Name: Intrakranielle Implantation mit anschließender 3D In Vivo Bioluminescent Imaging von Murine Gliome (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-11-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 46 s
Description: Lernen Sie die intrakranielle Implantation von GL261-Zellen bei Mäusen für die Neuroonkologie-Forschung. Diese Methode ermöglicht die quantitative Verfolgung von Tumorwachstum mittels 3D-In-vivo-Biolumineszenz-Bildgebung.

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Wir möchten Dr. Joshua B. Rubin für das großzügige Geschenk der Plasmide für die Lentivirus-System sowie Mahil Rao für hilfreiche Anregung für die Vorbereitung der GL261-luc-Zellen erkennen. Wir bedanken uns bei Studenten Unterstützung Brain Tumor Research (SSBTR), The Barrow Neurological Foundation und The Wallace Foundation für ihre großzügige Unterstützung. Tierversuche wurden in Übereinstimmung mit den Richtlinien und Vorschriften her durch die Institutional Animal Care und Verwenden Ausschuss der St. Joseph-Hospital und Medical Center eingerichtet durchgeführt.

<ol><li>Candolfi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracranial+glioblastoma+models+in+preclinical+neuro-oncology%3A+neuropathological+characterization+and+tumor+progression%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurooncol%22%5BJournal%5D)">Intracranial glioblastoma models in preclinical neuro-oncology: neuropathological characterization and tumor progression.</a> J Neurooncol. 85, 133-148 (2007).</li>
<li>Stafford, P., Abdelwahab, M. G., do, K. im, Preul, Y., Rho, M. C., M, J., Scheck, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ketogenic+diet+reverses+gene+expression+patterns+and+redudes+reactive+oxygen+species+levels+when+used+as+an+adjuvant+therapy+for+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22Nutr+Metab%22%5BJournal%5D)">The ketogenic diet reverses gene expression patterns and redudes reactive oxygen species levels when used as an adjuvant therapy for glioma.</a> Nutr Metab. 7, (2010).</li>
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</ol>

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Die Zelle Inokulum wird in einer Tiefe von 2,6 mm von der Oberfläche des Gehirns nach der Erstellung eines 0,4 mm Tasche infundiert. Um eine korrekte Platzierung und Tiefe der Nadel sorgen für eine X-ray kann aufgenommen mit einem C-Arm oder ähnliches Röntgenbild Intensivierung Gerät, jedoch ist diese optional. Komplikationen bei der Operation auftreten können, wenn das Tier nicht ordnungsgemäß betäubt, an welchem ​​Punkt kann das Tier während der Zellteilung Infusion zu bewegen. Dies kann zu Undichtigkeiten der Zelle Mix oder Blutungen aus Nadel zu verfolgen. Austreten von Zellen verursacht ektopische Wachstum von Tumorzellen. Es ist auch wichtig, nicht die Punktion der Ventrikel, was getan werden kann, wenn die BOHRLOCHRESERVOIR wird medial von der 2,3 mm in das Protokoll 4 beschrieben. Die richtige Platzierung der Nadel und Zelle verteilt wurde durch Infusion einer Maus mit 2 ul Methylenblau und seziert das Hirngewebe um die Position der infundierten Farbstoff überprüfen getestet. In diesem Protokoll haben wir die IVIS Spectrum in-vivo-Bildgebung und t verwendeter lebt Image Software (v 4.0) für die Verwendung mit diesem Instrument. (Caliper Life Sciences). Alle vergleichbaren in-vivo-Imaging-System und Bild-Analyse-Tools können verwendet werden, um ähnliche Ergebnisse zu erzielen. Diese Systeme bieten einige Vorteile gegenüber herkömmlichen Magnet-Resonanz-Tomographie (MRT), um das Wachstum eines experimentellen intrakraniellen Tumor zu folgen. Der offensichtlichste ist die relativen Kosten der 2-Instrumente - Tier MRT-Geräte sind wesentlich teurer und erfordern in der Regel die Dienste eines qualifizierten MRI-Techniker. In-vivo-Bildgebung, wie, was hier beschrieben, kann durch den Endverbraucher durchgeführt werden. Die Biolumineszenz Daten quantitative, während die Quantifizierung von MRT-Daten ist zeitaufwändig und etwas ungenau. Darüber hinaus zeigen MRT-Aufnahmen Ödemen und Entzündungen zusätzlich zu Tumorzellen und es kann schwierig sein, Tumor-Behandlung Wirkung zu trennen. Aus diesen Gründen erhalten genaue volumetrische Messungen des wachsenden Tumors kann eine Herausforderung sein. Biolumineszenz erfordert ATPDaher nur lebende Tumorzellen beitragen, die Tumorgröße Daten. Trotzdem gibt es einige Vorteile der MRT, ob eine Maschine zur Verfügung steht. Cells müssen nicht mit einem Biolumineszenz-Marker werden durch MRI sichtbar gekennzeichnet sein. Die Fähigkeit, peri-Tumor-Ödem visualisieren kann ein Vorteil für einige experimentelle Protokolle werden. Eine Stärke der beiden Technologien ist, dass mit einem nicht ausschließt, die Verwendung der anderen, so können Daten über das Wachstum des Tumors sowie das Vorhandensein von peri-Tumor-Ödemen und Entzündungen aus dem gleichen Tier gewonnen werden, wenn beide Technologien verfügbar sind an den Forscher.

<table border="1"><tbody><tr><td> Name des Reagenzes oder Lieferung </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td><td> Kommentare </td></tr><tr><td> GL261-luc2 Bioware Ultra- </td><td> Caliper Life Sciences </td><td> GL261-luc2 </td><td></td></tr><tr><td> Dulbecco Modified Eagle Medium (DMEM) </td><td> Invitrogen </td><td> 10313039 </td><td></td></tr><tr><td> Geneticin (G418) </td><td> Gibco (Invitrogen) </td><td> 11811-023 </td><td></td></tr><tr><td> Fetal Calf Serum (FCS) </td><td> Invitrogen </td><td> 26140079 </td><td></td></tr><tr><td> Phospate Buffered Saline (PBS) </td><td> Invitrogen </td><td> 70011044 </td><td></td></tr><tr><td> C57BL/6-cBrd/cBrd/Cr Mäuse </td><td> NCI-Frederick </td><td></td><td></td></tr><tr><td> AKWA Tränen Lubricant Augensalbe </td><td> Akorn Inc </td><td> 17478-062-35 </td><td></td></tr><tr><td> Ketaset (Ketamin Hydrochlorid) </td><td> Wyeth </td><td> 11570775 </td><td></td></tr><tr><td> Sedazine (Xylazinhydrochlorid) </td><td> Wyeth </td><td> 10031894 </td><td></td></tr><tr><td> Small Animal stereotaktische Instrument </td><td> Kopf Instruments </td><td> 900 </td><td></td></tr><tr><td> UltraMicroPump mit SYS-Micro4-Controller </td><td> World Precision Instruments </td><td> UMP3-1 </td><td> Falls nicht vorhanden, ist es möglich, manuell ziehen </td></tr><tr><td> 10 &amp;mgr; l-Spritze mit 26 Gauge abgeschrägte Nadel </td><td> World Precision Instruments </td><td> SGE010RNS </td><td></td></tr><tr><td> Adison Zange </td><td> World Precision Instruments </td><td> 500092 </td><td></td></tr><tr><td> Penfield Dissector </td><td> Codman </td><td> 65-1015 </td><td></td></tr><tr><td> 16g 1 ½ Precision Glide Needle </td><td> Beckton, Dickinson and Company (BD) </td><td> 305198 </td><td></td></tr><tr><td> Chirurgische Klinge Griff </td><td> BD </td><td> 371030 </td><td></td></tr><tr><td> Größe 15 Blatt </td><td> BD </td><td> 371315 </td><td></td></tr><tr><td> 4-0 Vicryl Naht </td><td> Ethicon </td><td> VCP496G </td><td></td></tr><tr><td> Knochenwachs </td><td> Medline </td><td> DYNJBW25 </td><td></td></tr><tr><td> Povidin-Jod-Swab Sticks </td><td> Medline </td><td> MD93901 </td><td></td></tr><tr><td> D-Luciferin Kaliumsalz </td><td> Caliper Life Sciences </td><td> 122796 </td><td></td></tr><tr><td> Forane (Isofluran) </td><td> Baxter </td><td> 1001936060 </td><td></td></tr><tr><td> OPMI Pentero Mikroskop </td><td> Carl Zeiss, Inc. </td><td></td><td> Jeder OP-Mikroskop genügt </td></tr><tr><td> Xenogen IVIS Spectrum mit optionalem Anästhesie-System </td><td> Caliper Life Sciences </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

intrakranielle implantation mit anschließender 3d in vivo bioluminescent imaging von murine gliome

Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas

Die Maus Gliom 261 (GL261) als in-vivo-Modell erkannt, dass rekapituliert viele der Funktionen des menschlichen Glioblastoma multiforme (GBM). Die Zelllinie wurde ursprünglich von intrakraniellen Injektion von 3-Methyl-cholantrene in eine C57BL / 6 syngenen Mausstamm 1 induzierte, deshalb immunologisch kompetenten C57BL / 6 Mäuse verwendet werden kann. Während wir GL261 verwenden, können das folgende Protokoll für die Implantation und Überwachung jeder intrakraniellen Maus-Tumor-Modell verwendet werden. GL261-Zellen wurden stabil exprimieren, Leuchtkäfer-Luciferase (GL261-luc) entwickelt. Wir schuf auch die helleren GL261-luc2 Zelllinie durch stabile Transfektion der luc2 Gen aus dem CMV-Promotors exprimiert. C57BL/6-cBrd/cBrd/Cr Mäusen (Albino-Variante der C57BL / 6) von der National Cancer Institute, Frederick, MD wurden verwendet, um das Licht Dämpfung durch schwarze Haut und Fell zu eliminieren. Mit dem Einsatz von Albino C57BL / 6 Mäusen, in-vivo-Bildgebung mit dem IVIS Spectrum in vivo imAltern ist ab dem Tag der Implantation (Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA) möglich. Die GL261-luc und GL261-luc2 Zelllinien zeigten die gleichen In-vivo-Verhalten der Eltern GL261-Zellen. Einige der gemeinsamen histologischen Merkmale in der menschlichen GBM und das Maus-Modell beinhalten: Tumor-Nekrose, pseudopalisades, Neovaskularisation, Invasion, Hyperzellularität und Entzündungen 1. Vor der Implantation Tiere wurden durch eine intraperitoneale Injektion von Ketamin (50 mg / kg), Xylazin (5 mg / kg) und Buprenorphin (0,05 mg / kg), in einem stereotaktischen Apparat und einen Einschnitt gelegt betäubt wurde mit einem Skalpell über die aus kranialen Mittellinie. Ein BOHRLOCHRESERVOIR war 0.1mm posterior zum Bregma und 2,3 mm nach rechts von der Mittellinie aus. Eine Nadel wurde bis in eine Tiefe von 3mm und zurückgezogen 0.4mm bis zu einer Tiefe von 2,6 mm eingesetzt. Zwei ul der GL261-luc oder GL261-luc2 Zellen (10 7 Zellen / ml) wurden im Verlauf von 3 Minuten infundiert. Die BOHRLOCHRESERVOIR wurde geschlossenmit bonewax und der Schnitt genäht. Nach stereotaktische Implantation der Biolumineszenz-Zellen sind ab dem Tag der Implantation nachweisbar und der Tumor kann unter Verwendung des 3D-Bildrekonstruktion Merkmal der IVIS Spectrum Instrument sein. Tiere erhalten eine subkutane Injektion von 150μg Luciferin / kg Körpergewicht 20 min vor der Bildgebung. Tumorlast wird unter Verwendung bedeuten Tumor Biolumineszenz im Laufe der Zeit. Tumor-tragende Mäuse wurden täglich auf Morbidität beurteilen beobachtet und wurden eingeschläfert, wenn einer oder mehrere der folgenden Symptome vorhanden sind: Lethargie, das Versagen der ambulate, gekrümmte Haltung, das Versagen der Bräutigam, Anorexie was bei&gt; 10% Gewichtsverlust. Die Tumore wurden offensichtlich in all der Tiere bei der Obduktion.

Intrakranielle Implantation von GL261-Zellen in C57BL / 6 Mäusen produziert maligne Gliome, dass viele Merkmale der menschlichen Glioblastoma multiforme zu rekapitulieren. Wir verwendeten GL261-Zellen stabil exprimiert Luziferase, damit wir verwenden<em&gt; In vivo</em&gt; Bildgebung zu folgen Tumorprogression. Die Operation und 3D<em&gt; In vivo</em&gt; Bildgebung demonstriert.

Intrakranielle Implantation mit anschließender 3D In Vivo Bioluminescent Imaging von Murine Gliome

Das Maus-Gliom 261 (GL261) gilt als In-vivo-Modellsystem, das viele Merkmale des menschlichen Glioblastoma multiforme (GBM) rekapituliert. Die ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, ein intrakranielles Gliommodell zu erstellen, das mittels In-vivo-Bildgebung quantitativ über die Zeit verfolgt werden kann. Dies wird erreicht, indem zunächst lumineszenzmarkierte Gliomzellen gewonnen und eine Zellsuspension mit einer Konzentration von ein bis zwei mal 10 hoch 7 Zellen pro Milliliter hergestellt wird. Der zweite Schritt des Verfahrens ist die stereotaktische Implantation der gewonnenen Zellen in das rechte frontale Stirnlappenareal des Maushirns.Anschließend erfolgt die subkutane Injektion von Luciferin in das Tier und die Erstellung einer kinetischen Kurve für die Luciferin-Expression. Mithilfe des IVUS-Spektrum-In-vivo-Bildgebungssystems ist der letzte Schritt des Verfahrens die serielle Bildaufnahme der Tiere und die Verfolgung des Tumorwachstums. Letztendlich können Ergebnisse erzielt werden, die das Tumorzellwachstum sowie die 3D-Lokalisation des Tumors mittels eines biolumineszenten Signals zeigen, das mit dem IVUS-Spektrum-In-vivo-Bildgebungssystem detektiert werden kann.Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber bestehenden Methoden wie der MRT besteht darin, dass die Biolumineszenz-Bildgebung ausschließlich lebende Tumorzellen erfasst und keinen speziell ausgebildeten MRT-Techniker erfordert. Außerdem ermöglicht sie es, Tiere gleichzeitig und in kürzerer Zeit abzubilden. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen im Bereich der Neuro-Onkologie zu beantworten, beispielsweise welche Wirksamkeit neuartige Therapien gegen Hirntumore aufweisen.Im lebenden Organismus kann diese Methode zwar Erkenntnisse über Hirntumore liefern, sie ist jedoch ebenfalls auf andere Organsysteme wie Lungen-, Prostata- und Leberkrebs anwendbar. Für die Vorbereitung dieses Verfahrens mindestens drei Mikroliter des Gliomzell-Inokulums in eine 10-Mikroliter-50-Millimeter-Spritze mit einer 26-Gauge-schiefen Nadel laden.Stellen Sie sicher, dass die Zellen nicht zusammenklumpen, da andernfalls die Spritze erneut beladen werden muss. Die anästhesierte Maus wird in den stereotaktischen Halter eingespannt und der Kopf der Maus mit der Mundklemme fixiert, wie auf diesem Bild gezeigt. Setzen Sie die beladene Spritze in den Mikroinjektor ein.Um die chirurgische Prozedur zu beginnen, führen Sie einen Hautschnitt mit einer Klinge der Größe 15 und einer gezahnten Pinzette durch. Führen Sie einen 10 bis 15 Millimeter langen Schnitt zwischen den Augen des Tieres in Richtung der Ohren aus, um das bgma freizulegen. Stellen Sie sicher, das bgma ordnungsgemäß zu identifizieren für.Es kann leicht mit dem dem bma distal gelegenen Sinusbereich verwechselt werden. Mit einer 16-Gauge-ein-und-einhalb-Zoll-Nadel wird die Bohröffnung 0,1 Millimeter hinter der Sagittalsutur und 2,3 Millimeter rechts der Mittellinie angelegt, indem leichter Druck auf die Nadel ausgeübt und gleichzeitig gedreht wird, bis der Schädel durchbrochen und das Gehirn freigelegt ist. Anschließend wird die Injektionsnadel mithilfe des Mikroinjektors bewegt, bis sie gerade die Oberfläche des Gehirns berührt. Von dieser Position aus wird die Nadel um eine Tiefe von drei Millimetern vorgeschoben.Halten Sie die Nadel drei Minuten lang an Ort und Stelle. Ziehen Sie anschließend die Nadel um 0,4 Millimeter zurück, sodass eine Gesamttiefe von 2,6 Millimetern unterhalb der Gehirnoberfläche erreicht wird. Dadurch entsteht eine kleine Tasche, in die die Zellen infundiert werden, um eine korrekte Platzierung und Tiefe sicherzustellen.Röntgenaufnahmen der Nadeltiefe können mit einem C-Bogen angefertigt werden; die Zellsuspension über drei Minuten mittels des Mikroinjektors mit einem Volumen von 2000 Nanolitern und einer Infusionsgeschwindigkeit von 667 NANOLITERS pro Minute infundieren. Nach der Infusion die Nadel zwei Minuten lang an Ort und Stelle belassen, um ein Auslaufen aus der Infusionsstelle zu verhindern. Anschließend die Nadel langsam vollständig zurückziehen.Nachdem die Nadel entfernt wurde, bedecken Sie die Bohrlochöffnung mit Knochenwachs unter Verwendung eines Penfield-Dissektors. Schließen Sie den Schnitt abschließend mit einer 4-0-Vicryl-Naht, wobei sichergestellt werden muss, dass keine großen Lücken in der Haut verbleiben. In vivo.Die Biolumineszenz-Bildgebung wird mit dem IVIS Spectrum-Bildgebungssystem durchgeführt. Starten Sie die Living Image-Software und initialisieren Sie das IVIS Spectrum-Bildgebungssystem, indem Sie auf der unteren rechten Seite des Bedienfelds die Schaltfläche „IVIS-System initialisieren“ anklicken. Wählen Sie auf der oberen linken Seite des Bedienfelds den lumineszenten Bildmodus aus, um die optimale Dauer der Biolumineszenz-Bildgebung zu bestimmen.Nach der Injektion von Lucifer ist es notwendig, zunächst eine kinetische Untersuchung am sedierten Tier in der Bildgebungskammer durchzuführen. Machen Sie das erste Bild etwa fünf Minuten nach der Injektion von Lucifer, um eine kinetische Kurve für die Luciferia-Expression zu erstellen. Erstellen Sie eine Abfolge, um alle drei Minuten Bilder für bis zu einer Stunde aufzunehmen.Klicken Sie im Bedienfeld auf die Schaltfläche zur Sequenzeinstellung. Geben Sie im Bedienfeld die Einstellungen für das erste biolumineszente Bild der Sequenz an, beginnend mit mittlerem Belichtungsbereich und automatischer Belichtung.Zur Bestimmung der optimalen Belichtungszeit wird empfohlen, die Verzögerungstaste im Sequenzeditor auszuwählen und eine Verzögerungszeit von drei Minuten zwischen jeder Aufnahme festzulegen. Klicken Sie auf Hinzufügen; anschließend werden die Aufnahmeparameter im Sequenzeditor der Tabelle hinzugefügt.Wiederholen Sie diesen Schritt für jedes Bild der Sequenz, sobald die Kurve erstellt ist. Die optimale Bildaufnahmezeit kann bestimmt werden, indem die Signalstärke über der Zeit aufgetragen wird, um das stärkste und präziseste Signal zu erhalten. Die Tiere sollten zum Zeitpunkt der höchsten in vivo-Photonenzahl abgebildet werden, was etwa 25 Minuten nach der Injektion von Luciferin erfolgt, wie diese Kurve zeigt.Um das Bild eines Versuchstieres aufzunehmen, verwenden Sie die Automatikoption bei der Aufnahmezeit. Dadurch kann die Software die Binning-Stufe und die optimale Dauer für die Bildaufnahme bestimmen. Speichern Sie die Programmdateien und die anschließenden Bildkommentare im Computerverzeichnis des Benutzers.Um die 3D-Bildgebung zu beginnen, verwenden Sie den Bildgebungs-Assistenten, um die Glühwürmchen-Reporter-Sonde auszuwählen. Wählen Sie im Fenster der Biolumineszenz-Belichtung „Weiter“, und sechs spektrale Auswahlmöglichkeiten, die aufgenommen werden sollen, erscheinen auf dem Bildschirm. Wählen Sie „Sequenz aufnehmen“, und die Bilder werden mit den jeweiligen Einstellungen unter der Registerkarte „Oberflächentopographie“ aufgenommen. Passen Sie in der Werkzeugpalette das Foto an den Umriss des Tieres an.Um ein rekonstruiertes Netz der Oberflächentopographie des Tieres zu erstellen, wechseln Sie zum DLI-3D-Rekonstruktions-Tab im Werkzeugkatalog und wählen Sie die geeigneten Bildaufnahmen für die Signalrekonstruktion aus. Stellen Sie sicher, dass Muskel unter Gewebeeigenschaften und Glühwürmchen unter Lichtquellenspektrum aufgeführt ist. Klicken Sie im Analyse-Tab auf Rekonstruieren, und die 3D-Rekonstruktion der Tieroberfläche sowie die entsprechende Rekonstruktion der Signalquelle sollten angezeigt werden.Die Datenanalyse kann beginnen, nachdem das Bild erfasst und gespeichert wurde. Greifen Sie auf die Programmdatei zu, indem Sie auf die Schaltfläche „Durchsuchen“ klicken und die Datei auswählen. Die Bildinformationen finden Sie unter „Bildinformationen anzeigen“. Quantifizieren Sie die Intensität des Signals, indem Sie die Schaltfläche für den Bereich von Interesse oder ROI-Werkzeuge auswählen.Stellen Sie sicher, dass das Bild im Photonenmodus analysiert wird, indem Sie Photon auswählen. Wählen Sie in der Dropdown-Liste in der oberen linken Ecke des Bildsteuerungsfelds die Schaltfläche Mess-ROI aus der Typ-Dropdown-Liste und anschließend die gewünschte ROI-Form. Die Optionen umfassen Kreis, Quadrat und oder Raster.Stellen Sie die ROI-Position ein, indem Sie die ROI-Formauswahl in den Bereich ziehen, der das Biolumineszenzsignal enthält. Achten Sie darauf, alle intensiven Bereiche auf dem aufgenommenen Bild abzudecken. Klicken Sie abschließend auf die Schaltfläche „Messen“, um die Signalintensität der ROI zu berechnen.Die ROI-Beschriftung wird angezeigt. Der Intensitätsnachweis einer erfolgreichen Zellimplantation ist gegeben, wenn die implantierten Zellen mittels Biolumineszenzbildgebung am Tag der Operation detektiert werden können, unabhängig davon, ob die Zellen mit dem luc oder luc2-Gen transfiziert wurden. Diese Grafik verfolgt das Tumorwachstum der GL261-luc-Zellen in einem albinotischen C57BL/6-Mausmodell. Die Biolumineszenz wurde alle drei Tage gemessen und als in-vivo-Photonenzahl über die Tage nach der Implantation aufgetragen.Die Aufnahmen zeigen Biolumineszenz zu verschiedenen Zeitpunkten. Die Färbung ist ein Hinweis auf Biolumineszenz, die proportional zur Anzahl der Tumorzellen ist. Die Tiere werden bei Auftreten von Krankheitssymptomen oder schlechtem Wohlbefinden euthanasiert.Obwohl dies kein Standardbestandteil dieser Analysen ist, kann das Gehirn herauspräpariert und Lucifer topisch hinzugefügt werden, um das ex vivo Bild zu erhalten. Dies muss unmittelbar nach dem Töten des Tieres erfolgen, da die Biolumineszenzreaktion ein TP erfordert. Dieses Diagramm vergleicht die aus Tumoren stammenden Photonenzahlen, die sich aus GL 2 6 1 lux-Zellen im Vergleich zu GL 2 6 1 L zwei-Zellen ergeben. Die Ergebnisse aus einer Durchschnittsberechnung von fünf Tieren zeigen, dass das L zwei-Gen ein höheres Maß an Biolumineszenz vermittelt.Die nächste Abbildung zeigt mehrere Ansichten einer dreidimensionalen Rekonstruktion der intrakraniellen Implantation von GL 2 6 1 L zwei Zellen, die mit dem Mausskelett und -gehirn korregistriert ist. Ein kinetischer Vergleich zwischen subkutanen und intraperitonealen Injektionen wurde ebenfalls durchgeführt: Drei Minuten nach Injektion von Luciferin wurde die Maus sediert und anschließend alle drei Minuten bis zu einer Stunde lang und danach alle sechs Minuten abgebildet, um eine kinetische Kurve der Biolumineszenz zu erzeugen. Wie hier dargestellt, ist eine subkutane Applikationsroute von Luciferin, dargestellt in Rot, einer intraperitonealen Injektion, dargestellt in Schwarz, überlegen, und der optimale Zeitpunkt zur Bildgebung der Tiere liegt etwa 25 Minuten nach der Luciferin-Injektion.Wenn die chirurgische Technik einmal beherrscht ist, kann sie innerhalb einer Stunde durchgeführt werden, sofern sie ordnungsgemäß ausgeführt wird. Nach diesem Verfahren können weitere Methoden wie MRT oder fluoreszenzgestützte Bildgebung angewendet werden, um zusätzliche Fragestellungen zu beantworten. Zum Beispiel, ob ein Ödem um den Tumor herum vorhanden ist oder welche anderen molekularen oder biochemischen Veränderungen im Tumor und seiner Umgebung stattfinden.Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man eine intrakranielle Implantation und eine 3D-In-vivo-Bildgebung von mire Gliomzellen durchführt.

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Medicine

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Luciferase-modifizierten menschlichen Gehirns Tumorxenotransplantaten können intrakraniell in athymischen Mäusen festgestellt werden, mit anschließender Überwachung des Tumorwachstums und Ansprechen auf die Therapie mit Biolumineszenz-Bildgebung. In Kombination mit dem Überleben Analyse wird Biolumineszenz Überwachung ein wesentliches Recherche-Tool für die präklinische Prüfung von Therapien, zur Behandlung von Gehirntumoren betrachtet.

Gründung Intrakranielle Brain Tumor Xenografts mit anschließender Analyse des Tumorwachstums und Ansprechen auf die Therapie mit Biolumineszenz-Bildgebung

Biolumineszenz-Bildgebung des Hypoxie-induzierbaren Faktors-1α Aktivität wird angewandt, um intrakranielle Tumorhypoxie Entwicklung in einer Brustkrebs Hirnmetastasen Mausmodell zu überwachen.

In-vivo-Biolumineszenz-Bildgebung von Tumorhypoxie Dynamics of Breast Cancer Hirnmetastasen in einem Mausmodell

Wir beschreiben eine integrierte Methode für die präzise, ​​stereotaktische Implantation von humanen Glioblastom multiforme Zellen in den Gehirnen von Nacktmäusen und anschließende...

Stereotaktische Intrakranielle Implantation und<em&gt; In vivo</em&gt; Bioluminescent Imaging der Tumorxenotransplantaten in einem Maus-Modell-System des Glioblastoma multiforme

Quelle: Clark, A.J., et al. Biolumineszenz-Bildgebung eines immunkompetenten Tiermodells für Glioblastome. J. Vis. Exp. (2016)Dieses Video zeigt die Biolumineszenz-Bildgebung zur Verfolgung des Fortschreitens des Glioblastoms in einem immunkompetenten Mausmodell, wobei Luciferase-exprimierende Tumorzellen und Luciferin zur nicht-invasiven Quantifizierung des Tumorwachstums verwendet werden.

Biolumineszenz-Bildgebung eines immunkompetenten Mausmodells für Glioblastom

Wir haben eine kortikale orthotopen Glioblastom-Modell bei Mäusen für die Intravital Zwei-Photonen-Mikroskopie, die die biophysikalischen Einschränkungen im Spiel während des Wachstums des Tumors rekapituliert normalerweise etabliert. Eine chronische Glasfenster ersetzt den Schädel über dem Tumor ermöglicht die Follow-up der Tumorprogression über die Zeit durch Zwei-Photonen-Mikroskopie.

Ein Orthotopische Glioblastoma Maus-Modell Pflege Gehirn Parenchymale Körperliche Einschränkungen und geeignet für Zwei-Photonen-Intravitalmikroskopie

GL261 Gliomzellen stellen ein nützliches immunkompetentes Tiermodell des Glioblastoms dar. Die Ziele dieses Protokolls sind die Demonstration geeigneter Techniken zur Überwachung des intrakraniellen Tumorwachstums unter Verwendung von in vivo Biolumineszenz-Bildgebung und die Überprüfung des Nutzens von Luciferase-modifizierten GL261-Zellen für die Untersuchung der Tumorimmunologie und immuntherapeutischer Ansätze zur Behandlung von Glioblastomen.

Biolumineszenz-Bildgebung von einem immunkompetenten Tiermodell für Glioblastoma

Orthotopen intrakraniellen Injektion von Tumorzellen wurde in der Krebsforschung zur Gehirn Tumorbiologie, Fortschreiten, Evolution und therapeutische Reaktion zu studieren. Hier präsentieren wir Ihnen Fluoreszenz Molekulare Tomographie der Tumor Xenografts vorsieht, dass Echtzeit-intravitalen Bildgebung und Quantifizierung eines Tumors in präklinischen Glioblastom Modelle Masse.

Fluoreszenz Molekulare Computertomographie für die In-Vivo Bildgebung des Glioblastoms Xenotransplantate

Lasermikrodissektion (LMD) ist eine empfindliche und hochreproduzierbare Technik, die verwendet werden kann, um Wege aufzudecken, die Gliomheterogenität und Invasion vermitteln. Hier beschreiben wir ein optimiertes Protokoll zur Isolierung diskreter Bereiche aus Gliomgewebe mittels Laser LMD, gefolgt von transkriptomischer Analyse.

Lasercapture Mikrodissektion von Glioma Subregionen für räumliche und molekulare Charakterisierung der intratumoralen Heterogenität, Oncostreams und Invasion

Wir beschreiben die intraparenchymale Transplantation von humanen neuralen Vorläuferzellen, die mit einem dualen Reportervektor transduziert werden, der Luciferase-grün fluoreszierendes Protein (GFP) im Gehirn der Maus exprimiert. Nach der Transplantation wird das Luciferase-Signal wiederholt mit In-vivo-Biolumineszenz und GFP-exprimierenden transplantierten Zellen gemessen, die in Hirnschnitten mittels Fluoreszenzmikroskopie identifiziert wurden.

Intracerebrale Transplantation und In Vivo Biolumineszenz-Tracking von menschlichen neuralen Vorläuferzellen im Gehirn der Maus

Wir stellen einen neuartigen Ansatz für die Zwei-Photonen-Mikroskopie der Tumorabgabe von fluoreszenzmarkierten Eisenoxid-Nanopartikeln an das Glioblastom in einem Mausmodell vor.

Zwei-Photonen-Intravitalmikroskopie des Glioblastoms im Mausmodell

Ziel dieses Protokolls ist es, Forschern eine hochgradig reproduzierbare Technik für intrakranielle Implantationen bereitzustellen.

Stereotaktische intrakranielle Implantation von Glioblastom-Patienten-abgeleiteten Xenograftzelllinien bei Mäusen

Lernen Sie die intrakranielle Implantation von GL261-Zellen bei Mäusen für die Neuroonkologie-Forschung. Diese Methode ermöglicht die quantitative Verfolgung von Tumorwachstum mittels 3D-In-vivo-Biolumineszenz-Bildgebung.

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