Name: Extraktion von Tissue Antigens für funktionelle Assays (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-09-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 32 s
Description: Lernen Sie die Extraktion von Gewebenantigenen für funktionelle T-Zell-Assays. Diese Methode verwendet ein BAW-Gemisch zur Homogenisierung und ermöglicht die sichere Messung von T-Zell-Proliferation und Zytokinsekretion in vitro.

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Diese Arbeit wird durch Zuschüsse aus dem Australian National Health and Medical Research Council (NHMRC # 559007) und der Juvenile Diabetes Research Foundation (JDRF 4-2006-1025) und der betrieblichen Infrastruktur Schema des viktorianischen Regierung unterstützt. Wir danken den Mitgliedern des Tom Mandel Inseltransplantation Programm Inselisolierung Team für die Bereitstellung der menschlichen Geweben. Menschliche Gewebe wurden gesammelt und mit lokalen ethischen Zulassung verwendet (St. Vincent Hospital HREC-A 011/04 und St. Vincent Gesundheit HREC-A 135/08).

Ein. Vorbereiten Milzgewebe <ol><li> Hinweis-all menschlichem Material sollten als potenziell infektiös und alle Verfahren sollten in einer Klasse II Laminar Flow Cabinet durchgeführt werden behandelt werden. Verwendung steriler Schere und Pinzette Fett und Bindegewebe aus Milz Abschnitte (~ 1-2 cm groß) und schneiden Sie so viel von der äußeren Kapsel Material wie möglich. </li><li> Schneiden Sie ein kleines Stück (1-2 cm 3) von Milzgewebe und platzieren Sie jedes Stück in einem sterilen 50 ml-Falcon-Röhrchen. </li><li> Snap-frieren die Gewebestücke durch Eintauchen in flüssigen N 2. </li><li> Lagerung bei -80 ° C. Ein ähnliches Protokoll ist für andere Gewebe (n). </li></ol> 2. Herstellung von Human Islet für Storage <ol><li> Kultur Inseln in CMRL Medien. Sammle Inselchen in einem 10 ml konischen Boden Rohr und waschen zweimal in PBS durch Zentrifugation bei 1.500 rpm für 5 min. Abgießen, PBS und lassen Sie das restliche Puffer, indem das invertierte Rohr kurz auf einem Papiertuch. Achten Sie darauf,um die Inseln zu vertreiben. </li><li> Nach dem Abtropfen, re-cap die Röhre und Snap-freeze in flüssigem Stickstoff eingefroren und bei -80 ° C. </li></ol> 3. Vorbereiten Extract <ol><li> Bereiten BAW-Mix (10:30:60% v / v) und bei 4 ° C. </li><li> Entfernen Sie den Schlauch von -80 ° C. Bei Raumtemperatur auftauen. </li><li> Ausreichend eiskalten BAW, um das Stück von Gewebe zu decken. Für Inselchen verwenden 3-5 ml. Für Milzgewebe verwenden 10-20 ml je nach Größe des Stückes von Gewebe. </li><li> Montieren Sie den Gewebehomogenisator. Reinigen durch &quot;Homogenisieren&quot; 10-20 ml 70% Ethanol / Wasser. </li><li> Homogenisieren des Gewebes in mehrere Bursts, nach dem Aufsetzen des Homogenisators Sonde in das Rohr mit dem Gewebe und BAW Lösung. Halten Sie das Rohr in einem Eis-Eimer danach. </li><li> Reinigen Sie den Homogenisator zwischen den Proben, durch Homogenisieren 10-20 ml 70% Ethanol / Wasser und dann BAW-Puffer. Dies verhindert Kreuzkontamination von Gewebe zwischen samples.Dismantleand sauber mit 70% Ethanol / Wasser nach unsE. </li><li> Wenn ein Extrakt, der nur lösliche Material benötigt, zentrifugieren homogenisierte Gewebeextrakt bei 4.000 Upm bei RT für 10 min. Wenn ein Rohextrakt mehr erforderlich ist, bei 1000 Upm bei RT für 5 min drehen. Die am besten geeignete Methode zur Extraktion der BAW-unlösliche Proteine ​​hängt vom nachgeschaltete Analyse der Proteine. Für den Einsatz in der funktionellen immunologischen Assays würden wir vorschlagen, versuchen, die unlösliche Fraktion in 8 M Harnstoff aufzulösen, wie wir zuvor gefunden haben dies gut verträglich zu sein 6. </li><li> Überstand in ein sauberes Röhrchen und legte es auf Eis. </li><li> Bestimmung der Konzentration von Protein in der Extrakt unter Verwendung eines BCA-Assay oder ähnliches. </li></ol> 4. Gefriertrocknung Auszüge <ol><li> Je nach der Masse des Proteins erforderlich (dh, 100 ug pro Röhrchen), verdünnt das Homogenat und abzugeben entsprechend Aliquots in 5,0 ml steriler markierten, Falcon (12x75 mm) Tuben. Wir verwenden häufig 100 ug / Rohr. </li><li> Verwenden Sie eine 18-20 Gauge sterilen Injektionsnadel bis 3 Löcher in der Kappe jeder Röhre zu machen. </li><li> Frieren Rohre entweder, indem sie auf Trockeneis für ~ 10 min oder in einem -80 ° C Gefrierschrank für&gt; 1 Stunde. Lagerung bei -80 ° C bis zum auf dem Lyophilisator setzen. </li><li> Schalten Sie Gefriertrockner und ermöglichen äquilibrieren (-100 ° C). Dieser Vorgang dauert ca. 30 min. </li><li> Je nach Volumen kann Gefriertrocknung innerhalb von 3 Stunden abgeschlossen sein, aber wir routinemäßig verlassen unsere Proben über Nacht. </li><li> Nach Beendigung des Trocknungszyklus, Abschaltung Vakuumpumpe und langsam ermöglichen Druck in der Kammer. Entfernen Rack. </li><li> In einer sterilen Haube, entfernen Sie die Lochkappen aus den Rohren und durch neue ersetzen (Falcon 352.032). </li><li> Röhrchen bei -20 ° C. Proben können in Kulturmedien oder andere Puffer rekonstituiert werden, und verwendet in Funktion oder biochemischen Assays. </li></ol> 5. Repräsentative Ergebnisse Abbildung 1 zeigt die Färbung eines ProteinsGel mit Extrakt aus der Milz und Inselchen erschöpft Pankreasgewebe (beschriftet acinar) und gereinigten menschlichen Inseln (mit Inseln) geladen. Die Ergebnisse zeigen eine gute Darstellung der Proteine ​​verschiedener Molekulargewicht für jedes Gewebe. Die Kapazität Gewebeextrakten die menschliche T-Zell-Proliferation zu stimulieren, wurde getestet unter Verwendung eines CFSE basierenden Proliferationsassay 7 (Abbildung 2). Die PBMC in diesem Test verwendet wurden von einem Individuum mit Diabetes Typ 1 isoliert. Das Ausmaß der Reaktion wird als Verhältnis der Anzahl der Zellen pro CFSE dim 5000 CD4 +, CFSE hellen Zellen ohne Antigen exprimiert: der CFSE dim Zellen pro 5000 CD4 +, CFSE hellen Zellen mit Antigen aus Dreifachproben 7. Die Ergebnisse zeigen eine schwache, aber nachweisbare, Proliferation als Reaktion auf Azinuszellen (CD1 = 3,5) und eine stärkere Reaktion auf islet Extrakt (6,8). Inaktivierten Influenza-Virus (CDI = 142,6) als enthaltenpositive Kontrolle. <img alt="Abbildung 1" src="/files/ftp_upload/4230/4230fig1.jpg" /> Abbildung 1. Protein-Gel. <img alt="Abbildung 2" src="/files/ftp_upload/4230/4230fig2.jpg" /> Abbildung 2. Ergebnisse einer CFSE-basierte Proliferationsassay gegen acinar und Inselchen Extrakt. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/4230/4230fig2large.jpg" target="_blank">Klicken Sie hier für eine größere Abbildung zu sehen</a> .

<ol><li>Mannering, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+approaches+to+measuring+human+islet-antigen+specific+T+cell+function+in+type+1+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Current approaches to measuring human islet-antigen specific T cell function in type 1 diabetes.</a> Clin. Exp. Immunol. 162, 197-209 (2010).</li>
<li>Beckhove, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+T+cell-based+identification+of+human+tumor+tissue+antigens+by+automated+two-dimensional+protein+fractionation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Rapid T cell-based identification of human tumor tissue antigens by automated two-dimensional protein fractionation.</a> J. Clin. Invest. 120, 2230-2242 (2010).</li>
<li>Mannering, S. I., Brodnicki, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+insights+into+CD4%2B+T-cell+specificity+and+function+in+Type+1+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Review+of+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Recent insights into CD4+ T-cell specificity and function in Type 1 diabetes.</a> Expert Review of Clinical Immunology. 3, 557-564 (2007).</li>
<li>Mannering, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+A-chain+of+insulin+is+a+hot-spot+for+CD4%2B+T+cell+epitopes+in+human+type+1+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Immunol%22%5BJournal%5D)">The A-chain of insulin is a hot-spot for CD4+ T cell epitopes in human type 1 diabetes.</a> Clin. Exp. Immunol. 156, 226-231 (2009).</li>
<li>Mannering, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+insulin+A-chain+epitope+recognized+by+human+T+cells+is+posttranslationally+modified%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">The insulin A-chain epitope recognized by human T cells is posttranslationally modified.</a> J. Exp. Med. 202, 1191-1197 (2005).</li>
<li>Moon, H. C., Joffe, M., Thomas, H. E., Kay, T. W. H., Mannering, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+extracting+tissue+proteins+for+use+in+lymphocyte+function+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">A method for extracting tissue proteins for use in lymphocyte function assays.</a> Journal of Immunological Methods. 359, 56-60 (2010).</li>
<li>Mannering, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+sensitive+method+for+detecting+proliferation+of+rare+autoantigen-specific+human+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol.+Methods%22%5BJournal%5D)">A sensitive method for detecting proliferation of rare autoantigen-specific human T cells.</a> J. Immunol. Methods. 283, 173-183 (2003).</li>
<li>Mannering, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4%2B+T+Cell+Proliferation+in+Response+to+GAD+and+Proinsulin+in+Healthy%2C+Pre-diabetic%2C+and+Diabetic+Donors%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+N.Y.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">CD4+ T Cell Proliferation in Response to GAD and Proinsulin in Healthy, Pre-diabetic, and Diabetic Donors.</a> Ann. N.Y. Acad. Sci. 1037, 16-21 (2004).</li>
<li>Mannering, S. I., Purcell, A. W., Honeyman, M. C., McCluskey, J., Harrison, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+T-cells+recognise+N-terminally+Fmoc-modified+peptide%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Human T-cells recognise N-terminally Fmoc-modified peptide.</a> Vaccine. 21, 3638-3646 (2003).</li>
<li>Peakman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+preparations+of+GAD65%2C+proinsulin%2C+and+the+islet+tyrosine+phosphatase+IA-2+for+use+in+detection+of+autoreactive+T-cells+in+type+1+diabetes%3A+report+of+phase+II+of+the+Second+International+Immunology+of+Diabetes+Society+Workshop+for+Standardization+of+T-cell+assays+in+type+1+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Characterization of preparations of GAD65, proinsulin, and the islet tyrosine phosphatase IA-2 for use in detection of autoreactive T-cells in type 1 diabetes: report of phase II of the Second International Immunology of Diabetes Society Workshop for Standardization of T-cell assays in type 1 diabetes.</a> Diabetes. 50, 1749-1754 (2001).</li>
<li>Honey, K., Rudensky, A. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysosomal+cysteine+proteases+regulate+antigen+presentation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Lysosomal cysteine proteases regulate antigen presentation.</a> Nat. Rev. Immunol. 3, 472-482 (2003).</li>
</ol>

Keine Interessenskonflikte erklärt.

Dieses Protokoll wurde entwickelt, weil wir einen Auszug aus menschlichem Gewebe, die frei von giftigen Chemikalien wie Wasch war erzeugen wollte. Insbesondere haben wir es verwendet, um Auszüge aus menschlichem Gewebe, die in Tests des menschlichen Immunsystems in vitro verwendet werden vorzubereiten. Extrakte hergestellt unter Verwendung dieses Protokolls können gleichermaßen in einem Puffer rekonstituiert werden und für viele biochemische Analysen, wie Western-Blot oder Flüssigkeitschromatographie. Dies mach...

<table border="1"><tbody><tr><td> Name des Reagenzes </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td><td> Kommentare </td></tr><tr><td> 5 ml 12 x 75 mm sterile Polystyrolröhrchen </td><td> BD Falcon </td><td> 352054 </td><td></td></tr><tr><td> Caps für Rohre Polystyrolröhrchen (oben) </td><td> BD Falcon </td><td> 352032 </td><td></td></tr><tr><td> 50ml sterilen Röhrchen </td><td> Becton Dickinson </td><td> 352070 </td><td></td></tr><tr><td> Acetonitril </td><td> Mallinckradt Chemicals </td><td> 2856-10 </td><td></td></tr><tr><td> Butan-1-ol </td><td> Sigma Aldrich </td><td> 537.993-IL </td><td></td></tr><tr><td> Homogenisator: PRO200 </td><td> Bio-Strategie </td><td> 01-01200 </td><td> 10 x 115 mm Sägezahngenerator </td></tr><tr><td> Lyophilizer </td><td></td><td></td><td> Virtis, Benchtop 4K </td></tr><tr><td> Sterile Nadel 18-20 Gauge </td><td> Becton Dickinson </td><td> REF 302032 </td><td></td></tr><tr><td> CMRL-1066 Medium </td><td> Sigma </td><td> C0422 </td><td></td></tr><tr><td> PBS </td><td> Sigma </td><td> D8537 </td><td></td></tr></tbody></table> Tabelle 1. Spezifisch Reagenzien und Ausrüstung.

extraktion von tissue antigens für funktionelle assays

Extraction of Tissue Antigens for Functional Assays

Viele der Antigen-Targets der adaptiven Immunantwort, durch B-und T-Zellen erkannt wird, wurden nicht 1 definiert. Dies gilt insbesondere bei Autoimmunerkrankungen und Krebs 2. Unser Ziel ist es, die Antigene von menschlichen T-Zellen in der Autoimmunerkrankung Typ-1-Diabetes 1,3,4,5 erkannt zu untersuchen. Die menschliche T-Zell-Antworten gegen Gewebe, wo die Antigene durch T-Zellen erkannt werden nicht identifiziert analysieren wir ein Verfahren entwickelt, um Protein-Antigenen aus humanem Gewebe in einem Format, das kompatibel mit funktionellen Assays 6 ist extrahieren. Zuvor T-Zell-Antworten auf ungereinigten Gewebeextrakten konnte nicht gemessen werden, da die Extraktions-Verfahren liefern ein Lysat, daß Waschmittel, die toxisch für humane periphere mononukleare Zellen enthalten sein. Hier beschreiben wir ein Protokoll zur Extraktion von Proteinen aus humanen Geweben in einem Format, das nicht toxisch für humane T-Zellen. Das Gewebe wird in einem Gemisch aus Butan-1-ol, Acetonitril und homogenisiert water (BAW). Die Proteinkonzentration in der Gewebeextrakt gemessen wird und ein bekannter Masse von Protein wird in Röhrchen aliquotiert. Nach der Extraktion werden die organischen Lösungsmittel durch Lyophilisierung entfernt. Lyophilisierte Gewebeextrakten gespeichert, bis sie benötigt werden. Zur Verwendung in Tests der Immunfunktion eine Suspension von Immunzellen in geeigneten Kulturmedien, kann direkt an die lyophilisierte Extrakt zugesetzt werden. Proliferation und Zytokin-Produktion durch PBMC in Reaktion auf Extrakte hergestellt unter Verwendung dieses Verfahrens wurden leicht gemessen. Daher ermöglicht unser Verfahren die rasche Herstellung von menschlichem Gewebe-Lysaten, die als Quelle von Antigenen bei der Analyse der T-Zell-Reaktionen verwendet werden kann. Wir schlagen vor, dass diese Methode die Analyse der adaptiven Immunantwort auf Gewebe in der Transplantationsmedizin, Krebs und Autoimmunität erleichtern.

Ein einfaches Protokoll zur Herstellung von menschlichem Gewebe-Extrakten, die als Quelle von Antigenen in funktioneller T-Zell-Assays verwendet werden beschrieben. Diese Methode ermöglicht es T-Zellen-Reaktionen auf Gewebe stammenden Antigenen zu messenden<em&gt; In vitro</em&gt;.

Extraktion von Tissue Antigens für funktionelle Assays

Viele der Antigenziele der adaptiven Immunantwort, die von B- und T-Zellen erkannt werden, sind noch nicht definiert worden 1. Dies gilt insbesondere für Autoimmunerkrankungen ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, einen Gewebeextrakt herzustellen, der mit funktionellen immunologischen Assays kompatibel ist. Dies wird erreicht, indem zunächst eine Probe des betreffenden Gewebes gesammelt wird. Anschließend wird die Gewebeprobe in einer Mischung aus Butanol, Acetonitril und Wasser, oder BAW, homogenisiert.Nach der Bestimmung der Protein­konzentration wird der Extrakt portioniert und lyophilisiert, um Lösungsmittel zu entfernen. Schließlich wird der rekonstituierte Extrakt als Antigenquelle in Proliferations­assays oder Zytokin­sekretions­assays mit humanen T-Zellen verwendet. Der Hauptvorteil dieser Methode gegenüber etablierten Verfahren wie der Detergenzlyse besteht darin, dass der Extrakt frei von toxischen Lösungsmitteln und Detergenzien ist.In diesem Protokoll müssen alle humanen Materialien als potenziell infektiös behandelt werden, und alle Verfahren sollten in einem Laminar-Fluss-Gerät der Klasse zwei durchgeführt werden. Entfernen Sie mithilfe steriler Scheren und Pinzetten Fett- und Bindegewebe von Milzabschnitten mit einer Größe von etwa ein bis zwei Zentimetern. Entfernen Sie so viel wie möglich vom äußeren Kapselmaterial.Schn

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Ein Protokoll für die Vorbereitung der robuste, kleine HeLa Kernextrakten beschrieben wird. Dieses Protokoll ist wertvoll für Tests, die Verwendung von kleinen Populationen von Zellen, wie Zellen mit Medikamenten oder RNAi behandelt erfordern. Verfahren sollte für eine Vielzahl von Genexpressions und anderen Zelltypen, einschließlich Zellen des Patienten.

Small-scale Kernextrakten für funktionelle Assays von Gen-Expression Machineries

Dieses Video zeigt die Verwendung des ELISpot-Assays zur Beurteilung der Funktion von Antikörper-sezernierenden B-Zellen, ASCs. Die von den ASCs sezernierten Antikörper interagieren mit den membrangebundenen polyklonalen Antikörperfragmenten, die von den enzymkonjugierten IgG- oder IgM-Antikörpern nachgewiesen werden. Der farbige Fleck, der in jeder Vertiefung produziert wird, zeigt das Vorhandensein des Isotyps des spezifischen Antikörpers an, der mit der sekretorischen Aktivität der B-Zellen...

Funktionelle Bewertung von Antikörper-sezernierenden B-Zellen mittels ELISpot-Assay

Wir präsentieren hier ein optimiertes, detailliertes Protokoll für die Doppelimmunfärbung in Formalin-fixierten, in Paraffin eingebetteten Gewebeschnitten des Zentralnervensystems (ZNS) und des peripheren Lymphknotens (LN) von Ratten.

Immunhistochemische Analyse im Rat des Zentralnervensystems und peripheren Lymphknoten Gewebeschnitte

Translationale Krebsforschung ist auf die Extraktion von menschlichem Gewebe angewiesen. Viel Arbeit wurde in die Optimierung der Extraktionsmethoden für die ex vivo-Analyse gesteckt. Hier beschreiben wir Gewebeaufbereitungsmethoden, die eine maximale Datenausgabe aus begrenzten Proben ermöglichen.

Arbeiten mit menschlichen Geweben für Translationale Krebsforschung

Eine einfache aber wirksame Methode, die magnetischen Nanopartikel verwendet antigen-reaktiven B-Zellen für die funktionale und phänotypische Analyse zu erfassen und zu bereichern beschrieben.

Detektion und Anreicherung von Rare Antigen-spezifische B-Zellen für die Analyse von Phänotypen und Funktion

Hier beschreiben wir eine Methode, die kombiniert in Situ MHC-Tetramer Färbung mit Immunohistochemistry, Lokalisierung, Phänotyp und Menge an Antigen-spezifische T-Zellen im Gewebe zu bestimmen. Dieses Protokoll wird verwendet, um die räumliche und phänotypischen Merkmale der Antigen-spezifische CD8 T-Zellen im Vergleich zu anderen Zelltyp und Strukturen im Gewebe zu bestimmen.

In Situ MHC-Tetramer Färbung und Quantitative Analyse zur Bestimmung der Lage, Fülle und Phänotyp der Antigen-spezifische CD8-T-Zellen in den Geweben

Fehlanpassungen in human Leukocyte Antigen (HLA) Sequenzen zwischen Organspender und Empfänger-Paare sind die Hauptursache der Antikörper-vermittelten Ablehnung im Organ-Transplantation. Hier präsentieren wir Ihnen die Verwendung von benutzerdefinierten Antigen-Arrays, die auf einzelnen Spendern HLA Sequenzen, Anti-Spender HLA Alloantibodies in Organempfängern Sonde basieren.

Personalisierte Peptidarrays für die Erkennung von HLA Alloantibodies in Organtransplantation

Wir beschreiben eine schnelle Färbemethode zur multispektralen Bildgebung an gefrorenen Geweben.

Eine schnelle Methode zur multispektralen Fluoreszenz-Bildgebung von tiefgefrorenen Gewebeabschnitten

Vollblutbasierte Immunoassays bieten ein einfaches und ressourceneffizientes Werkzeug zur Analyse der antigenspezifischen Immunität für Diagnose- und Forschungszwecke. Dieser Artikel bietet ein optimiertes Vollblut-basiertes Protokoll mit dualer Co-Stimulation für eine umfassende Analyse der Immunität des Wirts gegen pilzliche und virale Krankheitserreger, einschließlich einer Version mit geringem Volumen für pädiatrische Patienten und Kleintiere.

Vollblutassay mit dualer Co-Stimulation zur antigenspezifischen Analyse der Immunität des Wirts gegen pilzliche und virale Krankheitserreger

Wir bieten ein detailliertes Protokoll für die Isolierung und Identifizierung seltener antigenspezifischer T-Zellpopulationen in der Lunge von Mäusen durch magnetische T-Zell-Anreicherung und Peptid:Major Histocompatibility Complex (MHC)-Tetramere.

Identifizierung seltener antigenspezifischer T-Zellen aus der Lunge von Mäusen mit Peptid:Major-Histokompatibilitätskomplex-Tetrameren

Lernen Sie die Extraktion von Gewebenantigenen für funktionelle T-Zell-Assays. Diese Methode verwendet ein BAW-Gemisch zur Homogenisierung und ermöglicht die sichere Messung von T-Zell-Proliferation und Zytokinsekretion in vitro.

Extraktion von Tissue Antigens für funktionelle Assays

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