Isolation und Kultur von Maus Kortikale Astrozyten

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, reine Astrozytenkulturen zu erhalten, indem gemischte kortikale Zellen von P eins bis P vier Maus-Jungtieren isoliert und kultiviert werden. Dies wird erreicht, indem zunächst die Hirnrinde von Mäusebabys entnommen und die Hirnhäute entfernt werden. Der zweite Schritt besteht darin, die Rinde in kleine Stücke zu schneiden, die Rindenstücke durch Trypsin und Tation zu dissoziieren, um Einzelzellen zu erhalten, und die einzelnen Zellen auf mit Poly de Lycine beschichteten Gewebekulturflaschen zu plattieren.

Nach sieben bis acht Tagen haben Astrozyten, Mikroglia und Oligodendrozyten unterschiedliche Schichten gebildet, und die Trennung von Astrozyten von Mikroglia und Oligodendrozyten wird durch Schütteln des Gewebekulturkolbens auf einem Orbitalschüttler erreicht. Der letzte Schritt ist die Ionisierung und Ernte der verbleibenden Astrozyten, die dann in einem Gewebekulturkolben wieder plattiert werden. Letztendlich werden die Astrozyten 12 bis 14 Tage nach der ersten Zellteilung in der für Experimente geeigneten Konzentration plattiert und die Zellreinheit kann durch Immun-Zytochemie unter Verwendung von Astrozyten-spezifischen Markern untersucht werden.