Name: Messung der taktile Allodynie in einem Mausmodell der bakteriellen Prostatitis (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-01-16T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 46 s
Description: Erfahren Sie, wie Sie taktile Allodynie in einem Mausmodell der bakteriellen Prostatitis mit UPEC-Infektion und von-Frey-Filamenten messen. Diese Methode ermöglicht die standardisierte Schmerzbewertung bei chronischem Beckenschmerzsyndrom.

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Diese Arbeit wurde durch Zuschüsse 1K01DK079019A2 (PT) von der NIH / NIDDK unterstützt.

Ein. Bakterien Vorbereitung für Maus Impfung Folgendes muss unter aseptischen Bedingungen erfolgen. <ol><li> Nehmen Sie ein 17 x 100 mm Polypropylen-Röhrchen mit Kappen und 3 ml frisches Luria Broth (LB)-Medium. Mit autoklaviert Tipps, nehmen Sie sich gefrorenen Bakterien Glycerin Lager des Stammes CP1 2 und übertragen eine kleine Menge der Kultur in das Röhrchen mit der LB-Medien. Den Schlauch Kappe so dass Sauerstoff noch in der Lage, um das Rohr eindringen - die Kultur muss unter aeroben Bedingungen wachsen. Das Röhrchen bei 37 ° C in einem Schüttelinkubator bei 220 rpm über Nacht. </li><li> Am nächsten Tag übertragen 5 ul-Nacht-Kultur in ein frisches Röhrchen mit 3 ml LB-Medium wachsen und unter statischen Bedingungen in einem Inkubator über Nacht bei 37 ° C. </li><li> Am Tag 3 Transfer 40 ul der Kultur in aa 50 ml Röhrchen mit 40 ml LB-Medium jeweils. In einem 37 ° C statische Inkubator über Nacht. </li><li> Schalten Sie ein und stellen Zentrifuge auf 4 ° C.Sobald Zentrifuge Endtemperatur erreicht, übertragen jede 40 ml Kultur in einem 40 ml Nalgene Zentrifugenröhrchen. </li><li> Wiegen Röhrchen Zentrifuge auszugleichen - die Lautstärke mit LB-Medium, wie gebraucht. Spin Röhrchen bei 6.000 rpm für 20 min. </li><li> Überstand sorgfältig abnehmen und vorsichtig auszusetzen Bakterienpellet in 40 ml steriler PBS. </li><li> Wiederholen Sie Schritt 1,5 mit PBS. </li><li> Absaugen Überstand und auszusetzen Bakterien in 500 ul sterilem PBS. Wird die Lösung in einem 1,5 ml Mikrozentrifugenröhrchen. Nehmen Sie sich 10 ul der Suspension und verdünnen in 990 ul eiskaltem PBS. Verwenden Sie ein Spektralphotometer, um die OD 420 nm zu lesen, um die Lautstärke für die Impfung benötigten bestimmen. Um das entsprechende Volumen bestimmen eiskaltem PBS, um Pellets in auszusetzen: Nehmen Sie die OD 420 nm-Nummer (in ml) und subtrahieren die geschätzte Volumen des Bakterienpellet [ex. OD 420 nm = 0,545, Pellet ca. 0,075 ml. 0,545 bis 0,075 = 0,470]. </li><li> Entfernen 10 ul der Bakteriensuspension und diLaute in 990 ul eiskaltem PBS. Lesen Sie die OD 420 nm. Das Ziel ist, eine OD 420 nm-Wert für die verdünnte Suspension von 1,000 ± 0,010 zu erreichen. Wenn die Anzahl Ihrer Verdünnung oberhalb dieses Ziels, fügen mehr Volumen der Suspension und nehmen eine andere Lesart. Wenn die Zahl unter dem 0,990 dann drehen sich die Aussetzung und wiederholen OD 420 nm Lesen bis zum Erhalt gewünschte Lektüre. </li></ol> 2. Tierische Infektion Mäuse (5 bis 7 Wochen alt, zehn pro Gruppe) wurden vom Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME) erworben. <ol><li> Mäuse werden anästhesiert durch Inhalation von 1-4% Isofluran in einem Plexiglas-Kammer und sind bis recumbent überwacht. </li><li> Eine Maus zu einem Zeitpunkt ist zur Instillation von Bakterien durch Katheterisierung mit einem Polyethylen (PE10) Katheter an einer modifizierten 30 G Nadel einer Hamilton-Spritze aus Glas (Länge 1,5 bis 2,0 cm) entnommen. Der Katheter mit der Nabe der Nadel eingeführt wird. Die Maus ist placed auf die dorsale Oberfläche unter Narkose gehalten mit einem Nasenkonus. </li><li> Der Penis des Maus extrudiert wird durch sanften Druck und großzügigen Mengen an Schmiermittel auf Wattestäbchen ist zum Schmieren Eingang des penilen Harnröhre verwendet. </li><li> 10 ul phosphatgepufferter Kochsalzlösung, enthaltend 1 x 10 8 Bakterien in die Harnröhre von betäubten Mäusen nach Katheterisierung eingeführt. </li><li> Die Mäuse werden in einer anästhesierten Zustand für 15 min in dem Plexiglas-Kammer aufrechterhalten nach bakterieller Einführung bakteriellen Befestigung zu ermöglichen und eine sofortige Wasserlassen verhindern. </li><li> Mäuse werden wieder in ihre Käfige gesetzt und überwacht für die nächsten 24 Stunden. </li></ol> 3. Behavior Testing Die Mäuse wurden vor der Infektion (Baseline) und an den Tagen 3, 7, 14, 21 und 28 nach der Infektion getestet. Bezeichnet Hyperalgesie und taktile Allodynie wurde anhand von Frey Filamente aufgebracht auf den Bauch 11,12 und der plantaren region der Hinterpfote 13. Testing zu einem festen Zeit-of-day wurde perfomed wurden Standard-Methodik und einzelne Experimentator Prüfung von allen Tieren beschäftigt. Verblendet Testen von Gruppen wurde verwendet, um die Grenzen der verhaltensbasierte Schmerzen Tests in Tiermodellen zu bekämpfen. Fünf einzelne von Frey Filamenten mit Kräften von 0,04, 0,16, 0,4, 1,0 und 4,0 g (Stoelting, USA) wurden auf das Abdomen und Häufigkeit der Wegziehreaktionen aufgebracht wurde berechnet. <ol><li> Nach einer 30 min Eingewöhnungszeit werden die Mäuse in den einzelnen Plexiglas Kammern (6 x 10 x12 cm) in-house mit einem Edelstahl-Drahtgitter-Boden aus gelegt. </li><li> Bezeichnet Hyperalgesie und taktile Allodynie wurden getestet unter Verwendung der fünf von Frey Filamenten. Jedes Filament wurde für 1-2 Sekunden mit einem Inter-Stimulus-Intervall von 5 Sekunden für insgesamt 10-mal angewendet, und die Haare wurden in aufsteigender Reihenfolge der Kraft getestet. </li><li> Jedes Filament mit dem unteren Bauchbereich in der allgemeinen Umgebung der Prostata aufgebracht undwurde darauf geachtet, verschiedene Bereiche innerhalb dieser Region zu stimulieren Desensibilisierung zu vermeiden oder &quot;Wind up&quot;-Effekte. Filamente wurden mit ansteigender Kraft für 1-2 sec mit mindestens 5 sec Intervallen zwischen Stimulationen für insgesamt 10-mal angewendet. </li><li> Drei Arten von Verhalten eine positive Reaktion auf Filament Stimulation betrachtet: 1) scharfe Einziehen des Bauches, 2) sofort Lecken oder Kratzen im Bereich der Wendel Stimulation; 3) Springen. </li><li> Ansprechfrequenz wurde als der Prozentsatz der positiven Antwort (von 10, z. B. 5 Antworten von 10 = 50%) berechnet und die Daten wurden als mittlere Prozentsatz der Ansprechfrequenz ± SE gemeldet </li><li> Tiere mit mehr als 25 positiven insgesamt Baseline Antworten werden von der Studie ausgeschlossen. </li><li> Taktile Allodynie wurde auf dem Plantarbereich der Hinterpfote mit von Frey Filamente mit Kräften von 0,04, 0,16, 0,4, 1,0 und 4,0 g getestet. Der Median 50% Wegziehschwelle (5) wurde mit dem up-downMethode, bei der Prüfung mit 0,04 g Filament gestartet wurde angewendet senkrecht zur Fußsohle der Hinterpfote, bis der Faden leicht gebeugt. Filamente wurden in aufsteigender Reihenfolge, bis eine positive Antwort wurde beobachtet, getestet. Eine positive Antwort auf das Filament wurde entweder als eine scharfe Rückzug der Pfote oder Lecken der Test paw definiert. Wenn eine positive Antwort aufgezeichnet wurde der nächste schwächeren Filamenten aufgebracht wurde, und wenn eine negative Antwort beobachtet wurde, dann wird die nächste stärkere Filament aufgebracht wurde. </li><li> Die Experimente und Methoden beschrieben, wurden überprüft und von der Northwestern University Tierpflege und benutzen Ausschuss. </li></ol>

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<li>Boehm, B. J., Colopy, S. A., Jerde, T. J., Loftus, C. J., Bushman, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+bacterial+inflammation+of+the+mouse+prostate%5BTitle%5D)+AND+%22The+Prostate%22%5BJournal%5D)">Acute bacterial inflammation of the mouse prostate.</a> The Prostate. 72, 307-317 (2012).</li>
<li>Rivero, V. E., Cailleau, C., Depiante-Depaoli, M., Riera, C. M., Carnaud, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-obese+diabetic+%28NOD%29+mice+are+genetically+susceptible+to+experimental+autoimmune+prostatitis+%28EAP%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+autoimmunity%22%5BJournal%5D)">Non-obese diabetic (NOD) mice are genetically susceptible to experimental autoimmune prostatitis (EAP).</a> Journal of autoimmunity. 11, 603-610 (1998).</li>
<li>Pakarainen, T., Zhang, F. P., Makela, S., Poutanen, M., Huhtaniemi, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Testosterone+replacement+therapy+induces+spermatogenesis+and+partially+restores+fertility+in+luteinizing+hormone+receptor+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Testosterone replacement therapy induces spermatogenesis and partially restores fertility in luteinizing hormone receptor knockout mice.</a> Endocrinology. 146, 596-606 (2005).</li>
<li>Taguchi, O., Kojima, A., Nishizuka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+autoimmune+prostatitis+after+neonatal+thymectomy+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+experimental+immunology%22%5BJournal%5D)">Experimental autoimmune prostatitis after neonatal thymectomy in the mouse.</a> Clinical and experimental immunology. 60, 123-129 (1985).</li>
</ol>

Keine Interessenskonflikte erklärt.

Infektion der Maus Prostata mit UPEC ermöglicht für die in vivo-Modellierung von Ereignissen, die an der Pathogenese von bakteriellen Prostatitis, CP / CPPS oder als prädisponierende Ereignis in chronischen Entzündung beteiligt sein können. Die Methoden für die bakterielle Vorbereitung und Instillation draw auf eine große Menge an Literatur beschrieben auf UPEC Modelle weiblichen Harnwegsinfektion 7,14. Das Modell verfügt über eine breite Anwendbarkeit für das Studium Pathogenese, Testung potentielle...

<table border="1"><tbody><tr><td> Name des Reagenzes </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td></tr><tr><td> Kulturröhrchen </td><td> BD Falcon </td><td> 352059 </td></tr><tr><td> LB Broth Miller </td><td> EMD </td><td> EM1.10285.0500 </td></tr><tr><td> Nalgene Zentrifugenröhrchen </td><td> Thermo </td><td> 3118-0050 </td></tr><tr><td> Isofluran </td><td> Butler Schein </td><td> NDC 11695-6776-1 </td></tr><tr><td> Katheternadel 30G </td><td> Hamilton </td><td> 91030 </td></tr><tr><td> PE10 Schlauch </td><td> BD Intramedic </td><td> 427400 </td></tr><tr><td> Von Frey Filaments </td><td> Stoelting </td><td> 58025-31 </td></tr></tbody></table>

messung der taktile allodynie in einem mausmodell der bakteriellen prostatitis

Measurement of Tactile Allodynia in a Murine Model of Bacterial Prostatitis

Uropathogenen Escherichia coli (UPEC) sind Erreger, die eine wichtige Rolle bei Harnwegsinfektionen und bakterielle Prostatitis 1 spielen. Wir haben kürzlich gezeigt, dass UPEC eine wichtige Rolle bei der Initiierung von chronischen Schmerzen im Beckenbereich 2, ein Merkmal Chronische Prostatitis / chronisches Schmerzsyndrom des Beckens (CP / CPPS) 3,4 haben. Infektion der Prostata durch klinisch relevante UPEC können initiieren und zu etablieren chronischen Schmerzen durch Mechanismen, die Gewebeschäden und die Einleitung von Mechanismen der Autoimmunität 5 verbunden sein können. Eine Herausforderung für das Verständnis der Pathogenese der UPEC in der Prostata ist die relative Unzugänglichkeit der Prostata zur Manipulation. Wir verwendeten ein zuvor beschriebenes intraurethrale Infektion Methode 6 eine klinische Stamm UPEC in männlichen Mäusen somit Gründung einer aufsteigenden Infektion der Prostata zu liefern. Hier beschreiben wir unsere Protokolle für die Standardisierung der bacterial Inokulum 7 sowie das Verfahren zur Katheterisiervorrichtung narkotisierten männlichen Mäusen zur Instillation von Bakterien. CP / CPPS wird hauptsächlich durch das Vorliegen von taktiler Allodynie 4 charakterisiert. Behavior-Tests auf dem Konzept der kutanen Hyperalgesie aus bezeichnet viszeralen Schmerzen 8-10 basiert. Ein gereizter Fokus der viszeralen Geweben reduziert kutanen Schmerzschwelle ermöglicht eine übertriebene Reaktion auf normalerweise nicht-schmerzhafte Reize (Allodynie). Anwendung normaler Kraft auf die Haut führen anormalen Reaktionen, die mit der Intensität des darunterliegenden viszeralen Schmerzen erhöhen neigen. Wir beschreiben Methoden in NOD / ShiLtJ Mäusen, die von Frey Fasern zu verwenden, um taktile Allodynie über die Zeit in Reaktion auf eine einzelne Infektion mit Bakterien UPEC quantifizieren.

<html> Wir untersuchten NOD / ShiLtj und C57BL/6J männlichen Mäusen auf das Vorhandensein von chronischen Schmerzen bei bakteriellen Infektion. Männliche Mäuse (5 bis 7 Wochen alt) wurden mit Kochsalzlösung oder Bakterien in die Harnröhre (Abbildung 1) zugetropft. Mechanische Stimulation des Beckenbodens mit von Frey Filamente Kochsalzlösung eingeflößt C57BL/6J-Mäuse und UPEC-infizierten C57BL/6J Mäusen führte zu einer Reaktion Frequenz, die nicht während der 28-tägigen Kurs des Experiments (Abbi...

Infektion der Prostata kann ein Faktor bei der Vermittlung Schmerzen im Beckenbereich bei chronischer Prostatitis sein. Wir beschreiben das Verfahren zur Herstellung von standardisierten bakteriellen Inokulums Instillation von Bakterien in die Harnröhre des männlichen Mäusen und Methodik zur Messung taktile Allodynie bei Mäusen über die Zeit.

Messung der taktile Allodynie in einem Mausmodell der bakteriellen Prostatitis

Uropathogenic Escherichia coli (UPEC) are pathogens that play an important role in urinary tract infections and bacterial prostatitis1. We have recently ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, die taktile Allodynie bei einer Maus zu messen, die auf eine bakterielle Infektion der Prostata zurückzuführen ist. Dies wird erreicht, indem zunächst eine bakterielle Suspension für den Einbau in eine männliche Maus vorbereitet wird, die unter Narkose gestellt wird. Der zweite Schritt besteht darin, den Penis der Maus sanft zu extrudieren, gefolgt von einer intraurethralen Katheterisierung.Als nächstes werden Bakterien eingeschleust, die eine aufsteigende Infektion der Prostata der Maus auslösen. Der letzte Schritt ist die Messung der taktilen Allodynie nach einer Infektion. Letztendlich wird eine erhöhte Reaktionsfrequenz auf Röntgenfasern, die auf den Beckenbereich aufgetragen werden, verwendet, um eine erhöhte taktile Elo-DIA der Beckenregion als Reaktion auf bakterielle Prostatitis zu zeigen.Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber bestehenden Methoden wie der hormoninduzierten Prostatitis oder der Autoimmunprostatitis besteht darin, dass klinisch irrelevante Bakterien und eine natürliche aufsteigende Infektionsmethode verwendet werden, die für die Pathogenese der Prostataerkrankung wirklich wichtig sind. Im Allgemeinen werden

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Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Elektronische von-Frey-Messungen sind eine effektive und verbesserte Alternative zu klassischen von-Frey-Filamenten, da sie eine schnelle und präzise Messung der Veränderungen der mechanischen Entnahmeschwellen von Nagetieren bei kontinuierlich angelegten Druckreizen vor und nach einem Entzündungsereignis ermöglichen.

Messung von Veränderungen in Taktile Empfindlichkeit in der Hinterpfote von Mäusen unter Verwendung eines elektronischen von Frey Apparat

Wir beschreiben ein Protokoll, um die Entwicklung von Opioid-induzierte Hyperalgesie und Toleranz in Mäusen zu untersuchen. Basierend auf der Messung der thermischen und mechanischen nozizeptiven Reaktionen von naiven und Morphin-behandelten Tieren, erlaubt es, die Steigerung der Schmerzempfindlichkeit (Hyperalgesie) zu quantifizieren und Abnahme der Analgesie (Toleranz) mit chronischer Opiat-Verwaltung verbunden.

Bewertung von Morphin-induzierte Hyperalgesie und Schmerztoleranz in Mäuse mit Thermal-und Maschinen Nozizeptive Modalitäten

Neuropathische Schmerzen sind die Folge einer Verletzung oder Erkrankung des somatosensorischen Systems. Die "Manschette Modell" von neuropathischen Schmerzen bei Mäusen besteht aus der Implantation einer Polyethylen Manschette um den Hauptzweig des Ischiasnervs. Mechanische Allodynie wird mit Hilfe von Frey Filamente getestet.

Der Ischiasnerv cuffing Modell von neuropathischen Schmerzen bei Mäusen

Wir messen perigenital mechanische Empfindlichkeit und Mastzellaktivierung in der Prostata von männlichen C57BL / 6-Mäuse, die eine frühe Leben Stress Paradigma erfuhr - Neugeborenen von Müttern Trennung, um einen präklinischen Modell der chronischen Prostatitis / chronischem Schmerzsyndrom des Beckens zu induzieren.

Bewertung der perigenital Sensitivität und Prostatic Mastzellaktivierung in einem Mausmodell der Neonatal Maternal Separation

Hier ist ein Protokoll, das Schritte zur Etablierung eines Tiermodells für chronische Post-Ischämie-Schmerzen (CPIP) beschreibt. Dies ist ein anerkanntes Modell, das das menschliche komplexe regionale Schmerzsyndrom Typ-I iiaht. Mechanische und thermische Überempfindlichkeiten werden weiter ausgewertet, sowie Capsaicin-induzierte nocifensive Verhaltensweisen, die im CPIP-Rattenmodell beobachtet wurden.

Chronisches Post-Ischemia Schmerzmodell für komplexes regionales Schmerzsyndrom Typ-I bei Ratten

Um neuartige therapeutische Interventionen zur Prävention und Behandlung von Rückenschmerzen zu entwickeln, sind Tiermodelle erforderlich, um die Mechanismen und die Wirksamkeit dieser Therapien aus einer translationalen Perspektive zu untersuchen. Das vorliegende Protokoll beschreibt den BMS-Test, eine standardisierte Methode zur Beurteilung der mechanischen Empfindlichkeit des Rückens bei der Ratte.

Beurteilung der mechanischen Empfindlichkeit des Rückens bei der Ratte zur mechanistischen Untersuchung chronischer Rückenschmerzen

Methoden zur einfachen, schnellen Induktion eines Rückenschmerzmodells bei Mäusen werden hier unter Verwendung einer intraligamenten Injektion eines Plasminogenaktivators im Urin bereitgestellt.

Urokinase-Typ-Plasminogen-Aktivator-induziertes Modell für Rückenschmerzen bei Mäusen

Die partielle Ligatur des Ischiasnervs induziert lang anhaltende chronische neuropathische Schmerzen, die durch übertriebene Reaktionen auf thermische und mechanische Reize gekennzeichnet sind. Dieses Mausmodell für neuropathische Schmerzen wird häufig verwendet, um innovative Therapien zur Schmerzbehandlung zu untersuchen. Dieser Artikel beschreibt detailliert das chirurgische Verfahren zur Verbesserung der Standardisierung und Reproduzierbarkeit.

Partielle Ischiasnervligatur: Ein Mausmodell für chronische neuropathische Schmerzen zur Untersuchung der antinozizeptiven Wirkung neuartiger Therapien

In dieser Arbeit stellen wir ein Protokoll zur Bewertung der Nozizeption bei Mäusen vor, die mit Trypanosoma evansi infiziert sind, wobei das elektronische von-Frey-Gerät als Werkzeug verwendet wird, um die mechanischen Schwellenwerte der Hinterpfote und der Eingeweide zu messen.

Elektronische von Frey-Studie in Verbindung mit der Maus-Grimasse-Skala zur Beurteilung von Allodynie und Schmerzen bei Trypanosoma evansi-infizierten Mäusen

Das Protokoll beschreibt, wie die Kniehyperalgesie bei Mäusen gemessen werden kann. Wir zeigen Beispiele in Mausmodellen für akute Knieschmerzen sowie in Modellen für Osteoarthritis (OA).

Beurteilung der Kniehyperalgesie bei Mäusen mittels Druckanwendungsmessung

Erfahren Sie, wie Sie taktile Allodynie in einem Mausmodell der bakteriellen Prostatitis mit UPEC-Infektion und von-Frey-Filamenten messen. Diese Methode ermöglicht die standardisierte Schmerzbewertung bei chronischem Beckenschmerzsyndrom.

Messung der taktile Allodynie in einem Mausmodell der bakteriellen Prostatitis

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