Eine vereinfachte Methode zur Herstellung eines ischämischen Wundmodell

Das übergeordnete Ziel des folgenden Versuchs ist es, ischämische Wunden nicht nur bei normalen Kaninchen, sondern auch bei Kaninchen mit verminderter Widerstandsfähigkeit, wie z. B. alten oder diabetischen Kaninchen, zu erzeugen. Alle derzeit verwendeten Techniken zur ischämischen Wundbildung sind hochinvasiv, und bisher kann keine dieser Techniken bei diabetischen Tieren angewendet werden. Bei diesem Verfahren wird eine minimalinvasive Chirurgie durchgeführt, die mit drei kleinen Hautschnitten über den drei Gefäßbündeln beginnt.

Der nächste Schritt besteht darin, die Zentralvene und das verhätschelte Gefäßbündel zu isolieren und zu schützen, so dass die Durchblutung des Ohrs reduziert, aber nicht vollständig eliminiert wird. Schließlich werden die verbleibenden Gefäße, Nerven und Unterhautgewebe über die Hautschnitte durchtrennt oder ligiert. Die Ohrischämie wird durch das Fehlen eines arteriellen Pulses, des Aussehens des Ohrs, des Temperaturunterschieds und der subkutanen Sauerstoffsättigung bestätigt.

Diese minimalinvasive Operation mag schwierig zu sein scheinen, aber sie ist tatsächlich sehr einfach. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie nur sehr geringe Hautzerstörungen aufweist. Seit wir diese Technik im Jahr 2007 zum ersten Mal veröffentlicht haben, haben wir viele Fragen erhalten.

Seitdem haben wir dieses Verfahren weiter vereinfacht. Um den Verzicht auf ein Mikroskop noch einfacher zu machen, beginnen Sie mit dem Wiegen des ausgewählten Kaninchens und betäuben Sie das Kaninchen mit einer Mischung aus Ketamin und Xylazin. Überwachen Sie die Vitalparameter des Kaninchens, auf der Rückenseite können drei Gefäßbündel identifiziert werden, die das Ohr versorgen.

Dabei handelt es sich um das zentrale Bündel, das größte mit Sicherheiten, die mit anderen Schiffen verbunden sind. Das Coddelbündel, bei dem die Arterie normalerweise sehr klein ist oder nicht vorhanden ist, und das Schädelbündel. Auf der ventralen Seite wird die distale Haut nicht von den proximalen Gefäßen durchblutet.

Stattdessen haben die Gefäßbündel am Hinterohr zahlreiche durchdringende Äste durch den Knorpel, um die distale Bauchhaut zu durchbluten. Bei einigen Kaninchen befindet sich auch auf der ventralen Seite ein sehr kleines subkutanes Gefäß, das nicht mehr als ein Drittel der ventralen Haut mit Blut versorgt. Bei einem offenen umlaufenden Hautschnitt kommt es im Wesentlichen zu keiner Blutung aus einem ventralen Schnitt.

Bevor Sie fortfahren, stellen Sie sicher, dass das Kaninchen nicht auf Schmerzreize reagiert, indem Sie eine Zehenkneifung und einen Augenreflex verwenden, und schützen Sie die Augen des Tieres durch das Auftragen künstlicher Tränen. Salbe. Halten Sie das Kaninchen während der Operation mit einem Heizkissen warm. Dann mit Betadin und Alkohol beide Ohren und die umgebende Haut drapieren, so dass nur die beiden Ohren freiliegen.

Ein Ohr wird ischämisch, während das andere als Kontrolle dient. Die für die Operation verwendeten Instrumente sind ein chirurgisches Messer mit einer Klinge mit der Nummer 15, zwei Paar Tonabnehmer, einer für die Haut und ein anderer für andere Weichteile. Drei Moskitoklemmen, ein oder zwei Paar gebogene Mikroscheren, eine kleine Schere zum Schneiden von Nähten und hartem Gewebe, ein Nadelhalter und einige Stanzen aus Edelstahl.

Beginnen Sie die Operation mit der Identifizierung der drei Gefäßstiele entsprechend den Arterien und Venen. Mit einer Klinge mit der Nummer 15. Machen Sie vorsichtig einen vertikalen Hautschnitt am zentralen Gefäßstiel.

Isolieren Sie die Zentralvene vom umgebenden Gewebe und schützen Sie sie. Dieser Schritt umrundet. Die zentrale Vene für die Retraktion.

Präparieren Sie den Zentralnerv frei. Es befindet sich normalerweise auf der verwöhnten Seite der Vene. Der Nerv wird mit einer Schere abgeschnitten.

Präparieren Sie die zentrale Arterie frei. Sie befindet sich normalerweise auf der Schädelseite und tiefer als die Vene, binden Sie die Arterie ab und teilen Sie sie. Reinigen Sie das Gewebe um die zentrale Vene über dem Ohrknorpel.

Ein zweiter Hautschnitt wird über dem verhätschelten Stiel gemacht. Um das Bundle beizubehalten. Die Gefäße werden zum Schutz frei präpariert und eingekreist.

Dies ist besonders nützlich, wenn die Vene groß ist, wie bei diesem Kaninchen. Mache einen Tunnel zwischen diesem und dem ersten Schnitt. Schneiden Sie das Unterhautgewebe über dem Knorpel ab.

Ein dritter Hautschnitt wird über dem Schädelbündel vorgenommen. Dieses gesamte Bündel wird ligiert und getrennt. Die Haut über dem dritten Bündel wird aufgeschnitten.

Diese Vene liegt sehr nah an der Haut, schneiden Sie also nicht zu tief. Anschließend wird das gesamte Gefäßbündel frei präpariert, abgebunden und getrennt. Machen Sie mit einem Messer und einer Schere einen subkutanen Tunnel.

Durch die drei Schnitte wird das gesamte Unterhautgewebe, die Muskeln, die Nerven und die kleinen Gefäßäste abgesetzt. Verwenden Sie zusätzliche scharfe und stumpfe Dissektionen, um die Basis zu reinigen, so dass der blanke Knorpel etwa fünf bis 10 Millimeter breit bleibt. Die Blutung kann durch Mulldruck kontrolliert werden.

Ein Elektrokauter ist nicht erforderlich. Die Haut im Inneren des Ohres wird nicht geschnitten, da sie nicht viel Blut führt. Der wichtige Aspekt dieses Verfahrens besteht darin, eine angemessene Dissektion des subkutanen Tunnels zu gewährleisten und gleichzeitig die Gefäße zu schützen.

Das sollte kein so schwieriges Verfahren sein. Nach der Blutstillung werden die drei Hautschnitte mit vier oder fünf oh-Nähten verschlossen und erneut überprüft, um sicherzustellen, dass die Hautschnitte richtig geschlossen sind und keine Blutungen zu sehen sind. Für den Wundmedikamententest sind es vier. Kreisförmige Hautwunden in voller Dicke können auf der ventralen Seite jedes Ohrs mit einem sechs Millimeter dicken Edelstahlstempel erzeugt werden.

Der Abstand zwischen den Wunden beträgt mindestens 20 bis 30 Millimeter. Die Haut und das Perichondrium im Inneren der Stanze werden entfernt, aber der Knorpel wird nicht beschädigt. Nachdem die Wunden an beiden Ohren entstanden sind, bedecken Sie sie vorübergehend mit Gaze und bringen Sie das Kaninchen zur Medikamentenanwendung in einen Behandlungsraum.

Nachdem die Wunden von Blutgerinnseln gereinigt wurden, wenden Sie Test- und Kontrollmedikamente an. Die Wunden werden mit einem Okklusivverband abgedeckt, um ein Austrocknen zu verhindern. Wenn Sie zwei Arzneimittel vergleichen, tragen Sie jedes Medikament sowohl auf eine proximale als auch auf eine distale Wunde auf.

Dabei werden die unterschiedlichen Wundheilungsraten im distalen und proximalen Ohr postoperativ kontrolliert. Das ischämische Ohr wird in der Regel kühl und zyanotisch mit einem verminderten Gefühl distal des Schnitts. Ein leichtes Ödem kann einige Tage lang auftreten, verschwindet aber von selbst und es ist keine Behandlung erforderlich.

Der Puls der zentralen Arterie fehlt. Die Ohrbewegung wird reduziert, aber nicht vollständig eliminiert, da einige Muskeln noch an der Ohrbasis befestigt sind. Wenn der Tunnel korrekt gemacht ist, ist eine deutliche Vertiefung zwischen den Schnitten zu erkennen.

Ein Fentanyl-Pflaster wird auf der Rückenhaut angebracht, um mögliche postoperative Schmerzen zu lindern. Die Hauttemperatur wird täglich an jedem Ohr mit einem Thermometer gemessen. Die Durchblutung im Ohr wird mit einem transkutanen Sauerstoffspannungsmesser oder einem Laser-Doppler-Durchflussmesser gemessen.

Nach einer Woche können ab 2007 die Nähte der Hautschnitte entfernt werden. Das Verfahren wurde bei mehr als 70 Kaninchen angewendet. Darunter sind 23 diabetische Kaninchen und vier ältere Kaninchen.

Die Temperaturunterschiede zwischen dem nicht-ischämischen und dem ischämischen Ohr reichten von einem bis 10 Grad Celsius, wobei die meisten Kaninchen im Bereich von zwei bis sechs Grad Celsius lagen. Der Temperaturunterschied war in den ersten Tagen nach der Operation höher und nahm nach dem 15. Tag allmählich ab, blieb aber am Ende eines Monats immer noch erhalten. Von jedem Ohr wurden sechs Gewebeproben entnommen und mittels HPLC der Gehalt an hochenergetischem Phosphat gemessen, sowohl ein TP als auch eine Gesamtenergie.

Die Konzentrationen waren in den normalen Ohren höher als in den ischämischen Ohren. Die Wundheilungszeiten waren bei nicht-diabetischen und diabetischen Tieren bei 15 nicht-diabetischen Kaninchen für das ischämische Ohr immer länger als für das nicht-ischämische Ohr. Die durchschnittliche Heilungszeit betrug 17,8 Tage auf dem nicht-ischämischen Ohr gegenüber 21,8 Tagen auf dem ischämischen Ohr.

Bei 10 12 Monaten alten diabetischen Tieren betrug die durchschnittliche Heilungszeit 18,3 Tage auf dem nicht-ischämischen Ohr im Vergleich zu 29,1 Tagen auf dem ischämischen Ohr. Bei allen Tieren, einschließlich diabetischer Kaninchen, heilten die Hautschnitte normal und ohne Komplikationen ab. Bei Kaninchen. Mit einer diabetischen Zeit von 24 Monaten neigen die ventralen Wunden zu einer höheren Infektion

Diese Eigenschaft macht es näher an menschliche diabetische Wunden. Eine histologische Probe zeigt die Heilung des subkutanen Tunnels, in dem der Muskel fehlt und durch fibröses Gewebe ersetzt wird. Die Haut ist jedoch intakt.

Bei diesem Verfahren ist es wichtig, daran zu denken, die Tiere auf humane Weise zu behandeln. Einmal gemeistert, kann diese Technik in weniger als einer Stunde durchgeführt werden. Wir haben diese Technik bei mehr als 70 Kaninchen angewendet, darunter 23 diabetische Kaninchen ohne Komplikationen wie Blutungen oder Infektionen.

Es ist ein sehr sicheres Verfahren, das diesem Verfahren folgt. Andere Methoden wie zusätzliche Ischämie, Nervenschädigung und bakterielle Inokulation können durchgeführt werden, um zusätzliche Fragen wie Gefäßgeschwüre, Druckgeschwüre und eine diabetische Neuropathie zu beantworten.