Vorbereitung und Pathogeninaktivierung von Double Dose Buffy Coat Platelet Produkte, die INTERCEPT Blood System

In diesem Video wird ein Thrombozytenkonzentrat mit doppelter Dosis aus einem Pool von sieben Buffy-Coats hergestellt und anschließend mit Intercept behandelt. Nach dem Ansehen dieses Videos sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie ein pathogen-inaktiviertes Thrombozytenkonzentrat mit doppelter Dosis hergestellt wird. Zunächst zeigen wir eine schematische Übersicht, gefolgt von einer Demonstration.

Die ersten sieben Einheiten spendeter Vollblut werden zentrifugiert und aufgeteilt, um sieben Buffy-Coat-Einheiten zu gewinnen, die die vorgegebenen Werte für Volumen und Hämatokrit erreichen. Die Buffy Coats werden verbunden, gepoolt und erneut zentrifugiert. Anschließend wird die Thrombozytensuspension von den restlichen roten Blutkörperchen getrennt, um ein Thrombozytenkonzentrat in Doppelmenge herzustellen, um Pathogene und Leukozyten zu inaktivieren.

Der doppelte Dosis-Plättchenkonzentrat wird mittels des Interzept-Systems behandelt, das nukleinsäurehaltige Moleküle vernetzt. Letztlich ergibt dieses Verfahren zwei therapeutische Plättchendosen mit akzeptabler In-vitro-Qualität über sieben Tage Lagerung, wie durch die Bestimmung von pH, Glukose, Laktat, PO₂ und PCO₂ sowie Shallot Doru festgestellt wurde. Ein Techniker von meinem Blutspendezentrum wird die Prozedur demonstrieren; die Verarbeitungsanforderungen werden wir im Folgenden beschreiben.

Zunächst sicherstellen, dass das Thrombozytenkonzentrat mit doppelter Dosis den Verarbeitungsspezifikationen für die Inaktivierung von 300 bis 420 Milliliter entspricht. Volumen 2,5 bis siebenmal 10 hoch 11 der Thrombozytendosis und weniger als viermal 10 hoch 6 pro Milliliter. Rote Blutkörperchen Beginnen Sie dieses Verfahren mit sieben Einheiten Vollblut, die in 450-Milliliter-Top-Bottom-Sammelsystemen gesammelt wurden.

Stellen Sie die Bluteinheiten in Zentrifugenröhrchen und führen Sie eine harte Zentrifugation bei 4.880 RCF für 11 Minuten bei Raumtemperatur mit Bremseinstellung B fünf gemäß den Herstelleranweisungen durch. Nach der Zentrifugation wird sich das Blut in drei Schichten trennen: rote Blutkörperchen, Buffy Coat und Plasma. Drücken Sie das Plasma in den oberen Satellitenbeutel und die roten Blutkörperchen in den unteren Satellitenbeutel, wobei der Buffy Coat mit einem Volumen von etwa 48 Millilitern und einem Hämatokrit von 37 % im Sammelbehälter verbleibt.

Stellen Sie die Buffy-Coats über Nacht auf einen Thrombozyten-Agitator bei Raumtemperatur. Steril verbinden Sie sieben Buffy-Coats mit 300 Milliliter SSP-Plus-Thrombozyten-Additivlösung in einer Zugkonfiguration, wobei die Additivlösung oben angeordnet ist. Klemmen Sie die Leitung zwischen der Additivlösung und dem ersten Buffy-Coat wie hier gezeigt ab. Öffnen Sie die Schweissnähte zwischen den Buffy-Coat-Einheiten und lassen Sie sie in den letzten Buffy-Coat-Behälter ablaufen.

Öffnen Sie anschließend die Klemme und die Verbindung zwischen der Additivlösung und dem ersten Buffy-Coat und lassen Sie etwa ein Drittel der Additivlösung, ungefähr 100 Milliliter, nacheinander durch jeden der Buffy-Coat-Behälter spülen, bevor Sie die Klemme schließen. Wiederholen Sie diesen Waschvorgang noch zweimal, wobei jedes Mal etwa 100 Milliliter der Additivlösung verwendet werden. Trennen Sie den Behälter mit dem gepoolten Buffy Coat von den leeren Behältern. Das Volumen des Buffy-Coat-Pools einschließlich der Additivlösung sollte etwa 600 Milliliter betragen.

Stellen Sie die gepoolten Buffycoats eine Stunde lang bei Raumtemperatur auf einen Schüttler. Anschließend verbinden Sie einen Thrombozyten-Speicherbehälter mit integriertem Leukozyten-Reduktionsfilter mit dem Beutel, der den Buffycoat-Pool enthält. Geben Sie die gepoolten Buffycoats und den Thrombozyten-Speicherbehälter in eine Zentrifuge und zentrifugieren Sie sie 9 Minuten und 20 Sekunden bei 462 RCF.

Nach der Zentrifugation wird die Thrombozytensuspension durch den Luca-Reduktionsfilter in den Thrombozytenlagerbehälter abgegeben. Das Ergebnis ist ein Doppel-Dosis-Thrombozytenkonzentrat mit etwa sieben mal 10 hoch 11 Thrombozyten in 420 Milliliter, das einer Pathogeninaktivierung mit Intercept zur Pathogeninaktivierung unterzogen werden kann. Das Doppel-Dosis-Thrombozytenkonzentrat wird mithilfe eines Intercept-Verarbeitungssets behandelt, das aus einem Antoin-Behälter, einem Bestrahlungsbehälter und zwei Lagerbehältern besteht.

Verbinden Sie den Behälter mit der Thrombozytensuspension mit dem Amin-Behälter am Intercept-Verarbeitungsset. Hängen Sie anschließend die Thrombozyten auf. Brechen Sie die untere Kanüle am Amin-Behälter ab, um den Fluss der Lösung in den Beleuchtungsbehälter zu ermöglichen.

Dann brechen Sie die obere Kanüle am Amin-Behälter ab, um den Thrombozyten den Durchfluss durch den Amin-Behälter in den Beleuchtungsbehälter zu ermöglichen. Mischen Sie vorsichtig die Mischung aus Thrombozyten und Amotosin. Drücken Sie leicht auf den Beleuchtungsbehälter, um die Luft aus dem Beleuchtungsbehälter herauszupressen.

Versiegeln Sie den Schlauch zwischen der Beleuchtungseinheit und der Amato- und der Auffangflasche, sodass nicht mehr als vier Zentimeter Schlauch aus der Beleuchtungseinheit herausragen. Entfernen und entsorgen Sie die leeren Behälter. Stellen Sie das Verarbeitungsset in den Beleuchter, wobei sich die Beleuchtungseinheit im großen Fach auf der linken Seite und der Organizer im kleineren Fach auf der rechten Seite befindet.

Scannen Sie die Spenden-ID. Produktcode und Verarbeitung. Geben Sie die Losnummer in den Beleuchter ein.

Schließen Sie die Metallabdeckung und die Schublade. Drücken Sie auf Start, um die Beleuchtung zu beginnen. Der Beleuchter liefert eine kontrollierte Dosis an UVA-Licht an die Plättchenaminmischung im Beleuchtungsbehälter.

Amin dockt zwischen den Nukleinsäure-Basenpaaren von Krankheitserregern ein, die in der Thrombozyten-Einheit vorhanden sein können. Bei Beleuchtung entstehen dauerhafte Vernetzungen, die die DNA oder RNA miteinander verbinden, sodass die Erreger sich nicht mehr vermehren und beim Empfänger des Blutpräparats eine Erkrankung verursachen können. Nach der Beleuchtung entfernen Sie den Verarbeitungssatz.

Als Nächstes entfernen Sie die Behälter vom Organizer, hängen die Thrombozyten und das Verarbeitungsset auf. Brechen Sie die Kanüle am Auslass des Beleuchtungsbehälters ab und lassen Sie die Thrombozyten in den CAD-Behälter fließen. Im Inneren des CAD-Behälters befindet sich ein Wafer mit immobilisierten makroporösen Polystyrolkügelchen, die die Restmengen von Amin im Blutprodukt reduzieren.

Darauf achten, die CAD-Wafer nicht zu verbiegen. Die Luft aus dem CAD-Behälter in den Beleuchtungsbehälter auspressen. Den Schlauch nahe dem Einlassstutzen des CAD-Behälters verschließen.

Entfernen und entsorgen Sie den leeren Beleuchtungsbehälter. Stellen Sie den CAD-Behälter mit den angebrachten Speicherbehältern sechs bis 16 Stunden lang auf einen Thrombozyten-Agitator. Dadurch wird die Konzentration von restlichem Amlin auf weniger als oder gleich zwei Mikromolar reduziert.

Nach der CAD-Behandlung die Thrombozytenkonzentrate vom Schüttler nehmen, die Thrombozyten aufhängen, die Kanüle am Auslass des CAD-Behälters abbrechen und die Thrombozyten in die beiden Lagerungsbehälter fließen lassen. Anschließend die Luft aus den Lagerungsbehältern herausdrücken. Das Schlauchsystem oberhalb des Y-Stücks verschließen und den CAD-Behälter entfernen.

Das Ergebnis sind zwei pathogeninaktivierte Thrombozytenkonzentrate zur Beurteilung der in-vitro-Thrombozytenfunktion. Die Thrombozytenkonzentrate wurden hinsichtlich der Dosis, des pH-Werts, des pO₂, der Laktatproduktion und des Glukoseverbrauchs des Interzepts bis zum siebten Tag der Lagerung bestimmt.

Diese Abbildung zeigt die mittlere anfängliche Thrombozyten-Dosis des doppelten Thrombozytenkonzentrats vor der Intercept-Behandlung sowie die mittlere Thrombozyten-Dosis in jedem der behandelten aufgeteilten Produkte bis zum siebten Tag der Lagerung. Wie hier zu sehen ist, betrug der Thrombozytenverlust während der Lagerung etwa 9 %. Diese Verringerung unterscheidet sich nicht von dem erwarteten Verlust von Thrombozyten während der Lagerung konventioneller Thrombozyten. Gemäß den europäischen Anforderungen muss der pH-Wert der Thrombozyten bis zum Ende der Haltbarkeitsdauer über 6,4 liegen.

Während der Verarbeitung sinkt der pH-Wert von Thrombozytenkonzentraten leicht ab, abhängig von der Thrombozytenkonzentration, dem Volumen und der Gaspermeabilität des Lagerbehälters für Thrombozyten. Diese Abbildung zeigt den pH-Wert der aufgeteilten Thrombozytenprodukte über sieben Tage Lagerung; dabei bleibt der pH-Wert stabil und wird innerhalb der Anforderungen der Verarbeitung gut aufrechterhalten. Der aerobe Stoffwechsel sollte in gelagerten Thrombozyten weiterhin stattfinden und ist ein Indikator für die Fähigkeit der Thrombozyten, nach Transfusion in einen Patienten in vivo zu funktionieren.

Der Sauerstoffverbrauch und die CO2-Produktion der Thrombozyten deuten auf eine anhaltende Atmung der Thrombozyten im PL 24 10-Behälter während sieben Tagen Lagerung hin. Ebenso sollte der anaerobe Stoffwechsel in gelagerten Thrombozyten fortgesetzt werden. Daher sind auch der Glukoseverbrauch und die Laktatproduktion Indikatoren für die Fähigkeit der Thrombozyten, nach einer Transfusion zu funktionieren.

Diese beiden Abbildungen zeigen die Lactat- und Glucosespiegel über sieben Tage Lagerung. Der Glucoseverbrauch durch Thrombozyten und die Lactatproduktion stimmen gut miteinander überein. Während der sieben Tage Lagerung wiesen fünf Einheiten Glucosespiegel von weniger als 1,11 Millimol pro Liter auf, was der unteren Grenze für den Glucose-Assay entspricht.

Die Buffy-Code-Präparation und die Validierung der Pools erzeugten Thrombozytenkonzentrate, die die Eingabekriterien für die Inaktivierungsbehandlung erfüllen, insbesondere hinsichtlich Volumen, Thrombozytenzahl, Plasmaanteil und Erythrozytenkontamination. Die endgültigen Einheiten erfüllen die Validierungskriterien über sieben Tage Lagerung, einschließlich Thrombozytendosis und pH-Wert. Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber der konventionellen Buffy-Code-Präparationsmethode, die ein Einzeldosis-Thrombozytenkonzentrat erzeugt, liegt darin, dass sie die Komponentenausbeute aus Blutspenden maximiert, die Betriebskosten durch Anwendung einer Doppeldosistechnik reduziert und die Patientensicherheit verbessert, indem transfusionsübertragene Krankheitserreger inaktiviert werden.