Name: Zwei Methoden der Heterokaryon Formation zu entdecken HCV Restriktionsfaktoren (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-07-16T12:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 49 s
Description: Lernen Sie zwei Methoden zur Heterokaryon-Bildung zur Untersuchung von HCV-Restriktionsfaktoren in verschiedenen Zelllinien. Diese Techniken ermöglichen die Identifizierung dominanter Faktoren, die die Produktion infektiöser Hepatitis-C-Virus-Nachkommen inhibieren.

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Wir bedanken uns bei Takaji Wakita und Jens Bukh für JFH1 und J6CF Virusisolate wurde beobachtet. Weiterhin danken wir Charles Rice für Huh-7.5-Zellen und die Antikörper 9E10, Steven Foung für die E2-spezifischen Antikörper CBH-23, und alle Mitglieder der Abteilung für Experimentelle Virologie, Twincore für hilfreiche Anregungen und Diskussionen.

<ol><li>Zhu, Q., Guo, J. T., Seeger, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Replication+of+hepatitis+C+virus+subgenomes+in+nonhepatic+epithelial+and+mouse+hepatoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Replication of hepatitis C virus subgenomes in nonhepatic epithelial and mouse hepatoma cells.</a> J. Virol. 77, 9204-9210 (2003).</li>
<li>Kato, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonhepatic+cell+lines+HeLa+and+293+support+efficient+replication+of+the+hepatitis+C+virus+genotype+2a+subgenomic+replicon%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Nonhepatic cell lines HeLa and 293 support efficient replication of the hepatitis C virus genotype 2a subgenomic replicon.</a> J. Virol. 79, 592-596 (2005).</li>
<li>Ali, S., Pellerin, C., Lamarre, D., Kukolj, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatitis+C+virus+subgenomic+replicons+in+the+human+embryonic+kidney+293+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Hepatitis C virus subgenomic replicons in the human embryonic kidney 293 cell line.</a> J. Virol. 78, 491-501 (2004).</li>
<li>Date, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genotype+2a+hepatitis+C+virus+subgenomic+replicon+can+replicate+in+HepG2+and+IMY-N9+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Genotype 2a hepatitis C virus subgenomic replicon can replicate in HepG2 and IMY-N9 cells.</a> J. Biol. Chem. 279, 22371-22376 (2004).</li>
<li>Chang, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Replication+of+hepatitis+C+virus+%28HCV%29+RNA+in+mouse+embryonic+fibroblasts%3A+protein+kinase+R+%28PKR%29-dependent+and+PKR-independent+mechanisms+for+controlling+HCV+RNA+replication+and+mediating+interferon+activities%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Replication of hepatitis C virus (HCV) RNA in mouse embryonic fibroblasts: protein kinase R (PKR)-dependent and PKR-independent mechanisms for controlling HCV RNA replication and mediating interferon activities.</a> J. Virol. 80, 7364-7374 (2006).</li>
<li>Zhong, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Robust+hepatitis+C+virus+infection+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Robust hepatitis C virus infection in vitro.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102, 9294-9299 (2005).</li>
<li>Lindenbach, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complete+replication+of+hepatitis+C+virus+in+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Complete replication of hepatitis C virus in cell culture.</a> Science. 309, 623-626 (2005).</li>
<li>Wakita, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+infectious+hepatitis+C+virus+in+tissue+culture+from+a+cloned+viral+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Production of infectious hepatitis C virus in tissue culture from a cloned viral genome.</a> Nat. Med. 11, 791-796 (2005).</li>
<li>Witteveldt, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD81+is+dispensable+for+hepatitis+C+virus+cell-to-cell+transmission+in+hepatoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gen.+Virol%22%5BJournal%5D)">CD81 is dispensable for hepatitis C virus cell-to-cell transmission in hepatoma cells.</a> J. Gen. Virol. 90, 48-58 (2009).</li>
<li>Bitzegeio, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptation+of+hepatitis+C+virus+to+mouse+CD81+permits+infection+of+mouse+cells+in+the+absence+of+human+entry+factors%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Adaptation of hepatitis C virus to mouse CD81 permits infection of mouse cells in the absence of human entry factors.</a> PLoS Pathog. 6, e1000978(2010).</li>
<li>Lindemann, D., Goepfert, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+foamy+virus+envelope+glycoproteins%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Top+Microbiol+Immunol%22%5BJournal%5D)">The foamy virus envelope glycoproteins.</a> Curr Top Microbiol Immunol. 277, 111-129 (2003).</li>
<li>Brohm, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+determinants+important+for+hepatitis+C+virus+p7+function+in+morphogenesis+by+using+trans-complementation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Characterization of determinants important for hepatitis C virus p7 function in morphogenesis by using trans-complementation.</a> J. Virol. 83, 11682-11693 (2009).</li>
<li>Steinmann, E., Brohm, C., Kallis, S., Bartenschlager, R., Pietschmann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+trans-encapsidation+of+hepatitis+C+virus+RNAs+into+infectious+virus-like+particles%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Efficient trans-encapsidation of hepatitis C virus RNAs into infectious virus-like particles.</a> J. Virol. 82, 7034-7046 (2008).</li>
<li>Koutsoudakis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+early+steps+of+hepatitis+C+virus+infection+by+using+luciferase+reporter+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Characterization of the early steps of hepatitis C virus infection by using luciferase reporter viruses.</a> J. Virol. 80, 5308-5320 (2006).</li>
<li>Frentzen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Completion+of+hepatitis+C+virus+replication+cycle+in+heterokaryons+excludes+dominant+restrictions+in+human+non-liver+and+mouse+liver+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Completion of hepatitis C virus replication cycle in heterokaryons excludes dominant restrictions in human non-liver and mouse liver cell lines.</a> PLoS Pathog. 7, e1002029(2011).</li>
<li>Lindemann, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+particle-associated+glycoprotein+signal+peptide+essential+for+virus+maturation+and+infectivity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">A particle-associated glycoprotein signal peptide essential for virus maturation and infectivity.</a> J. Virol. 75, 5762-5771 (2001).</li>
<li>Blight, K. J., McKeating, J. A., Rice, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+permissive+cell+lines+for+subgenomic+and+genomic+hepatitis+C+virus+RNA+replication%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Highly permissive cell lines for subgenomic and genomic hepatitis C virus RNA replication.</a> J. Virol. 76, 13001-13014 (2002).</li>
</ol>

TP erhielt Beratungshonorare von Biotest.

Es werden zwei Verfahren zur Bildung Heterokaryon in kultivierten Zellen für die Analyse von dominant-negativen Einschränkungen, die HCV-Replikation entgegen zu induzieren. Mit diesen Verfahren haben wir das Vorhandensein einer dominanten konstitutiv exprimiert oder Virus-induzierte Faktor in verschiedenen humanen nicht-Leber und in Mäuseleber Zelllinien ausgeschlossen. Der erste Test in erster Linie analysiert, wenn Restriktionsfaktoren verhindern HCV Zusammenbau und die Freisetzung von infektiösen Nachkommen. Da in di...

<table border="1"><tbody><tr><td> Name des Reagenzes </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Invitrogen, Karlsruhe, Deutschland </td><td> 41965-039 </td></tr><tr><td> L-Glutamin </td><td> Invitrogen, Karlsruhe, Deutschland </td><td> 25030-024 </td></tr><tr><td> Nicht-essentielle Aminosäuren </td><td> Invitrogen, Karlsruhe, Deutschland </td><td> 11140-035 </td></tr><tr><td> Penicillin / Streptomycin </td><td> Invitrogen, Karlsruhe, Deutschland </td><td> 15140-122 </td></tr><tr><td> Fötales Kälberserum </td><td> PAA, Cölbe, Deutschland </td><td> A15151 </td></tr><tr><td> α-E2 (CBH23) </td><td> freundlicherweise von Steven Foung 10 vorgesehenen </td><td></td></tr><tr><td> ATP </td><td> Sigma, Steinheim, Deutschland </td><td> A2833-106 </td></tr><tr><td> Glutathion </td><td> Sigma, Steinheim, Deutschland </td><td&gt; G4251-1G </td></tr><tr><td> Blasticidin </td><td> Invivo Gen, San Diego, USA </td><td> Ant-BL-1 </td></tr><tr><td> G418 (Geneticin) </td><td> Invitrogen, Karlsruhe, Deutschland </td><td> 11811-064 </td></tr><tr><td> Polyethylen-Glykol-1500 </td><td> Roche, Mannheim, Deutschland </td><td> 10783641001 </td></tr><tr><td> Paraformaldehyd </td><td> Roth, Karlsruhe, Deutschland </td><td> 0.335,3 </td></tr><tr><td> Triton X-100 </td><td> Roth, Karlsruhe, Deutschland </td><td> 3051,2 </td></tr><tr><td> Ziegenserum </td><td> Sigma, Steinheim, Deutschland </td><td> G9023-5 ml </td></tr><tr><td> α-NS5A (9E10) </td><td> Mit freundlicher Unterstützung von Charles Rice 7 vorgesehene </td><td></td></tr><tr><td> DAPI (4 &#39;, 6&#39;-Diamidino-2-phenylindoldihydrochlorid) </td><td> Invitrogen </td><td> D1306 </td></tr><tr><td> Alexa-Fluor 546 - Ziege-Anti-Human-IgG </td><td> Invitrogen, Karlsruhe, Deutschland </td><td> A21089 </td&gt; </tr><tr><td> Alexa-Fluor 488 - Ziege anti-Maus IgG </td><td> Invitrogen, Karlsruhe, Deutschland </td><td> A10680 </td></tr><tr><td> Lipofectamine 2000 </td><td> Invitrogen, Karlsruhe, Deutschland </td><td> 11668-019 </td></tr><tr><td> CellTracker CMTMR </td><td> Invitrogen, Karlsruhe, Deutschland </td><td> C2927 </td></tr><tr><td> CellTracker CMFDA </td><td> Invitrogen, Karlsruhe, Deutschland </td><td> C2925 </td></tr><tr><td> Fluoromount </td><td> Sigma, Steinheim, Deutschland </td><td> F4680-25ML </td></tr><tr><td> Alle anderen Chemikalien </td><td> Roth, Karlsruhe, Deutschland </td><td></td></tr><tr><td> Zellkulturmaterialien </td><td> Sarstedt, Nümbrecht, Deutschland </td><td></td></tr></tbody></table>

zwei methoden der heterokaryon formation zu entdecken hcv restriktionsfaktoren

Two Methods of Heterokaryon Formation to Discover HCV Restriction Factors

Hepatitis C Virus (HCV) ist ein hepatotropen Virus mit einem Host-Bereich beschränkt, um Menschen und Schimpansen. Obwohl HCV-RNA-Replikation in humanen nicht-hepatische und murinen Zelllinien beobachtet, war die Effizienz sehr gering und erforderliche langfristige Auswahlverfahren mit HCV-Replikon-Konstrukten, Antibiotika-dominante selektierbare Marker 1-5. HCV-in-vitro-Forschung ist daher die menschliche Hepatom-Zelllinien permissive für das Eindringen von Viren und die Fertigstellung des viralen Lebenszyklus beschränkt. Aufgrund schmalen Arten Tropismus HCVS, gibt es keine immunkompetenten Kleintiermodell zur Verfügung, die die vollständige HCV Replikationszyklus erhält 6-8. Ineffiziente Replikation von HCV in nicht-menschlichen Zellen, z. B. von der Maus stammt wahrscheinlich wegen des Mangels an genetische Unverträglichkeit wesentlicher Host Abhängigkeit Faktoren und / oder Expression von Restriktionsfaktoren. Wir untersuchten, ob HCV-Vermehrung durch dominante Beschränkung fa wird unterdrücktctors entweder in humanen Zelllinien von nicht-hepatischen Geweben oder in der Leber der Maus-Zelllinien abgeleitet. Zu diesem Zweck haben wir zwei unabhängige bedingten trans-Komplementierung Verfahren, die auf somatische Zellfusion. In beiden Fällen ist die Vollendung des viralen Replikationszyklus nur in den Heterokaryons. Folglich zeigt die erfolgreiche trans-Komplementierung, die durch Messung de novo Produktion von infektiösen viralen Nachkommen bestimmt wird, dass kein beherrschender Beschränkungen. Im Einzelnen wurden subgenomischen HCV-Replikons Tragen eines Luciferase Transgens in sehr freizügigen menschlichen Hepatom-Zellen (Huh-7.5-Zellen) transfiziert. Anschließend wurden diese Zellen co-kultiviert und die mit verschiedenen humanen und murinen Zellen, die HCV-Strukturproteine ​​Kern Hülle 1 und 2 (E1, E2) und akzessorische Proteine ​​p7 und NS2. Vorausgesetzt, dass Zellfusion durch Behandlung mit Polyethylenglykol (PEG) initiiert wurde, veröffentlichte die Kultur infektiösen viralen partikel die naiven Zellen in einem Rezeptor-abhängigen Weise infiziert. Um den Einfluss der beherrschenden Beschränkungen des gesamten viralen Lebenszyklus, einschließlich Eintritt in die Zelle, der RNA-Translation, Replikation und Virus-Assembly beurteilen, nutzten wir einen humanen Leberzellen (Huh-7 Zellen Lunet N 9), die endogene Expression von CD81 fehlt, ein wesentlicher Faktor der HCV-Eintrag. In Abwesenheit von CD81 ektopisch exprimiert, sind diese Zellen im Wesentlichen refraktär HCV-Infektion 10. Wichtig ist, wenn co-kultiviert und verschmolzen mit menschlichen Zellen, die CD81, aber Mangel mindestens ein weiterer entscheidender Faktor Eindringen in die Zelle (dh SR-BI, CLDN1, OCLN) zum Ausdruck bringen, zeigen nur die daraus resultierenden Heterokaryons den kompletten Satz von HCV-Eintrag Faktoren Voraussetzung für die Infektion. Daher, zu analysieren, ob beherrschenden Restriktionsfaktoren unterdrücken Vollendung des HCV-Replikationszyklus fusionierten wir Lunet N Zellen mit verschiedenen Zellen aus Mensch und Maus Ursprungs, das die oben genannten crit zu erfülleneria. Wenn co-kultivierten Zellen mit einem sehr fusogenen viralen Hüllprotein Mutante des Prototyps Foamyvirus (PFV 11) transfiziert wurden und anschließend mit infektiösen HCV-Partikel (die getesteten) herausgefordert wurde de novo Produktion von infektiösem Virus beobachtet. Dies zeigt, dass HCV erfolgreich seine Replikationszyklus in Heterokaryons so dass kein Expression von dominant Restriktionsfaktoren in diesen Zelllinien. Diese neuen bedingten trans-Komplementierung Methoden nützlich sein, einen großen Panel von Zelllinien und primäre Zellen zur Expression von HCV-spezifischen beherrschenden Restriktionsfaktoren zu screenen.

Wir beschreiben zwei Methoden für die bedingte<em&gt; Trans</em&gt;-Komplementation des Hepatitis C Virus (HCV)-Anordnung und der Abschluss des vollständigen viralen Lebenszyklus, die auf Heterokaryon Bildung verlassen. Diese Techniken eignen sich zum Screening auf Zelllinien, die dominierende Einschränkung Faktoren, die Produktion von infektiösen HCV Nachkommen ausschließt auszudrücken.

Zwei Methoden der Heterokaryon Formation zu entdecken HCV Restriktionsfaktoren

Das Hepatitis-C-Virus (HCV) ist ein hepatotropes Virus mit einem Wirtsspektrum, das auf Menschen und Schimpansen beschränkt ist. Obwohl eine HCV-RNA-Replikation in ... beobachtet wurde,

Das Ziel dieses Verfahrens besteht darin, die Auswirkungen von Restriktionsfaktoren auf den Abschluss des Replikationszyklus des Hepatitis-C-Virus in einer beliebigen Zelllinie zu untersuchen, wobei zwei Methoden verwendet werden, die auf der Heca-Bildung basieren. Für die erste Methode beginnen Sie mit dem Kultivieren menschlicher Leberzellen sowie der Heal A- und der Hep 56 1D-Verpackungszellen. Danach wird Hepatitis-C-Virus-RNA mittels Elektroporation in die Leberzellen transfiziert. Anschließend werden die HCV-replizierenden Zellen mittels Polyethylenglykol mit der jeweiligen Verpackungszelllinie fusioniert. Bei der zweiten Fusionsmethode ist der erste Schritt die Herstellung einer HCV-Stammlösung mit hoher Titerzahl.Anschließend werden verschiedene Zelllinien gemeinsam kultiviert und die Zellfusion wird durch Transfektion mit dem Glykoprotein des Prototyp-Foamyvirus induziert. Danach werden die Heterokaryone mit HCV infiziert. Nach einer der beiden Methoden zur Heterokaryon-Bildung wird eine fluoreszenzmikroskopische Analyse durchgeführt, um die Fusion zu bestätigen, und die Produktion infektiöser Partikel wird quantifiziert.Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass

two-methods-heterokaryon-formation-to-discover-hcv-restriction

Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Eine flexible und effiziente Verfahren zur Charakterisierung von Zelltyp-spezifische Protein-Lokalisierung und nukleozytoplasmatischen pendelt beschrieben. Dieser Ansatz nutzt heterokaryon fluoreszenzmarkierten Fusionsproteinen Bild Protein Lokalisierungen nach Zellfusion. Das Protokoll ist offen für Steady-State-Lokalisierungen oder mehrere dynamische Bestimmungen auf Live Cell Imaging basiert.

Heterokaryon Technik zur Analyse von Zelltyp-spezifischen Localization

Source: Ren, S., et al. A Protocol for Analyzing Hepatitis C Virus Replication. J. Vis. Exp. (2014).This video demonstrates an immunofluorescence-based method to detect Hepatitis C virus replication in infected hepatoma cells. The protocol involves cell fixation, antibody staining for viral protein and double-stranded RNA, and visualization using fluorophore-tagged secondary antibodies. Dual signal detection under a fluorescence microscope confirms active viral replication within the host cells.

Immunofluorescence Assay to Detect Hepatitis C Virus Replication Complexes in Infected Cells

Quelle: Ren, S., et al. Ein Protokoll zur Analyse der Replikation des Hepatitis-C-Virus. J. Vis. Exp. (2014)Dieses Video demonstriert den Fluoreszenz-Fokus-Assay, der zur Quantifizierung infektiöser Hepatitis-C-Viren in Zellkultur verwendet wird. Es zeigt die serielle Verdünnung des viralen Überstandes, die Infektion von Hepatomzellen und den Nachweis von Virusreplikationsstellen mittels antikörperbasierter Fluoreszenzmikroskopie.

Quantifizierung des infektiösen Hepatitis-C-Virus mittels Fluoreszenzmikroskopie

Hepatitis-C-Virus (HCV) ist ein wichtiger menschlicher Krankheitserreger, der Lebererkrankungen, einschließlich Leberzirrhose und Krebs, verursacht. Ein HCV-infektiöses Zellkultursystem ist essentiell, um den molekularen Mechanismus der HCV-Replikation zu verstehen und neue Therapieansätze zu entwickeln. Hier beschreiben wir ein Protokoll zur Untersuchung verschiedener Stadien des HCV-Replikationszyklus.

Ein Protokoll für die Analyse von Hepatitis-C-Virus-Replikation

Die Pathogenese von HIV-1 wird sowohl durch virale Eigenschaften als auch durch genetische Faktoren des Wirts definiert. Hier beschreiben wir eine robuste Methode, die reproduzierbare Messungen ermöglicht, um den Einfluss der Variation der Gag-Gensequenz auf die in vitro Replikationskapazität des Virus zu bewerten.

Einem Restriktionsenzym basierte Klonen Methode, um das Beurteilen<em&gt; In-vitro-</em&gt; Replikation Kapazität von HIV-1 Subtyp C-Gag MJ4 chimären Viren

Hier haben wir eine neu entwickelte Hepatitis B-Virus (HBV) Reportersystem beschreiben, die frühen Stadien des HBV-Lebenszyklus zu überwachen. Dieses in vitro System vereinfacht wird in das Screening von anti-HBV - Agenten unterstützen , eine Hochdurchsatz - Strategie.

Entwicklung eines Systems Hepatitis-B-Virus Reporter den frühen Stadien des Replikationszyklus zu überwachen

Lipidtröpfchen sind wichtige Organellen für die Replikation von mehreren Erregern, einschließlich der Hepatitis C-Virus (HCV). Wir beschreiben ein Verfahren für die quantitative Lipidtröpfchen-Massenspektrometrie assoziierter Proteine ​​zu isolieren; es kann unter einer Vielzahl von Bedingungen, wie zum Beispiel Virusinfektion, Umweltstress, oder medikamentöse Behandlung verwendet werden.

Lipid Droplet Isolierung für die quantitative Massenspektrometrie-Analyse

Wir beschreiben hier die in-vitro- Erzeugung von HBV-DNA über eine Hepatitis B-Virus-Infektion-System und die hochempfindliche Erkennung seiner (1 – 2 Kopien)-Integration mit Inverse nested PCR.

Erkennung von niedrigen Kopie Nummer integrierte virale DNA gebildet durch In-vitro- Hepatitis B-Infektion

Hier stellen wir eine Methode zum Screening von Anti-Hepatitis-B-Virusmitteln vor, die die HBx-DDB1-Wechselwirkung mit einem Split-Luziferase-Assay-System hemmen. Dieses System ermöglicht den einfachen Nachweis von Protein-Protein-Wechselwirkungen und eignet sich zur Identifizierung von Inhibitoren solcher Wechselwirkungen.

Identifizieren von Inhibitoren der HBx-DDB1-Wechselwirkung mit einem Split Luciferase Assay System

Das Protokoll beschreibt eine Methode zur Einführung einer kontrollierbaren genetischen Vielfalt in das Genom des Hepatitis-C-Virus durch die Kombination von mutierter RNA-Synthese in voller Länge mit fehleranfälliger PCR und umgekehrter Genetik. Die Methode stellt ein Modell für die Phänotypauswahl dar und kann für 10 kb lange RNA-Virusgenome verwendet werden.

Reverse Genetik zur Entwicklung von RNA-Virusvarianten mit positivem Sinn

Wir präsentieren ein Protokoll zum Screening von Anti-Hepatitis-B-Virus-Verbindungen (HBV), die auf prä- und postvirale Eintrittsphasen abzielen, wobei die isotherme Titrationskalorimetrie verwendet wird, um die Bindungsaffinität (KD) mit dem Wirtsnatriumtaurocholat-Cotransport-Polypeptid zu messen. Die antivirale Wirksamkeit wurde durch die Unterdrückung viraler Lebenszyklusmarker (cccDNA-Bildung, Transkription und virale Assemblierung) bestimmt.

Ein kompetentes Hepatozytenmodell, das den Eintritt von Hepatitis-B-Viren durch Natriumtaurocholat cotransportierendes Polypeptid als therapeutisches Ziel untersucht

Lernen Sie zwei Methoden zur Heterokaryon-Bildung zur Untersuchung von HCV-Restriktionsfaktoren in verschiedenen Zelllinien. Diese Techniken ermöglichen die Identifizierung dominanter Faktoren, die die Produktion infektiöser Hepatitis-C-Virus-Nachkommen inhibieren.

Zwei Methoden der Heterokaryon Formation zu entdecken HCV Restriktionsfaktoren

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