Name: Charakterisierung der molekularen Mechanismen der In vivo UVR Induced Cataract (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-11-28T12:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 56 s
Description: Erfahren Sie die Induktion von Katarakten durch UV-Strahlung bei Ratten und die Analyse molekularer Mechanismen mittels quantitativer Echtzeit-PCR und Immunhistochemie. Dieses Protokoll ermöglicht präzise Untersuchungen zur Kataraktogenese.

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S och Drottning Viktorias Frimurarstiftelse: Diese Arbeit wurde von der Karolinska Institutet KID-Finanzierung, Swedish Radiation Protection Authority, Karolinska Institutet Eye Research Foundation, Gun och Bertil Stohnes Stiftelse, St. Eriks Eye Hospital Research Foundation, Ögonfonden, Konung Gustav V unterstützt.

Ein. Exposition gegenüber ultravioletter Strahlung <ol><li> 15 min vor der Belichtung anästhesieren einen weiblichen Sprague-Dawley-Ratten mit einem Gemisch von 90 mg / kg Ketalar (Ketamin) und 10 mg / kg Rompun (Xylazin) durch intraperitoneale Injektion. </li><li> Platzieren des Tieres in einem Ratten Restrainer und ziehen die Bänder bis Immobilisierung der Ratte ohne einen Stamm Squeeze 13. </li><li> Instill Mydriacyl (Tropicamid), 10 mg / ml, in beiden Augen des Ratten zu induzieren Mydriasis. </li><li> Platzieren des Tieres, so daß ein Auge gegen einen schmalen Strahl von UVR bei 300 nm 10 nm 14 mit voller Breite bei halbem Maximum positioniert und schirmen das kontralaterale Auge mit schwarzer Folie. </li><li> Setzen Sie den rat einseitig zu sub-Schwellendosis 1 kJ / m 2 UVR-B bei 300 nm für 15 min 15. </li></ol> 2. Präparation <ol><li> Nach vorgegebenen Nachbelichtung Intervall (1, 5, 24 und 120 Stunden), opfern die 6 Wochen alten Ratte (Gewicht &lt;200 g) von carbon Kohlendioxid Ersticken und Dislokation der Halswirbelsäule. </li><li> Entkernen Augen. Danach legte die Augenhornhaut unten, hinteren Seite nach oben. Dann Stempels eine minimale Öffnung durch Anlegen einer 27 Gauge Kanüle und schieben tangential an der Sklera um eine Beschädigung der Linse, die sehr nahe an der Sklera ist. Dann nutzen Sie ein Paar der Augenchirurgie Schere Umfang geschnitten direkt hinter dem Limbus, bis der hintere Teil der Sklera abgehoben werden kann. Dann heben Sie das Objektiv mit einem stumpfen gebogenen Pinzette. </li><li> Entfernen Sie Reste des Ziliarkörpers von der Linsenäquator unter einem Mikroskop, mit dem Objektiv in einem ausgewogenen Salzlösung nicht länger als 5-10 min. </li></ol> 3. Quantitative RT-PCR <ol><li> Platzieren einer Linse in einer Mischung von 350 ul Lysepuffer RA1 (NucleoSpin RNA II Gesamt-RNA Isolation Kit) und 3,5 ul β-Mercaptoethanol in einem 2 ml Eppendorf-Röhrchen. </li><li> Halten Sie die Linse in diesem Mix während 30 min bei Raumtemperatur. </li><li> Homogenisieren Sie das Objektiv miteine Nadel, bis nur harte Kern der Linse wird von der Linse (Cortex und Linsenkapsel im Lysepuffer) verlassen. Entfernen Sie den Kern aus dem Mix. </li><li> Lagern Sie die Proben sofort bei -70 ° C. </li><li> Tauen Sie die Proben und folgen Sie das Protokoll &quot;Total RNA Aufreinigung aus kultivierten Zellen und Gewebe&quot; (NucleoSpin RNA II Gesamt-RNA Isolation Kit). </li><li> Shop-RNA-Proben bei -70 ° C. </li><li> Um eine ausreichende Entfernung von DNA aus jeder Probe zu überprüfen, führen eine PCR unter den folgenden Bedingungen (Schritt 1: 95 ° C für 2 min; Schritt 2 während 40 Zyklen: 95 ° C für 20 sec, 55 ° C für 20 sec, 72 ° C für 20 Sek.; Schritt 3: 72 ° C für 7 min) mit p53 DNA-spezifischen Primern, 5&#39;-Vorwärts ACCCTCTGACCTTTTTCCCA-3 &#39;und 5&#39;-Reverse TGCTGGGATCTTAGGCACTC-3&#39; und Taq DNA-Polymerase (dNTPack), nach der Herstellung Protokoll. Die erwartete PCR-Produkt ist 243 Basenpaare. </li><li> Ausführen eines 1,5% Agarose-Gel-Elektrophorese DNA-spezifische PCR-Produkt von 243 Basenpaaren nachzuweisen. Zur Vorbereitung1,5% Agarosegel in TBE-Puffer nehmen 3,75 g Agarose und lösen es in 250 ml TBE-Puffer. Hinzufügen Ethidiumbromid (0,5 mg / ml) 500 ul in 500 ml 1,5% Agarose-Gel-Lösung. Das Gemisch wird in einer Mikrowelle und rühren, um die Agarose zu lösen. </li></ol> Keine der Proben muss keine DNA-spezifischen PCR-Produkte auf 1,5% Agarose-Gelelektrophorese offenbaren. <ol start="9"><li> Messung der Konzentration von RNA-Proben (1 ul) und das Verhältnis der Probe Absorption bei 260 nm (RNA) und 280 nm (Protein) in einer NanoDrop ND-1000 Spektrophotometer. Wenn das Verhältnis zu Protein von RNA-RNA-Probe Absorption ist 2,0 oder mehr wird die RNA-Probe ist rein. Wenn das Verhältnis der Extinktion RNA-Probe geringer ist als 2,0, Redo RNA Reinigungsschritt 3.5. </li><li> Nehmen ein Volumen von RNA-Probe, die 1 ug cDNA zu synthetisieren und entsprechend dem Protokoll 1. Strang cDNA-Synthese Kit (1 st Strang cDNA-Synthese-Kit für RT-PCR). </li><li> Bewahren cDNA-Proben bei -20 ° C(Für einen Zeitraum von 1 und mehr Jahren, bei -70 ° C). </li><li> Führen quantitative real-time PCR auf iCycler MyiQ Single Color Real Time PCR Detection System. Last Triplikate auf 96-Well-Platte mit 1 ul cDNA Probe TaqMan Gene Expression Master Mix, TaqMan Gene Expression Assay für Caspase 3, nach Anleitung zu fertigen. Last Triplikate auf einem anderen 96-Well-Platte mit 1 ul cDNA Probe TaqMan Gene Expression Master Mix, TaqMan Gene Expression Assay für 18s, nach Anleitung (TaqMan Gene Expression Assay Protocol) herstellen. Verdünnen in Serie einen Bruchteil der cDNA aus drei zufällig ausgewählten unbelichteten Linsen. Führen Reihenverdünnungen zusammen mit der cDNA aus Proben in einem 96-Well-Platte. </li><li> Verwenden Sie die Standardkurve Methode zur Quantifizierung der Ergebnisse. Die Zahl der Zyklen bei Schwellenwert Fluoreszenz wird als die Messung in MyiQ Software verwendet. Eine Standardkurve Ausdruck Anzahl der Zyklen an der Schwelle als Funktion der relativen Konzentration des Kalibrator ist established für die seriellen Verdünnungen in jeder Platte. cDNA aus drei nicht behandelten Linse Proben wurde für die Kalibrierung verwendet. Betreffen die Schwelle Anzahl von Zyklen für jede Probe mit der Standardkurve, um die relative Konzentration der Probe gemessen cDNA erhalten. Schließlich erhalten Expressionsniveau der Zielgene durch über die relative Konzentration der Ziel-cDNA, um die interne Kontrolle 18s cDNA. </li></ol> 4. Immunhistochemischen Färbung <ol><li> Fixierung <ol><li> Sezieren das Auge in PBS (Phosphate Buffered Saline, pH 7.4). </li><li> Setz das Auge in einem Rohr mit 4% Paraformaldehyd (PFA) in eiskaltem 20 min gefüllt. Bereiten PFA 4% am Tag zuvor. Lagerung bei 4 ° C bis zur Verwendung. PFA ist für etwa eine Woche frisch. </li><li> Entfernen PFA mit einer Mikropipette. Dann, mit eiskaltem PBS für 20 min waschen. </li><li> Setzen Sie das Auge in Saccharose 30% bei +4 ° C über Nacht. </li><li> Setzen Sie das Auge in einer Tasse mit Optimal Cutting Temperature (OCT)-Medium gefüllt (Tissue-Tek). Setzen Sie das Auge in eine geeignete Position zum Schneiden. </li><li> Frieren in OCT-Medium über Trockeneis. </li><li> Lagerung bei -70 ° C bis zur Verwendung. </li></ol></li><li> Schnitte <ol><li> Positionieren Sie den Blick für Kryo-Schnitte in angemessener Ebene. </li><li> Geschnitten drei 5 um dicke mittleres Sagittalschnitten von einem zentralen Abschnitt jeder Linse. Entsorgen Sie mindestens 6 Abschnitte zwischen aufeinanderfolgenden Abschnitten zu vermeiden Färbung die gleiche Kerne in verschiedenen Abschnitten. </li><li> Sobald ein Abschnitt geschnitten worden ist, sanft legen eine Folie oben drauf. Der Abschnitt sollte dann auf der Folie haften. </li><li> Lassen Sie die Folien an der Luft trocknen vor dem Gebrauch. Dias können bei -20 ° C gelagert werden, bis sie benötigt. </li></ol></li><li> Fluoreszenz Immunhistochemie <ol><li> Lassen Proben erreichen Raumtemperatur (5-10 min). </li><li> Zeichnen Ränder um die Proben mit einem PAP-pen (Invitrogen). </li><li> Lassen Sie die Grenze trocken für eine Weile (10 min). </li><li> Beschriften Sie die Objektträger. </li><li> Rehydrieren in 1 × PBS für 15 min. </li><li> Permeabilisieren in Standard-Baustein-Lösung für 30 min. </li><li> Fügen primären Antikörper (polyklonaler Kaninchen, gespalten Caspase-3-Antikörper Asp175 9661; Zelluläre Signalübertragung Technology, Inc) verdünnt 1:3000 in Standard-Baustein-Lösung. </li><li> Speicher in einer befeuchteten Kammer bei 4 ° C über Nacht. </li><li> Waschen in PBS durch Pipettieren (3 × 5 min) oder durch Eintauchen in eine große Badewanne (&gt; 15 min, 1-2 Änderungen). </li><li> Fügen sekundären Antikörper (anti-Kaninchen sekundären Antikörper mit einer spezifischen Absorption / Emissionsspektrum) verdünnt 1:300 in der Standard-Baustein-Lösung. </li><li> Waschen in PBS durch Pipettieren (3 × 5 min) oder durch Eintauchen in eine große Badewanne (&gt; 15 min, 1-2 Änderungen). </li><li> Wischen Sie PAP-pen Abstriche. </li><li> Speicherung in einer befeuchteten Kammer bei Raumtemperatur während 3 Stunden. Vermeiden Sie Licht. </li><li> Fügen Sie einen Tropfen Vectashield und legen Sie eine Deckglas auf dem Objektträger. Vermeiden Sie Luftblasen. </li><li> Lassen Sie die Vectashield aushärten (~ 20 min). </li><li> Halten Abschnitten in den dunklen bis zur Analyse. </li><li> Alle Steuer-Abschnitte werden in Abwesenheit von primären Antikörper verarbeitet. </li><li> Achten Sie auf die Ergebnisse innerhalb weniger Stunden unter einem Fluoreszenzmikroskop. </li><li> Graf Epithelzellen &#39;Kerne von einer Seite Kernbogen zur anderen Seite Kernbogen jeder Linse. Anwenden der Standard Blaufilter alle Linsenepithelzellen Kerne in Blau und einen Standard-Filter, der die Emission des Sekundärantikörpers paßt, um die Caspase-3-positiven Kernen im grünen sehen. </li><li> Aufzeichnung der Anzahl aller Linsenepithelzellen Kerne und die Anzahl der positiven Kernen. Zählen Sie die Zellen dreimal für jeden Abschnitt. </li></ol></li></ol>

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<li>Michael, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+repair+of+cataract+induced+by+ultraviolet+radiation%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmic+Research%22%5BJournal%5D)">Development and repair of cataract induced by ultraviolet radiation.</a> Ophthalmic Research. 32, 1-45 (2000).</li>
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<li>Ayala, M. N. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Influence+of+exposure+patterns+and+oxidation+in+UVR+induced+Cataract%22">Influence of exposure patterns and oxidation in UVR induced Cataract</a>. , Karolinska Institutet. Stockholm. (2005).</li>
<li>Dong, X. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Safety+limit+estimation+for+cataract+induced+by+ultraviolet+radiation%22">Safety limit estimation for cataract induced by ultraviolet radiation</a>. , Karolinska Institutet. Stockholm. (2005).</li>
<li>Löfgren, S., Michael, R., Söderberg, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+age+and+sex+in+ultraviolet+radiation+cataract+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Impact of age and sex in ultraviolet radiation cataract in the rat.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 44, 1629-1633 (2003).</li>
<li>Ayala, M. N., Michael, R., Söderberg, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+exposure+time+for+UV+radiation-induced+cataract%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Influence of exposure time for UV radiation-induced cataract.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 41, 3539-3543 (2000).</li>
</ol>

Keine Interessenskonflikte erklärt.

<html> Dieses Papier beschreibt Methoden, die Untersuchung der molekularen Ereignisse, die während UVR-B induzierte Katarakt ermöglichen. In Anbetracht, dass die meisten Informationen für in vivo UVR induzierten Katarakt aus Experimenten an Albino-Sprague-Dawley-Ratten 7, 16, 17, 18, ​​19 abgeleitet wurde, beschlossen wir, die Albino-Sprague-Dawley-Ratte in der aktuellen Studie zu verwenden. Alter der Ratten betrug sechs Wochen alte. Das Geschlecht wurde gewählt, weiblich ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Name des Reagenzes </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td><td> Kommentare (optional) </td></tr><tr><td> Ketalar </td><td> Pfizer </td><td> 150086 </td><td> 50 mg / ml </td></tr><tr><td> Rompun </td><td> Bayer </td><td> 022545 </td><td> 20 mg / ml </td></tr><tr><td> Oculentum Simplex </td><td> Apoteket, Schweden </td><td> 336164 </td><td> 5 g </td></tr><tr><td> Mydriacyl </td><td> Alcon </td><td> 00352 </td><td> 10 mg / ml </td></tr><tr><td> Balanced Salzlösung </td><td> Alcon </td><td> 0007950055 </td><td></td></tr><tr><td> 3,5 ul β-Mercaptoethanol </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> NucleoSpin RNA II Gesamt-RNA Isolation Kit </td><td> Macherey-Nagel GmbH &amp; Co, Düren, Deutschland </td><td> 740955,50 </td><td></td></tr><tr><td> p53 DNA spezifischen Primern </td><td> biomers.net GmbH </td><td> Maßgeschneiderte </td><td></td></tr><tr><td> Taq-DNA-Polymerase, dNTPack </td><td> Roche </td><td> 04 728 866 001 </td><td></td></tr><tr><td> Agarose </td><td> Sigma </td><td> A5093 </td><td></td></tr><tr><td> Ethidiumbromidlösung 0,5 mg / ml </td><td> Sigma </td><td> E1385 </td><td></td></tr><tr><td> Nano-Drop ND-1000 Spektralphotometer </td><td> NanoDrop Produkte </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 1. cDNA-Synthese-Kit für RT-PCR (AMV) </td><td> Roche Diagnostics GmbH </td><td> 11 483 188 001 </td><td></td></tr><tr><td> iCycler MyiQ Single Color Real Time PCR Detection System </td><td> Bio-Rad Laboratories </td><td></td><td></td></tr> &lt;tr&gt; <td> 96-Well-Platte </td><td> Sarstedt </td><td> 72.1979.202 </td><td></td></tr><tr><td> TaqMan Gene Expression Master Mix </td><td> Applied Biosystems </td><td> 4369016 </td><td></td></tr><tr><td> TaqMan Gene Expression Assay für Caspase 3 </td><td> Applied Biosystems </td><td> Rn00563902_m1 </td><td></td></tr><tr><td> TaqMan Gene Expression Assay für 18s </td><td> Applied Biosystems </td><td> Hs99999901_s1 </td><td></td></tr><tr><td> MyiQ Software </td><td> Bio-Rad Laboratories </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Gespaltenen Caspase-3 (Asp175) </td><td> Cell Signaling Technology </td><td> 9661 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-Kaninchen-IgG </td><td> Abcam </td><td> Ab6798 </td><td></td></tr><tr><td> Saccharose </td><td> Sigma Aldrich </td><td> 84097 </td><td></td></tr&gt; <tr><td> Vectashield </td><td> Vector Laboratories </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Universal-Mikroskop Axioplan 2 Imaging </td><td> Carl Zeiss </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Paraformaldehyd </td><td> Sigma Aldrich </td><td> 441244 </td><td></td></tr><tr><td> TBE-Puffer 10x </td><td> Promega </td><td> V4251 </td><td></td></tr></tbody></table>

charakterisierung der molekularen mechanismen der<em&gt; in vivo</em&gt; uvr induced cataract

Characterization of Molecular Mechanisms of In vivo UVR Induced Cataract

Grauer Star ist die häufigste Ursache für Erblindung in der Welt ein. Die Weltgesundheitsorganisation definiert Katarakt als einer Trübung der Linse des Auges, die die Übertragung von Licht behindert. Grauer Star ist eine multifaktorielle Erkrankung mit Diabetes, Rauchen, UV-Strahlung (UVR), Alkohol, ionisierende Strahlung, Steroide und Hypertonie. Es gibt starke experimentelle 2-4 und epidemiologische Evidenz 5,6, dass UVR Katarakt verursacht. Wir entwickelten ein Tiermodell für UVR B induzierten Katarakt sowohl betäubt 7 und nicht-narkotisierten Tieren 8. Das einzige Heilmittel für die Katarakt-Chirurgie ist aber diese Behandlung ist nicht für alle zugänglich. Es wurde geschätzt, dass eine Verzögerung des Einsetzens von Katarakt für 10 Jahre könnte die Notwendigkeit für die Kataraktchirurgie um 50% 9 zu reduzieren. Um das Auftreten von Katarakt verzögern, ist es notwendig, die Mechanismen der Entstehung von grauem Star zu verstehen und wirksame Prävention Strategiegien. Unter den Verfahren zur Kataraktentwicklung spielt Apoptose eine wichtige Rolle bei Einleitung von Katarakt bei Menschen und Tieren 10. Wir konzentrieren uns wurde kürzlich Apoptose in der Linse als Mechanismus zum Kataraktentwicklung 8,11,12. Es wird erwartet, dass ein besseres Verständnis der Wirkung von UV-Strahlung auf der Apoptoseweg werden Möglichkeiten für die Entdeckung neuer Arzneimittel zu verhindern Katarakt liefern. In diesem Artikel beschreiben wir, wie Katarakt kann experimentell durch in vivo Exposition gegenüber UVR-B induziert. Weitere RT-PCR und Immunhistochemie dargestellt als Werkzeuge zur molekularen Mechanismen von UVR-B induzierte Katarakt studieren.

Die verschiedenen Quellen der Variation in den Messungen wurden mit einer Varianzanalyse geschätzt und es wurde festgestellt, dass unter Berücksichtigung drei Messungen pro Tier die Varianz für Messungen in der Größenordnung von 15% der für Tiere war. Somit, wenn man bedenkt gesamte Linse Analyse ist es nicht möglich, die Genauigkeit zu erhöhen. Orthogonal Tests aufgeklärt einen statistisch signifikanten Unterschied für die Caspase-3-Nachricht zwischen 120 hr Latenzzeit im Vergleich zu kürzeren Latenzzeiten Abständen. <...

Grauer Star ist die häufigste Ursache für Erblindung in der Welt. Ultraviolette Strahlung der Sonne (UV) ist der Hauptrisikofaktor für die Katarakt-Entwicklung. Ein Tiermodell von weit UVR-B induzierte Katarakt entwickelt. In diesem Artikel beschreiben wir Methoden für die Untersuchung der Entstehung von grauem Star: Exposition gegenüber UV-Strahlung, quantitative RT-PCR und Immunhistochemie.

Charakterisierung der molekularen Mechanismen der<em&gt; In vivo</em&gt; UVR Induced Cataract

Katarakt ist die weltweit häufigste Ursache für Erblindung 1. Die Weltgesundheitsorganisation definiert die Katarakt als eine Trübung der Augenlinse, welche ...

Dieses Video zeigt eine Methode zur Induktion von Katarakten mittels ultravioletter Strahlung beim Ratten. Die an der Kataraktentwicklung beteiligten molekularen Mechanismen werden anschließend mittels quantitativer Echtzeit-PCR und immunzytochemischer Verfahren untersucht. Zunächst wird das Auge einer Ratte ultravioletter Strahlung ausgesetzt, um die Bildung eines Katarakts zu induzieren.Das andere Auge dient als Kontrolle. Anschließend werden die Linsen präpariert und aufgearbeitet, um RNA zu gewinnen, mit der die Expressionsniveaus von CAS B'S drei mittels quantitativer Echtzeit-PCR bestimmt werden, oder sie werden mit einem Antikörper gegen kaspierte Caspase gefärbt, um die Expression und Lokalisation des aktiven Proteins zu untersuchen.Letztlich bestätigen die Ergebnisse dieser Assays einen Anstieg der Caspase-3-mRNA sowie der Expression des aktiven Proteins im Zellkern der Linsenzellen nach Exposition gegenüber UVR. Der Hauptvorteil dieses Protokolls gegenüber bestehenden Methoden liegt darin, dass es eine einzigartige, schmalbandige UVR-Quelle und eine universelle Ratte-Haltevorrichtung verwendet, wodurch wir sicher und präzise Tiere mit einem gut definierten UV-Spektrum und

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Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Eine formale Demonstration der Zerlegung einer Maus Auge, was zu einem ganzen Berg der retinalen Pigmentepithels.

Präparation einer Maus Eye für einen ganzen Berg von retinalen Pigmentepithel

Epidermal Melanin wird durch die topische Anwendung von Forskolin in einem murinen Modell der hellhäutigen UV-empfindliche Menschen verursachte. Pharmakologische Manipulation von cAMP-Konzentrationen in der Haut und Epidermis stark verdunkelt Schutz gegen UV-vermittelte Entzündungen (Sonnenbrand), wie durch die minimale erythematöse Dosis (MED)-Assay gemessen.

Pharmakologische Induktion der epidermalen Melanin und Schutz vor Sonnenbrand in einem humanisierten Mausmodell

Wir beschreiben ein detailliertes Protokoll für Lambda wählen Sie cII Mutation Assay in kultivierten Zellen von transgenen Nagetiere oder die entsprechenden Tiere behandelt mit einem chemisch/physikalische Mittel von Interesse. Dieser Ansatz hat verbreitet zu Testzwecken Mutagenität von Karzinogenen in Säugetierzellen.

Die Lambda wählen Sie cII Mutation-Detection-System

Dieses Protokoll demonstriert den gleichzeitigen Nachweis von reaktiven Sauerstoffspezies (ROS), lebenden Zellen und abgestorbenen Zellen in lebenden Primärkulturen aus Maus-Augenoberflächenzellen. 2',7'-Dichlorfluoresceindiacetate, Propidiumiodid und Hoechst-Färbung werden verwendet, um die ROS,, abgestorbene Zellen und lebende Zellen zu bewerten, gefolgt von Bildgebung und Analyse.

Bewertung von oxidativen Schäden in den primären Maus-Augen-Oberflächenzellen/Stammzellen als Reaktion auf Uv-C-Schäden (UV-C)

In diesem Bericht stellen wir ein Protokoll vor, das es dem Prüfarzt ermöglicht, ein Mausmodell der intraokularen Uveitis zu erstellen. Dieses etablierte Modell, das gemeinhin als experimentelle Autoimmun-Uveitis (EAU) bezeichnet wird, erfasst viele Aspekte menschlicher Erkrankungen. Im Folgenden beschreiben wir, wie das Fortschreiten der Krankheit mit mehreren Ablesungen induziert und überwacht werden kann.

Experimentelle autoimmune Uveitis: Ein intraokulares entzündliches Mausmodell

Dieser Artikel beschreibt die Verfahren zur Bewertung der Toxizität von UV-Strahlung und chemischen Toxinen auf einer primären und immortalisierten Zelllinie.

Bestimmung der Toxizität von UV-Strahlung und Chemikalien auf primären und immortalisierten humanen Hornhautepithelzellen

Mausmodelle können nützliche Werkzeuge sein, um die Biologie des retinalen pigmentierten Epithels (RPE) zu untersuchen. Es wurde festgestellt, dass Mäuse eine Reihe von RPE-Pathologien entwickeln können. In dieser Arbeit beschreiben wir ein Phänotypisierungsprotokoll zur Aufklärung und Quantifizierung von RPE-Pathologien in Mäusen mittels Licht-, Transmissionselektronen- und konfokaler Mikroskopie.

Ein Protokoll zur Bewertung und Quantifizierung von retinalen pigmentierten Epithelpathologien in Mausmodellen der altersbedingten Makuladegeneration

Diese Methode modelliert die Kataraktchirurgie in vivo , indem Linsenfaserzellen von adulten Mäusen entnommen und der Kapselsack mit angehängten Linsenepithelzellen (LECs) zurückgelassen wird. Das Verletzungsansprechen wird dann zu verschiedenen Zeitpunkten nach der Operation anhand molekularer und morphologischer Kriterien beurteilt.

Modellierung der Kataraktchirurgie bei Mäusen

Das Protokoll beschreibt eine Studie über die systemischen und lokalen Auswirkungen der Exposition gegenüber ultraviolettem B auf die Haut bei Mäusen.

Untersuchung der chronischen Exposition von Mäusen gegenüber ultravioletter B-Strahlung 

Wir Detail eines neuen Nah-Infrarot-Fluoreszenz (NIRF) Katheter für die 2-dimensionale intravaskulären molekulare Bildgebung von Plaque...

In vivo Near Infrared Fluorescence (NIRF) intravaskuläre Molecular Imaging von entzündlichen Plaque, einen multimodalen Ansatz, um Imaging der Atherosklerose

Erfahren Sie die Induktion von Katarakten durch UV-Strahlung bei Ratten und die Analyse molekularer Mechanismen mittels quantitativer Echtzeit-PCR und Immunhistochemie. Dieses Protokoll ermöglicht präzise Untersuchungen zur Kataraktogenese.

Charakterisierung der molekularen Mechanismen der

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