Name: Eine neue Methode für die Kultur und polarisierte Stimulation der menschlichen Darmschleimhaut Explantate (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-05-01T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 38 s
Description: Erfahren Sie eine neue Methode zur Kultur und polarisierten Stimulation menschlicher Darmschleimhaut-Explantate. Diese Technik ermöglicht die Analyse von bis zu 20 Bedingungen gleichzeitig und liefert Einblicke in die Immunantwort.

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Wir danken Erika Mileti für hervorragende technische Unterstützung und Dr. Antonio Di Sabatino für die Bereitstellung der Sauerstoff Kammern. Finanzierung: und Fondazione Cariplo zu MR und Unterstützung durch einen internationalen Marie-Curie Training Mobilität Netzwerk (Cross-Talk, Finanzhilfevereinbarung Nr.: 21553-2) an: Diese Arbeit wurde durch Zuschüsse aus dem 7. EU-Rahmenprogramm (Dendroworld IBDase, ERC) unterstützt KT.

1. Beziehen und Vorbereiten des Tissue <ol><li> Tissue (gesund oder IBD Schleimhaut) wird während der Operation erhalten. Sobald die Probe Transfer zum Labor herausgeschnitten so bald wie möglich, indem sie es in Ca + + / Mg + +-freiem HBSS-Puffer mit Pen / Strep bei 4 ° C oder auf Eis ergänzt. </li></ol> * Die Größe der Probe hängt von der Verfügbarkeit des Gewebes: die Teil des Gewebes erhalten, ist streng, was nicht für die Diagnose benötigt und kann stark variieren zwischen gesund und IBD Themen. Gesundes Gewebe wird von Patienten, die operiert für Darmkrebs ausgeschnitten. <ol start="2"><li> Waschen Sie das Gewebe schonend und reinigen aller mesenterialen Material. Trennen der Schicht von der Schleimhaut Submukosa mit sterilen Scheren und Zangen, während das Gewebe in HBSS-Puffer in einer Petrischale (nicht getaucht). Berühren Sie die Oberfläche der Schleimhaut mit der Zange so wenig wie möglich. </li><li> Cut Schleimhaut in Streifen mindestens 1 cm breit und so lang wie möglich. Verwenden Sie zwei sterile Skalpelle, viel, als ob Sie Ihre Lebensmittel schneiden wurden. </li><li> Waschen Sie reinigen sanft Schleimhaut in HBSS und erweitern sie auf einer Petrischale mit der apikalen Seite nach oben zeigt. </li></ol> 2. Montage des Tissue <ol><li> Bereiten Sie frisches Medium (tisDMEM). Verwenden DMEM mit Glutamin (2 mM) und NaPyr (1 mM) ergänzt, und fügen Sie 15% FBS-Na (Fetal Bovine Serum - North American), 1% ITS-X und 200 ng / ml EGF zum Zeitpunkt der Verwendung. </li><li> Füllen Sie eine 10 cm Petrischale mit dem Rest der FBS-Na (verwenden Sie etwa 30 ml, so dass Metallgitter vollständig untergetaucht werden) und tauchen die Metallgitter. Halten Sie die Platte öffnen und unterstützt die Kunststoff-Zylinder auf seinem Hahn. </li></ol> * Die Metallgitter sind aus Eisen hergestellt. Das Netz ist quadratisch mit einer Seitenlänge von 0,5 mm. <ol start="3"><li> Take 3 ul chirurgische Kleber mit einem 10 oder 20 ul Pipette. Wenden Sie es sorgfältig, um eine der Grenzen eines Kunststoff-Zylinder, während es fIRM mit der Pinzette. </li><li> Sanft legen den Zylinder auf der apikalen Seite der Schleimhaut möglichst nahe an einem der Ränder des Streifens wie möglich. </li><li> Um die Zeit zu geben, kleben fest an den Zylinder auf dem Gewebe, bereiten Sie das Zentrum gut Organkultur Platte: Dosieren 850 ul-1 ml Medium im Zentrum gut und unterstützen die Metallgitter an den Kanten der Platte zentralen gut. </li><li> Schneiden Sie überschüssiges Gewebe von den Grenzen des Zylinders mit zwei sterile Skalpelle wie zuvor. </li><li> Heben Sie den Zylinder mit dem beigefügten Gewebe und platzieren Sie den basolateralen Seite auf dem Metallgitter in der Mitte der Platte. </li></ol> 3. Stimulation <ol><li> Verwenden Sie die Reize Ihrer Wahl in Ihre bevorzugte Konzentration. </li><li> Tragen Sie geeignete Volumen in der Mitte des Kunststoff-Zylinder ohne die Zylinder oder die Schleimhaut mit der Pipettenspitze. Stellen Sie sicher, dass Ihre gewählte Lautstärke gleichmäßig bedeckt die Oberfläche im Inneren des Zylinders. Indicated Bände: Große Kunststoff-Zylinder: 200 ul Medium Kunststoff-Zylinder: 100 ul Kleine Kunststoff-Zylinder: 50 ul </li><li> Inkubieren für 3 Stunden in einem üblichen Brutschrank. </li></ol> * Wenn Sie sich für längere Zeit Punkte brüten wollen, verwenden Sie unbedingt einen viel kleineren Volumen von Reizen (10-20 ul) und direkt zu platzieren das Gewebe in einer Atmosphäre von 100% O 2 in der Druck von 1 Atm (siehe 3.5) . <ol start="4"><li> Nehmen Sie das Medium mit den Reizen aus der apikalen Oberfläche des Gewebes und nicht mit frischem Medium REPLACE, weil das Gewebe nicht genug bekommen O 2, wenn eine dicke Schicht des Mediums auf der apikalen Gesicht verhindert Gasaustausch. Cover der Platte. </li><li> Legen Sie das Gewebe in einer Atmosphäre von 100% O 2 in der Druck von 1 Atm. </li></ol> 4. Ernten <ol><li> Nach 24 Stunden der gesamten Kulturzeit (± 2,5 Stunden) vorsichtig den Zylinder von the Gewebe mit Hilfe eines Skalpells leichtem Schaben Klebstoff aus und speichert sie in Abhängigkeit von der gewünschten Analyse (fix für die Immunhistochemie und / oder Immunfluoreszenz oder Schnellfrostmedium in flüssigem N2 für die RNA-Reinigung und Genexpressionsanalyse oder Proteinreinigung und Western-Blot-Assays ). </li><li> Ernten Sie die basolateralen Medium für Cytokinsekretion Profilierung. Zentrifuge bei 8.000 rpm für 7 min zur Pelletierung Schutt, den Überstand in ein Eppendorf-Röhrchen (alternativ Aliquot) und sofort bei -20 ° C lagern </li></ol> * Wenn Sie Überstände länger behalten möchten, speichern Sie sie bei -80 ° C

<ol><li>Schuller, S., Lucas, M., Kaper, J. B., Giron, J. A., Phillips, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ex+vivo+response+of+human+intestinal+mucosa+to+enteropathogenic+Escherichia+coli+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The ex vivo response of human intestinal mucosa to enteropathogenic Escherichia coli infection.</a> Cell. Microbiol. 11, 521-530 (2009).</li>
<li>Tsilingiri, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Probiotic+and+postbiotic+activity+in+health+and+disease%3A+comparison+on+a+novel+polarised+ex-vivo+organ+culture+model%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Probiotic and postbiotic activity in health and disease: comparison on a novel polarised ex-vivo organ culture model.</a> Gut. , (2012).</li>
<li>Tsilingiri, K., Rescigno, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Should+probiotics+be+tested+on+ex+vivo+organ+culture+models%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Gut+Microbes%22%5BJournal%5D)">Should probiotics be tested on ex vivo organ culture models?</a> Gut Microbes. , Manuscript in preparation (2012).</li>
<li>Mileti, E., Matteoli, G., Iliev, I. D., Rescigno, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+immunomodulatory+properties+of+three+probiotic+strains+of+Lactobacilli+using+complex+culture+systems%3A+prediction+for+in+vivo+efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Comparison of the immunomodulatory properties of three probiotic strains of Lactobacilli using complex culture systems: prediction for in vivo efficacy.</a> PLoS One. 4, e7056(2009).</li>
<li>Cencic, A., Langerholc, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+cell+models+of+the+gut+and+their+applications+in+food+microbiology--a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Food+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Functional cell models of the gut and their applications in food microbiology--a review.</a> Int. J. Food Microbiol. 141, Suppl 1. S4-S14 (2010).</li>
<li>te Velde, A. A., Verstege, M. A., Hommes, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+appraisal+of+the+current+practice+in+murine+TNBS-induced+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Inflamm.+Bowel+Dis%22%5BJournal%5D)">Critical appraisal of the current practice in murine TNBS-induced colitis.</a> Inflamm. Bowel Dis. 12, 995-999 (2006).</li>
<li>Senior, P. V., Pritchett, C. J., Sunter, J. P., Appleton, D. R., Watson, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crypt+regeneration+in+adult+human+colonic+mucosa+during+prolonged+organ+culture%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Anat%22%5BJournal%5D)">Crypt regeneration in adult human colonic mucosa during prolonged organ culture.</a> J. Anat. 134, 459-469 (1982).</li>
<li>Browning, T. H., Trier, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organ+culture+of+mucosal+biopsies+of+human+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Organ culture of mucosal biopsies of human small intestine.</a> J. Clin. Invest. 48, 1423-1432 (1969).</li>
<li>Besselink, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Probiotic+prophylaxis+in+predicted+severe+acute+pancreatitis%3A+a+randomised%2C+double-blind%2C+placebo-controlled+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Probiotic prophylaxis in predicted severe acute pancreatitis: a randomised, double-blind, placebo-controlled trial.</a> Lancet. 371, 651-659 (2008).</li>
<li>Lakhdari, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+NF-kappaB+modulation+capabilities+within+human+intestinal+commensal+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomed.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Identification of NF-kappaB modulation capabilities within human intestinal commensal bacteria.</a> J. Biomed. Biotechnol. 2011, 282356(2011).</li>
</ol>

Keine Interessenskonflikte erklärt.

Der Bedarf an physiologisch relevanten Modelle, auf denen Behandlungen für den menschlichen Darmschleimhaut wirksam getestet werden seit langem betont. Viele Forscher haben potentielle Artefakte und Defekte in den beiden Zellen 5 und 6 Mausmodellen bisher für diesen Zweck verwendet identifiziert. In der Tat, obwohl vielversprechende präklinische Daten oft erhalten wird, diese nur selten zu signifikanten klinischen Nutzen übersetzen. Das Verfahren in dieser Arbeit beschr...

<table><tbody><tr><td colspan="4">&lt;strong&gt;Reagenzien&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>10X HBSS</td><td>Eurocalne</td><td>ECM4006XL</td><td></td></tr><tr><td>Peni/Strepto</td><td>Lonza</td><td>DE17602E</td><td></td></tr><tr><td>Gentamycin</td><td>Gibco</td><td>15750-037</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Lonza</td><td>BE12614</td><td></td></tr><tr><td>FBS-Na</td><td>Gibco</td><td>16000-044</td><td></td></tr><tr><td>100X ITS-X</td><td>Gibco</td><td>51500-056</td><td></td></tr><tr><td>EGF</td><td>Tebu-bio</td><td>100-15</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamin</td><td>Lonza</td><td>BE17605E</td><td></td></tr><tr><td>Nicht essentielle Aminosäuren 100X</td><td>Gibco</td><td>11140-035</td><td></td></tr><tr><td>NaPyr</td><td>Gibco</td><td>11360-039</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">&lt;strong&gt;Materialien&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>Klonierungszylinder 6x8 mm</td><td>BellCo</td><td>2090-00608</td><td></td></tr><tr><td>Klonierungszylinder 8x8 mm</td><td>BellCo</td><td>2090-0080</td><td></td></tr><tr><td>Klonierungszylinder 10x10 mm</td><td>BellCo</td><td>2090-01010</td><td></td></tr><tr><td>Metallgitter</td><td>selbst hergestellt</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zentralschalen-Organkulturplatte</td><td>BD Falcon</td><td>353037</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgischer Kleber (Vetbond)</td><td>3M</td><td>1469SB</td><td></td></tr><tr><td>Sauerstoffgefäße</td><td>selbst hergestellt</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sauerstoffflaschen</td><td>Air Liquid Sanit&amp;#224;</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

eine neue methode für die kultur und polarisierte stimulation der menschlichen darmschleimhaut explantate

A Novel Method for the Culture and Polarized Stimulation of Human Intestinal Mucosa Explants

Wenige Modelle existieren derzeit realistisch zu simulieren, die komplexe menschliche Darm Mikro-Umgebung, in der eine Vielzahl von Interaktionen stattfinden. Proper Homöostase hängt direkt von dieser Wechselwirkungen, wie sie eine ganze Immunantwort induzieren Toleranz gegen Nahrungsmittel-Antigene zu gestalten, während gleichzeitig Montage effektive Immunantwort gegen pathogene Mikroben versehentlich mit der Nahrung aufgenommen. Intestinale Homöostase wird auch durch verschiedene komplexe Wechselwirkungen zwischen dem microbiota (einschließlich Lebensmittel-assoziierte positive Bakterienstämme) und der Gastgeber, die die Anlage / Abbau von Schleim regulieren erhalten, die Produktion von antimikrobiellen Peptiden durch die epithelialen Barriere, und die &quot;Erziehung&quot; der Epithelzellen Bevölkerungen, die die tolerogenen oder immunogen Phänotyp der einzigartigen, gut-resident Lymphoidzellen steuert &quot;. Diese Wechselwirkungen sind bisher sehr schwierig, mit in-vitro-Assays zu reproduzieren gewesenentweder mit kultivierten Zelllinien oder peripheren mononukleären Blutzellen. Darüber hinaus unterscheiden sich im Wesentlichen in Mausmodellen Komponenten der Darmschleimhaut (Schleimschicht Organisation, symbiotischer Bakterien Gemeinde) in Bezug auf den menschlichen Darm. So haben Studien von einer Vielzahl von Anwendungen in der Klinik für wichtige stressbedingten oder pathologischer Zustände, wie Reizdarmsyndrom, entzündliche Darmerkrankung oder Darmkrebs gebracht schwierig durchzuführen. Um diese Probleme anzugehen, haben wir ein neues System, das uns zu den Explantaten der menschlichen Darmschleimhaut, die ihre in situ Konditionierung behalten durch den Host Mikroflora und Immunantwort zu stimulieren, in einer polarisierten Mode ermöglicht. Polarized apikalen Stimulation ist von großer Bedeutung für das Ergebnis der ausgelösten Immunantwort. Es hat sich wiederholt gezeigt, dass die gleichen Reize können ganz unterschiedliche Reaktionen hervorrufen, wenn sie das Gesicht der apikalen Darm epi umgehenEndothel, anregend Epithelzellen basolateral oder in direkten Kontakt mit Lamina propria Komponenten, Schalt den Phänotyp von tolerogenen um immunogen und unnötige und exzessive Entzündung in der Umgebung. Wir erzielten polarisierten Stimulation durch Kleben eine Höhle Zylinder begrenzt die Fläche der Stimulation auf der apikalen Seite der Schleimhaut im Protokoll beschrieben. Wir haben dieses Modell zu prüfen, unter anderem, unterschiedliche Auswirkungen von drei verschiedenen Laktobazillen-Stämme. Wir zeigen, dass dieses Modell sehr leistungsfähiges System, um die immunmodulatorischen Eigenschaften von Probiotika bei gesunden und Krankheitszuständen beurteilen.

Es gelang uns bei der Erhaltung gesunder und IBD menschlichen Darmschleimhaut in Kultur für mindestens 24 Stunden die Erhaltung des Wohlbefindens des Gewebes. In Übereinstimmung mit früheren Beobachtungen 1 war dies nur möglich, wenn die Mehrheit der Kultur der Zeit (mindestens 85% der Gesamtmenge) fand im O 2, wenn das Gewebe nicht für 24 Stunden in herkömmlichen Inkubatoren (Abbildung 2) zu überleben. Wir haben auch gezeigt, dass die verschiedenen Reaktionen der Explantate auf di...

Wir stellen ein neues Verfahren für die Pflege der menschlichen Darmschleimhaut in Kultur und Überwachung der Reaktion auf verschiedene Arten von Stimuli über mindestens 24 Stunden. Mit unserer Methode wird die Polarität des Gewebes aufrechterhalten wird, so dass für eine physiologische Stimulation über die apikale Route.

Eine neue Methode für die Kultur und polarisierte Stimulation der menschlichen Darmschleimhaut Explantate

Derzeit existieren nur wenige Modelle, die die komplexe Mikroumgebung des menschlichen Darms, in der eine Vielzahl von Interaktionen stattfinden, realistisch simulieren können. Eine angemessene ...

Das übergeordnete Ziel des folgenden Experiments besteht darin, die in-vivo-Situation zur Stimulierung der menschlichen Darmschleimhaut nachzuahmen. Dies wird erreicht, indem ein Caver-Zylinder auf der apikalen Seite des Gewebes verklebt wird, um zu verhindern, dass der Stimulus mit der basolateralen Seite in Kontakt kommt. In einem zweiten Schritt wird der Stimulus appliziert, was die Analyse der ausgelösten Immunantwort ermöglicht.Anschließend wird der Reiz von der apikalen Seite des Gewebes entfernt, um es 24 bis 36 Stunden lang lebensfähig zu erhalten. Die erhaltenen Ergebnisse können unterschiedliche Wirkungen verschiedener probiotischer Stämme anhand von Daten der Immunhistochemie, der Zytokinausschüttung, der Profilanalyse und dergleichen zeigen. Der Hauptvorteil dieser Technik im Vergleich zu bestehenden Methoden wie der ASIC-Kammer besteht darin, dass die Analyse von bis zu 20 Bedingungen gleichzeitig ermöglicht wird.Es ermöglicht eine Verlängerung der Kulturzeit auf bis zu 36 Stunden und liefert zudem ausreichend Material für verschiedene Analysemethoden wie D-N-A-R-N-A-Analysen, Immunhistochemie, Zytokinfreisetzung und dergleichen. Obwohl dieses Verfahren Erkenntnisse im

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Quelle: In J. G. et al. Humane Colonoid-Monoschichten zur Untersuchung von Wechselwirkungen zwischen Krankheitserregern, Kommmensalen und dem intestinalen Epithel des Wirts. J. Vis. Exp. (2019).Dieses Video demonstriert das Verfahren zur Kultivierung von Colon-abgeleiteten Epithelzellen auf einem kollagenbeschichteten Transwell-System, um eine schleimproduzierende Monoschicht zu erzeugen, die die Darmbarriere modelliert und Wirts-Pathogen-Interaktionsstudien ermöglicht.

Erzeugung einer menschlichen Colonoid-Monoschicht mit Barrierfunktion zur Untersuchung von Wirt-Pathogen-Interaktionen

In diesem Video beschreiben wir die Methodik für den Aufbau eines ex vivo Darmorgankultursystems, um die Wechselwirkungen zwischen Darmgewebefragmenten von Mäusen und spezifischen Darmbakterien zu untersuchen. Die Vorrichtung besteht aus zwei Paaren von Eingangs-Ausgangs-Anschlüssen, wobei das erste das Darmgewebelumen verbindet und die spezifische Bakteriensuspension in dieses zuführt, und das zweite kontinuierlich Medien zu den Vertiefungen  der Vorrichtung zuführt, um die Lebensfähigkeit des...

Ein ex vivo Darmorgankultursystem zur Untersuchung von Wirt-Mikrobiota-Interaktionen

Wir beschreiben eine Methode zur Etablierung menschlicher Enteroide aus Dünndarmkrypten und Kolonoide aus Dickdarmkrypten, die sowohl aus chirurgischem Gewebe als auch aus Biopsien entnommen wurden. In diesem methodischen Artikel stellen wir die Kulturmodalitäten vor, die für das erfolgreiche Wachstum und die Erhaltung von humanen Enteroiden und Kolonoiden unerlässlich sind.

Gründung des Menschen Epithelial Enteroids und Colonoids von Whole Gewebe und Biopsie

Hier wird ein Protokoll zu ernten, zu pflegen und zu behandeln Maus kleine Darm-Organoide mit pathogen associated molecular patterns (PAMPs) und Listeria monocytogenes beschrieben, sowie Betonung auf die Genexpression und die richtige Normalisierungstechniken für Protein.

Das<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Kultur und Mustererkennung Rezeptor-Stimulation von Maus-Darm-Organoide

Wir beschreiben ein in vitro - Protokoll zur Zusammenarbeit Kultur gut microbiome und Darmzotten für einen längeren Zeitraum einen menschlichen Darm-on-a-Chip - microphysiological System.

Co-Kultur des Lebens Microbiome mit mikro humanen intestinalen Villi in ein Gut-on-a-Chip-Mikrofluidik-Vorrichtung

Dieses Protokoll beschreibt die Isolierung und Kultur von gemischten murine kleinen Darmzellen. Diese primären intestinalen Kulturen ermöglichen die Untersuchung von Signalwegen zugrunde liegenden Darmpeptid die Sekretion einer Reihe von Techniken.

Gemischte Primärkulturen von Murine Duenndarm bestimmt zur Untersuchung von Gut Hormonausschüttung und Live Cell Imaging von enteroendokrinen Zellen

Hier präsentieren wir Ihnen ein Protokoll zur menschlichen Kultur Enteroid oder Colonoid Monolagen, die intakten Barrierefunktion, Wirt epithelialen Mikrobiota Interaktionen auf die zelluläre und biochemische Ebene zu studieren.

Menschliche Colonoid Monolagen Wechselwirkungen zwischen Erreger, Kommensalen und Host Darmepithel zu studieren

Dieses Protokoll beschreibt, wie die Differenzierung von M-Zellen in menschlichen Stammzell-abgeleiteten ilealen Monolayern und Methoden zur Beurteilung ihrer Entwicklung induziert werden kann.

Induzierte Differenzierung von M-Zell-ähnlichen Zellen in menschlichen Stammzell-abgeleiteten Ileal Enteroid Monolayern

Hier stellen wir zwei Protokolle vor, die die Modellierung von intestinalen apikal-spezifischen Interaktionen ermöglichen. Organoid-abgeleitete intestinale Monoschichten und Air-Liquid-Interface (ALI)-Kulturen erleichtern die Erzeugung von gut differenzierten Epithelien, die sowohl von luminaler als auch von basolateraler Seite zugänglich sind, während polaritätsinvertierte Darmorganoide ihre apikale Seite freilegen und für Hochdurchsatz-Assays zugänglich sind.

Kulturmethoden zur Untersuchung apikal-spezifischer Wechselwirkungen mit intestinalen Organoidmodellen

Die Studie präsentiert eine Methode zur in-vitro-Untersuchung bakterieller Infektionen unter Verwendung von Gewebestammzell-abgeleiteten Intestinalorganoiden. Das Protokoll beschreibt, wie man Organoide in zwei Dimensionen kultiviert und differenziert, sie mit adhärent-invasiven Escherichia coli infiziert und wichtige Werte bewertet, darunter das Durchbrechen der Epithelbarriere, die Bildgebung der Infektion und die Antwort der epithelialen RNA.

Eine zweidimensionale Organoidkultur auf Invasin- oder Basementmembranextrakt zur Untersuchung von Wirts-Bakterien-Interaktionen

Erfahren Sie eine neue Methode zur Kultur und polarisierten Stimulation menschlicher Darmschleimhaut-Explantate. Diese Technik ermöglicht die Analyse von bis zu 20 Bedingungen gleichzeitig und liefert Einblicke in die Immunantwort.

Eine neue Methode für die Kultur und polarisierte Stimulation der menschlichen Darmschleimhaut Explantate

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