Name: Die Ex vivo Isoliert Skeletal Mikrogefäßdichte Vorbereitung für Untersuchung der vaskulären Reaktivität (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-04-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: Lernen Sie die chirurgische Isolierung und doppelte Kanülierung von Widerstandsarteriolen aus dem Musculus gracilis ex vivo. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung vaskulärer Reaktivität und struktureller Eigenschaften unter kontrollierten Bedingungen.

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Diese Arbeit wurde von der American Heart Association (EIA 0740129N) und NIH T32 HL90610 unterstützt.

<ol><li>Goodwill, A. G., Frisbee, S. J., Stapleton, P. A., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+Chronic+Anticholesterol+Therapy+on+Development+of+Microvascular+Rarefaction+in+the+Metabolic+Syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Impact of Chronic Anticholesterol Therapy on Development of Microvascular Rarefaction in the Metabolic Syndrome.</a> Microcirculation. , 1-18 (2009).</li>
<li>Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+vascular+thromboxane+generation+impairs+dilation+of+skeletal+muscle+arterioles+of+obese+Zucker+rats+with+reduced+oxygen+tension%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Increased vascular thromboxane generation impairs dilation of skeletal muscle arterioles of obese Zucker rats with reduced oxygen tension.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 295, H1522-H1528 (2008).</li>
<li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth-dependent+changes+in+endothelial+factors+regulating+arteriolar+tone%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Growth-dependent changes in endothelial factors regulating arteriolar tone.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 292, H207-H214 (2007).</li>
<li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogen+peroxide+emerges+as+a+regulator+of+tone+in+skeletal+muscle+arterioles+during+juvenile+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Hydrogen peroxide emerges as a regulator of tone in skeletal muscle arterioles during juvenile growth.</a> Microcirculation. 15, 151-161 (2008).</li>
<li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+myogenic+responsiveness+of+skeletal+muscle+arterioles+with+juvenile+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Increased myogenic responsiveness of skeletal muscle arterioles with juvenile growth.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, 2344-2351 (2008).</li>
<li>Dacey, R. G., Duling, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+study+of+rat+intracerebral+arterioles%3A+methods%2C+morphology%2C+and+reactivity%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">A study of rat intracerebral arterioles: methods, morphology, and reactivity.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 243, H598-H606 (1982).</li>
<li>Fredricks, K. T., Liu, Y., Lombard, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Response+of+extraparenchymal+resistance+arteries+of+rat+skeletal+muscle+to+reduce+PO2%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Response of extraparenchymal resistance arteries of rat skeletal muscle to reduce PO2.</a> Am. J. Physiol. 267, H706-H715 (1994).</li>
<li>Durand, M. J., Raffai, G., Weinberg, B. D., Lombard, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin-%281-7%29+and+low-dose+angiotensin+II+infusion+reverse+salt-induced+endothelial+dysfunction+via+different+mechanisms+in+rat+middle+cerebral+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Angiotensin-(1-7) and low-dose angiotensin II infusion reverse salt-induced endothelial dysfunction via different mechanisms in rat middle cerebral arteries.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 299, H1024-H1033 (2010).</li>
<li>LeBlanc, A. J., Cumpston, J. L., Chen, B. T., Frazer, D., Castranova, V., Nurkiewicz, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoparticle+inhalation+impairs+endothelium-dependent+vasodilation+in+subepicardial+arterioles%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Toxicol.+Environ.+Health+A%22%5BJournal%5D)">Nanoparticle inhalation impairs endothelium-dependent vasodilation in subepicardial arterioles.</a> J. Toxicol. Environ. Health A. 72, 1576-1584 (2009).</li>
<li>Jernigan, N. L., LaMarca, B., Speed, J., Galmiche, L., Granger, J. P., Drummond, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+salt+enhances+benzamil-sensitive+component+of+myogenic+constriction+in+mesenteric+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Dietary salt enhances benzamil-sensitive component of myogenic constriction in mesenteric arteries.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, H409-H420 (2008).</li>
<li>Stapleton, P. A., Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+mechanisms+of+endothelium-dependent+dilation+in+skeletal+muscle+arterioles+with+genetic+hypercholesterolemia%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Regul.+Integr.+Comp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Altered mechanisms of endothelium-dependent dilation in skeletal muscle arterioles with genetic hypercholesterolemia.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 293, R1110-R1119 (2007).</li>
<li>Goodwill, A. G., Stapleton, P. A., James, M. E., d'Audiffret, A. C., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+arachidonic+acid-induced+thromboxane+generation+impairs+skeletal+muscle+arteriolar+dilation+with+genetic+dyslipidemia%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Increased arachidonic acid-induced thromboxane generation impairs skeletal muscle arteriolar dilation with genetic dyslipidemia.</a> Microcirculation. 15, 621-631 (2008).</li>
<li>Baumbach, G. L., Hadju, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanics+and+composition+of+cerebral+arterioles+in+renal+and+spontaneously+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Mechanics and composition of cerebral arterioles in renal and spontaneously hypertensive rats.</a> Hypertension. 21, 816-826 (1993).</li>
<li>Uchida, E., Bohr, D. F., Hoobler, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+studying+isolated+resistance+vessel+from+rabbit+mesentery+and+brain+and+their+responses+to+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">A method for studying isolated resistance vessel from rabbit mesentery and brain and their responses to drugs.</a> Circ. Res. 4, 525-536 (1967).</li>
<li>Davis, M. J., Kuo, L., Chilian, W. M., Muller, J. M. I. solated Chapter 23. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDavis%2C+MJ+%22Isolated%2C+perfused+microvessels.+In%3A+Clinically+Applied+Microcirculation+Research%22">Isolated, perfused microvessels. In: Clinically Applied Microcirculation Research</a>. Barker, J. H., Anderson, G. L., Menger, M. D. 32, CRC Press, Inc. 435-456 (1995).</li>
<li>Lombard, J. H., Liu, Y., Fredricks, K. T., Bizub, D. M., Roman, R. J., Rusch, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrical+and+mechanical+responses+of+rat+middle+cerebral+arterieal+to+reduced+PO2+and+prostacyclin%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Electrical and mechanical responses of rat middle cerebral arterieal to reduced PO2 and prostacyclin.</a> Am. J. Physiol. 276, H509-H516 (1994).</li>
</ol>

Keine Interessenskonflikte erklärt.

Das Protokoll beschreibt die Isolierung dargestellt, Entfernen und Doppel-Kanülierung eines Skelettmuskels Mikrogefäßzellen, obwohl diese allgemeine Technik kann einfach in die meisten Gewebe aufgebracht werden. Für das laufende Manuskript hat der Begriff &quot;Arteriole&quot; von den Autoren verwendet worden, um einen Widerstand im Bereich zwischen 70-120 Schiff um Durchmesser unter Ruhebedingungen aktiven Ton, der auch ein wesentlicher Faktor für die Regulierung der Durchblutung Widerstand gegen ein Organ oder beschre...

<table border="1"><tbody><tr><td> Chemikalien und Geräte </td><td> Firma </td><td> Kommentare / Katalog # </td></tr><tr><td> Gefäßkammer </td><td> Brauch </td><td> Dave Eick (MCW) </td></tr><tr><td> Beheizte zirkulierenden Wasserbad </td><td> PolyScience und Haake </td><td> Haake DC 10 </td></tr><tr><td> Pipetten </td><td> Frederick Haer &amp; Co. </td><td> Kapillarrohr 2,0 mm AD x 1,0 mm ID (27-33-1) </td></tr><tr><td> Pressure Monitor </td><td> World Precision Instruments </td><td></td></tr><tr><td> Wassermantel Reservoir </td><td> Brauch </td><td></td></tr><tr><td> Externe Lichtquelle </td><td> World Precision Instruments </td><td> Novaflex </td></tr><tr><td> Pipettieren Puller </td><td> Mikrodaten Instruments </td><td> PMP102 Mikropipette Puller </td></tr><tr><td> Vollständige Fertigstellungment chirurgischer Werkzeuge </td><td> Fine Science Tools </td><td> Dumont </td></tr><tr><td> Ultra Fine Zange </td><td> Fine Science Tools </td><td> Inox # 5 </td></tr><tr><td> Silk Nahtfaden </td><td> Ethilon </td><td> # 10-0 oder 9-0 </td></tr><tr><td> Stereo-Mikroskop </td><td> Olymp </td><td> Olympus SZ-11 </td></tr><tr><td> Analoge Video-Messschieber </td><td> Boeckeler </td><td> Via Controller (Via-100) </td></tr><tr><td> Hochauflösende Analog-Kamera </td><td> Panasonic </td><td> GP-MF 602 </td></tr><tr><td> Sauerstoffbehälter </td><td> Regional </td><td> 21% Rest Stickstoff und 5% CO 2-Bilanz Stickstoff </td></tr><tr><td> Rohr </td><td> Tygon </td><td></td></tr><tr><td> Ablaufpumpe </td><td> Cole Parmer Instrument Co. </td><td></td></tr><tr><td> Geändert Ratte PSS </td><td> Siehe Rezept unten </td><td></td&gt; </tr><tr><td> Van den Breemen Relaxant PSS </td><td> Siehe Rezept unten </td><td></td></tr></tbody></table> Tabelle 1. Eine Liste der wichtigsten Komponenten der isolierten microvessel Stationierung in den Figuren dargestellt. <table border="1"><tbody><tr><td> Geändert Ratte PSS Rezept </td><td> Um zwei Liter PSS machen </td><td> 20X Salz Lager (2L) </td><td> 20X Ausgleichslagerkonto (2L) </td></tr><tr><td> NaCl </td><td></td><td> 278,0 g </td><td></td></tr><tr><td> KCl </td><td></td><td> 14,0 g </td><td></td></tr><tr><td> MgSO 4-7H 2 O </td><td></td><td> 11,5 g </td><td></td></tr><tr><td> CaCl 2-H 2 O </td><td></td><td> 9,4 g </td><td></td></tr><tr> &lt;td&gt; NaHCO 3 </td><td></td><td></td><td> 80,8 g </td></tr><tr><td> EDTA </td><td></td><td></td><td> 0,4 g </td></tr><tr><td> NaH 2 PO 4 </td><td> 0,28 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Glucose </td><td> 1,98 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x Salz vorrätig </td><td> 100 ml </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x Ausgleichslagerkonto </td><td> 100 ml </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Destilliertes Wasser </td><td> 1800 ml </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tabelle 2. Rezept für Standard-physiologische Salzlösung (PSS) in den isolierten microvessel Protokolle verwendet. Kommentare zu Rezept: 2 L Achten von Salt Lager und 2 L Ausgleichslagers. Diese cein im Kühlschrank gelagert werden, wenn sie nicht benutzt, aber schütteln Sie sie gut und oft vor der Zubereitung PSS. Die zusätzlichen Bestandteile sind zum Zeitpunkt der Herstellung der endgültigen PSS zugegeben. <table border="1"><tbody><tr><td> Van den Breemen Relaxant PSS </td><td> Zu 2 Litern PSS machen </td><td> 20X Salz Lager (1L) </td><td> 20X Ausgleichslagerkonto (1L) </td></tr><tr><td> NaCl </td><td></td><td> 107,4 g </td><td></td></tr><tr><td> KCl </td><td></td><td> 7,0 g </td><td></td></tr><tr><td> MgSO 4-7H 2 O </td><td></td><td> 5,76 g </td><td></td></tr><tr><td> MgCl 2-6H 2 O </td><td></td><td> 81,32 g </td><td></td></tr><tr><td> NaHCO 3 </td><td></td><td></td><td> 40,4 g </td></tr><tr><td> EDTEin </td><td></td><td></td><td> 0,2 g </td></tr><tr><td> EGTA </td><td></td><td></td><td> 15,22 </td></tr><tr><td> NaH 2 PO 4 </td><td> 0,28 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Glucose </td><td> 1,98 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x Salz vorrätig </td><td> 100 ml </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x Ausgleichslagerkonto </td><td> 100 ml </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Destilliertes Wasser </td><td> 1800 ml </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tabelle 3. Rezept für Beruhigungsmittel physiologischen van Breemen der Salzlösung (PSS) in den isolierten microvessel Protokolle unter den Bedingungen von Null aktiv Ton verwendet. Kommentare zu Rezept: 1 L Achten von Salt Lager einND 1 L Ausgleichslagers. Diese können im Kühlschrank gelagert werden, wenn sie nicht benutzt, aber schütteln Sie sie gut und oft vor der Zubereitung PSS. Die zusätzlichen Bestandteile sind zum Zeitpunkt der Herstellung der endgültigen Beruhigungsmittel PSS zugegeben.

die ex vivo isoliert skeletal mikrogefäßdichte vorbereitung für untersuchung der vaskulären reaktivität

The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity

Die isolierte microvessel Vorbereitung ist eine Ex-vivo-Präparat, das zur Untersuchung der unterschiedlichen Beiträge der Faktoren, die Kontrolle Gefäßdurchmesser ermöglicht, und somit Perfusionswiderstandes 1-5. Dies ist ein klassisches experimentelles Präparat, das in hohem Maße war, zunächst von Uchida et al. 15 vor einigen Jahrzehnten. Diese erste Beschreibung, die die Grundlage für die Techniken, die umfassend modifiziert und verbessert wurde, in erster Linie im Labor von Dr. Brian Duling an der University of Virginia 6-8, und präsentieren wir Ihnen eine aktuelle Ansatz auf den folgenden Seiten. Diese Vorbereitung wird speziell auf die gracilis Arteriole in einer Ratte als microvessel der Wahl beziehen, aber die grundlegende Vorbereitung lässt sich problemlos auf Schiffe von nahezu jedem anderen Gewebe oder Organ über Artgrenzen 13.09 isoliert angewendet werden. Mechanische (dh dreidimensionale) Veränderungen in der isolierten Mikrogefäße kann leicht ausgewertet werdenin Reaktion auf eine breite Palette von physiologischen (zB Hypoxie, intravaskuläre Druck oder Scherung) oder pharmakologische Herausforderungen und einen Einblick in mechanistische Elemente mit integrierten Reaktionen in einer intakten bereitzustellen, obwohl ex vivo Gewebe. Die Bedeutung dieser Methode ist, dass es für einfache Manipulation der Einflüsse können auf der integrierten Regelung der microvessel Durchmesser, aber dabei auch für die Steuerung von vielen der Beiträge aus anderen Quellen, einschließlich der intravaskulären Druck (myogenen), autonomen Innervation, hämodynamische ( zB Scherspannung), Endothel-abhängigen oder unabhängigen Stimuli, hormonelle und Parenchymzellen Einflüsse, um eine teilweise Liste zu liefern. Unter geeigneten experimentellen Bedingungen und mit entsprechenden Zielen, kann dies als Vorteil gegenüber in vivo oder in situ Gewebe / Organ Präparate, die nicht leicht für die einfache Steuerung von größeren systemischen Variablen ermöglichen dienen. Die major Einschränkung dieser Vorbereitung ist im Wesentlichen die Folge seiner Stärken. Per Definition ist das Verhalten dieser Schiffe wird unter Bedingungen, wo viele der bedeutendsten Beiträge zur Regulierung des vaskulären Widerstands entfernt worden sind, einschließlich der neuronalen, humoralen, metabolischen, etc. Als solche untersucht, so ist der Prüfer darauf achten, sich über-vermeiden Interpretation und Extrapolation der Daten, die gesammelt unter Verwendung dieser Zubereitung werden. Ein weiterer wichtiger Bereich der Bedenken hinsichtlich dieser Zubereitung ist, dass sie sehr einfach zu zellulären Bestandteilen wie das Endothel oder vaskulären glatten Muskelzellen beschädigen kann, so dass variable Quelle der Fehler eingeführt werden. Es wird dringend empfohlen, dass die einzelnen Ermittler entsprechende Messungen, um die Qualität der Zubereitung gewährleisten zu nutzen, sowohl auf der Start des Experiments und in regelmäßigen Abständen im Laufe eines Protokolls.

Ein<em&gt; Ex vivo</em&gt; Präparat wird zur Isolierung der größten M. gracilis Widerstand Arteriolen zur Vernehmung der beiden vaskulären Reaktionen auf vasoaktive Reize und die Bewertung der grundlegenden Eigenschaften über passive Wand Mechanik beschrieben.

Die Ex vivo Isoliert Skeletal Mikrogefäßdichte Vorbereitung für Untersuchung der vaskulären Reaktivität

Die isolierte Mikrogefäßpräparation ist eine Ex-vivo-Präparation, die die Untersuchung der verschiedenen Beiträge von Faktoren ermöglicht, welche die Gefäß... steuern.

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, einzelne Widerstandsarterien chirurgisch zu isolieren, zu entfernen und doppelt zu kanülieren. Für die Untersuchung unter ex vivo-Bedingungen erfolgt dies, indem zunächst ein Mikrogefäß in einem anästhetisierten Tier identifiziert und chirurgisch isoliert wird. Nach dem Transfer des Mikrogefäßes in eine Gefäßkammer werden sowohl das proximale als auch das distale Ende des Mikrogefäßes kanüliert.Schließlich werden die Mikrogefäße pharmakologischen oder physiologischen Reizen sowie experimentellen Interventionen ausgesetzt, um die Mechanismen zu untersuchen, die einer Gefäßfunktion oder -dysfunktion zugrunde liegen und die dem Gefäß selbst inhärent sind. Letztendlich zeigen die Ergebnisse die Muster und beteiligten Mechanismen der vaskulären Reaktivität in einer isolierten Umgebung auf, und zwar durch gezielt eingesetzte Stimuli und Interventionen. Im Allgemeinen haben Personen, die neu in dieser Methode sind, Schwierigkeiten, da diese Präparation nicht nur hervorragende chirurgische Fähigkeiten erfordert, die unter dem Mikroskop ausgeführt werden müssen, sondern auch Geduld und feinmotorische Kontrolle, um ein isoliertes Mikrogefäß mit einem Durchmesser, der häufig deutlich unter hundert Mikrometern liegt, doppelt zu kanülieren.Dies muss mit einem absolut minimalen Trauma für das Gefäß durchgeführt werden, da andernfalls das gesamte Verfahren lediglich in einem reaktionslosen Gefäß resultiert, das zeigt, dass das Verfahren fehlgeschlagen ist. Das Verfahren wird von Joshua Butcher, einem Doktoranden aus meinem Labor, vor der Durchführung an isolierten Mikrogefäßen durchgeführt. Vorbereitung: Beginnen Sie damit, zuvor vorbereitete Glas-Mikropipetten, indem Sie sie über einer Butanflamme erhitzen, zu einer geeigneten Konfiguration zu verbiegen. Anschließend verwenden Sie feine Pinzetten, um die Spitzen auf einen geeigneten Durchmesser abzubrechen.Platzieren Sie zwei Mikropipetten entgegengesetzt in die Pipettenhalter für die Mikrogefäße-Kammer und richten Sie sie so aus, dass sich die Spitzen in derselben vertikalen und horizontalen Ebene innerhalb der Gefäßkammer befinden. Bereiten Sie anschließend eine physiologische Salzlösung (PSS) vor und überprüfen Sie, ob der pH-Wert auf dem für die spezifischen experimentellen Bedingungen geeigneten Niveau eingestellt ist. Kalibrieren Sie mithilfe eines Hämocytometers oder eines Mikroskop-Bühnenmikrometers die digitalen Videoschublehren, die zur Messung des Gefäßdurchmessers verwendet werden.Verwenden Sie eine acht-null- oder dünnere ophthalmologische Naht, um einzelne Schlaufen zur Befestigung der Mikrogefäße an den Pipetten herzustellen. Bewahren Sie die Schlaufen am Tag des Experiments in einer Petrischale auf einem kleinen Streifen Klebeband auf, das um einen Objektträger gewickelt ist. Schalten Sie die Equilibrierungsgase in der Gefäßkammer sowie in den PERFUSE-eight- und SUSE-eight-Behältern ein.Füllen Sie alle Reservoire, Schläuche und Kammern mit der PSS-Lösung. Falls erforderlich, verwenden Sie eine Spritze, um die PSS vorsichtig vollständig durch die Pipette zu drücken, um sicherzustellen, dass diese ungehindert und vollständig gefüllt ist. Halten Sie den Eingangsdruck innerhalb angemessener Grenzen, um eine Beschädigung der Druckmesswandler zu vermeiden.Nach der Anästhesie des Tieres und der Freilegung der Mikrogefäße entfernen Sie die Mikrogefäße, indem Sie mit feinen Pinzetten die äußere Seite erfassen und entlang der Länge des Gefäßes schneiden. Achten Sie darauf, das Gefäß nicht zu ziehen oder zu reißen. Legen Sie das Gefäß anschließend in das gefüllte Wasserbad und halten Sie mit einem Paar feiner Pinzetten und einer mäßigen Perfusionsrate jede Seite der luminalen Wand des proximalen Gefäßendes fest, um das proximale Ende auf die Einfluss-Pipette zu kanülieren.Dann schieben Sie das Gefäß auf die Kanülen spitzen und führen Sie das Gefäß bis zu dem Punkt vor, an dem die T-Schleifen das Gefäß fixieren können. Bringen Sie die T-Schleife am distalen Ende des Gefäßes an und kanülieren Sie es am Ablaufpipett, wobei Sie es mit den T-Schleifen sichern. Justieren Sie die Kanüle, bis eine minimale Verformung des Gefäßes vorliegt und die Länge des Gefäßes der in-vivo-Länge entspricht.Platzieren Sie einen kleinen Bubbling Stone, der die geeignete Gasmischung liefert, in das Bad. Verschließen Sie die Kammer mit einer Plastikfolie oder einer Glasabdeckung, um zu verhindern, dass die Mikroskoplinse benetzt wird. Klemmen Sie in regelmäßigen Abständen den Ausflussschlauch ab, um festzustellen, ob das Gefäß eine Rostfärbung entwickelt.Überprüfen Sie die Gefäße auf Lecks, indem Sie den Druck im Gefäß erhöhen und zuerst die Ausfluss- und anschließend die Zuflussleitungen abklemmen. Ist der intraluminale Druck stabil, liegen keine erkennbaren Lecks vor. Falls das Gefäß einen kleinen Seitenast aufweist, der leckt, ligieren Sie diesen nach der Kanülierung der Mikrogefäße, der Äquilibration und Validierung mit einer einzelnen Schlinge aus 10-0-ophtalmologischer Naht, bevor Sie mit dem Experiment zur Bestimmung der initialen Kontrollreaktionen beginnen.Beispielsweise kann für einen physiologischen Reiz wie myogene Aktivierung oder druckinduzierte Konstriktion der intraluminale Druck über einen gewünschten Bereich zufällig verändert werden, wobei dem Gefäß Zeit gegeben wird, auf die Herausforderung mit Phenylephrin in variierenden Konzentrationen in zufälliger Reihenfolge zu reagieren. Nach einer geeigneten Einwirkzeit wird eine zweite Runde der Datensammlung eingeleitet, indem entweder zusätzliche Interventionen durchgeführt, die ursprüngliche Lösung ausgewaschen oder der physiologische Reiz entfernt und überprüft wird, ob das Gefäß ins Gleichgewicht zurückgekehrt ist. Sobald das Gefäß den aktiven Tonus verliert, wird das Experiment beendet oder gegebenenfalls Daten zur Mechanik der Gefäßwand erfasst.Wenn das Experiment abgeschlossen ist, spülen Sie alle Leitungen und Kammern mit PSS und reichlich destilliertem oder entionisiertem Wasser durch und lassen Sie sie anschließend vollständig trocknen. Gezeigt ist hier ein kaniertes Mikrogefäss mit Ein- und Ausflusspipetten sowie Schleifen in hoher Vergrößerung. Der hier sichtbare Innendurchmesser von hundert 12 Mikrometern wurde mithilfe digitaler Messschieber bestimmt.Ein kaniertes Mikrogefä&szlig; wird nach der Equilibrierung gezeigt. Hier ist dasselbe Gef&auml;&szlig; nach Dilatation als Reaktion auf die Gabe von Acetylcholin. Und schlie&szlig;lich ist dies das verengte Gef&auml;&szlig; nach der Gabe von Phenylephrin.Diese Diagramme fassen die Reaktionen eines isolierten Mikrogefses auf Hypoxie, steigende Konzentrationen von Acetylcholin oder Änderungen des intravasalen Drucks unter Kontrollbedingungen zusammen. Anschließend in Gegenwart von kalziumfreier PSS. Wenn man die Technik einmal beherrscht, kann sie in etwa einer Stunde durchgeführt werden, sofern sie ordnungsgemäß ausgeführt wird, und das Gefäß kann über viele Stunden hinweg im Kammerpräparat unter Aufrechterhaltung geeigneter Temperatur, Gas- und SUSE eight- oder Perfuse eight-Bedingungen leicht lebensfähig bleiben.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Eine neue vielseitige Methode zur Beobachtung der Mikrozirkulation wird vorgestellt. Es gilt als geeignet für eine langfristige Beobachtung und für die Kombination mit pharmacophysiological oder molekularbiologische Eingriffe.

In-vivo-Mikro-Zirkulation Measurement im Skelettmuskel von Intra-vital-Mikroskopie

Wir präsentieren eine Vorbereitung für die Visualisierung und Manipulation von Calcium-Signal in nativer, intakte mikrovaskulären Endothel. Endothelial Rohre frisch aus Maus Widerstand Arterien Skelettmuskel in vivo behalten Morphologie und dynamische Signalisierung innerhalb und zwischen benachbarten Zellen isoliert. Endothelzellen Rohre können aus Mikrogefäßen anderer Gewebe und Organe hergestellt werden.

Microvascular Endothelial Isolierung von Rohren aus Maus Widerstand Arterien

Der Dünndarm wird häufig Giftstoffe, die den Blutfluss zu beeinflussen, und kann sich negativ auf die Nährstoffabsorption ausgesetzt. Mit Hilfe eines multimyograph und A. und V. mesenterica isoliert, Verbindungen oder Giftstoffe von Interesse für Vasoaktivität abgeschirmt werden.

Isolierung und Verwendung von Rinder Abschnitte A. und V. mesenterica als Bioassay für Vasoaktivität im Dünndarm Testen

Wir stellen ein Protokoll menschlichen endothelial-pericyte Wechselwirkungen in Maus unter Verwendung einer Variation der Matrix Gelpfropfen Angiogenese-Assay zu untersuchen.

In - vivo - Studie der menschlichen Endothelial-pericyte Interaktion Mit dem Matrix - Gel - Plug - Assay in der Maus

Ein Verfahren zur Herstellung von Gesichtspräparaten der Kartoffel-Arterie und Aorta der Maus ist beschrieben. Solche Präparate, wenn sie mit spezifischen Antikörpern immunfluoreszenz gefärbt sind, ermöglichen es uns, die Lokalisation von Proteinen und die Identifizierung von Zelltypen innerhalb der gesamten Gefäßwand durch konfokale Mikroskopie zu untersuchen.

En Face Vorbereitung der Maus Blutgefäße

Videomicroscopy Systeme werden verwendet, um die funktionelle Eigenschaften der isolierten Fettgewebe Arteriolen in Reaktion auf physiologische und pharmakologische Stimuli zu untersuchen. Diese Technik kann verwendet werden, zu prüfen, mikrovaskuläre Phänotypen in verschiedenen Fettgewebe Domänen bei übergewichtigen Menschen.

Bewertung der menschlichen Fettgewebe mikrovaskuläre Funktion mit Videomicroscopy

Dieses Manuskript beschreibt in Vitro Videomikroskopie Protokolle für die Bewertung der Gefäßfunktion in Ratte zerebralen Widerstand Arterien. Das Manuskript beschreibt auch Techniken für die Bewertung der kapilläre Dichte mit Gewebekulturen beschrifteten Lektine und Gewebe Perfusion mit Laser-Doppler-Flowmetry.

Bewertung der vaskulären Kontrollmechanismen Nutzung Videomikroskopie der isolierten Widerstand Arterien von Ratten

Dieses Manuskript beschreibt eine einfache Protokoll für die Isolierung von Arteriolen von der Netzhaut der Ratte, die in elektrophysiologische, Kalzium Imaging und Druck Myographie Studien verwendet werden können.

Isolierung der retinalen Arteriolen für Ex Vivo Zelle Physiologie Studien

Hier stellen wir ein Protokoll zur Immunfluoreszenzfärbung vor, um die Endothelzellen der Mausaorta direkt zu beobachten. Diese Technik ist nützlich, wenn der zelluläre und molekulare Phänotyp von Endothelzellen in verschiedenen Strömungsmustern und bei der Entwicklung von Arteriosklerose untersucht wird.

Verwendung von En Face Immunofluoreszenz Färbung zur direkten Beobachtung von vaskulären Endothelzellen

Ziel dieses Protokolls ist es, Mikrogefäße aus mehreren Regionen des zentralen Nervensystems von lissenzephalischen und gyrencephalen Wirbeltieren zu isolieren.

Zuverlässige Isolierung von Mikrogefäßen des zentralen Nervensystems über fünf Wirbeltiergruppen hinweg

Die intensive Vorbereitung intakter zerebraler endothelialer "Röhrchen" der Maus aus den zerebralen parenchymalen Arteriolen wird für die Untersuchung der zerebralen Blutflussregulation veranschaulicht. Darüber hinaus demonstrieren wir die experimentellen Stärken dieses endothelialen Studienmodells für die Fluoreszenzbildgebung und die elektrophysiologische Messung wichtiger zellulärer Signalwege, einschließlich Änderungen des intrazellulären [Ca2+] und des Membranpotentials.

Isolierung und funktionelle Analyse des arteriolären Endothels des Hirnparenchyms der Maus

Lernen Sie die chirurgische Isolierung und doppelte Kanülierung von Widerstandsarteriolen aus dem Musculus gracilis ex vivo. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung vaskulärer Reaktivität und struktureller Eigenschaften unter kontrollierten Bedingungen.

Die Ex vivo Isoliert Skeletal Mikrogefäßdichte Vorbereitung für Untersuchung der vaskulären Reaktivität

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