Name: Zwei Arten von Assays zum Nachweis von Frog Sperm Chemotaxis (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-12-27T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 2 s
Description: Lernen Sie zwei Assay-Methoden zur Untersuchung der Spermien-Chemotaxis bei Fröschen. Diese Techniken ermöglichen die Quantifizierung und Analyse der Spermienbewegung in Reaktion auf Chemoattraktanten.

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Wir danken der WM Keck Bioimaging Laboratory für die Nutzung ihrer Video-Mikroskopie Arbeitsplatz. Diese Studie wurde von der NSF gewähren IBN-0615435 gefördert.

<ol><li>Ward, G. E., Brokaw, C. J., Garbers, D. L., Vacquier, V. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemotaxis+of+Arbacia+punctulata+spermatozoa+to+resact%2C+a+peptide+from+the+egg+jelly+layer%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Chemotaxis of Arbacia punctulata spermatozoa to resact, a peptide from the egg jelly layer.</a> J. Cell Biol. 101, 2324-2329 (1985).</li>
<li>Olivera, R. G., Tomasi, L., Rovasio, R. A., Giojalas, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+velocity+and+induction+of+chemotactic+response+in+mouse+spermatozoa+by+follicular+and+oviductal+fluids%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Reprod.+Fertil%22%5BJournal%5D)">Increased velocity and induction of chemotactic response in mouse spermatozoa by follicular and oviductal fluids.</a> J. Reprod. Fertil. 115, 23-27 (1999).</li>
<li>Fabro, G., Rovasio, R. A., Civalero, S., Frenkel, A., Caplan, S. R., Eisenbach, M., Giojalas, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemotaxis+of+capacitated+rabbit+spermatozoa+to+follicular+fluid+revealed+by+a+novel+directionality-based+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Reprod%22%5BJournal%5D)">Chemotaxis of capacitated rabbit spermatozoa to follicular fluid revealed by a novel directionality-based assay.</a> Biol. Reprod. 67, 1565-1571 (2002).</li>
<li>Sugiyama, H., Burnett, L., Xiang, X., Olson, J., Willis, S., Miao, A., Akema, T., Bieber, A. L., Chandler, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+and+multimer+formation+of+allurin%2C+a+sperm+chemoattractant+from+Xenopus+laevis+egg+jelly%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Reprod.+Dev%22%5BJournal%5D)">Purification and multimer formation of allurin, a sperm chemoattractant from Xenopus laevis egg jelly.</a> Mol. Reprod. Dev. 76, 527-536 (2009).</li>
<li>Al-Anzi, B., Chandler, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenopus+laevis+egg+jelly+releases+a+sperm+chemoattractant+during+spawning%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Xenopus laevis egg jelly releases a sperm chemoattractant during spawning.</a> Dev. Biol. 198, 366-375 (1998).</li>
<li>Ralt, D., Goldenberg, M., Fetterolf, P., Thompson, D., Dor, J., Mashiach, S., Garbers, D. L., Eisenbach, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sperm+attraction+to+a+follicular+factor%28s%29+correlates+with+human+egg+fertilizability%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Sperm attraction to a follicular factor(s) correlates with human egg fertilizability.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 88, 2840-2844 (1991).</li>
<li>Gakamsky, A., Schechtman, E., Caplan, S. R., Eisenbach, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+chemotaxis+when+the+fraction+of+responsive+cells+is+small--application+to+mammalian+sperm+guidance%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Analysis of chemotaxis when the fraction of responsive cells is small--application to mammalian sperm guidance.</a> Int. J. Dev. Biol. 52, 481-487 (2008).</li>
<li>Böhmer, M., Van, Q., Weyand, I., Hagen, V., Beyermann, M., Matsumoto, M., Hoshi, M., Hildebrand, E., Kaupp, U. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ca2%2B+spikes+in+the+flagellum+control+chemotactic+behavior+of+sperm%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">Ca2+ spikes in the flagellum control chemotactic behavior of sperm.</a> EMBO J. 24, 2741-2752 (2005).</li>
<li>Shiba, K., Baba, S. A., Inoue, T., Yoshida, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ca2%2B+bursts+occur+around+a+local+minimal+concentration+of+attractant+and+trigger+sperm+chemotactic+response%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Ca2+ bursts occur around a local minimal concentration of attractant and trigger sperm chemotactic response.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 19312-19317 (2008).</li>
<li>Burnett, L. A., Sugiyama, H., Bieber, A. L., Chandler, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Egg+jelly+proteins+stimulate+directed+motility+in+Xenopus+laevis+sperm%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Reprod.+Dev%22%5BJournal%5D)">Egg jelly proteins stimulate directed motility in Xenopus laevis sperm.</a> Mol. Reprod. Dev. 78, 450-462 (2011).</li>
<li>Abaigar, T., Barbero, J., Holt, W. V. Trajectory variance and autocorrelations within single sperm tracks as population level descriptors of sperm track complexity, predictability and energy generating ability. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAbaigar%2C+T+%22J.+Androl%22">J. Androl</a>. , Forthcoming (2011).</li>
<li>Mortimer, S. T., Swan, M. A., Mortimer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fractal+analysis+of+capacitating+human+spermatozoa%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Reprod%22%5BJournal%5D)">Fractal analysis of capacitating human spermatozoa.</a> Hum. Reprod. 11, 1049-1054 (1996).</li>
<li>Guerrero, A., Carneiro, J., Pimentel, A., Wood, C. D., Corkidi, G., Darszon, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategies+for+locating+the+female+gamete%3A+the+importance+of+measuring+sperm+trajectories+in+three+spatial+dimensions%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Hum.+Reprod%22%5BJournal%5D)">Strategies for locating the female gamete: the importance of measuring sperm trajectories in three spatial dimensions.</a> Mol. Hum. Reprod. 17, 511-523 (2011).</li>
<li>Yoshida, M., Yoshida, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sperm+chemotaxis+and+regulation+of+flagellar+movement+by+Ca2%2B%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Hum.+Reprod%22%5BJournal%5D)">Sperm chemotaxis and regulation of flagellar movement by Ca2+.</a> Mol. Hum. Reprod. 17, 457-465 (2011).</li>
<li>Spehr, M., Schwane, K., Riffell, J. A., Zimmer, R. K., Hatt, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odorant+receptors+and+olfactory-like+signaling+mechanisms+in+mammalian+sperm.Mol%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Odorant receptors and olfactory-like signaling mechanisms in mammalian sperm.Mol.</a> Cell. Endocrinol. 250, 128-136 (2006).</li>
<li>Veitinger, T., Riffell, J. R., Veitinger, S., Nascimento, J. M., Triller, A., Chandsawangbhuwana, C., Schwane, K., Geerts, A., Wunder, F., Berns, M. W., Neuhaus, E. M., Zimmer, R. K., Spehr, M., Hatt, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemosensory+Ca2%2B+dynamics+correlate+with+diverse+behavioral+phenotypes+in+human+sperm%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Chemosensory Ca2+ dynamics correlate with diverse behavioral phenotypes in human sperm.</a> J. Biol. Chem. 286, 17311-17325 (2011).</li>
<li>Tholl, N., Naqvi, S., McLaughlin, E., Boyles, S., Bieber, A. L., Chandler, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Swimming+of+Xenopus+laevis+sperm+exhibits+multiple+gears+and+its+duration+is+extended+by+egg+jelly+constituents%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Bull%22%5BJournal%5D)">Swimming of Xenopus laevis sperm exhibits multiple gears and its duration is extended by egg jelly constituents.</a> Biol. Bull. 220, 174-185 (2011).</li>
<li>Eisenbach, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sperm+chemotaxis%5BTitle%5D)+AND+%22Rev.+Reprod%22%5BJournal%5D)">Sperm chemotaxis.</a> Rev. Reprod. 4, 56-66 (1999).</li>
<li>Riffell, J. A., Zimmer, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+and+flow%3A+the+consequences+of+fluid+shear+for+sperm-egg+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Sex and flow: the consequences of fluid shear for sperm-egg interactions.</a> J. Exp. Biol. 210, 3644-3660 (2007).</li>
<li>Corkidi, G., Taboada, B., Wood, C. D., Guerrero, A., Darszon, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tracking+sperm+in+three-dimensions%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+Biophys.+Res.+Commun%22%5BJournal%5D)">Tracking sperm in three-dimensions.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 373, 125-129 (2008).</li>
<li>Himes, J. E., Riffell, J. A., Zimmer, C. A., Zimmer, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sperm+chemotaxis+as+revealed+with+live+and+synthetic+eggs%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Bull%22%5BJournal%5D)">Sperm chemotaxis as revealed with live and synthetic eggs.</a> Biol Bull. 220, 1-5 (2011).</li>
<li>Sun, F., Giojolas, L. C., Rovasio, R. A., Tur-Kaspa, I., Sanchez, R., Eisenbach, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lack+of+species-specificity+in+mammalian+sperm+chemotaxis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Lack of species-specificity in mammalian sperm chemotaxis.</a> Dev. Biol. 255, 423-427 (2003).</li>
<li>Guidobaldi, H. A., Teves, M. E., Uñates, D. R., Anastasía, A., Giojalas, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progesterone+from+the+cumulus+cells+is+the+sperm+chemoattractant+secreted+by+the+rabbit+oocyte+cumulus+complex%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Progesterone from the cumulus cells is the sperm chemoattractant secreted by the rabbit oocyte cumulus complex.</a> PLoS One. 3, e3040-e3040 (2008).</li>
<li>Oren-Benaroya, R., Orvieto, R., Gakamsky, A., Pinchasov, M., Eisenbach, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+sperm+chemoattractant+secreted+from+human+cumulus+cells+is+progesterone%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Reprod%22%5BJournal%5D)">The sperm chemoattractant secreted from human cumulus cells is progesterone.</a> Hum. Reprod. 23, 2339-2345 (2008).</li>
<li>Teves, M. E., Guidobaldi, H. A., Uñates, D. R., Sanchez, R., Miska, W., Publicover, S. J., Morales Garcia, A. A., Giojalas, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanism+for+human+sperm+chemotaxis+mediated+by+progesterone%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanism for human sperm chemotaxis mediated by progesterone.</a> PLoS One. 4, 8211-82 (2009).</li>
<li>Blengini, C. S., Teves, M. E., Uñates, D. R., Guidobaldi, H. A., Gatica, L. V., Giojalas, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+sperm+pattern+of+movement+during+chemotactic+re-orientation+towards+a+progesterone+source%5BTitle%5D)+AND+%22Asian+J.+Androl%22%5BJournal%5D)">Human sperm pattern of movement during chemotactic re-orientation towards a progesterone source.</a> Asian J. Androl. 13, 769-773 (2011).</li>
<li>Strünker, T., Goodwin, N., Brenker, C., Kashikar, N. D., Weyand, I., Seifert, R., Kaupp, U. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+CatSper+channel+mediates+progesterone-induced+Ca2%2B+influx+in+human+sperm%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The CatSper channel mediates progesterone-induced Ca2+ influx in human sperm.</a> Nature. 471, 382-386 (2011).</li>
<li>Lishko, P. V., Botchkina, I. L., Kirichok, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progesterone+activates+the+principal+Ca2%2B+channel+of+human+sperm%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Progesterone activates the principal Ca2+ channel of human sperm.</a> Nature. 471, 387-391 (2011).</li>
<li>Boyden, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+chemotactic+effect+of+mixtures+of+antibody+and+antigen+on+polymorphonuclear+leucocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">The chemotactic effect of mixtures of antibody and antigen on polymorphonuclear leucocytes.</a> J. Exp. Med. 115, 453-465 (1962).</li>
<li>Zigmond, S. H., Lauffenburger, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assays+of+leukocyte+chemotaxis%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Med%22%5BJournal%5D)">Assays of leukocyte chemotaxis.</a> Annu. Rev. Med. 37, 149-155 (1986).</li>
<li>Villanueva-Diaz, C., Vadillo-Ortega, F., Kably-Ambe, A., Diaz-Pérez, M. A., Krivitzky, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+that+human+follicular+fluid+contains+a+chemoattractant+for+spermatozoa%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil.+Steril%22%5BJournal%5D)">Evidence that human follicular fluid contains a chemoattractant for spermatozoa.</a> Fertil. Steril. 54, 1180-1182 (1990).</li>
<li>Villanueva-Diaz, C., Arizs-Martinez, J., Bermejo-Martinez, L., Vadillo-Ortega, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progesterone+induces+human+sperm+chemotaxis%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil.+Steril%22%5BJournal%5D)">Progesterone induces human sperm chemotaxis.</a> Fertil. Steril. 64, 1183-1188 (1995).</li>
<li>Olson, J., Xiang, X., Ziegert, T., Kittleson, A., Rawls, A., Bieber, A., Chandler, D. E. A. llurin <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((a+21+kD+sperm+chemoattractant+from+Xenopus+egg+jelly%2C+is+homologous+to+mammalian+sperm-binding+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">a 21 kD sperm chemoattractant from Xenopus egg jelly, is homologous to mammalian sperm-binding proteins.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98, 11205-11210 (2001).</li>
</ol>

Keine Interessenskonflikte erklärt.

Chemotaxis von Zellen bewegen entweder durch amöboide Bewegung oder Flagellen-powered Schwimmen ist in vielen biologischen Zusammenhängen gefunden und Erforschung dieses Phänomens erfordert die Verfügbarkeit von praktischen und zuverlässigen Tests. Einige Beispiele für das Phänomen, wie Anziehung von Spermien einer Seeigel-Ei oder das Sammeln von Schleimpilz-Zellen zu einem Fruchtkörper zu bilden, haben unmittelbare visuelle Wirkung. Die Quantifizierung dieses Phänomens ist in eine Vielzahl von Möglichkeiten, wie Eisenb...

<table border="1"><tbody><tr><td> Name des Item </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td><td> Kommentare </td></tr><tr><td> 24-Well-Platten </td><td> Becton-Dickinson </td><td> 35/1147 </td><td></td></tr><tr><td> 12 mm Außendurchmesser Einsätze mit 12 mu m-Membran </td><td> Millipore </td><td> PIXP01250 </td><td> Wir bisher verwendeten Costar-Corning Transwell plate # 3403-jetzt eingestellt </td></tr><tr><td> Zigmond Kammer </td><td> Neuroprobe </td><td> Z02 </td><td></td></tr><tr><td> Silikonöl </td><td> General Electric </td><td> SF1154 </td><td> Entspricht Dow Corning 550 Fluid- </td></tr><tr><td> Image J-Software </td><td> Wayne Rasband, Research Services Branch, National Institute of Mental Health </td><td> Kostenloser Download unter http://rsbweb.nih.gov/ij </td><td> Java-Programm, das auf Windows, Lin läuftux und Mac </td></tr><tr><td> MtrackJ Software </td><td> Erik Meijering / ImageScience / <a href="http://www.bigr.nl/">Biomedical Imaging Group</a> , Erasmus MC - University Medical Center Rotterdam </td><td> Kostenloser Download unter <a href="http://www.imagescience.org/meijering/software/mtrackj/">http://www.imagescience.org/meijering/software/mtrackj/</a> </td><td> Java-Programm, das auf Windows, Linux und Mac läuft </td></tr><tr><td> Virtual Dub Software </td><td> <a href="http://www.virtualdub.org/gpl.html">GNU General Public Licensed</a> Software </td><td> Kostenloser Download via <a href="http://www.virtualdub.org/index.html">http://www.virtualdub.org/index.html</a> </td><td> Setup-Anweisungen auf dem Image J Website unter plugins, nur für Windows </td></tr><tr><td> CEllSens Software </td><td> Olymp </td><td> Siehe Website: <a href="http://www.olympusamerica.com/seg_section/product.asp?product=1070">http://www.olympusamerica.com/seg_section/p</a>roduct.asp? Produkt = 1070 </td><td> Bedienelemente und nimmt Bilder aus einer Vielzahl von Kameras. Auch hat Bildverarbeitungsfunktionen </td></tr></tbody></table>

zwei arten von assays zum nachweis von frog sperm chemotaxis

Two Types of Assays for Detecting Frog Sperm Chemoattraction

Sperm Chemotaxis bei Wirbellosen kann ausreichend robust, dass man eine Pipette mit dem attraktiven Peptid in eine Spermiensuspension Ort und mikroskopisch sichtbar Spermien Ansammlung rund um die Pipette 1. Sperm Chemotaxis bei Wirbeltieren wie Fröschen, Nagern und Menschen ist schwieriger zu erkennen und erfordert quantitative Assays. Solche Tests sind zwei Haupttypen - Tests, die Spermien Bewegung zu quantifizieren, um eine Quelle der Lockstoff, sogenannte Spermien Anhäufung Assays und Assays, die tatsächlich verfolgen den Swimming Flugbahnen der einzelnen Spermien. Sperm Anhäufung Assays sind relativ schnell was Dutzende oder Hunderte von Tests in einem einzigen Tag durchgeführt werden, wodurch Dosis-Wirkungs-Kurven und Zeit Kurse relativ schnell durchgeführt werden. Diese Arten von Assays wurden ausgiebig zu vielen etablierten Chemoattraktion Systeme zu charakterisieren - zum Beispiel, Chemotaxis neutrophiler zu bacterial Peptide und Spermien-Chemotaxis zu Follikelflüssigkeit. Sperma-Tracking-Tests können arbeitsintensiver werden, bieten aber zusätzliche Daten, wie chemoattractancts tatsächlich verändern Schwimmen Wege, die Spermien zu nehmen. Diese Art von Test ist notwendig, um die Orientierung der Spermien Bewegung relativ zur chemoattrractant Farbverlaufsachse zu demonstrieren und zu charakteristischen Windungen oder Änderungen in der Ausrichtung, dass die Spermien näher an das Ei zu visualisieren. Hier beschreiben wir Methoden für jede dieser beiden Arten von Tests verwendet. Die Spermien Anhäufung Test verwendet wird als &quot;Zwei-Kammer&quot;-Test. Amphibien-Spermien sind in einem Gewebekulturplatte Einsatz mit einem Polycarbonat-Filter Etage mit 12 Mikrometer Durchmesser Poren gelegt. Inserts mit Spermien werden in Gewebekulturplatte Vertiefungen mit Puffer und ein chemoatttractant vorsichtig in den Boden gut, wo der Boden erfüllt die Wand (siehe Abb. 1). Pipettiert platziert. Nach der Inkubation wird die oben einfügen, welche die Spermien-Reservoir sorgfältig rentfernt hat, und Spermien in die untere Kammer, die durch die Membran passiert haben, werden entfernt, pelletiert und dann von Hämozytometer oder Durchflusszytometer gezählt. Die Spermien-Tracking-Test verwendet eine Zigmond Kammer ursprünglich zur Beobachtung Neutrophilen-Chemotaxis entwickelt und modifiziert für die Beobachtung von Spermien durch Giojalas und Mitarbeiter 2,3. Die Kammer besteht aus einer dicken Glasplatte, in die zwei senkrechte Rinnen bearbeitet worden sind. Diese werden durch eine 1 mm breite Aussichtsplattform getrennt. Nach der Anwendung eines Deckglases, Spermien in eine Mulde geladen sind, visualisiert die Lockstoff-Agent in die andere und die Bewegung der einzelnen Spermien durch Video-Mikroskopie. Video footage wird dann analysiert mit Hilfe von Software zweidimensionalen Zelle Bewegungen in der xy-Ebene als Funktion der Zeit (xyt Datensätze), dass die Flugbahn jedes Spermium Form zu identifizieren.

Eier und der extrazellulären Beschichtungen um Eier häufig Release Peptiden, Proteinen und kleinen Molekülen, die Kommunikation mit Spermien, um sie an das Ei fördert damit die Befruchtung führen. Mit Frosch Spermien wir beschreiben und vergleichen zwei Klassen von Assays verwendet, um Spermien Chemoattraktion erkennen - Sperma Anhäufung Assays und Spermien-Tracking-Tests.

Zwei Arten von Assays zum Nachweis von Frog Sperm Chemotaxis

Die Chemoattraktion von Spermien bei Invertebraten kann so robust sein, dass man eine Pipette, die das attraktive Peptid enthält, in eine Spermiensuspension setzen kann ...

Hier werden zwei verschiedene Methoden zur Beurteilung der Spermien-Chemoattraktion für den Zweikammer-Assay beschrieben. Aktivierte Froschspermien werden zunächst in Einsätze mit porösen Membranböden pipettiert, die in die Vertiefungen einer 24-Loch-Platte eingefügt sind. Sobald die Spermien positioniert sind, wird ein Chemoattraktant vorsichtig in den Boden der Vertiefung gegeben, um einen chemoattraktiven Gradienten zu erzeugen.Anschließend werden die Spermien inkubiert, um den Zellen Zeit zu geben, die poröse Membran als Reaktion auf den chemotaktischen Gradienten zu durchqueren. Schließlich wird der Einsatz entfernt, und die Spermien, die in den zwei-Kammer-Assay in den Boden der Vertiefung migriert sind, werden mittels Hämozytometer gezählt. Letztendlich kann die Aktivität von Spermien-Chemoattractanten verglichen und quantifiziert werden, beispielsweise durch eine Dosis-Wirkungs-Kurvenanalyse für den Zigman-Kammer-Tracking-Assay.Ein Deckglas wird zunächst mit Silikonöl auf die Zigman-Kammer aufgebracht und verkehrt herum über die kreisförmige Öffnung eines Mikroskops platziert. Eine Seite der Kammer wird anschließend mit aktivierten Froschspermien gefüllt. Danach wird die an

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Verfahren zur quantitativen Bewertung der chemotaktischen Reaktion...

C. elegans Chemotaxis-Assay

Geringe Spermien Wettbewerbsfähigkeit...

Beurteilung Differenzen in Sperm Wettbewerbsfähigkeit in<em&gt; Drosophila</em

Xenopus laevis Kaulquappen schwimmen lieber auf der weißen Seite einer schwarz / weißen Tank. Dieses Verhalten wird von ihrer Vision geleitet. Basierend auf diesem Verhalten stellen wir eine einfache Test, um die visuelle Funktion der Kaulquappen zu testen.

Eine einfache Verhaltenstest zur Prüfung von Visual Function in<em&gt; Xenopus laevis</em

Hier präsentieren wir Ihnen Methoden zur Spermatozoan Membran Integrität, eine zelluläre Funktion verbunden mit Sperma Befruchtung Kompetenz zu bewerten. Wir beschreiben drei Techniken für die fluorimetrischen Beurteilung der Spermien Membranen: gleichzeitige Färbung mit spezifischen fluoreszierende Sonden, Fluoreszenz-Mikroskopie und erweiterte Spermien gewidmet Durchflusszytometrie. Beispiele für die Kombination der Methoden werden ebenfalls vorgestellt.

Fluorimetrischen Techniken für die Beurteilung der Spermien Membranen

Hier, zwei mittleren Durchsatz-Assays für die Bewertung der Auswirkungen auf Ca2 +-Signalisierung und Akrosom Reaktion in menschliche Spermien werden beschrieben. Diese Tests können verwendet werden, um schnell und einfach große Mengen von Verbindungen für Auswirkungen auf Ca2 +Bildschirm-Signalisierung und Akrosom Reaktion in menschliches Sperma.

Medium-Throughput Screening Tests zur Beurteilung der Auswirkungen auf Ca2 +-Signalisierung und Akrosom Reaktion in menschliches Sperma

Sperma muss erfolgreich durch den ovidukt navigieren, um eine Eizelle zu düngen. Hier beschreiben wir einen Test zur Messung der Spermienwanderung innerhalb der C. elegans Hermaphrodite uterus. Dieser Test kann quantitative Daten über die Spermienverteilung innerhalb der Gebärmutter nach der Paarung sowie über Geschwindigkeit, Richtgeschwindigkeit und Umkehrfrequenz liefern.

Messung der Spermienführung und-beweglichkeit innerhalb der Caenorhabditis elegans Hermaphrodite Reproductive Tract

Wir beschreiben die Anwendung eines extrazellulären Flussanalysators zur Überwachung von Echtzeitveränderungen in der Glykolyse und oxidativen Phosphorylierung während der Mazemazeration der Maus.

Verwendung eines extrazellulären Flux-Analyzers zur Messung von Veränderungen in der Glykolyse und oxidativen Phosphorylierung während der Maus Sperma-Capacitation

Hier präsentieren wir ein Protokoll zur Untersuchung der Paarungswettbewerbsfähigkeit von männlichen Aedes aegypti unter Verwendung von Fluoreszenzfarbstoff als Marker. Weibliche Moskitos sind sowohl markierten als auch unmarkierten Männchen zur Kopulation ausgesetzt. Nach der Paarung werden ihre Spermatheken unter einem Fluoreszenzmikroskop untersucht, um ihren Paarungspartner zu bestimmen.

Verwendung des fluoreszierenden Farbstoffs Rhodamin B zur Untersuchung der Paarungswettbewerbsfähigkeit bei männlichen Aedes aegypti-Moskitos

Wenn Transforming Growth Factor ß-Familie Vorläuferproteine in Xenopus laevis-Embryonen ektopisch exprimiert werden, dimerisieren, gespalten werden und in die Blastokoele sezerniert werden, die von der späten Blastula bis zur frühen Gastrula beginnt. Wir beschreiben eine Methode zum Absaugen von Spaltprodukten aus der Blastokoele-Höhle für die Immunoblot-Analyse.

Analyse der Umwandlung von Wachstumsfaktor ß Familie Spaltungsprodukte, die in die Blastokoele von Xenopus laevis Embryonen sezerniert werden

Dieses Protokoll etabliert Methoden zur Extraktion und Quantifizierung von Reaktionen auf das flüchtige Sexualpheromon in C. elegans und stellt Werkzeuge zur Untersuchung der chemischen Kommunikation und Navigationsbahn zur Verfügung.

Extraktion von flüchtigen Sexualpheromonen und Chemoattraction-Assay bei Caenorhabditis elegans

Lernen Sie zwei Assay-Methoden zur Untersuchung der Spermien-Chemotaxis bei Fröschen. Diese Techniken ermöglichen die Quantifizierung und Analyse der Spermienbewegung in Reaktion auf Chemoattraktanten.

Zwei Arten von Assays zum Nachweis von Frog Sperm Chemotaxis

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