Name: Isolation und Kultur von Maus Kortikale Astrozyten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-01-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 25 s
Description: Lernen Sie die Isolation und Kultur reiner Astrozyten aus der Mauskortex für Neurowissenschaften. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Astrozytenbiologie und neuronaler Interaktion im ZNS.

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Unterstützt durch die Fazit-Stiftung Graduate Stipendium für SS, das Bundesministerium für Bildung und Forschung (BMBF 01 EO 0803) zu KB und der Europäischen Kommission RP7 Finanzhilfevereinbarung PIRG08-GA-2010 bis 276.989, NEUREX, und der Deutschen Forschungsgemeinschaft Foundation Grant SCHA 1442 / 3-1 bis CS Die Autoren haben keine widerstreitenden finanziellen Interessen.

Ein. Isolierung und Beschichtung von Mixed kortikalen Zellen Mixed kortikalen Zellen Isolierung für Astrozytenkulturen kann mit P1 bis P4 Maus Welpen werden. Um eine ordnungsgemäße Astrozyten Dichte zu erreichen ist es notwendig, 4 Maus pup Kortex pro T75 Zellkulturflasche verwenden. Daher werden in der folgenden Volumina Protokoll für ein Zellpräparat unter Verwendung von 4 Maus Jungtieren berechnet. <ol><li> Vor Beginn des Verfahrens Dissektion, vorwärmen 30 ml Astrozyten Kulturmedien (DMEM, hohe Glucose + 10% hitzeinaktiviertem fötalem Rinderserum + 1% Penicillin / Streptomycin; siehe Tabelle) bis 37 ° C Mantel ein T75-Flasche mit 20 ml Poly-D-Lysin (PDL) in einer Konzentration von 50 pg / ml in der Zellkultur-Wasser für 1 Stunde bei 37 ° C im CO 2-Inkubator. </li><li> Für die Dissektion Verfahren, bereiten alle notwendigen Reagenzien und Materialien. Sie benötigen: chirurgische Schere, glatte feinen Pinzette, flache Spitze Pinzette, Papierhandtücher, Abfallbeutel, 70% Ethanol eind 2 Sezieren Gerichten (3,5 cm Durchmesser) auf Eis mit 2 ml HBSS jeweils gefüllt. </li><li> Sanft halten und sprühen Sie den Kopf und Hals der Maus Welpen mit 70% Ethanol. Das Tier wird durch Enthauptung mit der Schere geopfert. </li><li> Führen Sie einen Medianschnitt, von hinten nach vorne, entlang der Kopfhaut, um den Schädel zu offenbaren. </li><li> Schneiden Sie den Schädel vorsichtig aus dem Hals bis zur Nase. Zwei weitere Schnitte werden durchgeführt, um einen weiteren Zugriff auf das Gehirn zu ermöglichen: Der erste Schnitt erfolgt anterioren der Riechkolben, der andere inferior des Kleinhirns, um den Schädel von der Schädelbasis trennen. </li><li> Verwendung der flachen Spitze Pinzette sind die kraniale Klappen leicht zur Seite gekippt und das Gehirn erfolgt und in die erste Schale mit HBSS Sezieren gefüllt genommen platziert. Die Schale wieder auf Eis und weiter ernten Alle 4 Gehirne. </li><li> Der Rest des Verfahrens ist Dissektion unter einem Stereomikroskop durchgeführt. Zunächst werden die Riechkolben und das Kleinhirn entfernt mit den feinenPinzette (Abbildung 1B). </li><li> Um die cortices abzurufen, greifen die hinteren Ende des Gehirns mit den feinen Pinzette, führen Sie eine Inzision zwischen den Hemisphären, legen Sie einen zweiten Satz von Zangen zum erstellten Hain und abziehen das plattenförmige Struktur der Rinde von der Gehirn. </li><li> Sorgfältig sezieren die Hirnhäute aus den Cortex Hemisphären durch Ziehen mit der feinen Pinzette (Abbildung 1D). Dieser Schritt vermeidet Kontaminationen des endgültigen Astrozyten Kultur durch meningealen Zellen und Fibroblasten. Übertragen Sie die vorbereiteten Cortex Hemisphären in die zweite Schüssel mit HBSS gefüllt und schicken Sie es auf Eis. Weiter dementsprechend mit allen 4 Rinden. </li><li> Schließlich schneiden jedes Cortex Hemisphäre in kleine Stücke mit scharfen Klingen (etwa 4 bis 8 Mal). </li><li> Unter sterilen Bedingungen Transfer Cortex Stück in einem 50 ml-Falcon-Röhrchen und fügen HBSS auf ein Gesamtvolumen von 22,5 ml. </li><li> 2,5 ml 2,5% Trypsin, Mischung und inkubierendas Gewebe im Wasserbad bei 37 ° C für 30 min. Mix von gelegentlichem Schütteln alle 10 min. </li><li> Zentrifuge 5 min bei 300 xg zu pelletieren Cortex Gewebestücke. </li><li> Sorgfältig Überstand zu entfernen durch Dekantieren. Um zu vermeiden, verlieren das Gewebe Pellet Sie können mechanisch bewahren Sie sie mit einer Pipette. Dissoziation des Gewebes in einer einzigen Zelle Suspension durch Zugabe von 10 ml Astrozyten Plattierungsmedium und kräftig Pipettieren mit einem 10 ml Kunststoff-Pipette bis Gewebestücke dissoziiert in einzelne Zellen (20 bis 30 mal) sind. Lautstärke auf 20 ml mit Astrozyten Plattierungsmedium. Sie können Nachweis der Dissoziation des Kortex Gewebe in einzelnen Zellen durch Zählen mit einer Zählkammer. Eine Herstellung von 4-Maus pup Kortex sollte zu 10-15 x10 6 dissoziierten Einzelzellen. </li><li> Absaugen PDL aus dem T75 Kulturflasche, Platte die dissoziierte einzigen Zellsuspension und bei 37 ° C im CO 2-Inkubator. </li></ol> 2. Der Erhalt eines Enriched Astrocyte Kultur <ol><li> Ändern Sie die Medium 2 Tage nach dem Ausplattieren der gemischten kortikalen Zellen und alle 3 Tage danach. </li><li> Nach 7 bis 8 Tagen, wenn Astrozyten konfluent und Überlagerung Mikroglia sind sitzen exponiert auf der Astrozyten Schicht oder sind bereits aus der Astrozyten Schicht (Abbildung 2) lösen, schütteln Sie die T75 Kolben bei 180 rpm für 30 min auf einem Schüttler um Mikroglia zu entfernen. Überstand verwerfen, die Mikroglia oder wenn Sie zu Kultur und möchten prüfen, Mikroglia, drehen Sie es nach unten und Platte für Kultur 28,29. </li><li> 20 ml frisches Astrozyten Kulturmedium und weiter durch Schütteln der Kolben bei 240 rpm für 6 h auf Oligodendrozyten-Vorläuferzellen (OPC) zu entfernen. Da einige OPCs wird nicht vollständig von der Astrozyten Schicht lösen, weiterhin unter kräftigem Schütteln für 1 min, um OPC Kontamination zu verhindern. Überstand verwerfen oder drehen Sie es nach unten und Platte, wenn Sie die Kultur OPCs 29 wollen. </li><li> Spülen Sie die verbleibenden confluent Astrozyten Schicht zweimal mit PBS absaugen PBS, 5 ml Trypsin-EDTA und Inkubation im CO 2-Inkubator bei 37 ° C. Überprüfen Ablösung der Astrozyten alle 5 min und durchzusetzen Ablösung von Astrozyten durch Anschlagen des Kolbens gegen die Handfläche (2-3 mal). </li><li> Nach Astrozyten aus der Kulturflasche abgelöst werden, 5 ml Astrozyten Kulturmedium, Spin-Zellen bei 180 xg für 5 min, Überstand entfernen und 40 ml frisches Astrozyten Plattierungsmedium. Eine T75 Zellkulturflasche sollte etwa 1x10 6 Zellen nach der ersten Zelle Split ergeben. Platte Zellen in zwei T75 Kulturflaschen und bei 37 ° C im CO 2-Inkubator. Anderer das Medium alle 2 bis 3 Tage. </li><li> 12-14 Tage nach der ersten Spaltung Astrozyten sind in der entsprechenden Zelle Konzentration 24-48 h vor Durchführung des Experiments überzogen. Eine T75 Zellkulturflasche sollte etwa 1,5-2 x10 6 Zellen nach der zweiten Zelle Split ergeben. </li></ol>

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</ol>

Keine Interessenskonflikte erklärt.

Die beschriebene Methode ist hier auf der Astrozyten Kultur Zubereitung von Nagetieren neonatalen Gehirn, die ursprünglich von McCarthy und de Vellis in 1980 27 beschrieben ist. Die modifizierte Methode der Isolierung und Kultivierung von kortikalen Astrozyten aus postnatalen P1 bis P4 Maushirn hier vorgestellten ist schnell, liefert reines primären Astrozyten und ist hoch reproduzierbar. Diese Technik kann leicht übertragen Astrozyten aus anderen Spezies, wie zB von Ratte oder Schwein und von anderen Hirnreg...

Astrozyten sind eine sehr reichliche Zelltyp im zentralen Nervensystem (ZNS). Das Verhältnis von Astrozyten mit Neuronen ist 1:3 im Cortex von Mäusen und Ratten, während es 1,4 Astrozyten pro Neuron im menschlichen Hirnrinde 1 sind. Das Interesse an Astrozytenfunktion hat sich in den letzten Jahren zugenommen. Eine wichtige Funktion der Astrozyten ist ihre Rolle bei der Bereitstellung von strukturellen und metabolischen Unterstützung Neuronen 2,3. Neu entdeckte Rollen für Astrozyten decken ein breites Spektrum von Funktionen. Dazu gehören Führen des Migration von Axonen und die Entwicklung bestimmter Neuroblasten während der Entwicklung 4-6, Bildung Funktionen im synaptischen Übertragung, Synapse Festigkeit und Informationsverarbeitung durch neuronalen Schaltkreise 7-9, Rollen in Blut-Hirn-Schranke (BBB) ​​10 und Integrität 11-13 und Regulierung des zerebrovaskulären Ton 14. Ein weiteres wichtiges Merkmal der Astrozyten ist ihre Reaktion auf eine Verletzung. Unter pathologischen Bedingungen astrocytes reaktiv werden und ferner hochregulieren die Expression des Intermediärfilament gliales fibrilläres saures Protein (GFAP) und inhibitorische extrazellulären Matrix (ECM)-Proteine ​​15,16. Reaktiven Astrozyten Abgrenzung der verletzten Stelle aus gesundem Gewebe durch Bildung einer glialen Narbe, die hauptsächlich aus Astrozyten sezernierten ECM Proteine ​​des Chondroitinsulfat-Proteoglykan (CSPG) Familie, hemmen die wichtigsten Faktoren, die axonale Regeneration nach ZNS-Verletzung 15-17. Astrozyten stammen aus radialen Gliazellen (RG)-Zellen während der späten Embryogenese und der frühen postnatalen Leben. Nach Spezifikation Astrozyten aufgetreten ist, Astrozyten Vorstufen ihren Endpositionen zu migrieren, wo sie den Prozess der terminalen Differenzierung beginnen. In vivo erscheinen Astrozyten als drei bis vier Wochen nach der Geburt, wie durch ihre reife typische Morphologie 18,19 angedeutet. Eine Subpopulation von RG Zellen wandeln in Subventrikulärzone Astrozyten (Typ B-Zellen). Both, RG und Typ B-Zellen funktionieren wie Astrozyten-wie neurale Stammzellen (NSCs) während der Entwicklung und in der erwachsenen sind. Wie Astrozyten, RG und Typ B-Zellen exprimieren auch den Astrozyten-spezifischen Glutamat-Transporter (GLAST), Hirn Lipid-bindendes Protein (BLBP) und GFAP, was anzeigt, dass diese Marker nicht ausschließlich verwendet werden, um spezifisch zu markieren erwachsenen Astrozyten. Im Gegensatz zu erwachsenen parenchymatösen Astrozyten, die nicht im gesunden Gehirn, RG und Typ B-Zellen zeigen Stammzellpotenzial wie die Fähigkeit sich selbst zu erneuern müssen teilen. Fehlregulation von Astrozyten wurden in zahlreichen Erkrankungen in Verbindung gebracht, einschließlich Alzheimer-Krankheit 20,21, Chorea Huntington 22, Parkinson-Krankheit 23, 24 Rett-Syndrom und Alexander-Krankheit 25. Zudem reagieren Astrozyten für alle Beleidigungen des ZNS, die zu Astrozyten-Aktivierung und Astrozyten Gliazellen Narbenbildung 16,26. Die Astrozyten Glianarbe die folgenden Gehirn tr bildetauma oder Rückenmarksverletzung wird angenommen, dass die wichtigste Barriere gegen neuronale Regeneration 15 sein. Die Entwicklung von zuverlässigen Methoden zu isolieren und zu erhalten gereinigten Populationen von Zellen war wesentlich für das Verständnis des Nervensystems. Bahnbrechende Arbeiten von McCarthy und de Vellis können Ermittler bislang fast reine Kulturen von Astrozyten aus neugeborenen Ratten Gewebes 27 vorzubereiten. Viel ist über Astrozyten Biologie mit dieser Methode, die hier in einer leicht modifizierten Form zur Isolierung Maus kortikalen Astrozyten präsentiert gelernt. Ergänzend in vivo Studien, Astrozyten als auch konditioniertem Medium unter Verwendung der in vitro-Kultur beschrieben werden, sind wertvolle Werkzeuge, um weitere Einblicke in Astrozyten Funktionen.

<table border="1"><tbody><tr><td> Name der Arbeitslösung </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td><td> Endkonzentration </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Astrocyte Kulturmedien </td></tr><tr><td> DMEM, high glucose </td><td> Life Technologies </td><td> 31966-021 </td><td></td></tr><tr><td> FBS, hitzeinaktiviertes </td><td> Life Technologies </td><td> 10082-147 </td><td> Endkonzentration: 10% </td></tr><tr><td> Penicillin-Streptomycin </td><td> Life Technologies </td><td> 15140-122 </td><td> Endkonzentration: 1% </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Lösung für Hirngewebe digestion </td></tr><tr><td> HBSS </td><td> Life Technologies </td><td> 14170-088 </td><td></td></tr><tr><td> 2,5% Trypsin </td><td> Life Technologies </td><td> 15090-046 </td><td> Endkonzentration: 0,25% </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Andere </td></tr><tr><td> 70% (Vol / Vol) Ethanol </td><td> Roth </td><td> 9065,2 </td><td></td></tr><tr><td> Poly-D-Lysin </td><td> Millipore </td><td> A-003-E </td><td> 50 ug / ml </td></tr><tr><td> Wasser </td><td> PAA </td><td> S15-012 </td><td> Zellkultur </td></tr><tr><td> PBS </td><td> PAA </td><td> H15-002 </td><td> Zellkultur </td></tr><tr><td> 0,05% Versuchenpsin-EDTA </td><td> Life Technologies </td><td> 25300-062 </td><td></td></tr><tr><td> 0,45 um Sterilfilter </td><td> Sartorius </td><td> 16555 </td><td></td></tr><tr><td> 3,5 cm Petrischale </td><td> BD Falcon </td><td> 353001 </td><td></td></tr><tr><td> 15 ml-Falcon-Röhrchen </td><td> BD Falcon </td><td> 352096 </td><td></td></tr><tr><td> 50 ml-Falcon-Röhrchen </td><td> BD Falcon </td><td> 352070 </td><td></td></tr><tr><td> 75 cm 2 Zellkulturflasche </td><td> BD Falcon </td><td> 353136 </td><td></td></tr><tr><td> Pinzette, feine </td><td> Dumont </td><td> 2-1032; 2-1033 </td><td> # 3c; # 5 </td></tr><tr><td> Pinzette, flache Spitze </td><td> KLS Martin </td><td> 12-120-11 </td><td></td></tr><tr><td> 13 cm chirurgische Scheren </td><td> Aesculap </td><td> BC-140-R </td><td></td></tr><tr><td> Stereomikroskop </td><td> Leica </td><td></td><td> MZ7.5 </td></tr><tr><td> Stereomikroskop + Kamera </td><td> Leica </td><td></td><td> MZ16F; DFC320 </td></tr><tr><td> Microscope + Kamera </td><td> Zeiss, Canon </td><td></td><td> Primo Vert; PowerShot A650 IS </td></tr><tr><td> Zentrifugieren </td><td> Eppendorf </td><td> 5805000.017 </td><td> Centrifuge5804R </td></tr><tr><td> Orbitalschüttler </td><td> Thermo Scientific </td><td> SHKE 4450-1CE </td><td> MaxQ 4450 </td></tr><tr><td> Wasserbad </td><td> Julabo </td><td></td><td> SW20, 37 ° C </td></tr></tbody></table>

isolation und kultur von maus kortikale astrozyten

Isolation and Culture of Mouse Cortical Astrocytes

Astrozyten sind eine reiche Zelltyp im Gehirn von Säugetieren, aber es bleibt noch viel über ihre molekularen und funktionellen Eigenschaften erlernt werden. In vitro Astrozyten Zellkultur-Systeme können verwendet werden, um die biologischen Funktionen dieser Gliazellen im Detail zu studieren. Dieses Video-Protokoll zeigt, wie reine Astrozyten durch Isolierung und Kultivierung von gemischten kortikalen Zellen der Maus Welpen zu erhalten. Die Methode basiert auf der Abwesenheit von lebensfähigen Neuronen und der Trennung von Astrozyten, Oligodendrozyten und Mikroglia, die drei wichtigsten glialen Zellpopulationen des zentralen Nervensystems, in Kultur. Repräsentative Bilder in den ersten Tagen der Kultur zeigen die Gegenwart einer gemischten Zellpopulation, und zeigen den Zeitpunkt, wann Astrozyten konfluent werden und sollte von Mikroglia und Oligodendrozyten getrennt werden. Darüber hinaus zeigen wir, Reinheit und astrozytären Morphologie der Astrozyten mit immunzytochemische Färbungen für gut etabliert undneu beschriebenen Astrozyten Marker. Diese Kultur kann leicht verwendet werden, um reine Maus Astrozyten und Astrozyten-konditioniertem Medium zur Untersuchung verschiedener Aspekte der Astrozyten Biologie erhalten.

Nach Isolierung des gesamten Gehirn der Maus (Abbildung 1A), das Kleinhirn und die Riechkolben müssen entfernt (Abbildung 1B) werden. Die Rinden werden mit der Maus Hirnstamm (1C) und der Hirnhäute der einzelnen Kortex (1D) geschält werden sorgfältig entfernt (1E). Hirnhäute sind offensichtlich durch die meningea und unvollständige Entfernung führt zur Verunreinigung der endgültigen Astrozyten Kultur meningealen Zellen und Fibroblasten....

Astrozyten wurden erkannt, vielseitige beteiligten Zellen in grundlegender biologischer Prozesse, die wichtig für die normale Entwicklung des Gehirns und Funktion, und das zentrale Nervensystem Reparatur sein. Hier präsentieren wir ein schnelles Verfahren zur reinen Maus Astrozytenkulturen erhalten, um die Biologie dieser wichtigen Klasse von zentralen Nervensystems Zellen zu untersuchen.

Isolation und Kultur von Maus Kortikale Astrozyten

Astrocytes  are an abundant cell type in the mammalian brain, yet much remains to be  learned about their molecular and functional characteristics. In ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, reine Astrozytenkulturen zu erhalten, indem gemischte kortikale Zellen von P eins bis P vier Maus-Jungtieren isoliert und kultiviert werden. Dies wird erreicht, indem zunächst die Hirnrinde von Mäusebabys entnommen und die Hirnhäute entfernt werden. Der zweite Schritt besteht darin, die Rinde in kleine Stücke zu schneiden, die Rindenstücke durch Trypsin und Tation zu dissoziieren, um Einzelzellen zu erhalten, und die einzelnen Zellen auf mit Poly de Lycine beschichteten Gewebekulturflaschen zu plattieren.Nach sieben bis acht Tagen haben Astrozyten, Mikroglia und Oligodendrozyten unterschiedliche Schichten gebildet, und die Trennung von Astrozyten von Mikroglia und Oligodendrozyten wird durch Schütteln des Gewebekulturkolbens auf einem Orbitalschüttler erreicht. Der letzte Schritt ist die Ionisierung und Ernte der verbleibenden Astrozyten, die dann in einem Gewebekulturkolben wieder plattiert werden. Letztendlich werden die Astrozyten 12 bis 14 Tage nach der ersten Zellteilung in der für Experimente geeigneten Konzentration plattiert und die Zellreinheit kann durch Immun-Zytochemie unter Verwendung von Astrozyten-spezifischen Markern

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In diesem Video beschreiben wir die Methode, um ein reines Präparat von Astrozyten aus neugeborenen Mäusen zu erhalten.

Astrozytenisolierung: Eine Methode zur reinen Präparation von kortikalen Astrozyten der Maus

Das Video demonstriert eine Technik zur Isolierung von Mikroglia aus der Rinde eines erwachsenen Mäusegehirns. Zunächst wird der Kortex segmentiert und homogenisiert, um Neuronen und andere Gliazellen zu entfernen und die Mikroglia zu erhalten. Anschließend wird die Zellsuspension magnetischen Anti-Myelin-Mikrokügelchen und einem Magnetfeld ausgesetzt, wodurch Mikroglia und myeloische Zellen effektiv von Myelin-Trümmern und myelinhaltigen Zellen getrennt werden.

Isolierung von Mikroglia aus der Hirnrinde eines adulten Mausgehirns

Das Video zeigt eine einfache Methode, um murine Astrozyten isoliert von anderen Gehirnzellen zu kultivieren. Während der Kultivierung werden durch die Verwendung von Astrozyten-spezifischen Medien und die Hemmung der Adhärenz nicht-astrozytärer Zellen selektiv Astrozyten kultiviert. Diese kultivierten Astrozyten weisen eine sternförmige Morphologie mit feinen Fortsätzen auf.

Eine einfache Technik zur Isolierung und Kultivierung von murinen Astrozyten

Dieses Video zeigt eine Methode zur Isolierung von zerebralen Perizyten aus einem Mäusegehirn. Die isolierten Zellen werden in perizytenspezifischen Medien kultiviert, um die Perizytenproliferation zu fördern.

Isolierung und Kultivierung von zerebralen Perizyten der Maus

Ein Schlüssel zur erfolgreichen Untersuchung der Mikroglia-Biologie ist die Erhaltung der Immunfunktion Mikroglia ex vivo bei der Isolierung von ZNS-Gewebe. Trenn Mikroglia über Dreh Schütteln Ergebnisse in hochreiner und immunofunctional Zellkulturen durch Fluoreszenz-Bildgebung, Immunzytochemie, und ELISA folgenden Mikroglia-Aktivierung mit der proinflammatorische Stimuli Lipopolysaccharide (LPS) und Pam 3 4 CSK (Pam) bewertet.

Isolation kortikaler Mikroglia mit bewahrten Immunophänotyp und Funktionalität aus Murine Neugeborene

Phänotypische Wildtyp-Astrozyten und neurale Stammzellen, die von Mäusen entnommen wurden, die mit floxierten, bedingten onkogenen Allelen gezüchtet und über virale Cre-vermittelte Rekombination transformiert wurden, können zur Modellierung der Astrozytom-Pathogenese in vitro und in vivo durch orthotope Injektion von transformierten Zellen in Gehirne von syngenen, immunkompetenten Wurfgeschwistern verwendet werden.

Modellierung Astrozytom Pathogenese In-vitro- Und In Vivo Verwenden kortikale Astrozyten oder neuralen Stammzellen aus dem Bedingten, gentechnisch veränderte Mäuse

Astrozyten sind eine der wichtigsten Schlüsselspieler im zentralen Nervensystem (ZNS). Hier berichten wir eine praktische Methode der sexed Hippokampus - Astrozyten Kulturprotokoll , um die zugrunde liegenden Mechanismen der Astrozytenfunktion bei männlichen und weiblichen Neugeborenen Welpen nach In-vitro - Ischämie zu untersuchen.

Geschlechtsunterschiede in Mäuse Hippocampus Astrozyten nach<em&gt; In-Vitro</em&gt; Ischemia

Dieses Protokoll beschreibt die indirekte Neuron-Astrozyten Co-Kultur für compartmentalized Analyse von Neuron-Glia Interaktionen.

Die indirekte Neuron-Astrozyten Cokultur Assay: Ein<em&gt; In Vitro</em&gt; Für die detaillierte Untersuchung von Neuron-Glia Interaktionen Set-up

Hier beschreiben wir eine In-vitro-Live-Imaging-Methode zur Visualisierung des intrazellulären Transports von Organellen und des Handels mit Plasmamembranproteinen in murinen Astrozyten. Dieses Protokoll stellt auch eine Bildanalysemethodik zur Bestimmung von Frachttransportrouten und Kinetik dar.

Visualisierung und Analyse des intrazellulären Transports von Organellen und anderen Ladungen in Astrozyten

Hier beschreiben wir ein detailliertes Protokoll zur Erzeugung hochangereicherter Kulturen von Astrozyten, die aus verschiedenen Regionen des Zentralnervensystems postnataler Mäuse stammen, und deren direkte Umwandlung in funktionelle Neuronen durch die erzwungene Expression von Transkriptionsfaktoren.

Isolierung und direkte neuronale Reprogrammierung von Maus-Astrozyten

Dieses Protokoll beschreibt die Isolierung von gereinigten Astrozyten und Mikroglia aus dem Rückenmark der erwachsenen Maus und erleichtert spätere Anwendungen wie RNA-Analyse und Zellkultur. Es umfasst detaillierte Zelldissoziationsmethoden und -verfahren, die darauf ausgelegt sind, sowohl die Qualität als auch die Ausbeute isolierter Zellen zu verbessern.

Isolierung von reinen Astrozyten und Mikroglia aus dem Rückenmark adulter Mäuse für In-vitro-Assays und Transkriptomstudien

Lernen Sie die Isolation und Kultur reiner Astrozyten aus der Mauskortex für Neurowissenschaften. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Astrozytenbiologie und neuronaler Interaktion im ZNS.

Isolation und Kultur von Maus Kortikale Astrozyten

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