Name: Die Überwindung der nicht mehr reagiert, in der experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE) Beständig Mausstämmen durch adoptiven Transfer-und Antigen-Challenge (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-04-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 38 s
Description: Erfahren Sie, wie Sie experimentelle autoimmune Enzephalomyelitis (EAE) in resistenten Mausstämmen durch adoptiven Transfer und Antigen-Challenge induzieren. Diese Methode ermöglicht zuverlässige Krankheitsauslösung für Autoimmunitätsforschung.

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In Teilen unterstützt durch Zuschüsse der National Institutes of Health (R01 NS37253 und N01 NS055167) und der National Multiple Sclerosis Society (RG 3288-A6).

1. Vorbereiten CFA-emulgierten Antigen <ol><li> Meerschweinchen-MBP gelöst (hergestellt nach dem Verfahren von Swanborg1 und in lyophilisierter Form bei 4 ° C) in Phosphatpuffer (PBS) in einer Konzentration von 2 mg / ml. Wenn synthetisiert MBP-Peptiden (MBP 60-80, SHHAARTTHYGSLPQKSQR) 2 verwendet werden, Herstellung einer 2 mg / ml Lösung. Erstellen Sie eine angemessene Menge an Antigen-Lösung (0,1 ml pro Maus immunisiert werden) in ein Glas Spritze mit Luer-Lok. </li><li> Malen ein Volumen von komplettem Freund-Adjuvans H37Ra (0,1 Gew.%) (CFA, Difco Laboratories) gleich der Antigen-Lösung in ein anderes Glas Spritze mit Luer-Lock versehen. </li><li> Verbinden Sie die beiden Glasspritzen mit einem Drei-Wege-Hahn. Mischen der Lösung mit dem MBP CFA, indem die Kolben hin und her. Halten Sie die Bewegung, bis eine Emulsion entsteht. </li><li> Um zu testen ob eine Emulsion bilden, schieben Sie die gesamte Mischung in eine Spritze. Trennen Sie die leere Spritze, ziehen ter Kolben etwas zurück, und entladen Sie einen Tropfen der restliche Emulsion in ein Becherglas mit sauberem Wasser bei Raumtemperatur. Wenn die Emulsion Tropfen intakt bleibt auf der Oberfläche des Wassers wird eine Emulsion gebildet wird. Wenn die Emulsion Tropfen verteilt, schließen Sie die Spritzen und setzen Sie die Mischbewegung. </li><li> Verwenden Sie eine 1 ml Kunststoff-Spritze für die Immunisierung Prozess bis zur Auslieferung einer genauen Dosis von Antigen zu gewährleisten. Um die Antigen-Emulsion auf die Kunststoff-Spritze zu übertragen, ziehen Sie den Kolben und setzen Sie die leere Kunststoff-Spritze in die Öffnung des Drei-Wege-Hahn, wo die vorherige Glasspritze wie in 1,4 getrennt wurde. </li><li> Füllen Sie den Kunststoff-Spritze an den Rand, indem Sie den Kolben der Spritze Glas. Legen Sie den Kolben der Spritze zurück und Kunststoff zurückzudrängen überschüssige Emulsion bis zum Erreichen der 1,2 ml-Marke auf dem Kunststoff-Spritze. Dieses Manöver stellt sicher, dass keine Luftblase im Inneren der Kunststoff-Spritze ist gefangen. </li><li> Entfernen Sie die Kunststoff-Spritze aus dem Dreiwegehahn. Attach ein # 26-Gauge-Nadel auf die Kunststoff-Spritze. Drücken Sie den Kolben bis zur 1-ml-Marke, so dass die Emulsion jetzt füllt das Hohlraumvolumen der Nadel. </li></ol> 2. Die Immunisierung von Mäusen Donor Hinweis: Weibliche C57BL / 6 Mäuse sind in der Regel mit Antigen-Emulsion in vier Standorten in den Flanken injiziert, nach den Methoden ursprünglich von McFarlin der Gruppe 3 an den National Institutes of Health entwickelt. Für einen erfahrenen Untersucher kann eine Person führen Sie die ganze Aufgabe. Für Anfänger kann Hilfe erbeten, so dass eine Person die Maus hält und die andere Person tut der Injektion. Alternativ kann die Maus in Narkose für die Injektion. <ol><li> Halten Sie die Maustaste fest am Hals Haut und halten den Schwanz wieder zwischen den 4 und 5. Finger, so dass die Thorax und Abdomen leicht zugänglich sind. </li><li> Stecken Sie die Nadel der Spritze 1 ml Kunststoff an einem Standort in den Brustkorb leicht über dem rechten Achselhöhle (der moverwenden) und injizieren 0,05 ml des Antigens Emulsion subkutan. Eine kleine Ausbuchtung der weißlich CFA kann durch die blasse Haut zu sehen. Wiederholen Sie das gleiche für den Standort in den Brustkorb etwas oberhalb der linken Achselhöhle. </li><li> Lassen Sie den Schwanz und nehmen von dem rechten Fuß (der Maus) zu halten, drehen Sie ihn und halten ihn zwischen dem 4. und 5. Finger. Suchen Sie die Stelle knapp unterhalb der Rippe Fall in der rechten Flanke und injizieren 0,05 ml der Antigen-Emulsion. </li><li> Lassen Sie den rechten Fuß, Drehen Sie die Maus in die andere Richtung und halten Sie den linken Fuß (der Maus) zwischen dem 4. und 5. Finger. Suchen Sie die Stelle knapp unterhalb der Rippe Fall in der linken Flanke und injizieren 0,05 ml der Antigen-Emulsion. </li><li> Wechseln zu einem frischen Nadel nach der Injektion von 10 Mäusen, oder wenn die Nadel wird abgestumpft. </li></ol> 3. Isolierung von Lymphknotenzellen für Tissue Culture 7 bis 10 Tage nach der Immunisierung <ol><li> Sieben bis 10 Tage nach der Immunisierung, opfern die Mäuseund entfernen Sie die Lymphknoten. Die bevorzugte Methode der Euthanasie ist durch CO 2-Inhalation. Nach der Tötung der Maus lag auf dem Rücken auf einem Brett mit Dissektion die Gliedmaßen ausgestreckt und an der Tafel mit Stiften. Die Mäuse werden mit einem Spray aus 70% Ethanol angefeuchtet. </li><li> Einen Schlitz in der Haut in Längsrichtung in der Mitte von dem unteren Ende des Bauches bis unter das Kinn mit einer sterilen Schere und Pinzette. </li><li> Schneiden des Bauches Haut vor dem Bereich der Leiste auf jedem Bein. Ziehen Sie festzunageln und die Haut, das Aussetzen der inguinalen Lymphknoten. </li><li> Schneiden Sie die Haut entlang der Vordergliedmaßen (links und rechts), so dass die Haut wieder abgezogen werden kann und bis in die axillären Lymphknoten in der Nähe der Achselhöhle merken sich aussetzen. </li><li> Mit zwei Paar Zangen zusammenarbeiten, wegzuziehen das Bindegewebe bedeckt und um die inguinalen Lymphknoten. Wenn das Bindegewebe gelöscht werden, legen Sie ein Pinzette unter der Lymphknoten und ziehen weg vom Körper. Legen Sie dieLymphknoten in einer 35 mm Petrischale mit sterilem PBS gefüllt. </li><li> Ziehen Sie die Bindegewebe, die in beiden Achsel-Lymphknoten Betrieb von zwei Pinzetten. Isolieren Sie die Lymphknoten und legen Sie sie in der Petrischale. Seien Sie sehr vorsichtig, um nicht die Blutgefäße über den Bereich, wie Blutungen Identifizierung der Lymphknoten sehr schwierig macht zu brechen. </li><li> Nachdem alle Lymphknoten gesammelt werden, bewegen Sie die Petrischale auf einem Bio Kapuze. Break und necken die Lymphknoten auseinander mit den beiden Paaren von Zangen, Schleifen einen gegen den anderen. Alternativ können die Lymphknoten von mit dem flachen Ende des Kolbens von einer 3 ml Kunststoffspritze Drücken gegen die Lymphknoten auf dem Boden der Petrischale gebrochen werden. </li><li> Übergeben der neckte Lymphknoten Zellsuspension durch ein Nylonnetz der Membrane und Trümmer zu entfernen. </li><li> Make-up den Lymphknoten Zellsuspension auf 50 ml mit sterilem PBS. Zentrifugieren bei 1000 rpm für 10 Minuten. Das Pellet in Kulturmedium. Führen Sie eine tragfähige cell zu zählen und stellen Sie die Konzentration auf 4 x 10 6 Zellen / ml. UseRPMI 1640 mit 10% fötalem Kälberserum, 2 mM L-Glutamin, 1 mM MEM Natriumpyruvat, 0,1 mM MEM nicht-essentielle Aminosäuren, 100 U / ml Penicillin, 100 ug / ml Streptomycin, 10 mM Hepes-Puffer und 5 x ergänzt 10 -5 M 2-ME. Pre-warm die Kultur vor dem Resuspendieren der Zellen. </li><li> Kultur die Zellen in 24-well-Platten mit 2 ml pro Well (Endzellkonzentration 8 x 10 6 Zellen / Vertiefung). In Antigen zu jeder Vertiefung in einer Endkonzentration von 100 ug / ml. Legen Sie die Platte in einer Kultur 37 ° C Inkubator mit 5% CO 2. Inkubieren Zellen für 5 Tage. </li></ol> 4. Ernte Cultured Lymphknotenzellen 5 Tage nach Beginn der Kulturen <ol><li> Mischen Sie die Zellen in jeder Vertiefung durch Auf-und Abpipettieren mit einer Pasteur-Glaspipette oder einem kleinen Volumen Pipette. Ernten der Zellen in ein 50 ml Zentrifugenröhrchen. </li><li> Zentrifugation der Zellen bei 1000 UpM für 10 Minuten. Resuspend das Zellpellet in einem kleinen Volumen von PBS. </li><li> Zählen von Zellen und stellen Sie die Lebendzellkonzentration bis 2,5 x 10 8 Zellen / ml mit sterilem PBS. Zeichnen Sie die Zellen in eine Spritze mit einem # 26-Gauge-Nadel ausgestattet. </li><li> Legen Sie eine Wärmelampe über den Käfig des Empfängers Mäusen zu helfen, erweitern sich die Schwanzvene. </li><li> Mit einem Maus-Halter, erweitern den Schwanz der Maus durch den Schlitz in der Halterung. Ziehen Sie den Schwanz zu verlängern. Suchen Sie die Vene. </li><li> Spritzen 0,2 ml / Maus der Zellsuspension, die gleich 5 x 10 7 Zellen. </li></ol> 5. Antigen-Challenge von Empfängermäuse 20 Tage nach Zell Transfer und die Entwicklung von Krankheitssymptomen <ol><li> Challenge-Empfänger Mäuse keine Anzeichen von Krankheit mit dem Antigen. Die Verfahren sind die gleichen wie bei Abschnitt 2 &quot;Immunisierung von Spender Mäuse&quot;. </li><li> Beobachten Sie die Entwicklung der paralytischen Erkrankung von 7 bis 10 Tage nach antigene Herausforderung. <ol><li> Krankheit beginnt mit Schwäche in den Schwanz. Krankheit wird als 1 benotetwenn der Schwanz wird schlaff. Krankheit wird als 2 eingestuft, wenn die Maus in einer hinteren Extremität gelähmt ist. Krankheit wird 3 benotet, wenn beide Hinterbeine gelähmt sind und die Maus zieht beide Hinterbeine beim Crawlen nach vorn. Krankheit wird 4 benotet, wenn die Maus verliert Einsatz beider Vorderbeine, so dass die Maus völlig unbeweglich. Krankheit wird 5 benotet, wenn die Maus ist moribund und der Körper rollt sich zusammen. Der Tod wird als Krankheit Klasse 6 4 erzielte. </li></ol></li><li> MBP-spezifischen EAE in C57BL / 6 Mäusen nach diesem Protokoll induzierte einphasig ist. Die Mäuse können von der Krankheit genesen, aber nicht unterziehen spontane Rückfälle. </li></ol> 6. Repräsentative Ergebnisse Mäuse, die empfangen grundiert und in vitro-expandierten Spender Lymphknotenzellen entwickelten keine EAE Krankheitssymptome, was ihre Widerstandsfähigkeit gegen Krankheiten Induktion. Jedoch schwere Erkrankung nach Antigen-Challenge (Tabelle I), entwickelt, was die Fähigkeit der Antigen-Challengebei der Umkehrung der Resistenzmechanismus. Zwei Besonderheiten des antigenen Herausforderung beachten sind die Dosen des Antigens und die Kinetik der Herausforderung, Krankheit auszulösen. Sehr niedrige Dosis des Antigens erforderlich ist, wie in Tabelle III gezeigt. Überraschenderweise konnten Mäuse, die Spenderzellen erhielt ein Jahr zuvor noch eine schwere Krankheit, wenn mit dem Antigen (Tabelle IV) in Frage gestellt. Diese beiden Beobachtungen lassen aber auf die Einbeziehung von &quot;langlebigen&quot; T-Zellen bei der Aufrechterhaltung EAE Widerstand. Dieses Protokoll gilt auch für viele EAE resistent Mausstämmen 4. <img alt="Abbildung 1." src="/files/ftp_upload/3778/3778fig1.jpg" /> Abbildung 1. Flussdiagramm der experimentellen Design für die Induktion von EAE in renommierten beständig Mausstämmen. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td colspan="3"> Klinische EAE nach dem adoptiven Transfer </td><td colspan="3"><strong&gt; Klinische EAE nach antigene Herausforderung </td></tr><tr><td> Belasten </td><td> Antigen </td><td> Häufigkeit </td><td> Av. Krankheit Klasse (Bereich) </td><td> Av. Tag Einsetzen (Bereich) </td><td> Häufigkeit </td><td> Av. Krankheit Klasse (Bereich) </td><td> Av. Tag Einsetzen (Bereich) </td></tr><tr><td> SJL </td><td> MBP </td><td> 21/21 </td><td> 4.0 (3-5) </td><td> 8.0 (6-10) </td><td> ND </td><td> ND </td><td> ND </td></tr><tr><td> C57BL / 6 </td><td> MBP </td><td> 0/10 </td><td> - </td><td> - </td><td> 7/7 </td><td> 3.85 (3-5) </td><td> 9.28 (9-10) </td></tr><tr><td> Balb / c </td><td> MBP </td><td> 0/7 </td><td> - </td><td> - </td><td> 5/5 </td><td> 3.2 (3-4) </td><td> 7.0 (7) </td></tr><tr><td> C3H/HeJ </td&gt; <td> MBP </td><td> 0/7 </td><td> - </td><td> - </td><td> 4/4 </td><td> 3.2 (3-4) </td><td> 8.0 (8) </td></tr><tr><td> C57BL / 6 </td><td> MBP 60-80 </td><td> 0/4 </td><td> - </td><td> - </td><td> 4/4 </td><td> 2.75 (2-4) </td><td> 10.2 (9-11) </td></tr></tbody></table> Tabelle I. Induktion von MBP-vermittelte EAE in C57BL / 6 Mäusen. Adoptiven Transfer von grundiert und in vitro-expandierten Spenderzellen induzierte keine EAE in C57Bl / 6 Mäusen. Antigene Herausforderung Post Zell-Transfer gemacht, die Mäuse anfällig für Krankheiten Induktion. Av., Durchschnittlich. ND, nicht getan. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td colspan="3"> Klinische EAE nach antigene Herausforderung </td></tr><tr><td> Priming Antigen </td><td> Challenge-Antigen </td><td> Häufigkeit </td><td> Av. Krankheit Klasse (Bereich)</td><td> Av. Tag Einsetzen (Bereich) </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> CFA allein </td><td> 0/3 </td><td> - </td><td> - </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> OVA-CFA </td><td> 0/3 </td><td> - </td><td> - </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> MBP-CFA </td><td> 3/3 </td><td> 4.0 (4.0) </td><td> 7.7 (7-9) </td></tr></tbody></table> Tabelle II. Spezifität der Antigen-Herausforderung. Empfänger-Mäuse wurden mit der Priming-Antigen sowie andere irrelevante Antigene in Frage gestellt. Nur die Priming-Antigen schwere Erkrankung induziert. OVA: Hühner-Ovalbumin. Av., Durchschnittlich. <table border="1"><tbody&gt; <tr><td></td><td></td><td colspan="3"> Klinische EAE nach antigene Herausforderung </td></tr><tr><td> Challenge-Antigen-Dosen (ug / Maus) </td><td> Häufigkeit </td><td> Av. Krankheit Klasse (Bereich) </td><td> Av. Tag Einsetzen (Bereich) </td></tr><tr><td> 200 </td><td> 4/4 </td><td> 3.75 (3-4) </td><td> 8.25 (7-9) </td></tr><tr><td> 100 </td><td> 4/4 </td><td> 3.67 (3-4) </td><td> 7.5 (7-8) </td></tr><tr><td> 50 </td><td> 4/4 </td><td> 3.25 (3-4) </td><td> 8.25 (7-10) </td></tr><tr><td> 25 </td><td> 4/4 </td><td> 3.0 (3.0) </td><td> 8.25 (8-9) </td></tr><tr><td> 10 </td><td> 4/4 </td><td> 3.0 (3.0) </td><td> 8.76 (8-9) </td></tr><tr><td> 5 </td><td> 4/4 </td><td> 2.5 (2-3) </td><td> 9.75 (9-10) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 2/4 </td><td> 1.0 (1.0) </td><td&gt; 16 (14-18) </td></tr><tr><td> 0 </td><td> 0/4 </td><td> - </td><td> - </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tabelle III. Challenge-Antigen-Dosen für die Induktion der Krankheit erforderlich ist. Verschiedene Konzentrationen von MBP verwendet werden, um Empfängermäuse herausfordern wurden getestet. Av., Durchschnittlich. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td colspan="3"> Klinische EAE nach antigene Herausforderung </td></tr><tr><td> Challenge-Antigen </td><td> Tag der Challenge- </td><td> Häufigkeit </td><td> Av. Disease Klasse (Bereich) </td><td> Av. Tag des Beginns (Bereich) </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 5 </td><td> 3/4 </td><td> 1.33 (1-2) </td><td> 9.67 (9-10) </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 10 </td&gt; <td> 4/4 </td><td> 3.0 (3.0) </td><td> 8.25 (7-9) </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 15 </td><td> 4/4 </td><td> 3.75 (3-4) </td><td> 7.25 (7-8) </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 25 </td><td> 4/4 </td><td> 4.0 (4.0) </td><td> 8.0 (7-9) </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 35 </td><td> 4/4 </td><td> 3.5 (3-4) </td><td> 7.5 (7-8) </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 60 </td><td> 4/4 </td><td> 3.75 (3-4) </td><td> 9.0 (8-10) </td></tr><tr><td colspan="5"> -------------------------- </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 343 </td><td> 3/3 </td><td> 3.0 (3.0) </td><td> 10.33 (10-11) </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 445 </td><td> 3/3 </td><td> 3.0 (3.0) </td><td> 7.0 (7.0) </td></tr></tbody></table> Tabelle IV. Kinetik der Antigen-Herausforderung. Empfänger Mäuse wurden zu verschiedenen Zeitpunkten nach Punkt herausgefordert verabschiedenIVE-Zell-Transfer. Av., Durchschnittlich.

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</ol>

Keine finanzielle Angaben.

Studien von EAE in Mäusen verwenden oft die neuroantigens, Myelin-basisches Protein (MBP), Proteolipidprotein (PLP) oder von Myelin Oligodendrozyten Protein (MOG). Frühere Studien meist MBP verwendet. PLP stimuliert die starke und konsistente Antworten von SJL-Mäusen. In jüngerer Zeit ist der gemeinsame MOG Neuroantigen verwendet, weil B6-Mäuse anfälliger für Krankheiten Induktion mit diesem Antigen sind. Viele der gezielten Gen-Maus-Stämme sind auf der B6 genetischen Hintergrund. Interessanterweise sind B6-Mäuse anfäll...

<table border="1"><tbody><tr><td> Name des Reagenzes </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td><td> Kommentare </td></tr><tr><td> Meerschweinchen-Rückenmark </td><td> Rockland Immuno-Chemicals, Inc. Gilbertsville, PA 19525 <a href="http://www.rockland-inc.com" target="_blank">www.rockland-inc.com</a> </td><td> GP-T065 </td><td> eingefroren </td></tr><tr><td> Freundsches Adjuvans, komplett H37Ra </td><td> Difco Laboratories Detroit, MI </td><td> 231131 </td><td></td></tr><tr><td> Multifit-Austausch in der Lage Spritze </td><td> BD <a href="http://www.bd.com/us" target="_blank">www.bd.com / uns</a> </td><td> 512133 </td><td></td></tr><tr><td> RPMI 1640 </td><td> MediatechInc. Manassas, VA <a href="http://www.cellgro.com" target="_blank">www.cellgro.com</a> </td><td> 10-040-CM </td><td></td></tr><tr><td> OVA </td><td> Sigma-Aldrich <a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank">www.sigmaaldrich.com</a> </td><td> A5503 </td><td></td></tr><tr><td> Mäuse </td><td> Jackson Laboratory Bar Harbor, Maine </td><td> B6-Mäuse: 0000664 </td><td></td></tr></tbody></table>

die Überwindung der nicht mehr reagiert, in der experimentellen autoimmunen enzephalomyelitis (eae) beständig mausstämmen durch adoptiven transfer-und antigen-challenge

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

Experimentelle Autoimmun-Enzephalomyelitis (EAE) ist eine entzündliche Erkrankung des zentralen Nervensystems (CNS) und hat als Tiermodell für die Untersuchung des menschlichen demyelinisierende Krankheit, Multiple Sklerose (MS) verwendet. EAE wird durch pathologische Infiltration von mononukleären Zellen in das ZNS und durch klinische Manifestation der paralytischen Erkrankung gekennzeichnet. Ähnlich wie bei MS, ist EAE auch unter genetischer Kontrolle, dass bestimmte Mausstämme sind anfällig für Krankheiten Induktion während andere resistenter sind. Typischerweise C57BL / 6 (H-2 b) Mäusen, die mit Myelin basisches Protein immunisiert (MBP) scheitern zu Lähmungserscheinungen entwickeln. Diese Teilnahmslosigkeit ist sicherlich nicht aufgrund von Mängeln an der Antigen-Verarbeitung oder die Antigen-Präsentation von MBP, als eine experimentelle hier beschriebene Protokoll verwendet worden war, um schwere EAE in C57BL / 6 Mäusen sowie anderen renommierten beständig Mausstämmen zu induzieren. Darüber hinaus hatte enzephalitogener T-Zell-Klone aus C57BL / 6 und Balb / c-Mäusen reaktiv MBP Erfolgvoll isoliert und vermehrt. Das experimentelle Protokoll beinhaltet die Verwendung eines zellulären adoptiven Transfer, bei dem MBP-geprimten (200 ug / Maus) C57BL / 6 Donor Lymphknotenzellen isoliert und kultiviert für fünf Tage mit dem Antigen, um den Pool von MBP-spezifischen T-Zellen zeigen. Am Ende der Kulturzeit, werden 50 Millionen lebensfähige Zellen in naive syngene-empfänger über die Schwanzvene übertragen. Empfängermäuse so behandelt in der Regel nicht entwickeln EAE, so Bekräftigung ihrer Resistenz, und sie können normal bleiben auf unbestimmte Zeit. Zehn Tage nach der Zellübertragung werden Empfängermäuse mit komplettem Freund-Adjuvans (CFA) emulgiert-MBP in vier Stellen in den Flanken in Frage gestellt. Schwere EAE beginnt, sich in diesen Mäusen zehn bis vierzehn Tage nach der Herausforderung zu entwickeln. Die Ergebnisse zeigten, dass die Induktion von antigen spezifische Krankheit war, als Herausforderung, nicht mit irrelevanten Antigenen induzieren habe klinischen Anzeichen einer Krankheit. Bezeichnenderweise eine Titration des Antigen-Dosis verwendetfordern die Empfänger Mäusen zeigten, dass es sein könnte so niedrig wie 5 pg / Maus. Darüber hinaus zeigte die Untersuchung der Kinetik der Zeitpunkt der Antigen-Challenge, dass Herausforderung Krankheit zu induzieren wirksam war bereits nach 5 Tagen nach der Antigen-Challenge und solange über 445 Tage nach der Antigen-Challenge. Diese Daten weisen auf stark die Beteiligung eines &quot;langlebigen&quot; T-Zell-Population bei der Aufrechterhaltung Teilnahmslosigkeit. Die Beteiligung von regulatorischen T-Zellen (Tregs) in diesem System ist nicht definiert.

Bestimmte Maus-Stämme sind in der Lage, die Induktion der experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE) mit Myelin basisches Protein zu widerstehen. Hier beschriebene ist ein einfaches Protokoll, das die Immunisierung Teilnahmslosigkeit umkehrt und induziert paralytischen Erkrankung in mehreren typischen EAE resistent Maus Flecken.

Die Überwindung der nicht mehr reagiert, in der experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE) Beständig Mausstämmen durch adoptiven Transfer-und Antigen-Challenge

Die experimentelle autoimmune Enzephalomyelitis (EAE) ist eine entzündliche Erkrankung des zentralen Nervensystems (ZNS) und wird als Tiermodell für ... verwendet.

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, EAE konsistent und einfach in jeder Mauslinie zu induzieren, einschließlich solcher, die als resistent gegenüber der EAE-Induktion gelten. Dies wird erreicht, indem zunächst Spendermäuse mit myelinspezifischen Proteinen oder Peptidantigenen immunisiert werden, die in komplettem Freund-Adjuvans emulgiert sind. Zehn Tage später werden die Lymphknoten der Spendermäuse isoliert und die Lymphknotenzellen in vitro erneut stimuliert, indem sie vier bis fünf Tage lang mit demselben Antigen kultiviert werden.Anschließend werden die Zellen adoptiv in naive Empfängermäuse übertragen. Empfängliche Mausstämme entwickeln innerhalb von acht bis 14 Tagen EAE, um EAE in einem resistenten Stamm auszulösen. 14 Tage nach der adoptiven Übertragung wurden die Empfängermäuse dann mit Antigen in CFA immunisiert.Mithilfe dieser Methode kann EAE in resistenten Mausstämmen induziert werden. Der Hauptvorteil des adaptiven Transfer- und Challenge-Protokolls zur Induktion von EAE liegt darin, dass eine zuverlässige Erzeugung der Erkrankung ermöglicht wird. Selten beobachten wir eine klinische Erkrankung von weniger als 100 %.Wir können das Protokoll an die

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Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Dieses Video zeigt eine effiziente Homogenisierungstechnik zur Erzeugung einer Antigen-adjuvanten Emulsion zur Induktion einer experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE) in einem Mausmodell. Die Emulsion enthält ein Autoantigen – Myelin-Oligodendrozyten-Glykoprotein (MOG) – in der Wasserphase, umgeben von einer kontinuierlichen Ölphase, die aus einem inaktivierten pathogenen Bakterium besteht. Die Emulsion sorgt für eine anhaltende Freisetzung von Antigenen für eine verlängerte...

Herstellung einer Antigen-Adjuvans-Emulsion zur Induktion der autoimmunen Enzephalomyelitis

Das Video zeigt die Induktion einer experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis in einem Mausmodell durch Injektion einer Kombination aus Myelin-Oligodendrozyten-Glykoproteinen und inaktiviertem Mycobacterium tuberculosis. Das Modell ermöglicht es Forschenden, Krankheitsmechanismen zu untersuchen und therapeutische Interventionen zu testen.

Induktion einer experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis im Mausmodell

Dieses Video zeigt die Methode zur Induktion einer experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE) durch Injektion von Myelin-abgeleiteten Peptiden mit einem Adjuvans, um autoreaktive T-Zellen zu aktivieren, die ins Gehirn wandern. Pertussis-Toxin wird verabreicht, um die Durchlässigkeit der Blut-Hirn-Schranke zu erhöhen, so dass diese T-Zellen und andere Immunzellen in das Gehirn eindringen können. Diese Immunzellen verursachen eine Demyelinisierung, die zu einer gestörten...

Generierung einer experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis im Mausmodell

In diesem Video wird ein Mausmodell für Multiple Sklerose mit Hilfe der experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE) erstellt. Der Maus wird eine Emulsion injiziert, die ein neuronales Peptid und ein Adjuvans enthält, wodurch eine Immunantwort ausgelöst wird, die autoreaktive T-Zellen aktiviert. Darauf folgt eine Injektion von Pertussis-Toxin (PTX), um die Durchlässigkeit der Blut-Hirn-Schranke zu erhöhen, so dass die autoreaktiven T-Zellen das Gehirn infiltrieren können. Diese...

Experimentelle Autoimmun-Enzephalomyelitis (EAE) ist ein etabliertes Tiermodell für multiple Sklerose. C57BL / 6 Mäuse mit Myelin-Oligodendrozyten-Glykoprotein (MOG)-Peptid 35-55 (MOG 35-55) immunisiert, was zu einer aufsteigenden schlaffen Lähmung durch autoreaktive Immunzellen im zentralen Nervensystem verursacht. Protokolle für die Krankheitsinduktion und Überwachung diskutiert.

Myelin Oligodendrozyten Glykoprotein (MOG<sub&gt; 35-55</sub&gt;) Induzierten experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE) in C57BL / 6 Mäuse

Dieses Manuskript beschreibt die Methoden zur Induktion und Bewertung des experimentellen Modells der autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE), zusammen mit der Beurteilung der Immunzellverteilung und der mRNA-Zytokinspiegel in Lymphknoten, Milz, Blut und Rückenmark mittels Durchflusszytometrie bzw. quantitativer PCR in verschiedenen Krankheitsstadien.

Die Induktion der experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis bei Mäusen und die Auswertung des Krankheitsabhängige Verteilung von Immunzellen in verschiedenen Geweben

Hier präsentieren wir Ihnen Protokolle, um die Beeinträchtigung der neurovaskuläre Einheit während experimentelle autoimmune Enzephalomyelitis in vivo zu untersuchen. Wir gezielt auf Durchlässigkeit der Blut - Hirn-Schranke und Gelatinase Tätigkeit in Leukozyte Migration über die Glia Limitans ermitteln.

Beeinträchtigung der Endothelzellen und glialen Barrieren des Referats neurovaskuläre während experimentelle Autoimmune Enzephalomyelitis In Vivo Visualisierung

Das vorliegende Protokoll beschreibt die Induktion einer experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis in einem Mausmodell unter Verwendung von Myelin-Oligodendrozyten-Glykoprotein und die Überwachung des Krankheitsprozesses mit einem klinischen Scoring-System. Experimentelle autoimmune Enzephalomyelitis-bezogene Symptome werden mittels Mausfemur-Mikro-Computertomographie und Freilandtest analysiert, um den Krankheitsprozess umfassend zu beurteilen.

Induktion und diverse Bewertungsindikatoren der experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis

Um eine experimentelle autoimmune Enzephalomyelitis, ein Tiermodell für Multiple Sklerose, zu induzieren, werden Mäuse mit einer Wasser-in-Öl-Emulsion immunisiert, die ein Autoantigen und ein komplettes Freund-Adjuvans enthält. Während für die Herstellung dieser Emulsionen mehrere Protokolle existieren, wird hier ein schnelles, einfaches und standardisiertes Homogenisierungsprotokoll für die Emulsionsherstellung vorgestellt.

Eine schnelle, einfache und standardisierte Homogenisierungsmethode zur Herstellung von Antigen/Adjuvans-Emulsionen zur Induktion experimenteller autoimmuner Enzephalomyelitis

Die experimentelle autoimmune Enzephalomyelitis (EAE) ist ein Tiermodell für Multiple Sklerose (MS), das mit der menschlichen Krankheit eine robuste humorale Autoimmunreaktion teilt. In dieser Arbeit berichten wir über ein einfaches und flexibles ELISA-Protokoll zur Quantifizierung von Autoantikörpern im Serum von EAE-immunisierten Mäusen.

Quantifizierung autoreaktiver Antikörper in Mäusen nach experimenteller autoimmuner Enzephalomyelitis

Erfahren Sie, wie Sie experimentelle autoimmune Enzephalomyelitis (EAE) in resistenten Mausstämmen durch adoptiven Transfer und Antigen-Challenge induzieren. Diese Methode ermöglicht zuverlässige Krankheitsauslösung für Autoimmunitätsforschung.

Die Überwindung der nicht mehr reagiert, in der experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE) Beständig Mausstämmen durch adoptiven Transfer-und Antigen-Challenge (Video) | JoVE Journal

Die Überwindung der nicht mehr reagiert, in der experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE) Beständig Mausstämmen durch adoptiven Transfer-und Antigen-Challenge

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