Name: Glaswolle-Filter für die Konzentration auf Wasserbasis Viren-und Landwirtschaftsorganisation der Zoonose-Erreger (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-03T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 1 s
Description: Lernen Sie die Konstruktion kostengünstiger Glaswolle-Filter zur Konzentration wasserübertragbarer Krankheitserreger aus großen Wasservolumina. Diese Methode ermöglicht Forschern die effiziente Detektion von Viren, Bakterien und Protozoen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Wir danken William T. Eckert für das Video erzählt. Die Entwicklung der Glaswolle-Protokoll war ein Teil des Wisconsin Wasser und Gesundheit Testversion für Enteric Risks (WAHTER Study), die von US EPA STAR Stipendium R831630 finanziert. Alaska-Proben wurden von A. Reeves, A. Ramey, und B. Meixell mit finanzieller Unterstützung von USGS gesammelt. Jede Nutzung der Handels-, Produkt-oder Firmennamen ist nur zu beschreibenden Zwecken und stellt keine Billigung durch die US-Regierung.

1. Vorbereiten der Glaswolle <ol><li> Vor und nach der Herstellung jeder Charge von Filtern, sterilisieren Sie den Arbeitsbereich mit 10% Bleichmittel. </li><li> Handschuhe anziehen und Kleid. Sterilisieren Sie einen Eimer durch Autoklavieren bei 121 ° C und 15 psi für mindestens 20 Minuten. Legen Sie die Glaswolle in der sterilen Löffel. </li><li> Tränken Sie die Glaswolle mit Umkehrosmose-Wasser einweichen lassen und für 15 Minuten. </li><li> Lassen Sie das Umkehrosmose-Wasser aus dem Eimer. </li><li> Tränken Sie die Glaswolle mit 1 M HCl und einwirken lassen für 15 Minuten. </li><li> Lassen Sie das 1 M HCl aus dem Eimer. </li><li> Spülen Sie die Glaswolle mit Umkehrosmose-Wasser. </li><li> Gründlich mischen. </li><li> Überprüfen Sie den pH-Wert mit pH-Papier und wiederholen Sie die Umkehr-Osmose-Wasser zu spülen, bis ein neutraler pH-Wert erreicht wird. </li><li> Abgießen Spülwasser. </li><li> Tränken Sie die Glaswolle mit 1 M NaOH und einwirken lassen für 15 Minuten. </li><li> Lassen Sie das 1 M NaOH aus dem Eimer. </li><li> Riederholen die Umkehrosmose spülen bis ein neutraler pH erreicht wird. </li><li> Abgießen Spülwasser. </li><li> Statt einer Schaufel kann eine Glaswolle Scheibe konstruiert werden, was ähnlich im Design einer Glaspipette Scheibe (Abbildung 1). </li><li> Abdecken Glaswolle vollständig mit steriler Phosphat-gepufferter Kochsalzlösung (PBS) auf pH 6,8 eingestellt. </li><li> Einsatz vorbereitet Glaswolle sofort oder lagern bei 4 ° C. Es können bis zu zwei Wochen gelagert werden. Vor der Verwendung sicherstellen, dass der pH-neutral ist, da es im Laufe der Zeit steigen wird. Wenn der pH-Wert nicht neutral ist, mit sterilem Phosphat Nachspülen Kochsalzlösung (pH 6,8). </li></ol> 2. Montage des Glaswollefilter <ol><li> Bohren Sie ein 11/16 cm großes Loch in die PVC-Kappen und Leitungswasser Fäden so die männlichen Adapter Nylon Beschläge in die Kappen aufgeschraubt werden kann. Dieser Schritt ist nur für die erste Anordnung erforderlich. Danach kann die Kappen seit Jahren verwendet werden. Bewerben TeflonKlebeband auf den Armaturen Nylon Gewinde und den Kappen. </li><li> Verpacken Sie das PVC-Rohr mit kleinen Stücken von Glaswolle. Verwenden Sie einen Stempel aus Metall, wie ein Auto Motorventil, zu dichte Packung. Verpackung erfordert keine große Kraft. Packen Sie fest genug, so dass die Glaswolle an seinem Platz bleibt und Kanäle nicht zu bilden. Jedoch nicht so dicht packen kann kein Wasser durch den Filter fließen. Wenn verpackt entsprechend sollte eine Fließgeschwindigkeit von 4 bis 5 Liter pro Minute erreichbar sein, wenn der Filter an Wasserhähne mit Druck zwischen 40-60 psi angebracht. Für die Größe der PVC-Rohr in diesem Protokoll angegeben, gewaschen ca. 85 Gramm verpackt und Glaswolle wird pro Rohr verwendet. Tara die leere PVC-Rohr auf einer Top-Loading-Balance und Pack mit gewaschenen Glaswolle, bis das Rohr Masse 85 Gramm erhöht. </li><li> Legen Polypropylen-Netz in die PVC-Kappen mit Übergangsnippel Nylon Beleuchtungskörper befestigt sind. </li><li> Teflonband um die Gewindeabschnitte der PVC-Rohr. </li><li> Schrauben Sie auf PVC-Kappen auf dem PVC-pIPE-Label und ein Filter Ende der Zufluss und das andere Ende der Abfluss. Dies ist wichtig für die spätere Elutionsschritt. Welches Ende ist beschriftet Zufluss spielt keine Rolle. </li><li> Push 60 ml steriler Phosphat-gepufferter Saline (pH = 6,8) in den Filter unter Verwendung eines Katheters gekippt Spritze. Überschüssiges herauskommen wird gegenüberliegenden Ende. </li><li> Wrap Enden fest mit Parafilm zu vermeiden undicht. Filter können bis zu 30 Tage gelagert werden bei 4 ° C </li></ol> 3. Sampling <ol><li> Sterilisieren Schlauch für stichprobenartige Überprüfungen durch Eintauchen oder Umluftbetrieb Artikel für 30 Minuten in 0,525% NaClO (dh eine 10% ige Lösung von Standard Haushaltsbleiche) verwendet. Folgen dies durch Ablassen des Natriumhypochloritlösung und neutralisiert mit 0,05% Natriumthiosulfat, durch Zugabe von 25 ml einer 2% Lager wasserfreiem Natriumthiosulfat-Lösung auf einen Liter Wasser Umkehrosmose. </li><li> Für die Probe Wasser mit einem pH größer als 7,5, der pH-Wert zwischen 6,5 und 7,0 mit HCl. HCl-Konzentration kann im Bereich von 0,25M bis 1 M Vier Liter 0,5 M HCl ist in der Regel ausreichend für zwei 800-Liter-Proben, je nach Umgebungstemperatur des Wassers pH-Wert und Pufferkapazität. Inject HCI bei der Probenahme mit Hilfe einer Schlauchpumpe oder Venturi (Abbildung 2). Stellen Sie die Drehzahl der Pumpe oder Venturi-Öffnung, um den Ziel-pH zu erreichen. Der pH am Entnahmeleitung Auslaß über ein Feld pH-Meter. </li><li> Verwenden Sie einen Vorfilter, wenn die Glaswollefilter Clogs von Wasser mit hoher Trübung. (Spezifikationen für den Vorfilter und sein Gehäuse sind in der Materialliste online.) Da Krankheitserreger können Teilchen, die durch den Vorfilter gefangen befestigt werden es zusammen mit dem Glaswollefilter müssen eluiert werden (siehe unten). </li><li> Stellen Sie den Durchfluss auf zwischen 2 und 4 Liter / Minute. Typisches Proben Volumen liegen zwischen 200 und 1.500 Liter. </li><li> Trennen Sie die Glaswolle-Filter und Speicher in einem Kunststoff-sterilen Beutel bei 4 ° C für bis zu 48 Stunden. </li></ol> 4. Elution <ol><li> Bringen Sie den Filter aus Glaswolle mit einem Ringstehen mit der Probe Zufluss Ende nach unten in eine Polypropylen-Flasche. Eluiert entgegengesetzt zur Richtung des Probenstroms. </li><li> Push 80 ml sterile 3% Fleischextrakt in 0,05 M Glycin mit einem pH von 9,5 in den Filter. </li><li> Warten Sie 15 Minuten. </li><li> Push weitere 80 mL sterilem 3% Fleischextrakt in 0,05 M Glycin mit einem pH von 9,5 in den Filter. </li><li> Schieben Sie den Filter gründlich Luft, bis Schaum kommt aus dem Filtereingang. </li><li> Passen Sie die Eluat pH-Wert auf zwischen 7,0 und 7,5 mit 1 M HCl. </li><li> Shop Eluat bei 4 ° C für bis zu 24 Stunden oder bei -20 ° C für längere Zeiträume. </li><li> Eluieren den Vorfilter, wenn eine solche verwendet wird. Schrauben Sie die Oberseite des Gehäuses Patrone und gießen Sie überschüssiges Wasser im Inneren des Gehäuses, während Sie den Vorfilter an Ort und Stelle mit sterilen Handschuhen. </li><li> Entfernen Sie den Vorfilter aus dem Gehäuse Patrone und schieben Sie sie in einen 15 &quot;x 6&quot; Zip-Lock Beutel. </li><li> Gießen 200 ml sterile 3% Fleischextrakt in 0,05 M glycine mit einem pH von 9,5 in den Beutel und abzudichten fest mit dem Zip-Verschluss. </li><li> Kehren Sie die Sackware Vorfilter mehrere Male, um sicherzustellen, wird die gesamte Oberfläche in Berührung kommt, mit der Rindfleisch-Extrakt. </li><li> Warten Sie 15 Minuten, gelegentlich invertierenden und Massieren der Sackware Vorfilter. </li><li> Öffnen Sie die Zip-Lock. Grip die Tasche um den Vorfilter dicht zu verdrängen, wie viel Rindfleisch-Extrakt wie möglich und ziehen Sie den Vorfilter mit sterilen Handschuhen,. </li><li> Gießen Sie die Rindfleischextrakt Eluat in einem Polypropylen-Flasche. </li><li> Stellen Sie die Eluat-Wert zwischen 7,0 und 7,5 mit 1 M HCl. </li><li> Shop Eluat bei 4 ° C für bis zu 24 Stunden oder bei -20 ° C für längere Zeiträume. Der Vorfilter Eluat kann separat für Krankheitserreger untersucht werden oder in Kombination mit dem Glaswollefilter Eluat. </li></ol> 5. Repräsentative Ergebnisse <table border="1"><tbody><tr><td> Erreger </td><td> Wassertrübung Level (NTU) ein </td><td> Erzielte beimpften / L b, c, d </td><td> % Wiederfindung ± 1 SD </td><td> Anzahl Unabhängige Studien </td></tr><tr><td> Enterovirus Poliovirus Sabin-III </td><td> 0,5 </td><td> 500 </td><td> 81% ± 11 </td><td> 7 </td></tr><tr><td> EnteroVirus-Poliovirus Sabin III </td><td> 0,5 </td><td> 5000 </td><td> 67% ± 12 </td><td> 8 </td></tr><tr><td> Enterovirus Poliovirus Sabin-III </td><td> 215 </td><td> 500 </td><td> 59% ± 32 </td><td> 7 </td></tr><tr><td> Enterovirus Poliovirus Sabin-III </td><td> 215 </td><td> 5000 </td><td> 38% ± 22 </td><td> 6 </td></tr><tr><td> Enterovirus Poliovirus Sabin-III </td><td> 447 </td><td> 500 </td><td> 56% ± 18 </td><td> 8 </td></tr><tr><td> Enterovirus Poliovirus Sabin-III </td><td> 447 </td><td> 5000 </td><td> 63% ± 37 </td><td> 8 </td></tr><tr><td> Cryptosporidium parvum </td><td> 0,5 </td><td> 5 </td><td> 38% ± 14 </td><td> 7 </td></tr><tr><td> Cryptosporidium parvum </td><td> 0,5 </td><td> 50 </td><td> 53% ± 19 </td><td> 8 </td></tr><tr><td> Weinenptosporidium parvum </td><td> 215 </td><td> 5 </td><td> 40% ± 16 </td><td> 7 </td></tr><tr><td> Cryptosporidium parvum </td><td> 215 </td><td> 50 </td><td> 30% ± 6 </td><td> 6 </td></tr><tr><td> Cryptosporidium parvum </td><td> 447 </td><td> 5 </td><td> 33% ± 13 </td><td> 8 </td></tr><tr><td> Cryptosporidium parvum </td><td> 447 </td><td> 50 </td><td> 28% ± 11 </td><td> 8 </td></tr><tr><td> Salmonella enterica </td><td> 0,5 </td><td> 5 </td><td> 29% ± 24 </td><td> 7 </td></tr><tr><td> Salmonella enterica </td><td> 0,5 </td><td> 500 </td><td> 56% ± 16 </td><td> 8 </td></tr><tr><td> Salmonella enterica </td><td> 215 </td><td> 5 </td><td> 32% ± 24 </td><td> 7 </td></tr><tr><td> Salmonella enterica </td&gt; <td> 215 </td><td> 500 </td><td> 34% ± 11 </td><td> 6 </td></tr><tr><td> Salmonella enterica </td><td> 447 </td><td> 5 </td><td> 34% ± 18 </td><td> 8 </td></tr><tr><td> Salmonella enterica </td><td> 447 </td><td> 500 </td><td> 31% ± 24 </td><td> 8 </td></tr></tbody></table><ol class="lalpha"><li> Nephelometric Turbidity Unit </li><li> Enteroviren durch qPCR als genomische Kopien / L aufgezählt </li><li> C. parvum Oozysten durch Immunfluoreszenz als aufgezählt </li><li> S. enterica von Kultur als Kolonie-bildenden-Einheiten aufgezählt </li></ol> Tabelle 1. Glaswolle Konzentration mit variierenden Wasser Trübungen und Erreger Dichten. <table border="1"><tbody><tr><td> Erreger </td><td> Wasserprobe Location </td><td> Menge Gesetzte / L ein </td><td> Reco%<html> sehr </td></tr><tr><td> Vogelgrippe H5N2 </td><td> Sundi Lake, Anchorage Borough </td><td> 2500 </td><td> 42,9% </td></tr><tr><td> Vogelgrippe H5N2 </td><td> Minto Flats, Fairbanks North Star Borough </td><td> 2500 </td><td> 36,7% </td></tr><tr><td> Vogelgrippe H5N2 </td><td> Portage Valley, Anchorage Borough </td><td> 2500 </td><td> 7,8% </td></tr><tr><td> Vogelgrippe H5N2 </td><td> Potter Marsh, Anchorage Borough </td><td> 2500 </td><td> 41,5% </td></tr><tr><td> Vogelgrippe H5N2 </td><td> Willow Lake, Yukon-Koyukuk Borough </td><td> 2500 </td><td> 15,5% </td></tr></tbody></table><ol class="lalpha"><li> Gemessen an der qPCR als genomische Kopien / L </li></ol> Tabelle 2. Glaswolle Konzentration des Vogelgrippevirus mit Wasser aus fünf Standorten in Alaska. les/ftp_upload/3930/3930fig1.jpg &quot;alt =&quot; Bild 1 &quot;/&gt; Abbildung 1. Schematische Darstellung der Glaswolle Unterlegscheibe. Das kann statt einem Eimer verwendet werden, das spart Zeit von Spülen. Das Konzept ist ähnlich einer Glaspipette Unterlegscheibe. <img src="/files/ftp_upload/3930/3930fig2.jpg" alt="2" /> Abbildung 2. Glaswolle Filtration mit Säure Injektion durch Schlauchpumpe. Beachten Sie die &quot;T&quot;-Anschluss, wo die Pumpe-Schlauch führt Säure in die Probe Linie zwischen dem Wasserhahn und Glaswolle-Filter. pH-Einstellung ist nur erforderlich, wenn das Wasser abgetastet hat einen pH-Wert&gt; 7,5. Glaswolle-Filter sind effektiver bei der Konzentration Krankheitserreger aus dem Wasser mit einer breiten Palette von Trübung und Krankheitserreger Ebenen Dichten (Tabelle 1). Um dies zu testen, wurde 20 Liter entchlortes Leitungswasser mit getrocknetem Schlamm Lehmboden (0, 1,27, oder 2,75 g / L), um den gewünschten Grad der Trübung zu erreichen gemischt und dann ausgesät mit Krankheitserregern in verschiedenen Dichten. Das Wasserwurde durch ein Filter geleitet Glaswolle, wurden die konzentrierten Erreger im Eluat aufgezählt, und dieser Wert der Zähler in die Rückbildung in Prozent berechnet. Die Menge der Krankheitserreger in das Wasser, dh der Nenner der Berechnung der Wiederfindungsrate Prozent, ausgesät wurde von der ersten Aussaat der Erreger in eine negative Eluat dann das Aufzählen der Erreger bestimmt. Die negative Eluat wurde durch Durchleiten eines 20-Liter-geimpfte Probe durch einen Filter und Eluieren hergestellt. Die Quantifizierung der Erreger ausgesät in einer negativen Eluat vermeidet Unterschiede in der Erreger-Enumeration, die aus Matrix Unterschiede durch die Glaswolle-Filter erstellt führen könnte. Die Bedeutung dieser Schritt bei der Quantifizierung von Pathogenen qPCR wird in Lambertini et al. 3. Ein 20-Liter-negativen Kontrollprobe wurde über Glaswolle Filtration zu bestimmen, gab es keine native Krankheitserreger vorhanden, die die prozentuale Ausbeute Berechnung durcheinander bringen könnten konzentriert. A 10 um nominale Porengröße Vorfilter wso verwendet werden, wenn die Trübung Ebene war ≥ 215 NTU. Poliovirus wurde mittels real-time qPCR mit dem sekundären Konzentrations-und Nukleinsäure-Extraktion Verfahren und Primer und die Sonde in Lambertini et al. 3 quantifiziert. Cryptosporidium parvum wurde in der letzten konzentrierte Probevolumen (FCSV) von der sekundären Konzentration Verfahren für die Poliovirus erstellt quantifiziert . Oozysten wurden visualisiert durch Immunfluoreszenz (MERIFLUOR Cryptosporidium Giardia &amp; Detection Kit, Meridian Life Science, Inc., Cincinnati, OH). Salmonella enterica in der FCSV wurde durch das Ausplattieren auf XLD Agar quantifiziert (Remel, Lenexa, KS) und Zählen Kolonie-bildenden- Einheiten. Glaswolle-Filter sind effektiver bei der Konzentration des aviären Influenzaviren (Tabelle 2). Geringe Pathogenität Vogelgrippevirus (H5N2) wurde in Wasser von mehreren Standorten in Alaska ausgesät und die prozentuale Ausbeute berechnet wie beschrieben AbovE. Sekundäre Konzentration und Nukleinsäure-Verfahren wie für Poliovirus durchgeführt; das Virus wurde durch qPCR quantifiziert unter Verwendung der Primer und die Sonde bei Spackman et al 4 beschrieben.

<ol><li>US Environmental Protection Agency. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+1623%3A+Cryptosporidium+and+Giardia+in+Water+by+Filtration%2FIMS%2FFA%5BTitle%5D)+AND+%22EPA+815-R-05-002%22%5BJournal%5D)">Method 1623: Cryptosporidium and Giardia in Water by Filtration/IMS/FA.</a> EPA 815-R-05-002. , (2012).</li>
<li>Cashdollar, J. L., Dahling, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+a+method+to+re-use+electropositive+cartridge+filters+for+concentrating+viruses+from+tap+and+river+water%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Evaluation of a method to re-use electropositive cartridge filters for concentrating viruses from tap and river water.</a> J. Virol. Methods. 132, 13-17 (2006).</li>
<li>Lambertini, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concentration+of+enteroviruses%2C+adenoviruses%2C+and+noroviruses+from+drinking+water+by+use+of+glass+wool+filters%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Environ.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Concentration of enteroviruses, adenoviruses, and noroviruses from drinking water by use of glass wool filters.</a> Appl. Environ. Microbiol. 74, 2990-2996 (2008).</li>
<li>Spackman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+real-time+reverse+transcription+PCR+assay+for+Type+A+influenza+virus+and+the+avian+H5+and+H7+hemagglutinin+subtypes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Development of a real-time reverse transcription PCR assay for Type A influenza virus and the avian H5 and H7 hemagglutinin subtypes.</a> J. Clin. Microbiol. 40, 3256-3260 (2002).</li>
<li>Environment Agency. Optimisation of a new method for detection of viruses in groundwater. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Report+No.+NC%2F99%2F40%22">Report No. NC/99/40</a>. , Environment Agency, National Groundwater and Contaminated Land Centre. West Midlands, United Kingdom. (2000).</li>
<li>Vilaginés, P., Sarrette, B., Husson, G., Vilaginés, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glass+wool+for+virus+concentration+at+ambient+water+pH+level%5BTitle%5D)+AND+%22Water+Sci.+Technol%22%5BJournal%5D)">Glass wool for virus concentration at ambient water pH level.</a> Water Sci. Technol. 27, 299-306 (1993).</li>
<li>Vivier, J. C., Ehlers, M. M., Grabow, W. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+enteroviruses+in+treated+drinking+water%5BTitle%5D)+AND+%22Water+Res%22%5BJournal%5D)">Detection of enteroviruses in treated drinking water.</a> Water Res. 38, 2699-2705 (2004).</li>
<li>Powell, K. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPowell%2C+KL+%22Enteric+virus+detection+in+groundwater+using+a+glass+wool+trap.+In%3A+Groundwater%3A+Past+Achievements+and+Future+Challenges%22">Enteric virus detection in groundwater using a glass wool trap. In: Groundwater: Past Achievements and Future Challenges</a>. Sililo, O. , Balkema, Rotterdam. 813-816 (2000).</li>
<li>Hunt, R. J., Borchardt, M. A., Richards, K. D., Spencer, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+sewer+source+contamination+of+drinking+water+wells+using+tracers+and+human+enteric+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Sci.+Technol%22%5BJournal%5D)">Assessment of sewer source contamination of drinking water wells using tracers and human enteric viruses.</a> Environ. Sci. Technol. 44, 7956-7963 (2010).</li>
<li>van Heerden, J., Ehlers, M. M., Heim, A., Grabow, W. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence%2C+quantification+and+typing+of+adenoviruses+detected+in+river+and+treated+drinking+water+in+South+Africa%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Prevalence, quantification and typing of adenoviruses detected in river and treated drinking water in South Africa.</a> J. Appl. Microbiol. 99, 234-242 (2005).</li>
<li>Vilaginés, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Round+robin+investigation+of+glass+wool+method+for+poliovirus+recovery+from+drinking+water+and+sea+water%5BTitle%5D)+AND+%22Water+Sci.+Technol%22%5BJournal%5D)">Round robin investigation of glass wool method for poliovirus recovery from drinking water and sea water.</a> Water Sci. Technol. 35, 445-449 (1997).</li>
<li>Gantzer, C., Senouci, S., Maul, A., Levi, Y., Schwartzbrod, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enterovirus+genomes+in+wastewater%3A+concentration+on+glass+wool+and+glass+powder+and+detection+by+RT-PCR%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Enterovirus genomes in wastewater: concentration on glass wool and glass powder and detection by RT-PCR.</a> J. Virol. Methods. 65, 265-271 (1997).</li>
<li>Pathogen losses in surface water runoff from dairy manure applied to corn fields. Borchardt, M. A., Jokela, W. E., Spencer, S. K. American Society for Microbiology General Meeting, New Orleans, LA, , (2011).</li>
<li>Deboosere, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+validation+of+a+concentration+method+for+the+detection+of+influenza+A+viruses+from+large+volumes+of+surface+water%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Environ.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Development and validation of a concentration method for the detection of influenza A viruses from large volumes of surface water.</a> Appl. Environ. Microbiol. 77, 3802-3808 (2011).</li>
<li>Lambertini, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Virus+contamination+from+operation+and+maintenance+practices+in+small+drinking+water+distribution+systems%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Water+Health%22%5BJournal%5D)">Virus contamination from operation and maintenance practices in small drinking water distribution systems.</a> J. Water Health. 9, 799-812 (2011).</li>
</ol>

Keine Interessenkonflikte erklärt.

Glaswolle-Filter wurden von verschiedenen Forscherteams 3,5,6 benutzt worden, um menschliche enteralen Viren aus einer Vielzahl von Wasser-Quellen wie fertig Trinkwasser 7, 8,9 Grundwasser, Oberflächenwasser 10, Meerwasser 11, 12 Abwasser konzentrieren, und 13 landwirtschaftliche Stichwahl. Hier berichten wir über die Filter sind auch wirksam bei der Konzentration des Vogelgrippevirus sowie die bakterielle und Protozoen Erreger Salmonella enterica (Serovar ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Name des Reagenz oder das Element </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td></tr><tr><td> Salzsäure </td><td> <a href="http://www.fishersci.com" target="_blank">Fisher Scientific</a> </td><td> A144-500 </td></tr><tr><td height="24"> Natriumhydroxid </td><td> <a href="http://www.fishersci.com" target="_blank">Fisher Scientific</a> </td><td> BP359-212 </td></tr><tr><td> Phosphate Buffered Saline Kochsalz Kaliumphosphat-zweibasischen Kaliumphosphat-einbasischen </td><td> <a href="http://www.fishersci.com" target="_blank">Fisher Scientific</a> <a href="http://www.fishersci.com" target="_blank">Fisher Scientific</a> <a href="http://www.fishersci.com" target="_blank">Fisher Scientific</a> </td><td><html> BP358-212 BP363-500 BP362-500 </td></tr><tr><td> Natriumhypochlorit dh Haushaltsbleiche </td><td> <a href="http://www.clorox.com" target="_blank">Die Clorox Co.</a> </td><td></td></tr><tr><td> Natriumthiosulfat, wasserfrei </td><td> <a href="http://www.fishersci.com" target="_blank">Fisher Scientific</a> </td><td> S 475-212 </td></tr><tr><td> Rindfleisch-Extrakt, getrockneter </td><td> <a href="http://www.bd.com" target="_blank">Becton, Dickinson and Company</a> </td><td> 211520 </td></tr><tr><td> Glycine </td><td> <a href="http://www.fishersci.com" target="_blank">Fisher Scientific</a> </td><td> G46-500 </td></tr><tr><td> Geölte Sodocalcic Glaswolle Oder R-11 unfaced Glasfaserisolierung </td><td> <a href="http://www.isover.com" target="_blank">Isover</a> <html> ref = &quot;http://www.jm.com&quot; target = &quot;_blank&quot;&gt; Johns Manville </td><td> Bourre 725 QN </td></tr><tr><td> Polypropylen-Netz </td><td> <a href="http://www.industrialnetting.com" target="_blank">Industrie-Netting</a> </td><td> xN4510 </td></tr><tr><td> 2 &quot;x4&quot; Sch 80 PVC Gewinderohr Nippel </td><td> <a href="http://www.grainger.com" target="_blank">Grainger</a> </td><td> 6MW35 </td></tr><tr><td> 2 &quot;Sch 40 PVC-Kappe </td><td> <a href="http://www.grainger.com" target="_blank">Grainger</a> </td><td> 5WDW3 </td></tr><tr><td> Männlich Adapter Nylon passend (1/2 &quot;x1 / 2&quot;) </td><td> <a href="http://www.usplastic.com" target="_blank">US Plastic Corp</a> </td><td> 62178 </td></tr><tr><td> Flaschen für Eluat-1-Liter- </td><td> <a href="http://www.fishersci.com" target="_blank">Fisher Scientific</a> </td><td> 03 bis 313-4F </td></tr><tr><td> 60 ml Spritze </td><td>&quot;Http://www.fishersci.com&quot; target = &quot;_blank&quot;&gt; Fisher Scientific </td><td> NC9661991 </td></tr><tr><td> pH-Streifen </td><td> <a href="http://www.whatman.com" target="_blank">Whatman</a> </td><td> 2614 991 </td></tr><tr><td> Vorfilter, Polypropylen, 10-Zoll-Patrone, 10 um </td><td> McMaster-Carr </td><td> 4411K75 </td></tr><tr><td> Vorfiltergehäuse </td><td> Cole-Parmer </td><td> S-29.820-10 </td></tr></tbody></table>

glaswolle-filter für die konzentration auf wasserbasis viren-und landwirtschaftsorganisation der zoonose-erreger

Glass Wool Filters for Concentrating Waterborne Viruses and Agricultural Zoonotic Pathogens

Der erste wichtige Schritt bei der Bewertung Krankheitserreger im Verdacht verunreinigtes Wasser ist die Konzentration. Konzentration Methoden sind in der Regel spezifisch für einen bestimmten Erreger Gruppe, zum Beispiel US-Umweltbehörde EPA-Methode 1623 für Giardia und Cryptosporidium 1, die mehrere Methoden benötigt werden, wenn die Probenahme-Programm zielt auf mehr als einem Erreger-Gruppe bedeutet. Ein weiterer Nachteil der derzeitigen Methoden ist die Ausrüstung kann kompliziert und teuer sein, zum Beispiel die VIRADEL-Methode mit dem 1MDS Patronenfilter zum Konzentrieren Viren 2. In diesem Artikel beschreiben wir, wie Glaswolle-Filter für die Konzentration auf Wasserbasis Krankheitserreger zu konstruieren. Nach Filterelution, ist das Konzentrat zugänglich einer zweiten Konzentration Schritt, wie Zentrifugation, durch Pathogen Nachweis und zur Zählung von kulturellen oder molekularen Methoden gefolgt. Die Filter haben mehrere Vorteile. Die Konstruktion ist einfach und die Filter kann ein gebaut werdenny Größe für die Erfüllung spezifischer Anforderungen Probenahme. Die Filterteile sind kostengünstig, was es ermöglicht, eine große Anzahl von Proben ohne gravierende Auswirkungen auf ein Projektbudget zu sammeln. Große Volumina (einige 100 bis 1000 s L) können je nach der Höhe des Verstopfens von Probe Trübung konzentriert werden. Die Filter sind sehr portabel und mit minimaler Ausrüstung, wie eine Pumpe und Durchflussmesser, können sie im Bereich für die Probenahme fertigen Trinkwasser, Oberflächenwasser, Grundwasser und landwirtschaftliche Stichwahl durchgeführt werden. Schließlich ist Glaswolle effektive Filtration zum Konzentrieren einer Vielzahl von Erreger-Typen so nur eine Methode erforderlich ist. Hier berichten wir über Filter Wirksamkeit bei der Konzentration des wässrigen menschlichen Enteroviren, S almonella enterica, Cryptosporidium parvum und Vogelgrippe-Virus.

Glaswolle-Filter wurden verwendet, um auf Wasserbasis Viren durch eine Reihe von Forschergruppen auf der ganzen Welt zu konzentrieren. Hier zeigen wir einen einfachen Ansatz für den Bau von Glaswolle-Filter und demonstrieren die Filter sind auch wirksam bei der Konzentration des wässrigen virale, bakterielle und Protozoen Pathogene.

Glaswolle-Filter für die Konzentration auf Wasserbasis Viren-und Landwirtschaftsorganisation der Zoonose-Erreger

Der entscheidende erste Schritt bei der Bewertung der Pathogenkonzentration in vermutlich kontaminiertem Wasser ist die Aufkonzentrierung. Aufkonzentrierungsmethoden sind in der Regel spezifisch für einen ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, einen kostengünstigen und wirksamen Filter zur Anreicherung einer Vielzahl wasserübertragbarer Krankheitserreger aus großen Wassermengen herzustellen. Der Filter wird hergestellt, indem man zunächst Glaswolle spült, sie sowohl mit einer Säure als auch mit einer Base wäscht und die Wolle danach erneut bis zu einem neutralen pH-Wert spült. Anschließend wird die Glaswolle in phosphatgepufferter Kochsalzlösung gespült.Im nächsten Schritt wird die Glaswolle in ein PVC-Rohr gepackt, um den Glaswollefilter zu bilden. Nach der Verwendung des Filters zur Wasserprobenahme wird eine Elutionsstufe durchgeführt. Die Probe kann anschließend gelagert, weiter angereichert oder auf Krankheitserreger mittels kultureller oder molekularer Methoden analysiert werden.Wasserübertragene Krankheiten stellen eine erhebliche Gefahr für die öffentliche Gesundheit dar. Weltweit kann die Übertragung von Krankheiten durch Trinkwasser und Erholungsaktivitäten im Wasser erfolgen. Ein Ansatz zur Bewertung der hygienischen Qualität von Wasser besteht darin, es direkt auf krankheitserregende Krankheitserreger zu untersuchen.Es gibt mehrere Vorteile bei der Verwe

glass-wool-filters-for-concentrating-waterborne-viruses-agricultural

Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Die Fluktuationsrate von Viren in Meer-und Süßwasser-Systeme können durch eine Reduktion und Wiederholung Technik geschätzt werden. Die Daten können die Forscher Raten von Virus-vermittelte mikrobielle Sterblichkeit in aquatischen Systemen zu schließen.

Die Schätzung Virus Produktionsraten in aquatischen Systemen

Dieses Protokoll beschreibt die Verwendung einer Tangentialströmungs-Hohlfaser-Ultrafiltration Probenkonzentration und eine Wärme Dissoziation als alternative Schritte zum Nachweis von...

Eine Änderung, die EPA-Methode 1623 Tangential Flow Hohlfaser-Ultrafiltration und Wärme Dissoziationsstufen nutzt, um auf Wasserbasis Detect<em&gt; Cryptosporidium</em&gt; Und<em&gt; Giardia spp.</em

Es wurde ein Ansatz entwickelt, um optimale Viruskonzentrationsbedingungen für Wasserproben mit kleinem Volumen unter Verwendung von Spikes des humanen Adenovirus zu identifizieren. Die hier beschriebenen Techniken werden verwendet, um Konzentrationsparameter für andere virale Ziele zu identifizieren, und werden auf groß angelegte Experimente zur Viruskonzentration angewendet.

Ein kleines Volumen Verfahren für Viral Konzentration von Wasser

EPA-Methode 1615 verwendet einen elektropositiven Filter, um Enteroviren und Noroviren in Umwelt- und Trinkwasser zu konzentrieren. Dieses Manuskript beschreibt das Verfahren zur Entnahme von Proben für Analysen nach Methode 1615.

EPA-Methode 1615 Messung der Enterovirus und Norovirus Vorkommen in Wasser von Kultur und RT-qPCR. I. Sammlung von Virenproben

Ein Anion Austausch Harz-basierte Methode, angepasst an Flüssigkeit, die Impingement-basierte Bioaerosol Probenahme von Viren nachgewiesen wird. Kombination mit nachgeschalteter molekulare Erkennung ermöglicht die Methode facile und empfindlichen Nachweis von Viren von bioaerosolen.

Erkennung von Viren von Bioaerosolen Anion Austausch Harz

Bakterien sezernieren nanometergroße extrazelluläre Vesikel (EVs), die bioaktive biologische Moleküle tragen. Die EV-Forschung konzentriert sich auf das Verständnis ihrer Biogenese, ihrer Rolle bei Mikroben-Mikroben- und Wirt-Mikroben-Interaktionen und Krankheiten sowie ihrer potenziellen therapeutischen Anwendungen. Ein Workflow für die skalierbare Isolierung von EVs aus verschiedenen Bakterien wird vorgestellt, um die Standardisierung der EV-Forschung zu erleichtern.

Skalierbare Isolierung und Reinigung extrazellulärer Vesikel aus Escherichia coli und anderen Bakterien

Zahlreiche neuartige virusähnliche Sequenzen wurden aufgrund des umfangreichen Einsatzes von Sequenzierungstechnologien in Stechmücken gefunden. Wir stellen ein effektives Verfahren zur Isolierung und Amplifikation von Viren unter Verwendung von Wirbeltier- und Mückenzelllinien zur Verfügung, das als Grundlage für zukünftige Studien zu Stechmücken-assoziierten Viren, einschließlich mückenübertragener und mückenspezifischer Viren, dienen könnte.

Mückenassoziierte Virusisolierung aus im Feld gesammelten Stechmücken

Die Viruskonzentration aus Wasser- und Abwasserproben aus der Umwelt ist eine anspruchsvolle Aufgabe, die vor allem zur Identifizierung und Quantifizierung von Viren durchgeführt wird. Während mehrere Methoden zur Viruskonzentration entwickelt und getestet wurden, demonstrieren wir hier die Wirksamkeit der Ultrafiltration und der Magermilchflockung für RNA-Viren mit verschiedenen Probentypen.

Konzentration von Viruspartikeln aus Wasser- und Abwasserproben aus der Umwelt mittels Magermilchflockung und Ultrafiltration

Hier beschreiben wir Methoden der Probenahme aus den euphotischen Zonen von Meeres- und Süßwasserökosystemen zur Isolierung von Cyanophagen (und ihren Wirten) und Post-Sampling-Prozesse, die einzelne Genotypen anreichern und die Dynamik der Virus-Wirt-Interaktion charakterisieren.

Umweltproben von photosynthetischen Mikroben und ihren Viren: Vom Feld ins Labor

Hier präsentieren wir eine Studie zur Bewertung der antiviralen Wirksamkeit kupfer- und silberbasierter Oberflächenbeschichtungen auf Luftfiltern. Mit einer Bioaerosolkammer und Phi6-Bakteriophagen quantifiziert diese Methode die virale Inaktivierung und mechanische Filtrationseffizienz für selbstdesinfizierende Innenraumlufttechnologien.

Bewertung der Wirkung von beschichteten Filtern und Vorfiltern auf die Infektivität und Konzentration des aerosolisierten Phi6-Virus

Lernen Sie die Konstruktion kostengünstiger Glaswolle-Filter zur Konzentration wasserübertragbarer Krankheitserreger aus großen Wasservolumina. Diese Methode ermöglicht Forschern die effiziente Detektion von Viren, Bakterien und Protozoen.

Glaswolle-Filter für die Konzentration auf Wasserbasis Viren-und Landwirtschaftsorganisation der Zoonose-Erreger

Weitere Videos entdecken