Name: In ovo Elektroporation in Mittelhirn-Küken für Studien über Genfunktion in dopaminergen Neuronen Entwicklung (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-08-03T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 57 s
Description: Erfahren Sie die In-ovo-Elektroporation im Mittelhirn von Kükenembryonen zur Untersuchung der Genfunktion bei der Entwicklung dopaminerger Neuronen. Diese Methode ermöglicht gezielte Gentransfer-Studien.

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Wir danken Dr. Takahiko Matsuda für die Bereitstellung der pCAG-mCherry konstruieren. YCM wird durch einen Career Development Award der Schweppe-Stiftung und ein Stipendium der Whitehall-Stiftung unterstützt.

1. Versorgung Vorbereitung (nicht im Video) <ol><li> Bereiten Sie einen frischen 1X Verdünnung von Penicillin / Streptomycin (Pen / Strep) in 1X PBS. Nicht mehr als 50 ml notwendig sind. Filter mit einer Spritze 0,22 um-Filter. </li><li> Bereiten Injektion Konstrukte durch die Kombination von gewünschten Plasmid-Konstrukte. Wir haben alle Konstrukte in der pCAG-Flag-Vektor mit geeigneter Stöchiometrie bis zu einem Endvolumen von ~ 10 l. Außerdem sollte pCAG-GFP 14 oder pCAG-mCherry zum Verfolgen Elektroporation Effizienz und elektroporierten Zellen gegeben werden. Wir verwenden pCAG-mCherry für dieses Experiment. Schließlich werden 0,22 um filtriert Fast Green-Farbstoff in der Plasmid-DNA Mischung bei einer Endkonzentration von 0,05%, um die Einkoppeleffizienz in Embryonenküken midbrains visualisieren. </li></ol> 2. Egg Vorbereitung (im Video) <ol><li> Um erwerben HH Stadium 11 Embryonen, brauchen Eier bebrütet werden bei 100 ° F (37,8 ° C) für etwa 41 Stunden nach der Befruchtung mit 25-40% Luftfeuchtigkeit. OrtEier auf ihrer Seite und markieren die Spitze jeder Strich mit einem Bleistift. Platzieren Sie Trays in einer vorgewärmten, befeuchteten Inkubator. Langsam Eier schaukeln, indem Sie die Drehfunktion des Inkubator-Plattformen auf &quot;Automatisch&quot;. Überprüfen Sie die Feuchtigkeit und Wasserstand alle 24 Stunden. </li><li> Kurz vor Beginn des Versuchs, zu entfernen Eier aus dem Inkubator verlassen und bei Raumtemperatur. Dies wird dazu beitragen, die Entwicklung verlangsamen und verhindern, dass über die Entwicklung. </li><li> Reinigen Sie die Oberfläche der einzelnen Eier mit 70% Ethanol und wischen Sie mit einem Kimwipe. </li><li> Nehmen Sie zwei 4 cm Stücke von Klebeband und kleben Sie diese Seite an Seite auf dem Ei, ein großes Rechteck über den Bleistift Strich zu machen. Glätten Sie das Band vor dem Ei. Dies ist, wo das Fenster gemacht werden. Das Band wird kleine Stücke von Schalen abfällt, wenn das Fenster aufgeschnitten zu verhindern. </li><li> Verwenden Sie eine 10 ml-Spritze und 18-Gauge-Nadel ½ bis 5 ml Albumin aus dem Ei zu ziehen. Nach dem Durchstechen der Schale, winkeln Sie die Nadel weg von der Dotter nicht zu stören, umoder Schäden am Embryo beim Entfernen Albumin. Reinigen Sie die Nadel mit 70% Ethanol zwischen Eiern, aber sicher sein, die Nadel ist vor Durchstechen der nächste Ei trocken. </li></ol> 3. Glass Injektionsnadel Vorbereitung (im Video) <ol><li> Injektionsnadeln sind gemacht mit den folgenden Einstellungen auf einem lodernden / Braun Feinpipettenziehvorrichtung (Sutter Instrument Modell P-97): Heat 670, Pull-120, Vel 40, 165 Zeit. World Precision Instruments (API) 4 Zoll 1,0 mm dünnen Wand Kapillargläser (API TW100F-4) wird verwendet, um Nadeln zu machen. </li><li> Laden Sie ein Glas gezogen Nadel mit einer P10-Pipette und die lange Spitze Kapillare Laden Pipettenspitze (Eppendorf 5242956,003). Legen 5-10 ul, je nachdem wie viele Eier sind, die injiziert werden. Füllen Sie das Glas langsam Nadel, die Schaffung eines durchgehenden Spalte von Plasmid-Lösung abwesend von Luftblasen. </li><li> Platzieren Sie die geladene Nadel in den Nadelhalter an dem Mikromanipulator (Narishige MM3) und dem Picospritzer III Mikroinjektorkopfs. Sehen Sie sich die Nadel unter einem dissectiMikroskop auf und schneiden Sie die Nadel an der Stelle, wo die grüne Flüssigkeit stoppt. Es hilft, einen dunklen Hintergrund zu verwenden, um besser zu visualisieren Sie die Nadel. Die richtige Nadel Trimmen kommt mit der Praxis. </li></ol> 4. Mittelhirn / Neuralrohr Injection (im Video) <ol><li> Verwenden Sie eine Schere Frühjahr 2-2,5 cm Durchmesser Fenster im Ei geschnitten. Starten Sie das Fenster aus dem vorigen Stichloch machte beim Zeichnen von Albumin, und drehen Sie das Ei in der Hand, wie Sie abgeschnitten. Seien Sie sicher zu reinigen Sie die Schere mit einem Kimwipe in 70% Ethanol zwischen Eiern gesättigt. </li><li> Alle Hühnerembryonen unter einem Dissektionsmikroskop. Es kann notwendig sein, um die Augen zu trainieren. Es kann helfen, den Embryo durch Einspritzen von 0,22 um-gefiltert 20% Tusche in PBS unter dem Hühnerembryo zu visualisieren. Wir haben jedoch gefunden, dass dieser Schritt vermieden werden sollte, wenn möglich, wie es für das Überleben tendenziell abnimmt. </li><li> Injektion funktioniert am besten, wenn der Embryo in parallel zu dem Weg der Nadel angeordnet ist, wobei der Kopf von der Nadel.Langsam dringen das Neuralrohr in einem 45 Grad Winkel zum Mittelhirn-Hinterhirn Kreuzung. Es ist sehr wichtig, nur füllen die neuronale Vesikel, die den Mittelhirn mit Plasmid-DNA und Fast Green Farbstoff, ohne nennenswerte Diffusion in die Vorderhirn und Hinterhirn Regionen. Starten Sie mit der Injektion von Picospritzer Mikroinjektor die Dauer Satz bei 25 ms, das eventuell verändert je nach Nadel Trimmen werden. In der Regel zwischen 10-50 ms verwenden. </li></ol> 5. Elektroporation (im Video) <ol><li> Rufen Sie die Injektionsnadel. Platz 3 Tropfen 1X Pen / Strep in PBS-Lösung in das Ei auf den Embryo. </li><li> Überprüfen Sie die Einstellungen des BTX EMC830 Elektroporator: <table border="1"><tbody><tr><td> SPANNUNG: </td><td> 20 V </td></tr><tr><td> PULSLÄNGE: </td><td> 25 ms </td></tr><tr><td> # Impulse: </td><td> 3 </td></tr><tr><td> INTERVAL: </td><td> 500 ms </td></tr><tr><td> POLARITÄT: </td><td&gt; UNIPOLAR </td></tr></tbody></table></li><li> Die 2 mm langen L-förmigen Platinelektroden auf der gleichen horizontalen Niveau wie der Boden des Neuralrohrs, mit der embryonalen Mittelhirn sitzt in der Mitte zwischen zwei beabstandeten Elektroden 3 mm. Ausrichten der Elektroden mit dem Boden des Neuralrohrs ist entscheidend für eine effiziente Elektroporation des ventralen Mittelhirn. Um Mittelhirn-spezifische Elektroporation zu erreichen, ersetzten wir die Original-BTX-Elektroden mit zwei maßgeschneiderten Platin L-förmigen Elektroden mit kurzen 2 mm langen Spitzen. Diese Platin-Elektroden von 0,5 mm Durchmesser Platindrähte (Alfa Aesar) hergestellt. Diese Platin-Elektroden sind gerade lang genug, um das Mittelhirn eines Stufe 11 Hühnerembryonen, die etwa 0,9 mm lang, ohne Targeting viel von dem Vorderhirn oder den Rautenhirn Regionen ist zu decken. Drücken Sie die BTX-Fußschalter einmal. Luftblasen um die Elektroden mit jedem erfolgreichen Elektroporation erzeugt werden. Entfernen Sie vorsichtig die Elektroden aus dem Ei und wischen Sie die elektrOden mit einem 70% igen Ethanol-Kimwipe abgedeckt. Setzen Sie noch 3 Tropfen 1X Pen / Strep-Lösung im Ei, auf den Embryo. </li><li> Decken Sie das Fenster mit einem 5 cm x 5 cm großes Stück klar Packband. Achten Sie darauf, um das Ei gut und zu versiegeln, dass die Ei-Inhalte nicht in Kontakt mit der Band zu kommen. </li></ol> 6. Inkubieren und Ernte <ol><li> Legen Sie die Eier wieder in den Inkubator. Stellen Sie sicher, das Drehen des Inkubator-Plattformen ist AUS. Inkubieren Eier, bis die gewünschte HH 23 wird erreicht. </li><li> Ernte lebende Embryonen und sie in gemeinsamen PBS gefüllten Petrischalen für jede Bedingung. Bildschirm geerntet Embryonen unter einem Fluoreszenz-Mikroskop Dissektion und behielt nur Embryonen mit mCherry Ausdruck. </li><li> Übertragen Embryonen in einzelne Vertiefungen einer 24-Well-Platte. Füllen Sie jede gut mit 1 ml frisch zubereiteten 2% Paraformaldehyd (PFA) und lassen Sie sie 2-3 Stunden bei 4 ° C fixieren </li><li> Waschen fixierte Embryonen dreimal für jeweils 10 Minuten in PBS. Ort Embryonen nacheinander in 15% und 30% Saccharose, bis ins Gleichgewicht gebracht. Die Embryonen werden zunächst in Saccharose zu schweben, wird aber beim Äquilibrierung sinken. </li><li> Überprüfen Embryonen unter einem Fluoreszenz-Mikroskop Dissektion, sich Notizen auf dem mCherry Expressionsmuster und Niveau für jeden Embryo. Einbetten jedes Embryo im Oktober Es ist sehr kritisch zu orientieren Embryonen richtig optimale Mittelhirn Querschnitte für nachfolgende Analysen (1) zu erzeugen. </li><li> Bereiten 18 um dicken Mittelhirn Abschnitten mit einem Leica CM3050S Kryostaten. Analysieren Mittelhirn Entwicklung und Differenzierung von dopaminergen Neuronen Immunfärbung mit geeigneten Zelltyp Marker. </li></ol> 7. Repräsentative Ergebnisse Eine schematische Darstellung der Elektroporation und Analyse Embryonenküken Mittelhirn ist in Abbildung 1 dargestellt. In den erfolgreich injiziert und elektroporiert Hühnerembryonen, sollte Ausdruck sein mCherry im Mittelhirn Region sichtbar nach weiteren Entwicklung ( <strong&gt; 2A, B, C). Unter der Annahme, dass mCherry mit der Expression anderer Gene co-elektroporierte korreliert, können Embryonen ausstellenden richtige Ausdruck mCherry dann fixiert und eingebettet werden, um Mittelhirn Kryoschnitten für weitere Untersuchungen (2D) vorzubereiten. Im Allgemeinen kann etwa 50% der ventralen Mittelhirn neuralen Vorläuferzellen effizient mit dem obigen Protokoll transfiziert werden. Die Spezifikation der dopaminergen Schicksal in elektroporierte neuralen Vorläuferzellen durch die Co-Lokalisation von mCherry untersucht werden kann, Gen-Flag-markierte, mit dopaminergen Neuronen-Marker wie Tyrosin-Hydroxylase (TH) (Abbildung 3). Die Strukturierung der Vorläuferzellen Domänen in dem ventralen Mittelhirn kann durch Co-immnostaining Gefrierschnitte mit unterschiedlichen Vorläuferdomäne Marker untersucht werden. Zu wenig mCherry Ausdruck legt nahe, dass ektopische Gene wahrscheinlich nicht effizient ausgedrückt. Embryonen unter dieser Bedingung nicht für weitere Untersuchungen verwendet werden. Ebenso, dass Embryonennicht bis zum Ende des experimentellen Verfahrens überleben können nicht für die Datensammlung und Analyse verwendet werden. <img alt="1" src="/files/ftp_upload/4017/4017fig1.jpg" /> Abbildung 1. Illustration der Embryonenküken Mittelhirn in ovo Elektroporation Assay. HH Stadium 11 embryonalen Hühnerembryonen mit pCAG-mCherry zusammen mit Genen von Interesse mit schnellen Grün gemischt, um die Einspritzung zu visualisieren (A) injiziert. Nach mit DNA-Konstrukten gefüllt sind, midbrains mit einer Rechteckwelle Elektroporator elektroporiert. Die Embryonen werden weiter inkubiert, bis die gewünschte HH Stufe 23 erreicht ist. Dann mCherry-positiven Embryonen werden geerntet, fixiert und Embedded (B). Mittelhirn Kryoschnitten sind mit Schnittebenen durch die weiße Linie in Abbildung 1B angegeben vorbereitet und analysiert durch Immunfärbung mit Mittelhirn Marker wie Tyrosin-Hydroxylase (TH) (C). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/4017/4017fig1large.jpg" target="_blank">Klicken Sie hier</a>für eine größere Abbildung zu sehen. <img alt="2" src="/files/ftp_upload/4017/4017fig2.jpg" /> Abbildung 2. Vorbereitung der Gefrierschnitte aus Embryonenküken Mittelhirn. Nach 41 Stunden Inkubation werden HH Stadium 23 Hühnerembryonen auszudrücken mCherry und Gene von Interesse geerntet (A, B und C), mit PFA fixiert, behandelt mit Saccharose, und eingebettet in Oktober für Kryoschneiden. Hühnerembryonen werden sorgfältig ausgerichtet, um die Vorbereitung des Mittelhirns Abschnitten zu gewährleisten. Eine typische Embryo Morphologie und die Schnittebene für den Erhalt von Mittelhirn Abschnitte werden gezeigt (D). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/4017/4017fig2large.jpg" target="_blank">Klicken Sie hier für eine größere Abbildung anzuzeigen</a> . <img alt="Abbildung 3" src="/files/ftp_upload/4017/4017fig3.jpg" /> Abbildung 3. Analyse der elektroporierte Mittelhirn Abschnitten. Gefrierschnitte von Embryonen mit hoher mCherry Ausdruck (A) werden hergestellt und mit Antikör gefärbten, die die Flag-markierte Gen von Interesse (B) und dopaminergen Mittelhirn Neuronenmarkers TH (C) zu erkennen. Embryonale midbrains mit pCAG-mCherry und pCAG-Flag leeren Vektor als Kontrolle dienen elektroporiert. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/4017/4017fig3large.jpg" target="_blank">Klicken Sie hier für eine größere Abbildung anzuzeigen</a> .

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<li>Blank, M. C., Chizhikov, V., Millen, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Ovo+Electroporations+of+HH+Stage+10+Chicken+Embryos%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos.</a> J. Vis. Exp. (9), e408(2007).</li>
<li>Chesnutt, C., Niswander, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasmid-based+short-hairpin+RNA+interference+in+the+chicken+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">Plasmid-based short-hairpin RNA interference in the chicken embryo.</a> Genesis. 39, 73-78 (2004).</li>
</ol>

Die Autoren haben keinerlei potenzielle Interessenkonflikte offen zu legen.

Die in-ovo-Elektroporation von Embryonenküken Mittelhirn bietet eine kostengünstige und schnelle Alternative zur Erzeugung von transgenen oder Knockout-Tieren in vivo-Studie von Genfunktionen in dopaminergen Mittelhirn-Neuronen Entwicklung durchzuführen. Verwendet man die 2 mm langen L-förmigen Platinelektroden mit embryonalen Mittelhirn-spezifischen DNA-Injektion ist der Schlüssel für eine effiziente Expression des Gens von Interesse in dopaminergen Mittelhirn-Neuronen Vorläuferzellen. Darüber hinaus ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Name des Reagenzes </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td><td> Kommentare </td></tr><tr><td> Befruchtete Hühnereier </td><td> Charles River Laboratories </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Egg Brutkasten </td><td> DQR Fertigung </td><td> 1502 Sportsman </td><td></td></tr><tr><td> BTX Electroporator </td><td> BTX Harvard Apparatus </td><td> ECM830 </td><td></td></tr><tr><td> Elektroden </td><td> BTX Harvard Apparatus </td><td> 45-0162 L-förmigen genetrodes </td><td> Für den Einsatz mit ECM830 Elektroporator </td></tr><tr><td> Platin-Iridium-Draht </td><td> Alfa Aesar </td><td> # 10056 </td><td> 0,5 mm Durchmesser Zur Herstellung der 2 mm langen Elektroden </td></tr><tr><td> Glaskapillare </td><td> World Precision Instruments </td><td> TW100F-4 </td><td></td></tr><tr><td> Microloader Pipettenspitze </td><td> Eppendorf </td><td> 5242 956.003 </td><td></td></tr><tr><td> Tusche </td><td> Staples </td><td></td><td> Filter vor der Verwendung 20% </td></tr><tr><td> Mikroinjektor </td><td> Parker Automation, Parker Hannifin Cooperation </td><td> Picospritzer III </td><td></td></tr><tr><td> Fluoreszierende Dissektionsmikroskop </td><td> Leica </td><td> MZ16F </td><td></td></tr><tr><td> Feinpipettenziehvorrichtung </td><td> Sutter Instrument </td><td> D-97 </td><td></td></tr></tbody></table>

in ovo elektroporation in mittelhirn-küken für studien über genfunktion in dopaminergen neuronen entwicklung

In ovo Electroporation in Chick Midbrain for Studying Gene Function in Dopaminergic Neuron Development

Dopaminergen Neuronen in der ventralen Mittelhirn Kontrolle Bewegung befindet, emotionales Verhalten und Belohnung Mechanismen 3.1. Die Dysfunktion des ventralen Mittelhirn dopaminergen Neuronen in der Parkinson-Krankheit, Schizophrenie, Depression und Demenz 5.1 verwickelt. So konnte die Untersuchung der Regulation der dopaminergen Mittelhirn-Neuronen Differenzierung nicht nur liefern wichtige Einblicke in die Mechanismen, die Mittelhirn Entwicklung und neuronale Vorläuferzellen Schicksal Spezifikation, sondern auch zur Entwicklung neuer therapeutischer Strategien zur Behandlung einer Vielzahl von humanen neurologischen Erkrankungen. Dopaminergen Neuronen differenzieren aus neuralen Vorläuferzellen entlang der ventrikulären Zone der embryonalen ventralen Mittelhirn. Die Entwicklung von neuralen Vorläuferzellen wird durch Genexpression 6,7 gesteuert. Hier berichten wir über Techniken der Verwendung von Elektroporation, um Gene gezielt zum Ausdruck bringen im Mittelhirn der Hamburger Hamilton (HH) Stufe 11 (thirteen Somiten, 42 Stunden) Hühnerembryonen 8,9. Die externe Entwicklung von Hühnerembryonen ermöglicht die komfortable experimentelle Manipulationen an bestimmten embryonalen Stadien, mit den Auswirkungen auf späteren Entwicklungsstadien Zeitpunkten 10-13 bestimmt. Küken embryonalen neuralen Röhren früher als HH Stadium 13 (neunzehn Somiten, 48 Stunden) bestehen aus multipotenten neuralen Vorläuferzellen zur Differenzierung in verschiedene Zelltypen des Nervensystems sind. Die pCAG Vektor, der sowohl einen CMV-Promotor und ein Küken β-Actin-Enhancer enthält, kann für robuste Expression des Flag oder andere Epitop-markierten Konstrukte in Embryonenküken neuronalen Röhren 14. In diesem Bericht möchten wir betonen, besondere Maßnahmen zur regional begrenzten Gen-Expression in embryonalen dopaminergen Mittelhirn-Neuronen-Vorläuferzellen, einschließlich wie man injizieren DNA-Konstrukte gezielt in den embryonalen Mittelhirns Gegend und wie Elektroporation mit kleinen maßgeschneiderten Elektroden lokalisieren zu erreichen. Analysieren von chick Mittelhirn in späteren Stadien eine hervorragende in vivo für Plasmid-Vektor-vermittelte gain-of-Funktion und Loss-of-Funktions-Untersuchungen der Mittelhirn Entwicklung. Modifizierung des experimentellen System kann des Assays, anderen Teilen des Nervensystems erstrecken zum Durchführen Gastrula-Analyse und zur Untersuchung der Regulation der Genexpression.

Um die Funktion und die Regulation von Genen während der Entwicklung der dopaminergen Neurone im Mittelhirn zu bewerten, beschreiben wir eine Methode, die beinhaltet<em&gt; In-ovo-</em&gt; Elektroporation von Plasmid-DNA-Konstrukte in embryonale Küken ventralen Mittelhirn dopaminergen Neuronen Vorfahren. Diese Technik kann verwendet werden, um eine effiziente Expression von Genen des Interesses, um verschiedene Aspekte des Mittelhirns Entwicklung und Differenzierung dopaminergen Neuronen zu untersuchen.

In ovo Elektroporation in Mittelhirn-Küken für Studien über Genfunktion in dopaminergen Neuronen Entwicklung

Dopaminerge Neuronen im ventralen Mittelhirn steuern die Bewegung, das emotionale Verhalten und Belohnungsmechanismen1-3. Die Dysfunktion des ventralen Mittelhirns ...

Dieses Experiment demonstriert die in ovo-Elektroporation des Hühnermittelhirns, um den Effekt der exogenen Genexpression auf die Entwicklung des Mittelhirns und die Differenzierung dopaminerger Neuronen zu untersuchen. Zunächst wird das Mittelhirn von Hamburger-Hamilton-Stage-11-Hühnerembryonen mit dem gewünschten Plasmid-DNA injiziert, um die exogene DNA gezielt in die sich entwickelnde Mittelhirnbläschenregion einzubringen. Anschließend wird unter Verwendung selbstgefertigter kleiner Elektroden das Mittelhirnbläschen elektroporiert, um die exogene DNA spezifisch in die neuralen Vorläuferzellen des Mittelhirns zu übertragen.Als Nächstes gewinnen Sie Embryonen des Stadiums 23 mit guter M-Cherry-Expression im Mittelhirn und stellen optimale transversale Schnitte des Mittelhirns her. Letztendlich kann eine Immunfärbungsanalyse für Marker dopaminergener Neuronen, wie beispielsweise Tyrosinhydroxylase, die Differenzierung neuraler Vorläuferzellen in reife dopaminerge Neuronen zeigen, die durch die Expression von Genen des Interesses induziert wird. Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber anderen bestehenden Methoden der In-ovo-Elektroporation liegt darin, dass mit diesem Protokoll e

in-ovo-electroporation-chick-midbrain-for-studying-gene-function

Research

Forschung

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowissenschaften

Küken in ovo Elektroporation ist eine Technik, die genetische Manipulation der Vogelembryo ermöglicht. Typische Anwendungen für diese Technik sind die funktionelle Analyse von Genen und vermeintlichen Enhancer-Elemente. Dieses Video zeigt Neuralrohr Elektroporation in HH 10 Hühnerembryonen. Injektionstechnik und ordnungsgemäße Eibehandlung werden diskutiert.

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Die Entzifferung Axonal Pathways von genetisch definierte Gruppen von Neuronen in der Küken Neuralrohr Verwendung In ovo Elektroporation

Das übergeordnete Ziel dieses Videos ist zu zeigen, wie die gezielte Injektion Netzhaut führen...

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In ovo Elektroporation von miRNA-basierte Plasmide in der Entwicklung von Neuralrohr und Beurteilung der Phänotypen von DiI Injection in Open-book Vorbereitungen

Ektopische Expression ist eine Technik, um die microRNAs Rolle in der Entwicklung des Gehirns aufzuklären. , Für bestimmte Bereiche mit in ovo Elektroporation ist jedoch eine Herausforderung. Hier zeigen wir einen effizienten Weg, um selektiv elektroporieren ventrale und dorsale Mittelhirn Regionen.

In ovo Expression von microRNA in ventralen Mittelhirn-Küken

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Das Hörorgan vermittelt das Hören. Hier stellen wir eine modifizierte In-Ovo-Mikroelektroporationsmethode vor, die für die Untersuchung der Proliferation und Differenzierung von Vorläuferzellen im sich entwickelnden Hühner-Hörorgan optimiert ist.

Gentransfer in das Huhn Hörorgan von<em&gt; In Ovo</em&gt; Micro-Elektroporation

Auditorische Hirnstamm Neuronen von Vogel und Säugetiere sind spezialisiert auf schnelle neuronale Kodierung, ein grundlegendes Verfahren für normale Hörfunktionen. Diese Neuronen entstehen aus verschiedenen Vorläufern des embryonalen Hinterhirns. Wir präsentieren Techniken, die die Elektroporation verwenden, um Gene im Hirnhirn von Hühnerembryonen zu exprimieren, um die Genfunktion während der auditorischen Entwicklung zu untersuchen.

In Ovo Electroporation im Hühnchen auditorischen Hirnstamm

Das Küken ist ein kostengünstiger, zugänglicher und weit verbreiteter Modellorganismus für eine Vielzahl von Studien. Hier wird eine Reihe von Protokollen detailliert beschrieben, um die molekularen Mechanismen zu verstehen, die der Entwicklung und Regeneration des Vogelinnenohrs zugrunde liegen.

In Ovo und Ex Ovo Methoden zur Untersuchung der Entwicklung des Vogelinnenohrs

In utero Elektroporation ist eine wertvolle Methode zur Transfektion von neuronalen Vorläuferzellen in vivo. Abhängig von der Platzierung der Elektroden und der Entwicklungspsychologie Zeitpunkt der Elektroporation können bestimmte Teilmengen von kortikalen Zellen ausgerichtet werden. Gezielte Zellen können dann in vivo oder in vitro für die Auswirkungen der genetischen Veränderung untersucht werden.

In utero Elektroporation gefolgt von primären neuronalen Kultur für ein Studium Gene Function in Subset von kortikalen Neuronen

Erfahren Sie die In-ovo-Elektroporation im Mittelhirn von Kükenembryonen zur Untersuchung der Genfunktion bei der Entwicklung dopaminerger Neuronen. Diese Methode ermöglicht gezielte Gentransfer-Studien.

In ovo Elektroporation in Mittelhirn-Küken für Studien über Genfunktion in dopaminergen Neuronen Entwicklung

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