Name: Protein Transfektion von Maus Lung (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-05-15T12:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 21 s
Description: Lernen Sie eine effiziente Protein-Transfektionsmethode für Mäuselungen mit lipidbasiertem Reagenz und Mikrosprüher. Dieses Protokoll minimiert unspezifische Effekte und ermöglicht präzise Expressionsstudien in vivo.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Diese Arbeit wurde von den National Institutes of Health (7R01HL098528-03) und FAMRI Clinical Innovator Award unterstützt.

1. Herstellung von Protein-Transfektionsreagenz <ol><li> Lösen Sie die Pro-Ject Reagenz durch Zugabe von 250 ul Methanol oder Chloroform zu dem Röhrchen mit dem trockenen Film. </li><li> Vortex für 10-20 sec bei Höchstgeschwindigkeit. </li><li> Je 20 ul Pro-Ject Reagenz in separaten Reaktionsgefäßen. </li><li> Verdampft das Lösungsmittel, indem die Reaktionsgefäße mit dem Pro-Ject Reagenz unter einer Laminar-Flow-Haube für mindestens 6 h bei Raumtemperatur. Es muss vollständig trocken sein. Alternativ trocknen die Pro-Ject Reagens unter Verwendung einer Vakuum getrocknet. </li><li> Bewahren Sie die Röhrchen bei -20 ° C. Sie sind gut für ein Jahr bei dieser Temperatur. </li></ol> 2. Hinzufügen Protein zu Pro-Ject Reagenz <ol><li> Je 50 ul PBS, enthaltend 2,0 ug des Proteins von Interesse, in ein Röhrchen mit 20 ul getrockneten Pro-Ject Transfektionsreagenz. </li><li> Nach Zugabe des Proteins, mischen Sie die Lösung durch Vortexen bei niedriger Geschwindigkeit foder 3-5 sec, gefolgt von Inkubation für 30 min bei Raumtemperatur. </li></ol> 3. Intratracheale Verwaltung von Protein <ol><li> Anesthetize Mäuse durch intraperitoneale Injektion von Ketamin / Xylazin (100 mg / kg und 10 mg / kg). </li><li> Nach Sedierung erreicht ist, werden die Mäuse aus ihren oberen Schneidezähne mit einem speziell entwickelten Plattform (Abbildung 1) suspendiert. </li><li> Mit einer Pinzette und einer Büroklammer nach einem Laryngoskop wird die Oropharynx geöffnet, so daß der Katheter eingeführt werden kann (Abb. 2). Die Stimmbänder sind visualisiert, indem eine Lichtquelle gegen die Luftröhre der Maus. </li><li> Das Protein / Projekt Reagenzmischung (50 ul) wird durch die Luftröhre mit einer Penn Century Microsprayer injiziert. </li></ol>

<ol><li>Glasser, S. W., Korfhagen, T. R., Wert, S. E., Whitsett, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+models+for+study+of+pulmonary+development+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Transgenic models for study of pulmonary development and disease.</a> Am. J. Physiol. 267, 489-497 (1994).</li>
<li>D'Armiento, J., Dalal, S. S., Okada, Y., Berg, R. A., Chada, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagenase+expression+in+the+lungs+of+transgenic+mice+causes+pulmonary+emphysema%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Collagenase expression in the lungs of transgenic mice causes pulmonary emphysema.</a> Cell. 71, 955-961 (1992).</li>
<li>Foronjy, R. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Superoxide+dismutase+expression+attenuates+cigarette+smoke-+or+elastase-generated+emphysema+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Respir+Crit.+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Superoxide dismutase expression attenuates cigarette smoke- or elastase-generated emphysema in mice.</a> Am. J. Respir Crit. Care Med. 173, 623-631 (2006).</li>
<li>Foronjy, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+divergent+roles+of+secreted+frizzled+related+protein-1+%28SFRP1%29+in+lung+morphogenesis+and+emphysema%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">The divergent roles of secreted frizzled related protein-1 (SFRP1) in lung morphogenesis and emphysema.</a> Am. J. Pathol. 177, 598-607 (2010).</li>
<li>Costa, R. H., Kalinichenko, V. V., Lim, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcription+factors+in+mouse+lung+development+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Lung+Cell+Mol.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Transcription factors in mouse lung development and function.</a> Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 280, 823-838 (2001).</li>
<li>Perl, A. K., Tichelaar, J. W., Whitsett, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditional+gene+expression+in+the+respiratory+epithelium+of+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Transgenic+Research%22%5BJournal%5D)">Conditional gene expression in the respiratory epithelium of the mouse.</a> Transgenic Research. 11, 21-29 (2002).</li>
<li>Morimoto, M., Kopan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((rtTA+toxicity+limits+the+usefulness+of+the+SP-C-rtTA+transgenic+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">rtTA toxicity limits the usefulness of the SP-C-rtTA transgenic mouse.</a> Dev. Biol. 325, 171-178 (2009).</li>
<li>Waehler, R., Russell, S. J., Curiel, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+targeted+viral+vectors+for+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Genetics%22%5BJournal%5D)">Engineering targeted viral vectors for gene therapy.</a> Nature reviews. Genetics. 8, 573-587 (2007).</li>
<li>Crystal, R. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Administration+of+an+adenovirus+containing+the+human+CFTR+cDNA+to+the+respiratory+tract+of+individuals+with+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Genet%22%5BJournal%5D)">Administration of an adenovirus containing the human CFTR cDNA to the respiratory tract of individuals with cystic fibrosis.</a> Nat. Genet. 8, 42-51 (1994).</li>
<li>Merkel, O. M., Zheng, M., Debus, H., Kissel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+gene+delivery+using+polymeric+nonviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Pulmonary gene delivery using polymeric nonviral vectors.</a> Bioconjugate Chemistry. 23, 3-20 (2012).</li>
<li>Yang, Y., Li, Q., Ertl, H. C., Wilson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+and+humoral+immune+responses+to+viral+antigens+create+barriers+to+lung-directed+gene+therapy+with+recombinant+adenoviruses%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Cellular and humoral immune responses to viral antigens create barriers to lung-directed gene therapy with recombinant adenoviruses.</a> J. Virol. 69, 2004-2015 (1995).</li>
<li>Liu, Q., Muruve, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+basis+of+the+inflammatory+response+to+adenovirus+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Molecular basis of the inflammatory response to adenovirus vectors.</a> Gene Ther. 10, 935-940 (2003).</li>
<li>Pfeifer, C., Aneja, M. K., Hasenpusch, G., Rudolph, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adeno-associated+virus+serotype+9-mediated+pulmonary+transgene+expression%3A+effect+of+mouse+strain%2C+animal+gender+and+lung+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Adeno-associated virus serotype 9-mediated pulmonary transgene expression: effect of mouse strain, animal gender and lung inflammation.</a> Gene Ther. 18, 1034-1042 (2011).</li>
<li>Wallace, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+phosphatase+2A+regulates+innate+immune+and+proteolytic+responses+to+cigarette+smoke+exposure+in+the+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol.+Sci%22%5BJournal%5D)">Protein phosphatase 2A regulates innate immune and proteolytic responses to cigarette smoke exposure in the lung.</a> Toxicol. Sci. 126, 589-599 (2012).</li>
<li>Wallace, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+Phosphatase+2a+%28Pp2a%29+Regulates+Innate+Immune+and+Proteolytic+Responses+to+Cigarette+Smoke+Exposure+in+the+Lung%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol.+Sci%22%5BJournal%5D)">Protein Phosphatase 2a (Pp2a) Regulates Innate Immune and Proteolytic Responses to Cigarette Smoke Exposure in the Lung.</a> Toxicol. Sci. , (2012).</li>
<li>Brown, R. H., Walters, D. M., Greenberg, R. S., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+of+endotracheal+intubation+and+pulmonary+functional+assessment+for+repeated+studies+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">A method of endotracheal intubation and pulmonary functional assessment for repeated studies in mice.</a> J. Appl. Physiol. 87, 2362-2365 (1999).</li>
</ol>

Die Autoren haben keine Interessenkonflikte offen zu legen.

Der Vorteil dieser Technik gegenüber anderen Methoden ist, dass sie in Protein-Spiegel erhöht und die Aktivität im Lungengewebe selbst erzeugt. Darüber hinaus dringt zu den distalen Bereichen der Lunge zu bleiben nur innerhalb der Atemwege gegenüber. Wir haben erhöhte Protein-Aktivität unserer Injektat auch nach lavaging der Atemwege mit einer Salzlösung 15 gemessen. Tissue Aktivität Analysen zeigen, dass das Protein in Zellen gelangen und nicht nur in den Lufträumen der Maus bleiben. Dies wurde durch Immunhi...

<table><tbody><tr><td>Pro-Ject</td><td>Pierce Bio</td><td>89850</td><td></td></tr><tr><td>Mikrosprühgerät</td><td>Penn Century</td><td>FMJ-250</td><td></td></tr><tr><td>Beta-Galactosidase</td><td>Pierce Bio</td><td>89850</td><td></td></tr><tr><td>Beta-Galactosidase-Antikörper</td><td>Santa Cruz Bio</td><td>SC-19119</td><td></td></tr><tr><td>Mausserumalbumin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A3139</td><td></td></tr><tr><td>Ketamin/Xylazin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Nr. K113</td><td></td></tr></tbody></table>

protein transfektion von maus lung

Protein Transfection of Mouse Lung

Zunehmende Proteinexpression ermöglicht es Forschern, besser zu verstehen, die funktionelle Rolle dieses Proteins bei der Regulation biologischer Prozesse Taste 1. In der Lunge wurde dies typischerweise durch genetische Ansätze transgenen Mäusen 2,3 oder virale oder nicht-virale Vektoren, die Protein-Ebene über eine erhöhte Genexpression 4 erhöhen nutzen erreicht. Transgene Mäuse sind teuer und zeitaufwendig zu erzeugen und die zufällige Insertion eines Transgens oder chronischen Genexpression normale Entwicklung der Lunge zu ändern und so die Nutzbarkeit des Modells 5. Während bedingten transgenics abzuwenden Probleme mit chronischer Genexpression 6 der reversen Tetracyclin-gesteuerten Transaktivator (rtTA)-Mäuse, die zur bedingten Ausdruck erzeugen zugeordnet sind, zu entwickeln spontanes Zwischenraumvergrößerung 7. Wie bei transgenen, ist die Verwendung von viralen und nicht-viralen Vektoren teuer 8 und Dosis-d provozierenependent Entzündungsreaktionen dass verwirren Ergebnisse 9 und 10 behindern Ausdruck. Darüber hinaus sind die Wirksamkeit von wiederholten Dosen durch verstärkte Immunantwort auf den Vektor 11,12 begrenzt. Forscher entwickeln Adeno-assoziierter viraler (AAV) Vektoren, die weniger Entzündung zu provozieren und mehr Ausdruck in der Lunge 13. Mit β-Galactosidase, präsentieren wir eine Methode zur schnellen und effektiv erhöht Proteinexpression in der Lunge über eine direkte Protein Transfektionstechnik. Dieses Protokoll mischt eine feste Menge an gereinigtem Protein mit 20 ul einer Lipid-basierte Transfektionsreagenz (Pro-Ject, Pierce Bio), um das Eindringen in das Lungengewebe selbst zu ermöglichen. Die liposomale Proteinmischung wird anschließend in den Lungen der Mäuse über die Luftröhre mit einem Microsprayer (Penn Century, Philadelphia, PA) injiziert. Die Feinzerstäuber erzeugt eine feine Wolke aus flüssigen Aerosol in den Lungen. Mit Hilfe der Technikwir haben eine gleichmäßige Abscheidung des injizierten Proteins während der Atemwege und die Alveolen von Mäusen 14 demonstriert. Das Lipid Transfektion Technik ermöglicht die Verwendung einer kleinen Menge an Protein zu erzielen. Dies begrenzt die entzündliche Reaktion, die ansonsten durch hohe Protein Verabreichung hervorgerufen würde. In der Tat, mit dieser Technik, die wir veröffentlicht, dass wir in der Lage, deutlich zu erhöhen PP2A Aktivität in der Lunge, ohne die Lungenspülung Zellularität 15 waren. Lungenspülung Zellularität genommen 24 Stunden nach der Belastung war vergleichbar mit Kontrollen (27 ± 4 Kontrolle vs 31 ± 5 Albumin transfizierten; N = 6 pro Gruppe). Außerdem erhöht es Protein-Ebene ohne eine Lunge entwicklungsbedingten Veränderungen oder Änderungen an der Architektur, die in transgenen Modellen auftreten können. Jedoch kann die Notwendigkeit einer wiederholten Verabreichungen machen diese Technik weniger günstig für Studien, die die Auswirkungen einer langfristigen Erhöhung der Proteinexpression. Dies würde besonders tru seine für Proteine ​​mit kurzen Halbwertszeiten.

<html> Um die Wirksamkeit unserer Technik demonstrieren verwendeten wir eine Feinzerstäuber (Penn Jahrhundert), um die Luftröhre von Mäusen mit 2 ug Maus Albumin (Sigma) in 50 ul PBS, das 20 ul Pro-Ject Transfektionsreagenz enthielt, gelöst zu injizieren. Die Albumin behandelten Mäusen mit Mäusen, die in gleicher Weise mit 2 ug beta-Galaktosidase-Proteins (Pierce Bio) behandelt wurden, verglichen. Nach 24 Stunden wurden die Mäuse getötet und die Lungen wurden für die histologische Analyse verarbeitet. Immunhistochemie fü...

Transgene Mäuse, oder virale Vektoren verwendet, um Protein-Expression in der Lunge verbessern. Allerdings sind diese Techniken zeitaufwendig, technisch anspruchsvoll und haben Off-Target-Effekte, die Ergebnisse verwechseln kann. Unser Protein Transfektionsprotokoll verwendet eine Lipidbasis Transfektionsreagenz und einer ultrafeinen Feinzerstäuber gleichmäßig liefern aktives Protein zu Lungenzellen.

Protein Transfektion von Maus Lung

Increasing protein expression enables researchers to  better understand the functional role of that protein in regulating key  biological processes1. In ...

Das allgemeine Ziel dieses Verfahrens besteht darin, ein Protein in die Mauslunge einzuschleusen. Dazu wird das Protein von Interesse zunächst in einem Projekt-Transfektionsreagenz suspendiert. Anschließend wird eine Maus anästhesiert und auf eine spezielle Plattform für die Injektion platziert.Eine Lichtquelle wird verwendet, um die Einführung des Mikrosprühgeräts in die Luftröhre zu erleichtern. Schließlich werden 50 Mikroliter Flüssigkeit, die das Protein der Untersuchung enthält, injiziert. Letztendlich dient diese Proteintansfektionstechnik dazu, erhöhte Proteinspiegel in den Lungen von Mäusen nachzuweisen.Obwohl diese Methode für die Anwendung bei chronisch obstruktiver Lungenerkrankung konzipiert wurde, kann sie auch bei anderen Erkrankungen wie Asthma oder pulmonaler Fibrose eingesetzt werden. Eine visuelle Demonstration dieser Methode ist entscheidend. Da die Schritte der intratrachealen Injektion schwer zu erlernen sind, erfordern sie eine korrekte Positionierung der Atemwege der Maus und eine transilluminierte Sicht auf die Stimmbänder.Beginnen Sie zunächst mit der Zubereitung des Proteintransfektionsreagens. Geben Sie 250 µL Methanol oder Chloroform in das Röhrchen mit dem trockenen Projekt.Film. Anschließend wirbeln Sie das Röhrchen 10 bis 20 Sekunden lang bei maximaler Geschwindigkeit im Vortex.Nach dem Auflösen 20 Mikroliter Projekt-Reagenz in separate Mikrozentrifugenröhrchen pipettieren. Diese Röhrchen unter einer laminaren Luftströmungshauben platzieren, um das Lösungsmittel mindestens sechs Stunden lang zu verdunsten. Bei Raumtemperatur müssen die Röhrchen vollständig trocken sein.Lagern Sie die Röhrchen bei minus 20 Grad Celsius, wo sie ein Jahr lang haltbar bleiben. Am Tag der Transfektion entnehmen Sie eine Portion Transfektionsreagenz und 50 Mikroliter PBS, die zwei Mikrogramm des Proteins der Interesse enthalten. Mischen Sie die Lösung durch Vortexen bei niedriger Geschwindigkeit für drei bis fünf Sekunden und inkubieren Sie sie vor der Verwendung 30 Minuten bei Raumtemperatur.Wenn das Protein bereit ist, betäuben Sie eine Maus, um eine intratracheale Applikation vorzubereiten. Für die intratracheale Injektion wird eine speziell konstruierte Plattform verwendet. Diese weist eine Rampe in einem Winkel von 45 Grad zur Basis sowie einen Metallbügel auf, der an zwei Haken an der Oberseite hängt.Nach der Anästhesie wird der Draht verwendet, um die Maus an ihren oberen Schneidezähnen aufzuhängen. Sobald die Maus fixiert ist, platzieren Sie eine Lichtquelle an die Trachea, um die Sichtbarmachung der Stimmbänder mithilfe von Pinzette und Büroklammer zu erleichtern. Öffnen Sie als Laryngoskop den Oropharynx und führen Sie den Katheter ein.Bei Verwendung des Micros-Sprühgeräts ist es wichtig, beim Betätigen des Kolbens ausreichende Kraft aufzuwenden. Andernfalls entstehen statt eines feinen Nebels Tropfen, die möglicherweise die Atemwege der Maus verlegen könnten. Wenn alles korrekt positioniert ist, injizieren Sie 50 µL der Proteinmischung mittels eines Pen-Century-Mikrosprühgeräts durch die Trachea.In diesem Beispiel wurden Mäuse 24 Stunden nach der Proteinttransfektion intratracheal entweder mit Mausalbumin oder mit Beta-Galacto injiziert. Die Färbung, die hier durch die großen Pfeile gekennzeichnet ist, wurde in den Atemwegen der mit Beta-Galacto behandelten Mäuse nachgewiesen, nicht jedoch in den mit Albumin behandelten Mäusen. Einmal beherrscht, könnte diese Technik innerhalb von 10 bis 15 Minuten durchgeführt werden. Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man eine intratracheale Injektion bei Mäusen zur Proteinttransfektion durchführt.

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Dieses Video demonstriert eine Methode zur Generierung eines Mausmodells der Pleuraverbreitung durch Injektion von Lungenkrebszellsuspension in die Brusthöhle einer immundefizienten Maus.

Etablierung eines Mausmodells für pleural disseminierten Lungenkrebs

Primäre menschliche Bronchialepithelzellen sind schwer zu transduzieren. Dieses Protokoll beschreibt die Produktion von Lentiviren und deren Konzentration sowie die optimalen Kulturbedingungen, die notwendig sind, um in diesen Zellen während der Differenzierung zu einem pseudostratifizierten Epithel hocheffiziente Transduktionen zu erzielen.

Optimale Lentivirus Produktion und Zellkulturbedingungen notwendig für eine erfolgreiche transduzieren primären humanen bronchialen Epithelzellen

Dieses Protokoll beschreibt die Verwendung der Multiphotonenmikroskopie zur Durchführung einer langfristigen hochauflösenden Einzelzellbildgebung der intakten Lunge in Echtzeit unter Verwendung eines vakuumstabilisierten Bildgebungsfensters.

Langfristige High-Resolution Intravitalmikroskopie in der Lunge mit einem Vakuum-Stabilisierte Imaging-Fenster

Dieses Manuskript bietet eine Beschreibung der Methodik, die zur Etablierung von Transduktions-Transplantations-Mausmodellen verwendet wurde. Es wird detailliert über technische Fehler berichtet, die bei der Durchführung von Knochenmarktransplantationen vermieden werden sollten. Es sollte ein klares Verständnis für die Bedeutung eines hohen Virustiters, Transfektion/Transduktion und Bestrahlung gewonnen werden.

Transduction-Transplantation Maus-Modell der myeloproliferativen Neoplasien

Hier präsentieren wir Ihnen ein Protokoll zur Förderung der Transgen-Integration und Herstellung von Gründer Transgene Mäuse mit hoher Wirksamkeit durch eine einfache Injektion eines Lentivirale Vektors in den Perivitelline Raum einer befruchteten Eizelle.

Lentivirale vermittelte Produktion von transgenen Mäusen: eine einfache und hocheffiziente Methode für die direkte Untersuchung der Gründer

Hier beschreiben wir eine minimalinvasive Phänomen orthotopen Transplantation Modell der Lunge Adenokarzinom Mauszellen als Zeit und kostensenkende Modell, nicht-kleinzelligem Lungenkrebs zu studieren.

Orthotopen Transplantation von Phänomen Lungenzellen Adenokarzinom, PD-L1 Ausdruck zu studieren

Dieses Protokoll beschreibt die Schritte, die unternommen wurden, um KRAS-Lungentumoren bei Mäusen zu induzieren, sowie die Quantifizierung gebildeter Tumoren durch Ultraschallbildgebung. Kleine Tumoren werden in frühen Zeitpunkten als B-Linien visualisiert. Zu späteren Zeitpunkten werden relative Tumorvolumenmessungen durch das Messwerkzeug in der Ultraschallsoftware durchgeführt.

Nachweis der Lungentumorprogression bei Mäusen durch Ultraschall-Bildgebung

Wir demonstrieren ein Schritt-für-Schritt-Protokoll zur Untersuchung der Genfunktion in peritonealen Gewebe-residenten Makrophagen in vivo unter Verwendung lentiviraler Vektoren.

Lentivirale Vektorpräparation für die effiziente Gen- und microRNA-Modulation von geweberesidenten Makrophagen in der Bauchhöhle in vivo bei Mäusen

Hier wird ein zellbasiertes AAV-Produktionsprotokoll für HEK293-Suspensionen vorgestellt, das zu einem reduzierten Zeit- und Arbeitsaufwand für die Vektorproduktion mit Komponenten führt, die für Forschungszwecke von kommerziellen Anbietern erhältlich sind.

Herstellung von Adeno-assoziierten Vektorchargen mit hoher Ausbeute unter Verwendung von HEK293-Suspensionszellen

Dieses Protokoll beschreibt einen skalierbaren intraduktalen CRISPR-Screening-Ansatz, der parallele in vivo Gen-Knockout- und Aktivierungsstudien in der Mammarydrüse der Maus ermöglicht.

Paralleles In vivo-Screening von Gen-Knockout und -Aktivierung in der Mammarisdrüse der Maus

Lernen Sie eine effiziente Protein-Transfektionsmethode für Mäuselungen mit lipidbasiertem Reagenz und Mikrosprüher. Dieses Protokoll minimiert unspezifische Effekte und ermöglicht präzise Expressionsstudien in vivo.

Protein Transfektion von Maus Lung

Weitere Videos entdecken