Name: RNA Extraktion aus Neuroprecursor Zellen unter Verwendung des Bio-Rad Total RNA Kit (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-31T23:51:30.000+00:00
Duration: 17 min 25 s
Description: Lernen Sie die RNA-Extraktion aus Neuroprecursor-Zellen mit dem Bio-Rad Total RNA Kit. Diese Methode liefert konsistente Ergebnisse und hohe Ausbeuten aus embryonalen Kortizes für zuverlässige Genexpressionsanalysen.

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rna extraktion aus neuroprecursor zellen unter verwendung des bio-rad total rna kit

RNA Extraction from Neuroprecursor Cells Using the Bio-Rad Total RNA Kit

RNA Extraktion aus Neuroprecursor Zellen unter Verwendung des Bio-Rad Total RNA Kit

Hallo, ich bin Josh Sh, Doktorand im Labor von Dr. Ed Maki an der University of California Irvine. Ich zeige Ihnen, wie man RNA aus neuronalen Vorläuferzellen mit diesem BioRad-to-RNA-Mini-Kit extrahiert. Ich verwende dieses Kit bereits seit mehreren Jahren in diesem Labor und erhalte stets konsistente Ergebnisse mit hohen Ausbeuten.Die Zellen, die wir verwenden, sind Eton-und-ein-Halb-Neuro-Vorläuferzellen, die akut aus embryonalen Kortizes isoliert wurden, und wir geben sie normalerweise in eine 24-Loch-Gewebekulturplatte, die mit PD-L und Laminin beschichtet ist, und ich säte sie mit je hunderttausend Zellen pro Loch aus. Bevor ich beginne, muss ich Ihnen sagen, dass Sie an einer festgelegten Arbeitsfläche arbeiten sollten, die Sie für Ihre RNA-Arbeiten nutzen. Zunächst ist sicherzustellen, dass Ihre RNA-Arbeitsfläche sauber ist.Die geeignete Methode, um die Arbeitsfläche zu reinigen, besteht darin, dieses RNA-Zap zu verwenden. Im Grunde genommen eliminiert es jegliche RNA, da die Substanz die RNA abbaut. Eine weitere Maßnahme ist, stets Handschuhe zu tragen, wenn Sie die Extraktion durchführen, da Ihre Haut voller RNA ist.Daher ist das strengstens untersagt. Okay, was ich hier

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Wir stellen eine Methode zur Erzeugung von cDNA aus Umwelt-mRNA. In der Regel Gesamt-RNA zunächst aus der Umgebung gesammelt, rRNA selektiv entfernt, mRNA wird selektiv verstärkt und cDNA aus der angereicherten mRNA-Pool synthetisiert wird sequenziert. Recovered Sequenzen annotiert werden unter Verwendung von Standard Bioinformatik Techniken, um die exprimierten Gene zu identifizieren.

Analyse von Genexpressionsdaten aus marinen mikrobiellen Gemeinschaften mit Environmental Transcriptomics

Wir beschreiben ein Verfahren mittels Laser-Mikrodissektion zu isolieren und zu extrahieren RNA aus einer homogenen Zellpopulation, pyramidalen Neuronen in der Schicht III des oberen temporalen Gyrus in postmortalen menschlichen Gehirnen. Wir anschließend linear verstärken (T7-based) mRNA und hybridisieren die Probe auf die Affymetrix menschlichen X3P Microarray.

Beziehen High Quality-RNA aus Einzel-Zellpopulationen in menschlichen Postmortem Gehirngewebe

Durch die vorübergehende Natur der pre-mRNA, kann es schwierig sein zu isolieren und zu...

Eine schnelle High-Throughput-Verfahren zur Abbildung Ribonukleoproteine ​​(RNPs) on Human pre-mRNA

In diesem Artikel beschreiben wir eine einfache Methode für die Gewinnung von Einzelzellen aus der Ratte primären neuronalen Kulturen und anschließende Transkriptom-Analyse mit aRNA Verstärkung. Dieser Ansatz ist verallgemeinerbar zu jedem Zelltyp.

Transkriptom-Analyse von Einzelzellen

Eine Schritt für Schritt-Protokoll zur Isolierung und Identifizierung von RNA assoziiert Komplexe durch RIP-Chip.

Verfahren zur Isolierung und Identifizierung von mRNAs, microRNAs und Protein-Komponenten des Ribonucleoprotein Komplexe aus Zellextrakten mit RIP-Chip

RNA-Protein-Wechselwirkungen sind das Herzstück vieler zellulärer Prozesse. Hier beschreiben wir eine in vivo Methode, um spezifische RNA zu isolieren und neue Proteine zu identifizieren, die mit ihr assoziiert sind. Dies könnte ein neues Licht darauf werfen, wie RNAs in der Zelle reguliert werden.

Neuartige RNA-bindende Proteine ​​Isolation durch die rasche Methodik

Die zwei verschiedenen 3' schnelle Verstärkung der cDNA enden (3' Rennen) Protokolle beschrieben hier machen Verwendung von zwei verschiedene DNA-Polymerasen Sequenzen zuordnen, die ein Segment der offenen Leserahmen (ORF), das Stopp-Codon und die gesamte 3' UTR eine Niederschrift mit RNA enthalten aus verschiedenen Krebszelllinien gewonnen.

Anpassung der 3' endet rasche Verstärkung der CDNA Transkripte in Krebs zuordnen

Diese RNA Pulldown-Methode ermöglicht es, die RNA-Ziele eine lange nicht-kodierende RNA (LncRNA) zu identifizieren. Basierend auf der Hybridisierung von hausgemachten, gestaltete Gegenstrang DNA-Oligonukleotid Sonden spezifisch für diese LncRNA in einem entsprechend festen Gewebe oder Zell-Linie, ermöglicht es effizient die Erfassung aller RNA-Ziele von der LncRNA.

RNA-Pulldown-Verfahren, RNA-Ziele eine lange nicht-kodierende RNA zu identifizieren

Circular RNAs (circRNAs) sind nicht-kodierende RNAs, die eine Rolle bei der Transkriptionsregulation und der Vermittlung von Wechselwirkungen zwischen Proteinen spielen können. Nach Der Bewertung verschiedener Parameter für den Aufbau von CircRNA-Sequenzierungsbibliotheken wurde ein Protokoll unter Verwendung der gestrandeten Gesamt-RNA-Bibliotheksvorbereitung mit RNase R-Vorbehandlung erstellt und hier vorgestellt.

Identifizierung von kreisförmigen RNAs mittels RNA-Sequenzierung

Die absolute Quantifizierung der RNA-Sequenzierung (AQRNA-seq) ist eine Technologie, die entwickelt wurde, um die Landschaft aller kleinen RNAs in biologischen Gemischen zu quantifizieren. Hier werden sowohl die Bibliotheksvorbereitung als auch die Datenverarbeitungsschritte von AQRNA-seq demonstriert, wobei Veränderungen im Transfer-RNA (tRNA)-Pool in Mycobacterium bovis BCG während der hungerinduzierten Dormanzphase quantifiziert werden.

AQRNA-seq zur Quantifizierung kleiner RNAs

Lernen Sie die RNA-Extraktion aus Neuroprecursor-Zellen mit dem Bio-Rad Total RNA Kit. Diese Methode liefert konsistente Ergebnisse und hohe Ausbeuten aus embryonalen Kortizes für zuverlässige Genexpressionsanalysen.

RNA Extraktion aus Neuroprecursor Zellen unter Verwendung des Bio-Rad Total RNA Kit

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