Maus-Modell der chirurgisch-induzierten Endometriose durch Auto-Transplantation von Gebärmutter-Gewebe

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, bei Mäusen operativ Endometriose durch autologe Transplantation von Uterusgewebe in die arterielle Versorgung des Darmmesenteriums zu induzieren. Dies wird erreicht, indem zunächst die Uterusarterie ligiert, der Uterus entfernt und das Endometrium freigelegt wird. Der zweite Schritt des Verfahrens besteht darin, mithilfe einer zweimillimeterigen Biopsiepunch aus dem freigelegten Endometrium drei endometrioidartige Implantate herzustellen.

Der dritte Schritt des Verfahrens besteht darin, die drei endometrioiden Implantate an Arterien in der arteriellen Kaskade des Darmmesenteriums zu nähen. Der letzte Schritt des Verfahrens ist das Verschließen der Bauchwand und der Haut sowie die Gewährleistung der Erholung der endometrioiden Läsionen beim Tier. Bei Mäusen entfernte Proben ähneln denjenigen bei Frauen mit Endometriose, wie histologische Analysen sowie Muster der Gen- und Proteinexpression zeigen.

Im Allgemeinen haben Personen, die neu in dieser Methode sind, aus drei Hauptgründen Schwierigkeiten. Erstens sind die Mausgewebe einfach sehr klein. Zweitens lässt sich das Darmmesenterium leicht beschädigen, und drittens führen Nähte, die zu straff angelegt werden, zu einer Darmnekrose.

Sammeln Sie zunächst die gesamte erforderliche chirurgische Ausrüstung für eine erfolgreiche aseptische Operation, einschließlich Lösungen zur Analgesie und Anästhesie. Nachdem das Tier mit inhaliertem Isofluran anästhesiert wurde, bestätigen Sie die vollständige Anästhesie durch fehlende Reaktion auf einen Zehenquetschreiz, um Trockenheit während der Operation vorzubeugen. Tragen Sie einen Augensalbe auf die Augen auf und rasieren Sie die Operationsstelle mit kleinen Scheren. Desinfizieren Sie die Operationsstelle durch drei abwechselnde Wischbewegungen mit Chlorhexidin-Lösung und 70 %igem Ethanol und legen Sie anschließend das Tier unter einem sterilen Tuch ab.

Führen Sie einen kleinen medianen Schnitt mit einer kleinen Schere oder einer Skalpellklinge durch, der 0,5 bis 1,0 Zentimeter kaudal zur Vaginalöffnung endet. Lösen Sie vorsichtig die Körperwand vom Bauchdeckenwall, um die Schließung der Operationsstelle zu erleichtern. Führen Sie nach der stumpfen Präparation einen kleinen medianen Schnitt in der Bauchwand durch.

Danach mit kleinen Pinzetten vorsichtig das linke Uterushorn lokalisieren. Der Uterus liegt dorsal zum Darm, der normalerweise als Erstes sichtbar ist, wenn man den Inzisionsbereich betritt. Vorsichtig am Uterushorn anheben und eine geöffnete Pinzette darunter schieben, um als Retraktor zu dienen. Es ist außerdem hilfreich, das Erscheinungsbild der Eierstöcke und des Uterus zu diesem Zeitpunkt zu beachten.

Zur Unterstützung der Zyklusdatierung. Führen Sie zwei sechs bis acht Zentimeter lange Stücke schwarzen geflochtenen Seiden-Nähgarns der Stärke 5/0 unterhalb des gedehnten Uterushorns ein. Ligieren Sie das Horn sicher an der Uterotuben-Junktion.

Legen Sie einfach bis zum Eileiter und an der uterozervikalen Übergangsstelle an. Verwenden Sie an jeder Stelle einen quadratischen Knoten und lassen Sie die Enden der Naht ungeschnitten. Schneiden Sie den zwischen den beiden Ligaturen liegenden Abschnitt des Uterushorns aus und geben Sie das Gewebe in eine Glas-Petri-Schale, die etwa 100 µL PBS mit Penicillin und Streptomycin enthält.

Schneiden Sie die Enden des Seidenfaden-Lasts ab. Falls der Faden gelockert wird oder Blutungen auftreten, finden Sie den Stumpf und binden Sie einen weiteren Knoten oder nicht mit einer kleinen Schere. Entfernen Sie das Fett vom Uterushorn.

Öffnen Sie das Uterushorn, indem Sie eine Klinge einer kleinen Schere in das Lumen einführen. Gleiten Sie vorsichtig mit der Schere entlang des Uterushorns, während Sie das Horn mit einer Pinzette halten. Verwenden Sie in der Glas-Petrischale eine zweimillimeterige Biopsie-Stanze, um drei gleich große Implantate auszustanzen. Achten Sie darauf, dass sie nicht austrocknen.

Legen Sie sterile Mullbinde unmittelbar über die Schnittstelle und befeuchten Sie sie gründlich mit steriler PBS-Lösung, die Penicillin und Streptomycin enthält. Es ist wichtig, die Feuchtigkeit während der folgenden Schritte mit kleinen, glatten Pinzetten aufrechtzuerhalten. Suchen Sie vorsichtig nach dem Blinddarm und bewegen Sie sich entlang des Dünndarms in Richtung Rumpf.

Ziehen Sie einen kleinen Abschnitt des Darms von vier bis fünf Zentimetern heraus und fächern Sie ihn auf der vorbenetzten Gazetupfe so auf, dass die arterielle Gefäßverzweigung des Darmmesenteriums deutlich sichtbar ist. Achten Sie darauf, den Darm stets mit steriler Kochsalzlösung feucht zu halten. Platzieren Sie ein Implantat auf einer Nadel und befestigen Sie es vorsichtig mit einer sechsfachen schwarzen Alon-Schwarznähten an einer Arterie etwa 0,5 Zentimeter vom Darm entfernt.

Verwenden Sie nur einen. Werfen Sie die Pinzette darüber und ziehen Sie die Naht nicht zu stark fest. Denn dies kann zu einem Verlust der Durchblutung und anschließender Nekrose des Darms führen.

Schließen Sie zwei Knoten mit einem ab, werfen Sie jeweils einen und schneiden Sie die Naht zwei Millimeter vom Implantat entfernt ab, befeuchten Sie den Darm. Danach bewegen Sie sich in kaudaler Richtung. Ziehen Sie die nächsten drei bis vier Zentimeter des Darms heraus und ersetzen Sie vorsichtig den Abschnitt, der bereits ein Implantat enthält.

Überspringen Sie eine oder zwei Arterien von der vorherigen Implantationsstelle aus und nähen Sie das nächste Implantat ein; wiederholen Sie dies für das dritte Implantat. Nähen Sie abschließend die Bauchdecke und verschließen Sie die Haut mit Wundclips. Nach dem Verschließen der Operationsstelle und der Gabe von Analgetika legen Sie das Tier auf die Bauchseite in den Käfig, teilweise auf eine wiederverwendbare beheizte Wassermatte, bis das Tier wieder vollständig erholt ist.

Um die endometrioiden Läsionen zu gewinnen, lokalisieren Sie die schwarzen Nähte im Mesenterium des Darms. Messen Sie mithilfe eines Messschiebers die Länge und Breite jeder endometrioiden Läsion. Präparieren Sie die endometrioiden Läsionen sorgfältig aus, wobei darauf zu achten ist, sie nicht zu durchstechen.

Entfernen Sie jegliches nicht-endometrioides Gewebe von der Läsion. Schwenken Sie die drei mit Flüssigkeit gefüllten endometrioiden Läsionen, bevor Sie die Naht entfernen. Entfernen Sie die Naht vorsichtig und eröffnen Sie zwei der endometrioiden Läsionen.

Wiegen Sie diese erneut, bevor Sie mit der Gewebeverarbeitung fortfahren. Entfernen und wiegen Sie anschließend das verbleibende Uterushorn. Die histologische Analyse der Endometriose sowohl bei Frauen als auch im hier gezeigten Mausmodell zeigt, dass die endometrioiden Läsionen Drüsen und Stromagewebe des Endometriums enthalten. Endometrioseherde bei Mäusen enthalten außerdem Makrophagen, die mit Hämossiderin beladen sind und ein häufiges Merkmal der Endometriose bei Frauen darstellen. Endometrioide Läsionen, die drei Tage nach der Induktion von Mäusen entfernt wurden, erscheinen entzündet und hämorrhagisch, wie links dargestellt, nach zwei bis vier Wochen Wachstum.

Endometrioseherde im Mausmodell sind zystisch, flüssigkeitsgefüllt und im Vergleich zum Zeitpunkt der Induktion von peritonealen Adhäsionen umgeben. Flüssigkeitsgefüllte Herde waren ein bzw. zwei Monate nach der Induktion um 306 % und 862 % größer, und kugelige Herde waren um 51 % und 172 % größer. Flüssigkeitsgefüllte und ladendometrioider Herd.

Das Gewicht bleibt ein Monat nach der Induktion über fünf verschiedene Experimente hinweg bei Anwendung dieses Verfahrens konstant. Dieses Modell kann verwendet werden, um Fragen zur Pathophysiologie der Endometriose zu beantworten und neuartige Therapeutika zur Behandlung von mit dieser Erkrankung assoziierten Schmerzen und Unfruchtbarkeit zu erforschen.