelöscht und dann &quot;wieder&quot; mit der Verabreichung einer nicht-kontingent Präsentation der Belohnung (Priming-induzierte Wiedereinsetzung) oder einen Stressor wie Fußschock (Stress-induzierte Wiederherstellung) 11.</...

<table border="1"><tbody><tr><td> Artikel </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td></tr><tr><td> Enrichment Cage </td><td> Qualität Cage Unternehmen </td><td> FH-36 ½ T-N </td></tr><tr><td> Operante Kammer </td><td> Med Associates </td><td> MED-008-CT-B3 </td></tr><tr><td> SCH 23390 </td><td> Sigma </td><td> D054 </td></tr></tbody></table>

eine allgemeine methode zur bewertung der inkubation von saccharose craving in ratten

A General Method for Evaluating Incubation of Sucrose Craving in Rats

Für jemanden, der auf einem Nahrungsmittel-Diät, Esssucht in Reaktion auf Lebensmittel-gekoppelten Signale können als Schlüssel Verhaltensstörungen Übergang zwischen Abstinenz und Rückfall in Essen unter 1 dienen. Lebensmittel Verlangen auf diese Weise konzipiert ist verwandt mit Drogenverlangen in Reaktion auf Drogen gepaart Cues. Eine reiche Literatur gibt es schon das Verständnis des Verhaltens-und neurobiologischen Determinanten der Gier nach Drogen entwickelt worden, wir und andere haben erst vor kurzem mit Schwerpunkt auf der Übersetzung Techniken von der Grundlagenforschung Suchtforschung besser zu verstehen, Sucht-ähnliche Verhalten in Bezug auf Nahrung 2-4. Wie in früheren Studien mit Craving getan, untersuchen wir Saccharose Verlangen Verhalten durch die Verwendung eines Ratten-Modell für einen Rückfall. In diesem Modell, Ratten selbst verabreichen entweder Drogen oder Essen in Sitzungen über mehrere Tage. In einer Sitzung, liefert Hebel reagiert die Belohnung mit einem Ton + Lichtreiz. Craving Verhalten wird dann operativ als Reaktion in einem definiertenanschließenden Sitzung, wo die Belohnung ist nicht verfügbar. Rats zuverlässig auf den Ton zu reagieren + Lichtreiz, wahrscheinlich aufgrund seiner erworbenen konditionierten verstärkenden Eigenschaften 5. Dieses Verhalten wird manchmal auch als Saccharose suchen oder Cue-Reaktivität bezeichnet. In der gegenwärtigen Diskussion werden wir verwenden den Begriff &quot;Saccharose Begierde&quot;, diese beiden Konstrukte zu subsumieren. In den letzten zehn Jahren haben wir, wie die Länge der Zeit nach der Belohnung Selbstverwaltung Einflüsse Belohnung Verlangen konzentriert. Interessanterweise erhöhen Ratten reagieren auf die Belohnung gepaart Cue im Laufe von mehreren Wochen für einen Zeitraum von Zwangs-Abstinenz. Diese &quot;Inkubationszeit des Verlangens&quot; ist in Ratten, die selbst verwalteten entweder in Lebensmitteln oder Drogen 4,6 beobachtet haben. Diese zeitabhängige Zunahme der Begierde wir im Tiermodell identifiziert haben können haben ein großes Potential für den Menschen, Drogen-und Esssucht Verhaltensweisen. Hier präsentieren wir ein Protokoll für die Beurteilung der Inkubation von Sucrose Verlangen in Ratten. Varianten des Verfahrens wird angegeben, wo Sehnsucht als Reaktion auf eine diskrete Saccharose-gepaart Cue folgenden Aussterben der Hebel drücken innerhalb der Saccharose Selbstverwaltung Kontext (Extinction ohne Cues) oder als Reaktion auf Saccharose-gekoppelten Signale in eine allgemeine Aussterben Kontext beurteilt werden (Extinction mit Hinweisen).

Als Reaktion auf Lebensmittel oder Arzneimittel-gepaart Hinweise nimmt im Laufe einer Periode der Abstinenz und dies kann zu einer erhöhten Anfälligkeit für Rückfälle Verhaltensweisen beziehen. Hier haben wir detailliert ein Verfahren zur Bewertung dieser &quot;Inkubationszeit der Begierde&quot; in Ratten, die selbst verwalteten Saccharose haben.

Eine allgemeine Methode zur Bewertung der Inkubation von Saccharose Craving in Ratten

Für Personen mit einer einschränkenden Diät kann das Verlangen nach bestimmten Lebensmitteln (Food Craving) als Reaktion auf mit Lebensmitteln assoziierte Reize einen entscheidenden verhaltensbiologischen Übergangspunkt zwischen Abstinenz und ... darstellen.

Das übergeordnete Ziel dieses Experiments besteht darin, das Verlangen nach Saccharose bei Ratten nach einer kurzen oder längeren Phase der erzwungenen Abstinenz von der Saccharose-Selbstapplikation zu bewerten. Dies wird erreicht, indem man den Ratten zunächst ermöglicht, über 10 tägliche Selbstapplikationssitzungen hinweg Saccharose selbst zu verabreichen. Anschließend werden die Tiere für entweder einen oder 30 Tage in einen Zustand der erzwungenen Abstinenz von der Saccharose-Selbstapplikation versetzt, indem sie einfach in ihren Heimkäfigen gehalten werden.Der letzte Schritt des Verfahrens besteht darin, die Ratten in die Selbstapplikationsumgebung zurückzubringen und ihnen zu erlauben, auf Reize zu reagieren, die zuvor explizit mit Sucrose-Selbstapplikation assoziiert waren, jedoch nicht mit Sucrose selbst. Letztendlich zeigen die Ergebnisse, wie die Höhe der Reaktion auf mit Sucrose gepaarte Reize je nach Dauer der erzwungenen Abstinenz variiert. Wie wir bereits berichtet haben, nimmt das Verlangen nach Sucrose während eines Monats erzwungener Abstinenz von Sucrose zu oder inkubiert. Experimente zur Selbstapplikation können mit dieser Methode durchgeführt werden, um die Verhaltens- und neurobiologischen Grundlagen der Inkubation von Verlangen zu untersuchen. Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber bestehenden Methoden liegt darin, dass die Dauer nach der letzten Selbstapplikationssitzung variieren kann. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen im Bereich der Suchtforschung zu beantworten, insbesondere, wie die Länge einer Phase erzwungener Abstinenz das Verlangen beeinflusst.Die Auswirkungen der Anwendung dieser Technik erstrecken sich auf Therapien für Rückverhaltensweisen. Insbesondere, da die überwiegende Mehrheit der Personen nach einer längeren Abstinenzphase einen Rückfall erlebt hat. Obwohl diese Methode Einblicke in das Verlangen nach Zucker vermitteln kann.Es kann auch auf andere Belohnungen wie Suchtstoffe angewendet werden. Diese Studie verwendet männliche Long-Evans-Ratten, die zu Beginn der Studie drei Monate alt sind. Die Ratten werden einzeln gehalten, bei einem 12-Stunden-umgekehrten Tag-Nacht-Zyklus, mit pelletiertem Futter und Wasser ad libitum, bevor alle Versuchs- und Kontrolltiere gewogen werden.Die Tiere sollten während der gesamten Studiendauer jeden Montag, Mittwoch und Freitag gewogen werden. Schließlich sollte die Wasserverweigerung etwa 20 Stunden vor Beginn der Untersuchung zum zuckerhaltigen Getränkeverlangen eingeleitet werden. Dies fördert die Selbstverabreichung von Saccharose am ersten Trainingstag.Die gesamte Training- und Testphase findet zwischen 09:00 und 13:00 Uhr statt, und die Kohorten werden täglich stets zur gleichen Zeit im Testraum trainiert und geprüft. Die operanten Konditionierungskammern sind in schallgedämpfte Gehäuse mit Belüftungslüftern eingebaut. Die in dieser Studie verwendeten Kammern haben Abmessungen von 30 × 20 × 24 Zentimetern und enthalten zwei Hebel: einen feststehenden und einen einziehbaren Hebel.Beide Hebel sind 10 Zentimeter über dem Gitterboden positioniert. Zusätzlich enthalten die Kammern einen Tonerzeuger, ein weißes Reizlicht über dem versenkbaren Hebel und ein rotes Raumlicht an der gegenüberliegenden Wand. Zur Beurteilung der motorischen Aktivität sind die Kammern mit Infrarot-Lichtschranken ausgestattet; in diesen Kammern befinden sich die vorderen Strahlen 10,5 Zentimeter von den Seitenwänden entfernt, und die seitlichen Strahlen sind jeweils sechs Zentimeter von den Seitenwänden entfernt.Jeder Balken befindet sich 4,5 Zentimeter über dem Boden aus Edelstahlstäben. Geben Sie frische 10%ige Saccharoslösung in die Infusionspumpe, die sich oben an jeder Kammer befindet. Programmieren Sie die zugehörige Software so, dass die Pumpe aktiviert wird, um 0,2 Milliliter der 10%igen Saccharoslösung in das Fach rechts neben dem Hebel abzugeben.Außerdem sollte mit Hilfe des zugehörigen Softwareprogramms die Kammer so eingestellt werden, dass das Drücken des beweglichen oder aktiven Hebels gleichzeitig einen zusammengesetzten Reiz aus einem Ton und weißem Licht auslöst. Der zusammengesetzte Reiz sollte fünf Sekunden lang andauern und von einer 42-Sekunden-Timeout-Phase gefolgt werden, während derer Drücke auf den aktiven Hebel aufgezeichnet werden, jedoch keine programmierte Konsequenz haben. Der stationäre oder inaktive Hebel ist so programmiert, dass sein Drücken keine Konsequenz hat, lediglich die Anzahl der Drücke erfasst wird.Im Wesentlichen sollte die Software alle Betätigungen beider Hebel sowie die Anzahl der Unterbrechungen des Infrarotstrahls während jeder Trainingssitzung aufzeichnen. Am ersten Trainingstag wird die Ratte für insgesamt zwei Stunden in die operante Konditionierungskammer platziert. Während dieser Zeit kann sich die Ratte frei bewegen und entweder den ausfahrbaren Hebel zur Freigabe einer 10%igen Saccharoslösung betätigen oder den inaktiven feststehenden Hebel betätigen.Alle Reaktions- und Bewegungsmaße werden als Zeitverläufe in Zwei-Minuten-Intervallen aufgezeichnet, jedoch üblicherweise als Gesamtwerte pro Sitzung berichtet. Nach Ablauf von zwei Stunden entfernen Sie die Ratte und bringen Sie in den Heimkäfig zurück. Stellen Sie sicher, dass die Konditionierungskammer gründlich gereinigt wird, um Rückstände und orale olfaktorische Hinweise zu entfernen, die nachfolgende Trainingssitzungen stören könnten.Während der Phase der erzwungenen Abstinenz verbleiben die Ratten im Heimkäfig mit Pelletfutter und Wasser ad libitum. Die Dauer der erzwungenen Abstinenz kann beliebig lang sein. Ein typischer Zeitraum für Studien zur Inkubation von Verlangen beträgt ein bis 30 Tage.Zusätzlich können unter Kontrollbedingungen weitere zu testende Parameter wie Saccharose, Sättigung oder die Wirkung von Umweltanreicherung verabreicht werden. In diesem Zeitraum werden zwei Testparadigmen vorgestellt. Das erste veranschaulicht die Extinktion ohne Reize.Richten Sie zuerst die operante Konditionierungskammer so ein, dass die Trainingsbedingungen nachgebildet werden, mit der Ausnahme, dass Ton und weißes Licht nicht aktiviert werden, wenn der aktive Hebel betätigt wird. Programmieren Sie die Kammer für sechs einstündige Extinktionssitzungen, die jeweils durch eine fünfminütige Phase getrennt sind, in der das Raumlicht ausgeschaltet und der aktive Hebel eingefahren wird, wobei die Sitzungen ununterbrochen ablaufen. Nach Abschluss der erzwungenen Abstinenzphase bringen Sie die Ratte in die operante Konditionierungskammer und lassen Sie während sechs einstündiger Extinktionssitzungen auf dem aktiven Hebel reagieren.Ein Verhaltensextinktion wird angenommen, wenn die Anzahl der Betätigungen des aktiven Hebels im sechsten Extinktionssitzung auf weniger als 20 pro Stunde gesunken ist. Falls die Extinktion noch nicht eingetreten ist, wird der Ratte eine siebte Extinktionssitzung ermöglicht. Die nächste Sitzung nach einer weiteren fünfminütigen Pause ist die Teststunde, in der die Ratten erneut den Ton plus Lichtreiz abrufen können, der ursprünglich während des Trainings mit jeder Applikation von Saccharose gekoppelt war. Bei dem zweiten Testverfahren, der Extinktion mit Reizen, wird die operante Konditionierungskammer so eingerichtet, dass sie die Trainingsbedingungen widerspiegelt.Abgesehen davon, dass bei Betätigung des aktiven Hebels keine Saccharoslösung verabreicht wird, wird die zu testende Ratte für die Dauer von zwei Stunden in die operante Konditionierungskammer platziert. Die Betätigung des inaktiven Hebels in Verbindung mit den Daten zum Unterbrechen des Lichtstrahls kann ebenfalls als Maß für unspezifische motorische Aktivierung verwendet werden. Da Unterscheidungen zwischen motorischen und motivationalen Veränderungen die Interpretation des Q-Reaktivitätsverhaltens möglicherweise erschweren können.Diese Abbildung zeigt typische Daten, die von einer Gruppe von 77 gesunden Ratten erhalten wurden, die darauf trainiert wurden, Saccharose selbst zu verabreichen. Gemäß dem in diesem Protokoll beschriebenen Trainingsparadigma ist ersichtlich, dass die Ratten während des Trainings selektiv auf den aktiven Hebel reagieren. Hier werden die Daten aus einer Testsession dargestellt.Es ist zu sehen, dass die Ratten im Auslöschungsversuch mit verfügbarer gekoppelter Warteschlange und Hinweisreizen reagieren. Auch hier zeigen die Ratten während des Tests eine selektive Reaktion am aktiven Hebel, wobei die Inaktivität des Hebels sowie die motorische Aktivität eine gewisse Inkubation aufweisen, obwohl der Effekt hier am stärksten bei der Reaktion am aktiven Hebel ausgeprägt ist. Die Gruppengrößen lagen zwischen 11 und 12 Tieren pro Gruppe, und zwischen den Gruppen am Tag eins und am Tag 30 zeigte sich ein signifikanter Unterschied mit einem P-Wert von weniger als 0,05. Diese Abbildung zeigt den Effekt der Saccharose-Sättigung auf die Saccharose-Q-Reaktivität nach ein- oder 30-tägiger erzwungener Abstinenz; einige Ratten erhielten Flaschen mit 10%iger Saccharose in ihren Heimkäfigen für die 17 Stunden unmittelbar vor dem Test im Auslöschungsversuch ohne Hinweisreize.Das Verfahren zeigte, dass Sättigung die Extinktion ohne Reizpräsentation nach einer beliebigen Phase erzwungener Abstinenz verringerte, jedoch nur die Reaktion auf das Saccharose-Q bei Ratten reduzierte, die lediglich einen Tag erzwungener Abstinenz durchlaufen hatten; die Gruppengrößen betrugen acht bis neun Tiere pro Gruppe. Das Sternsymbol kennzeichnet einen signifikanten Unterschied zur Gruppe des ersten Tages, und das Kreuzsymbol kennzeichnet einen signifikanten Unterschied zur Kontrollgruppe, wobei P kleiner als 0,05 ist. Diese Ergebnisse verdeutlichen, dass eine Monat dauernde Umweltanreicherung die Reaktivität gegenüber Saccharose-Q bei Ratten verringerte.Während der erzwungenen Abstinenzphase blieben die Kontrollratten in Einzelhaltung, während die Ratten der angereicherten Gruppe in große Käfige mit mehreren Spielzeugen in ihrer Umgebung, einschließlich PVC-Rohren, umgesiedelt wurden. Diese Ratten erhielten außerdem jeden Montag, Mittwoch und Freitag neue Spielzeuge. Die Ratten in dieser Studie wurden mittels der Extinktionsmethode ohne Q'S-Verfahren getestet.Die Umweltanreicherung verringerte die inkubierte Extinktion ohne Q-Antworten und Antworten auf das alleinige Verhalten des Sucrose-Q auf das Niveau, das bereits nach nur einem Tag erzwungener Abstinenz beobachtet wurde; jede Gruppe bestand aus acht Ratten. Der Stern kennzeichnet einen signifikanten Unterschied zur Gruppe des ersten Tages, und das Kreuzsymbol kennzeichnet einen signifikanten Unterschied zur Kontrollgruppe, wobei P kleiner als 0,05 ist. Hier wurden die Ratten vorab am Testtag mit einer Dosis des Dopamin-D1-Antagonisten SCH 23390 behandelt und mittels des Extinktionsverfahrens mit QS getestet.Es ist ersichtlich, dass systemisches s CH 2 3 3 9 0 die Suche nach Saccharose nach einem Tag erzwungener Abstinenz wirksamer verringert, wobei jede Gruppe aus acht bis zwölf Ratten pro Gruppe bestand. Der Stern kennzeichnet einen signifikanten Unterschied zur Gruppe des ersten Tages. Das Kreuzsymbol kennzeichnet einen signifikanten Unterschied zur Kontrollgruppe, wobei P kleiner als 0,05 ist.Bei der Durchführung dieses Verfahrens ist es wichtig, darauf zu achten, dass die Gruppen, die den Bedingungen der erzwungenen Abstinenz zugewiesen werden, anhand ihres Trainingsverhaltens ausgeglichen sind. Nach diesem Verfahren können weitere Methoden wie die Drogenselbstapplikation angewendet werden, um zusätzliche Fragen zu beantworten, beispielsweise zur Allgemeingültigkeit des Inkubationseffekts des Verlangens nach seiner Entstehung. Diese Technik ermöglichte es Forschern auf dem Gebiet der Sucht, die neuronalen Substrate abstinenter, abhängigkeitsbedingter Veränderungen des Verlangens bei Ratten zu untersuchen.Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man eine Studie durchführt, die die abstinenzabhängige Sucrose-Sehnsucht bei Ratten misst, und die Reaktion der Ratten auf eine zuvor mit Sucrose assoziierte Q-Bewertung im Rahmen der Selbstapplikation beurteilt.

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Neurowissenschaften

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