Name: Modeling Colitis-assoziierten Krebs mit Azoxymethan (AOM) und Dextransulfat Natrium (DSS) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-09-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 37 s
Description: Lernen Sie ein etabliertes Protokoll zur Induktion von Dickdarmtumoren bei Mäusen mit Azoxymethan und Dextransulfat-Natrium. Dieses zuverlässige Modell erzeugt Tumoren mit morphologischen und molekularen Ähnlichkeiten zum humanen kolitis-assoziierten Karzinom.

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Diese Arbeit wurde zum Teil durch DK089016 und L30 RR030244 (MAC), CA153036 (AS) und P30-DK52574 (der Washington University Digestive Diseases Forschung Core) finanziert. AIT war ein Howard Hughes Medical Institute Medical Research Training Fellow.

Ein. Colitis-assoziierten Cancer Induction <ol><li> Beiseite Käfigen von Geschlecht und Alter abgestimmt 6-8 Wochen alten Mäusen für Versuchs-und Kontrollgruppen verwendet werden. Mäuse können individuell mit Schwanz Markierungen oder Ohr-Clips markiert werden. </li><li> Am Tag 0 Rekord Baseline Gewichten und injizieren Jede Maus intraperitoneal (IP) mit 10 mg / kg des AOM funktionierende Lösung (1 mg / ml in isotonischer Kochsalzlösung, von 10 mg / ml Stammlösung in dH2O verdünnt bei -20 ° C) . Erfahrungsgemäß kann diese Dosis zwischen 7-14 mg / kg und / oder eingestellt werden wiederholt Anfang des Experiments. </li></ol> Achtung: AOM ist ein flüchtiges genotoxische Agenten und sollte sorgfältig nach dem begleitenden MSDS behandelt werden. Verdünnungen sollten in einer chemischen Haube hergestellt werden, auf Eis gehalten, und verworfen folgenden Organ spezifischen Protokolle. <ol start="3"><li> Machen Sie eine 2,5% (2,5 g/100 ml) DSS-Lösung in destilliertem Wasser und durchlaufen eine 0,22 um Celluloseacetat filter durch Vakuum. Diese Dosis kann zwischen 1-3,5% je nach Mausstamm und Umwelt angepasst werden. Einmal hergestellt, DSS-Lösung kann im Kühlschrank aufbewahrt werden bis zu 1 Woche. </li><li> Am Tag 7 Versorgung DSS-Lösung, um Mäuse als Trinkwasser. Etwa 250 ml / Käfig wird jedes Mal neue DSS für maximal 5 Mäuse / Käfig vorgesehen ist, benötigt werden, jedoch sind diese nur Schätzungen und variieren je nach Art der Wasser-Flaschen in Ihrem Tierhaltung verwendet. </li><li> Um eine kontinuierliche Versorgung der DSS für sieben Tage bereitzustellen, sollten DSS-Lösung in saubere Flaschen dreimal (alle 2-3 Tage) während dieser Zeit ausgetauscht werden. Einige Forscher messen die Menge der DSS vor dem Austausch mit neuen Lösung als Maß der Belastung verbraucht. </li><li> Am Tag 14, schalten Käfige zurück zu Standard Trinkwasser für zwei Wochen. </li><li> Wiederholen der Schritte (1.4) - (1.6) an den Tagen 28 und 49, um einen zweiten und dritten Zyklus der DSS. Ein DSS &quot;Zyklus&quot; besteht aus einer Woche DSS im Trinkwassergefolgt von 2 Wochen regelmäßiger (autoklaviert) Wasser. </li></ol> 2. Clinical Assessment Colitis und Tumorprogression <ol><li> Mäuse sollten gewogen / beobachtet werden 2-3 mal pro Woche. Gewichtsverlust in Prozent im Vergleich zum Ausgangswert wird als Surrogat Maßnahme von Colitis Schweregrad eingesetzt. Regelmäßige Bewertungen der rektalen Blutungen, Durchfall oder Prolaps kann man je nach experimentellen Ziele und berichtet werden nach verschiedenen Scoring-Systeme. 9, 10 </li><li> Ein Gewichtsverlust von bis zu 10% mit 2-3 Tagen Durchfall und rektale Blutungen können in der Woche nach einem vollen Zyklus der DSS (tägliche Beobachtung kann während dieser Zeit unmittelbar nach dem DSS Zeitraum nützlich) erwartet werden. </li></ol> Es ist möglich, dass einige Mäuse können nicht wiederhergestellt werden; Mäusen verlieren größer als 20% ihres Gewichtes sind weniger wahrscheinlich, überleben und können frühe Euthanasie erfordern. Eine einzelne IP-Injektion von 0,5 - 1,0 ml Kochsalzlösung in solchen Mäusen kann eine nützliche unterstützende Maßnahme zur Korrektur flui<html> d Volumen verloren aufgrund von Durchfall. 3. Murine Endoskopie (Optional) <ol><li> Endoskopie nach dem zweiten oder dritten Zyklus der DSS kann durchgeführt werden, um das Tumorwachstum in vivo vor der Tötung zu bestätigen. Da die AOM / DSS Modell ist recht zuverlässig in produzierenden Tumoren, ist dieser Schritt in der Regel nicht erforderlich. Nur ein paar Mäuse sollte unter Verwendung dieser Methode, da sie das Potenzial, Mäusetumoren stören muss. 11 </li><li> Anesthetize die Maus mit inhalativen oder injizierbare Sedierung. </li><li> Nach Maus betäubt, sichern Sie die Maus auf einer flachen Platte mit Klebeband am Schwanz und Brust. </li><li> Schieben Sie den Maus-Endoskop in die Maus Mastdarm vorsichtig mit Kochsalzlösung zu füllen und zu bewässern, um intraluminale Sicht zu verbessern und zu entfernen fäkale Inhalt. (Beachte, dass die Endoskopie können auch mit Lufteinblaseinrichtung als Alternative zu Kochsalzlösung und dieser Technik werden kann bieten eine verbesserte Visualisierung des Tumors. 12) </li></ol>e &quot;&gt; 4. Maus Opfer und Colon Harvesting <ol><li> Am Tag 70, sollte jeder AOM / DSS behandelten Maus beherbergen mehrere Kolontumoren und bereit sein, für die Beurteilung. Dieses Datum kann verzögert Wochen bis Monate, wenn größere Tumoren gewünscht werden. (Zu beachten ist, können Mäuse mit schwerer rektale vorgefallene müssen früh eingeschläfert werden, um übermäßige Schmerzen zu Tieren vermeiden, da pro institutionellen animal care Ausschüsse.) </li><li> Vor seziert, individuell einschläfern Mäuse mit Isofluran und Genickbruch (oder andere institutionell anerkannte Methode). Endgewicht und andere Messungen kann zu diesem Zeitpunkt vorgenommen werden. </li><li> Legen Sie die Maus mit ihrer Bauchseite auf ein Schneidebrett ausgesetzt. Bedecken Sie den Bauch mit 70% Ethanol, um Haare verunreinigen die Bauch-Inhalte während der Extraktion des Dickdarms verhindern. </li><li> Verwenden einer Pinzette, um die Mittellinie des Bauches zu erfassen und einen kleinen Einschnitt, um das Bauchfell aussetzen. </li><li> Erweitern diese Schnitt auf jeder Seite des Bauches entlang der Küsten margin. </li><li> Mit einer Schere durch das Becken so geschnitten, dass der Darm kann bis zum anorektalen Übergang geerntet werden. Dies ist wichtig, da DSS ulcerosa Schädigung am größten ist an der distalen Rektum und dementsprechend ist dies der Bereich größter Tumorentwicklung. </li><li> Zusätzliche Geweben wie mesenterischen Lymphknoten kann ebenfalls zu diesem Zeitpunkt geerntet werden. </li></ol> 5. Vorbereiten des Colon für makroskopische Analyse <ol><li> Mit einer 18G Magensonde Nadel an einer 5-ml-Spritze, spülen Sie den Doppelpunkt mit eiskaltem Phosphat-gepufferter Salzlösung (PBS), so dass Flüssigkeit austritt in der physiologischen Richtung. Wenn Kolongewebe für RNA oder Protein-basierte Analyse verwendet wird, kann sie durch Einsatz gehalten vorgekühlte Arbeit Trays kalt werden. </li><li> Öffnen Sie die gespülten Darm längs sein Mesenterium und Farbe auf den kalten Fach. Tumoren sind einfach visualisiert, wenn der Doppelpunkt auf eine dunkle Oberfläche platziert wird. Alternativ kann 1% Alcian blauen Farbstoff angewendet t hervorzuhebenumors. Bewerten Tumors Anzahl und Größe mit einem Lineal oder digitalen Messschieber. </li><li> Kleine Abschnitte des Tumors und benachbarten normalen Gewebe kann zu diesem Zeitpunkt für eine zukünftige Analyse werden durch RNA-, Protein oder immunhistochemische (IHC) Methoden ausgeschnitten, so dass einige Teil des verbleibenden Dickdarms zur histologischen Beurteilung. </li></ol> Digitale Fotografie der Brutto-Darm-Proben unmittelbar nach dem Schritt 5,2 hilfreich sein kann für eine präzise Analyse der Tumorlast, vor allem, wenn wesentliche Teile der Doppelpunkte für andere Formen der Analyse ausgeschnitten wie oben beschrieben. Tumorlast (%) kann als Tumor-Währungsgebiet / insgesamt Darm-Bereich mit freier Software wie ImageJ berechnet werden. 6. Vorbereiten des Colon für die histologische Beurteilung <ol><li> Übernehmen 10% Formalin, um die restlichen Doppelpunkt auf dem kalten Behälter über eine Spritze oder einen Finger. Wodurch das Gewebe für mindestens 30 sec auf diese Weise erleichtert die Übertragung zu fixieren, um die Fixierung Becken. Stellen Sie sicher, restliche Formalin ist wiped off vor dem Lackieren eine neue eröffnet Doppelpunkt auf dem gleichen Tablett. </li><li> Übertragen Doppelpunkte in ein Becken mit 10% Formalin gefüllt und festzunageln an den Rändern. </li><li> Nach 3 Stunden der Fixierung, zu übertragen Doppelpunkte bis 70% Ethanol. Doppelpunkte kann in 70% Ethanol unbegrenzt beibehalten. </li><li> Drei Längsschnitte Doppelpunkt (proximal, Mitte, distal / Rektum) kann in 2% Agar stabilisiert werden und von Paraffineinbettung. Sicherzustellen, dass die proximalen und distalen Kolons Kolon / Rektum ausgerichtet sind einheitlich für jede Maus. </li><li> Dysplasie, Krypta Schäden und Entzündungen können beschrieben und von einer erfahrenen Person beurteilt werden nach zuvor veröffentlichten Protokollen. 10, 13-15 Mäuse kann vor Tag 70 geopfert werden, wenn der Experimentator in Früherkennung dysplastischen Veranstaltungen interessiert ist. </li></ol> 7. Repräsentative Ergebnisse Der AOM / DSS-Modell beschrieben erlaubt dem Forscher, um zuverlässig zu generieren Darm-Tumoren in Mäusen.Tumorwachstum in diesem Modell wird direkt durch den zugehörigen Entzündungsprozess beeinflusst. Colitis Schwere sollte klinisch nach Gewichtsverlust und das Vorhandensein von Durchfall / Hämatochezie (Abbildung 2) überwacht werden. Diese Zeichen der Krankheitsaktivität neigen dazu, von Tag 5 des DSS-Zyklus und für vier oder mehr Tage beginnen, nachdem DSS entfernt wird. Selten können Mäuse mit einer signifikanten rektale Tumorlast zu entwickeln Rektumprolaps. Nach dem zweiten oder dritten DSS-Zyklus Durchfall kann sich hartnäckig. Typischerweise Tumoren vorhanden sind und identifizierbar durch murine Koloskopie vor dem dritten Zyklus der DSS (Abbildung 3). Zusätzliche Zeit und einen dritten Verlauf DSS bewirkt größere Tumore zum Zeitpunkt der Ernte (Abbildung 4). Verwenden von topisch applizierten Alcianblau Beize verwendet werden, um Tumore (Abbildung 5) hervorzuheben. Photographien von Dickdarmtumoren in Erzeugen Tumormessungen die verwendet werden können, um quantitativ zu unterstützen vergleiche Tumor Produktion und Größezwischen experimentellen Gruppen (Abbildung 6). Fixierten und in Paraffin eingebetteten Doppelpunkt Proben können dann für die Histologie oder mit der Verwendung von immunhistochemischen (Abbildung 7 und 8) ausgewertet werden. <img src="/files/ftp_upload/4100/4100fig1.jpg" alt="Abbildung 1" /> Abbildung 1. Schematische Darstellung des AOM und DSS Verwaltung. AOM (10 mg / kg) wird am Tag 0 injiziert. Zu Beginn der zweiten Woche (Tag 7), wurde mit 2,5% DSS-Lösung an Mäuse in ihrem Trinkwasser verabreicht. Sieben Tage von DSS wird von zwei Wochen der autoklavierten Wasser. Zwei weitere Zyklen von DSS sind vor der Tötung verabreicht werden. <img src="/files/ftp_upload/4100/4100fig2.jpg" alt="Abbildung 2" /> Abbildung 2. Mausgewicht im Vergleich zum Ausgangswert bei der AOM-und DSS-Verwaltung. Beachten Sie, dass in der Woche nach jeder DSS-Zyklus, Mäuse los<html> e 5-10% ihres Körpergewichts. Gewichtsverlust in diesem Experiment ist ein Surrogat-Marker für Colitis Schweregrad. <img src="/files/ftp_upload/4100/4100fig3.jpg" alt="Abbildung 3" /> Abbildung 3. Von Tumoren anzeigen in distalen Kolon über murine Endoskopie am Tag 50 von AOM / DSS Behandlung. Man beachte die mehrfache polypoide Massen Behinderung der Lumen des distalen Kolon (b, c) im Vergleich zur normalen Kolon (a). <img src="/files/ftp_upload/4100/4100fig4.jpg" alt="Abbildung 4" /> Abbildung 4. Longitudinally eröffnet Maus Doppelpunkt Veranschaulichung grobe Auftreten von Tumoren. Beachten die höhere Tumorlast im distalen Kolon / Rektum (linken oberen Bild), und die charakteristische rugated Textur des proximalen Kolon (rechts oberen Bild) mit wenig Tumorwachstum. Eine Nahaufnahme des distalen Kolon zeigt zahlreiche Tumoren in verschiedenen Größen (siehe unten). ove_content &quot;fo: keep-together.within-page =&quot; always &quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/4100/4100fig5.jpg" alt="Abbildung 5" /> Abbildung 5. Tumoren durch Anwendung Alcianblau markiert Fleck. Man beachte, wie der Farbstoff die normale Textur der Darm sowie die Grenzen jedes einzelnen Tumors betont. Solche Färbung kann hilfreich sein, in der genauen Messung von Tumor Gebieten Lineal oder digitale Messung. <img src="/files/ftp_upload/4100/4100fig6.jpg" alt="Abbildung 6" /> Abbildung 6. Repräsentative Verteilung der durchschnittlichen Anzahl von Tumoren pro Maus mit AOM / DSS behandelt. Man beachte die Mehrzahl der Tumoren im distalen Kolon befinden und &lt;2 mm Größe. <img src="/files/ftp_upload/4100/4100fig7.jpg" alt="Abbildung 8" /> Abbildung 7. Paraffin eingebetteten Längsschnitte Doppelpunkt in Kassette (oben) eind auf Schlitten nach H &amp; E-Färbung (unten). Beachten Sie, dass Rest-Alcianblau Fleck nicht mit H &amp; E-Färbung stören. Ein großer Tumor auf der Folie Bild (eingekreist) eingekreist. Die Bezeichnungen &quot;distal&quot;, &quot;Mitte&quot; und &quot;proximal&quot; Ergebnis aus Schneiden den gesamten Dickdarm in Terzen zwischen dem Blinddarm und Anus. <img src="/files/ftp_upload/4100/4100fig8.jpg" alt="Abbildung 8" /> Abbildung 8. Repräsentative Histologie des Tumors durch AOM / DSS Verabreichung im distalen Colon. H &amp; E, BrdU und β-Catenin gefärbten Objektträger bei 50X (oben) und 400X (Bodenplatte) bzw. demonstrieren dysplastische Veränderungen ähnlich dem menschlichen Adenokarzinomen des Dickdarms.

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Keine Interessenskonflikte erklärt.

Behandlung von Mäusen mit AOM und DSS rasch und wirksam Modelle menschlichen ulcerosa-assoziierten Krebses. Hypothesen bezüglich erbliche Faktoren, Colitis-assoziierten Krebsarten kann leicht mit gentechnisch veränderten Mäusen studiert werden. 13, 16 Alternativ kann die pharmakologische Wirkung von Targets in ulcerosa-assoziiertem Krebs durch Verwendung Wildtyp-Mäuse können studiert werden. Während dieses Modell wird von Interessenten in der Studie von Kolontumor Entwicklung in d...

<table border="1"><tbody><tr><td> Name des Reagenzes </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td><td> Kommentare </td></tr><tr><td> C57BL/6J Mäuse </td><td> Jackson Laboratory </td><td> 000664 </td><td></td></tr><tr><td> Azoxymethan (AOM) </td><td> Sigma Aldrich </td><td> A5486-100MG </td><td> Stammlösung: verdünnt auf 10 mg / ml in destilliertem Wasser bei -20 ° C als 0,5 gehalten werden - 1 ml Aliquots. Arbeitslösung: verdünnen Lager zu 1 mg / ml in isotonischer (0,9%) Kochsalzlösung </td></tr><tr><td> Dextransulfat Natrium (DSS) </td><td> TdB Consultancy </td><td> DB001 </td><td> MW 40 kDa (36-50 kDa Zubereitungen aus anderen Quellen sind akzeptabel; Das gleiche viel für einen einzigen Experiment verwendet werden) 6 </td></tr><tr><td> Coloviewminiendoscopic System </td><td> Karl Storz </td><td> Mehrere </td><td> Siehe Becker et al. Für detaillierte Erklärung der Ausrüstung und Einrichtung. 11 </td></tr><tr><td> TPP Schnelle FilterMax 500 ml Flasche-Filter, 0,22 um PES </td><td> Midwest Scientific </td><td> TP99500 </td><td> Jede Standard-Gewebekultur-Filter ist akzeptabel </td></tr><tr><td> Ethylalkohol 200 Proof ASC / USP </td><td> Pharmako-Aaper (oder andere) </td><td> 11ACS200 </td><td> Verdünnen, um 70% in destilliertem Wasser </td></tr><tr><td> Isofluran, USP </td><td> Butler Animal Health Versorgung </td><td> 4029405 </td><td> Bewegen Sie die Maus im Glas mit Gaze oder einem kleinen Tuch in Narkose eingeweicht </td></tr><tr><td> 18G Gerade Gavage Needle </td><td> Braintree Scientific </td><td> N-008 </td><td></td></tr><tr><td> Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS) </td><td> SigmaAldrich </td><td> P5493 </td><td> Auf 1x verdünnen (0,01 M) in destilliertem Wasser </td></tr><tr><td> Kalte Tray (Tissue Tek II Cold Plate) </td><td> Fisher Scientific </td><td> NC9491941 </td><td> Lagerung bei -20 ° C </td></tr><tr><td> ImageJ Software </td><td> NIH (kostenloser Download) </td><td></td><td> <a href="http://rsbweb.nih.gov/ij/" target="_blank">http://rsbweb.nih.gov/ij/</a> </td></tr><tr><td> Formaldehyd (37%) </td><td> Fisher Scientific </td><td> F79-500 </td><td> Verdünnt auf 10% in PBS </td></tr><tr><td> BD Bacto Agar </td><td> Fisher Scientific </td><td> DF0140-01-0 </td><td> Verwenden Kochplatte bis 2% ige Lösung in destilliertem Wasser zu schaffen </td></tr><tr><td> Miltex Eye Dressing Forceps </td><td> MedPlus Inc. </td><td> 18-780 </td><td></td></tr><tr><td> Miltex Augenschere </td><td> MedPlus Inc. </td><td> 18-1430 </td> &lt;td&gt; Curved Punkten verhindern Schäden an Dickdarm beim Öffnen. </td></tr><tr><td> Alcianblau 8GX (Pulver) </td><td> Sigma Aldrich </td><td> A5268 </td><td> 1 g Pulver auf 100 ml 3% ige Essigsäure (3 ml Eisessig + 97 ml destilliertem Wasser) </td></tr><tr><td> 1 ml Tuberkulin-Spritze mit angehängten 26 G x 3/8 in intradermalen Nadel Fase </td><td> BD </td><td> 305946 </td><td> Zur Injektion von AOM </td></tr></tbody></table>

modeling colitis-assoziierten krebs mit azoxymethan (aom) und dextransulfat natrium (dss)

Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane (AOM) and Dextran Sulfate Sodium (DSS)

Individuen mit entzündlichen Darmerkrankungen (IBD), wie Morbus Crohn (CD) oder Colitis ulcerosa (UC) sind mit einem erhöhten Risiko der Entwicklung von Darmkrebs (CRC) über gesunden Individuen. Dieses Risiko ist proportional zur Dauer und Ausmaß der Krankheit, mit einer kumulativen Inzidenz so hoch wie 30% bei Personen mit langjähriger UC mit der weit verbreiteten Kolon Engagement. 1 Colonic Dysplasie in IBD und Colitis assoziiertem Krebs (CAC) wird angenommen, dass als Folge entwickeln von wiederholten Zyklen von Epithelzellen Verletzung und Reparatur während diese Zellen in einer chronisch entzündlichen Zytokinmilieu gebadet werden. 2 Während spontane und Colitis-assoziierten Krebserkrankungen die Qualität des Seins Adenokarzinome Aktien, wird die Reihenfolge der zugrunde liegenden molekularen Ereignisse glaubte, anders zu sein. 3 Diese Unterscheidung argumentiert, die Notwendigkeit spezifischer Tiermodelle CAC. Mehrere Mausmodellen derzeit für das Studium der CAC existieren. Dextransulfat Natriumum (DSS), ein Mittel mit direkten toxischen Wirkungen auf das Darmepithel, können im Trinkwasser an Mäuse in mehreren Zyklen, um eine chronische entzündliche Zustand erzeugen verabreicht werden. Bei ausreichender Dauer, werden einige dieser Mäuse entwickeln Tumoren. 4 Tumor Entwicklung in diesem Modell wird beschleunigt, wenn in einer pro-karzinogene verabreicht wird. Hierzu gehören Mäuse mit genetischen Mutationen in der Tumorgenese von Pathways (APC, p53, Msh2) sowie Mäuse mit genotoxischen Agentien (Azoxymethan [AOM], 1,2-Dimethylhydrazin [DMH]). 5 vorbehandelt Die Kombination von DSS mit AOM als Modell für Colitis assoziiertem Krebs hat Popularität für seine Reproduzierbarkeit, Potenz, niedriger Preis, und Benutzerfreundlichkeit gewonnen. Obwohl sie einen gemeinsamen Mechanismus haben, hat AOM sich als wirksamer und stabil in Lösung als DMH. Während Tumor-Entwicklung in anderen Modellen erfordert in der Regel mehrere Monate, entwickeln Mäuse mit AOM injiziert und anschließend mit DSS behandelt ausreichende Tumoren in einems weniger als 7-10 Wochen. 6, 7 Schließlich AOM und DSS kann bei Mäusen jeder genetischen Hintergrund (knock out, transgene, etc.) ohne Kreuzungen werden zu einer bestimmten tumorigenen Belastung verabreicht werden. Hier zeigen wir, ein Protokoll für die Entzündung angetriebenen Kolon Tumorgenese in Mäusen unter Verwendung einer einzigen Injektion von AOM gefolgt von drei Sieben-Tage-Zyklen von DSS über einen Zeitraum von 10 Wochen. Dieses Modell induziert Tumoren mit histologischen und molekularen Veränderungen stark ähneln denjenigen vorkommenden menschlichen CAC und bietet eine sehr wertvolles Modell für die Untersuchung von Onkogenese und Chemoprävention bei dieser Krankheit. 8

Wir demonstrieren ein Protokoll, bei dem Verabreichung des genotoxischen Agens Azoxymethan (AOM) durch drei Zyklen des pro-entzündliches Mittel Dextransulfat-Natrium (DSS) rasch und konsequent befolgt erzeugt Dickdarmtumoren in Mäusen mit morphologischen und molekularen Ähnlichkeiten mit den in menschlichen ulcerosa angesehen -assoziierten Krebserkrankungen.

Modeling Colitis-assoziierten Krebs mit Azoxymethan (AOM) und Dextransulfat Natrium (DSS)

Personen mit chronisch entzündlichen Darmerkrankungen (CED), wie zum Beispiel Morbus Crohn (MC) oder Colitis ulcerosa (CU), haben ein erhöhtes Risiko, ein kolorektales ...

Am Tag null injizierte Myer Azoxymethan oder ein OM in der folgenden Woche. Ihr Trinkwasser wird durch eine Lösung ersetzt, die Natrium-Dextran-Sulfat oder DSS enthält. In der dritten Woche erhalten die Mäuse zwei Wochen lang Wasser.Dieser DSS-Wasserkreislauf wird zwei weitere Male wiederholt. Nach dem zweiten DSS-Zyklus können Mäuse mittels Spiegelung auf Tumore untersucht werden.Nach Woche 10 werden die Mäuse getötet und die Kolons entnommen. Die Kolons werden gespült und längs eröffnet. Die Kolons werden auf Tumorgröße und Anzahl der Tumoren untersucht.Ein Längsschnitt des Kolons in Dritteln kann eingebettet und zur histologischen Analyse eingereicht werden. Mit Hilfe der Lichtmikroskopie können Tumore gezählt und klassifiziert werden. Wir demonstrieren ein Protokoll, bei dem die Verabreichung des genotoxischen Agents a OM gefolgt von drei Zyklen des proinflammatorischen Agents erfolgt.DSS erzeugt rasch und reproduzierbar Kolontumoren bei Mäusen mit morphologischen und molekularen Ähnlichkeiten zu den beim Menschen im Rahmen einer colitisassoziierten Karzinogenese beobachteten Tumoren. Markieren Sie die einzelnen Mäuse am Tag null mit Schwanzmarkierungen oder Ohrkennzeichen, not

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Dextransulfat-Natrium (DSS) im Trinkwasser verabreicht wird eine etablierte murine entzündlichen Verletzungen Modell der akuten Colitis. Dieses Protokoll beschreibt die Methode für die DSS-Behandlung und der Aufbereitung der Gewebe.

Murine Colitis Modeling mit Dextransulfat Sodium (DSS)

Experimentelle Modelle von chronisch entzündlichen Darmerkrankungen haben uns erlaubt, die komplexen angeborenen und adaptiven Immunantwort mit Pathogenese assoziiert zu untersuchen. Mit histologische Scoring, Quantifizierung von pro-inflammatorischen Zytokinen und Myeloperoxidase-Aktivität, kann man anfangen, diese Reaktionen in chronisch entzündlichen Darmerkrankungen gesehen zu beurteilen.

Untersuchung Darmentzündungen in DSS-induzierten Modell der IBD

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Generierung eines PDOX-Mausmodells für Darmkrebs: Untersuchung der Progression von Darmkrebs in einem Mausmodell

Dieses Video demonstriert eine Technik zur Generierung eines chemisch induzierten Mausmodells für Colitis — eine entzündliche Darmerkrankung. Die Maus darf eine Dextran-Natriumsulfat (DSS)-Lösung für eine angemessene Dauer zu sich nehmen. Beim Verzehr schädigt DSS die Schleim- und Epithelschichtbarriere im Dickdarm, so dass Darmmikroben in das darunter liegende Gewebe eindringen können – wo sie von den ansässigen Immunzellen wahrgenommen werden, um eine übertriebene Immunantwort zu vermitteln,...

Eine Technik zur Generierung eines Mausmodells für Dextransulfat-Natrium-induzierte Kolitis

DNBS / TNBS induzierte Colitis bietet eine alternative und kostengünstige Methode, um die Pathobiologie von entzündlichen Darmerkrankungen zu untersuchen. Die in diesem Papier diskutiert Protokoll beschreibt die erfolgreiche Anwendung von DNBS Colitis bei Mäusen und Ratten zu induzieren, und erlaubt es, Host-Mediated-Darm-Reaktionen gründlich zu studieren.

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Nicht-invasive Beurteilung der Wirksamkeit neuer Therapeutika für Darmpathologien Verwenden der seriellen endoskopische Bildgebung von lebenden Mäusen

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Etablierung eines Koloproktitis-Krebsmodells bei Mäusen und Bewertung der therapeutischen Wirkung der chinesischen Medizin

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Modeling Colitis-assoziierten Krebs mit Azoxymethan (AOM) und Dextransulfat Natrium (DSS)

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