Name: Messung der taktile Allodynie in einem Mausmodell der bakteriellen Prostatitis (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-01-16T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 46 s
Description: Erfahren Sie, wie Sie taktile Allodynie in einem Mausmodell der bakteriellen Prostatitis mit UPEC-Infektion und von-Frey-Filamenten messen. Diese Methode ermöglicht die standardisierte Schmerzbewertung bei chronischem Beckenschmerzsyndrom.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Diese Arbeit wurde durch Zuschüsse 1K01DK079019A2 (PT) von der NIH / NIDDK unterstützt.

Ein. Bakterien Vorbereitung für Maus Impfung Folgendes muss unter aseptischen Bedingungen erfolgen. <ol><li> Nehmen Sie ein 17 x 100 mm Polypropylen-Röhrchen mit Kappen und 3 ml frisches Luria Broth (LB)-Medium. Mit autoklaviert Tipps, nehmen Sie sich gefrorenen Bakterien Glycerin Lager des Stammes CP1 2 und übertragen eine kleine Menge der Kultur in das Röhrchen mit der LB-Medien. Den Schlauch Kappe so dass Sauerstoff noch in der Lage, um das Rohr eindringen - die Kultur muss unter aeroben Bedingungen wachsen. Das Röhrchen bei 37 ° C in einem Schüttelinkubator bei 220 rpm über Nacht. </li><li> Am nächsten Tag übertragen 5 ul-Nacht-Kultur in ein frisches Röhrchen mit 3 ml LB-Medium wachsen und unter statischen Bedingungen in einem Inkubator über Nacht bei 37 ° C. </li><li> Am Tag 3 Transfer 40 ul der Kultur in aa 50 ml Röhrchen mit 40 ml LB-Medium jeweils. In einem 37 ° C statische Inkubator über Nacht. </li><li> Schalten Sie ein und stellen Zentrifuge auf 4 ° C.Sobald Zentrifuge Endtemperatur erreicht, übertragen jede 40 ml Kultur in einem 40 ml Nalgene Zentrifugenröhrchen. </li><li> Wiegen Röhrchen Zentrifuge auszugleichen - die Lautstärke mit LB-Medium, wie gebraucht. Spin Röhrchen bei 6.000 rpm für 20 min. </li><li> Überstand sorgfältig abnehmen und vorsichtig auszusetzen Bakterienpellet in 40 ml steriler PBS. </li><li> Wiederholen Sie Schritt 1,5 mit PBS. </li><li> Absaugen Überstand und auszusetzen Bakterien in 500 ul sterilem PBS. Wird die Lösung in einem 1,5 ml Mikrozentrifugenröhrchen. Nehmen Sie sich 10 ul der Suspension und verdünnen in 990 ul eiskaltem PBS. Verwenden Sie ein Spektralphotometer, um die OD 420 nm zu lesen, um die Lautstärke für die Impfung benötigten bestimmen. Um das entsprechende Volumen bestimmen eiskaltem PBS, um Pellets in auszusetzen: Nehmen Sie die OD 420 nm-Nummer (in ml) und subtrahieren die geschätzte Volumen des Bakterienpellet [ex. OD 420 nm = 0,545, Pellet ca. 0,075 ml. 0,545 bis 0,075 = 0,470]. </li><li> Entfernen 10 ul der Bakteriensuspension und diLaute in 990 ul eiskaltem PBS. Lesen Sie die OD 420 nm. Das Ziel ist, eine OD 420 nm-Wert für die verdünnte Suspension von 1,000 ± 0,010 zu erreichen. Wenn die Anzahl Ihrer Verdünnung oberhalb dieses Ziels, fügen mehr Volumen der Suspension und nehmen eine andere Lesart. Wenn die Zahl unter dem 0,990 dann drehen sich die Aussetzung und wiederholen OD 420 nm Lesen bis zum Erhalt gewünschte Lektüre. </li></ol> 2. Tierische Infektion Mäuse (5 bis 7 Wochen alt, zehn pro Gruppe) wurden vom Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME) erworben. <ol><li> Mäuse werden anästhesiert durch Inhalation von 1-4% Isofluran in einem Plexiglas-Kammer und sind bis recumbent überwacht. </li><li> Eine Maus zu einem Zeitpunkt ist zur Instillation von Bakterien durch Katheterisierung mit einem Polyethylen (PE10) Katheter an einer modifizierten 30 G Nadel einer Hamilton-Spritze aus Glas (Länge 1,5 bis 2,0 cm) entnommen. Der Katheter mit der Nabe der Nadel eingeführt wird. Die Maus ist placed auf die dorsale Oberfläche unter Narkose gehalten mit einem Nasenkonus. </li><li> Der Penis des Maus extrudiert wird durch sanften Druck und großzügigen Mengen an Schmiermittel auf Wattestäbchen ist zum Schmieren Eingang des penilen Harnröhre verwendet. </li><li> 10 ul phosphatgepufferter Kochsalzlösung, enthaltend 1 x 10 8 Bakterien in die Harnröhre von betäubten Mäusen nach Katheterisierung eingeführt. </li><li> Die Mäuse werden in einer anästhesierten Zustand für 15 min in dem Plexiglas-Kammer aufrechterhalten nach bakterieller Einführung bakteriellen Befestigung zu ermöglichen und eine sofortige Wasserlassen verhindern. </li><li> Mäuse werden wieder in ihre Käfige gesetzt und überwacht für die nächsten 24 Stunden. </li></ol> 3. Behavior Testing Die Mäuse wurden vor der Infektion (Baseline) und an den Tagen 3, 7, 14, 21 und 28 nach der Infektion getestet. Bezeichnet Hyperalgesie und taktile Allodynie wurde anhand von Frey Filamente aufgebracht auf den Bauch 11,12 und der plantaren region der Hinterpfote 13. Testing zu einem festen Zeit-of-day wurde perfomed wurden Standard-Methodik und einzelne Experimentator Prüfung von allen Tieren beschäftigt. Verblendet Testen von Gruppen wurde verwendet, um die Grenzen der verhaltensbasierte Schmerzen Tests in Tiermodellen zu bekämpfen. Fünf einzelne von Frey Filamenten mit Kräften von 0,04, 0,16, 0,4, 1,0 und 4,0 g (Stoelting, USA) wurden auf das Abdomen und Häufigkeit der Wegziehreaktionen aufgebracht wurde berechnet. <ol><li> Nach einer 30 min Eingewöhnungszeit werden die Mäuse in den einzelnen Plexiglas Kammern (6 x 10 x12 cm) in-house mit einem Edelstahl-Drahtgitter-Boden aus gelegt. </li><li> Bezeichnet Hyperalgesie und taktile Allodynie wurden getestet unter Verwendung der fünf von Frey Filamenten. Jedes Filament wurde für 1-2 Sekunden mit einem Inter-Stimulus-Intervall von 5 Sekunden für insgesamt 10-mal angewendet, und die Haare wurden in aufsteigender Reihenfolge der Kraft getestet. </li><li> Jedes Filament mit dem unteren Bauchbereich in der allgemeinen Umgebung der Prostata aufgebracht undwurde darauf geachtet, verschiedene Bereiche innerhalb dieser Region zu stimulieren Desensibilisierung zu vermeiden oder &quot;Wind up&quot;-Effekte. Filamente wurden mit ansteigender Kraft für 1-2 sec mit mindestens 5 sec Intervallen zwischen Stimulationen für insgesamt 10-mal angewendet. </li><li> Drei Arten von Verhalten eine positive Reaktion auf Filament Stimulation betrachtet: 1) scharfe Einziehen des Bauches, 2) sofort Lecken oder Kratzen im Bereich der Wendel Stimulation; 3) Springen. </li><li> Ansprechfrequenz wurde als der Prozentsatz der positiven Antwort (von 10, z. B. 5 Antworten von 10 = 50%) berechnet und die Daten wurden als mittlere Prozentsatz der Ansprechfrequenz ± SE gemeldet </li><li> Tiere mit mehr als 25 positiven insgesamt Baseline Antworten werden von der Studie ausgeschlossen. </li><li> Taktile Allodynie wurde auf dem Plantarbereich der Hinterpfote mit von Frey Filamente mit Kräften von 0,04, 0,16, 0,4, 1,0 und 4,0 g getestet. Der Median 50% Wegziehschwelle (5) wurde mit dem up-downMethode, bei der Prüfung mit 0,04 g Filament gestartet wurde angewendet senkrecht zur Fußsohle der Hinterpfote, bis der Faden leicht gebeugt. Filamente wurden in aufsteigender Reihenfolge, bis eine positive Antwort wurde beobachtet, getestet. Eine positive Antwort auf das Filament wurde entweder als eine scharfe Rückzug der Pfote oder Lecken der Test paw definiert. Wenn eine positive Antwort aufgezeichnet wurde der nächste schwächeren Filamenten aufgebracht wurde, und wenn eine negative Antwort beobachtet wurde, dann wird die nächste stärkere Filament aufgebracht wurde. </li><li> Die Experimente und Methoden beschrieben, wurden überprüft und von der Northwestern University Tierpflege und benutzen Ausschuss. </li></ol>

<ol><li>Yamamoto, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+epidemiology+of+uropathogenic+Escherichia+coli%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+infection+and+chemotherapy+official+journal+of+the+Japan+Society+of+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Molecular epidemiology of uropathogenic Escherichia coli.</a> Journal of infection and chemotherapy official journal of the Japan Society of Chemotherapy. 13, 68-73 (2007).</li>
<li>Rudick, C. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uropathogenic+Escherichia+coli+induces+chronic+pelvic+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Uropathogenic Escherichia coli induces chronic pelvic pain.</a> Infect. Immun. 79, 628-635 (2011).</li>
<li>Pontari, M. A., Ruggieri, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+in+prostatitis%2Fchronic+pelvic+pain+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+urology%22%5BJournal%5D)">Mechanisms in prostatitis/chronic pelvic pain syndrome.</a> The Journal of urology. 172, 839-845 (2004).</li>
<li>Schaeffer, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+practice.+Chronic+prostatitis+and+the+chronic+pelvic+pain+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+journal+of+medicine%22%5BJournal%5D)">Clinical practice. Chronic prostatitis and the chronic pelvic pain syndrome.</a> The New England journal of medicine. 355, 1690-1698 (2006).</li>
<li>Rudick, C. N., Schaeffer, A. J., Thumbikat, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+autoimmune+prostatitis+induces+chronic+pelvic+pain.+American+journal+of+physiology%5BTitle%5D)+AND+%22Regulatory%2C+integrative+and+comparative+physiology%22%5BJournal%5D)">Experimental autoimmune prostatitis induces chronic pelvic pain. American journal of physiology.</a> Regulatory, integrative and comparative physiology. 294, R1268-R1275 (2008).</li>
<li>Elkahwaji, J. E., Ott, C. J., Janda, L. M., Hopkins, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+for+acute+bacterial+prostatitis+in+genetically+distinct+inbred+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Urology%22%5BJournal%5D)">Mouse model for acute bacterial prostatitis in genetically distinct inbred strains.</a> Urology. 66, 883-887 (2005).</li>
<li>Hultgren, S. J., Porter, T. N., Schaeffer, A. J., Duncan, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+type+1+pili+and+effects+of+phase+variation+on+lower+urinary+tract+infections+produced+by+Escherichia+coli%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Role of type 1 pili and effects of phase variation on lower urinary tract infections produced by Escherichia coli.</a> Infect. Immun. 50, 370-377 (1985).</li>
<li>Jarrell, J., Giamberardino, M. A., Robert, M., Nasr-Esfahani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bedside+testing+for+chronic+pelvic+pain%3A+discriminating+visceral+from+somatic+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Pain+research+and+treatment%22%5BJournal%5D)">Bedside testing for chronic pelvic pain: discriminating visceral from somatic pain.</a> Pain research and treatment. 2011, 692102(2011).</li>
<li>Jarrell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Demonstration+of+Cutaneous+Allodynia+in+Association+with+Chronic+Pelvic+Pain%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Demonstration of Cutaneous Allodynia in Association with Chronic Pelvic Pain.</a> J. Vis. Exp. (28), e1232(2009).</li>
<li>Giamberardino, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viscero-visceral+hyperalgesia%3A+characterization+in+different+clinical+models%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Viscero-visceral hyperalgesia: characterization in different clinical models.</a> Pain. 151, 307-322 (2010).</li>
<li>Laird, J. M., Martinez-Caro, L., Garcia-Nicas, E., Cervero, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+model+of+visceral+pain+and+referred+hyperalgesia+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">A new model of visceral pain and referred hyperalgesia in the mouse.</a> Pain. 92, 335-342 (2001).</li>
<li>Laird, J. M., Souslova, V., Wood, J. N., Cervero, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deficits+in+visceral+pain+and+referred+hyperalgesia+in+Nav1.8+%28SNS%2FPN3%29-null+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Deficits in visceral pain and referred hyperalgesia in Nav1.8 (SNS/PN3)-null mice.</a> J. Neurosci. 22, 8352-8356 (2002).</li>
<li>Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+assessment+of+tactile+allodynia+in+the+rat+paw%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neuroscience%22%5BJournal%5D)">Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw.</a> Journal of neuroscience. 53, 55-63 (1994).</li>
<li>Schaeffer, A. J., Schwan, W. R., Hultgren, S. J., Duncan, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+of+type+1+pilus+expression+in+Escherichia+coli+to+ascending+urinary+tract+infections+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Relationship of type 1 pilus expression in Escherichia coli to ascending urinary tract infections in mice.</a> Infect. Immun. 55, 373-380 (1987).</li>
<li>Boehm, B. J., Colopy, S. A., Jerde, T. J., Loftus, C. J., Bushman, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+bacterial+inflammation+of+the+mouse+prostate%5BTitle%5D)+AND+%22The+Prostate%22%5BJournal%5D)">Acute bacterial inflammation of the mouse prostate.</a> The Prostate. 72, 307-317 (2012).</li>
<li>Rivero, V. E., Cailleau, C., Depiante-Depaoli, M., Riera, C. M., Carnaud, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-obese+diabetic+%28NOD%29+mice+are+genetically+susceptible+to+experimental+autoimmune+prostatitis+%28EAP%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+autoimmunity%22%5BJournal%5D)">Non-obese diabetic (NOD) mice are genetically susceptible to experimental autoimmune prostatitis (EAP).</a> Journal of autoimmunity. 11, 603-610 (1998).</li>
<li>Pakarainen, T., Zhang, F. P., Makela, S., Poutanen, M., Huhtaniemi, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Testosterone+replacement+therapy+induces+spermatogenesis+and+partially+restores+fertility+in+luteinizing+hormone+receptor+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Testosterone replacement therapy induces spermatogenesis and partially restores fertility in luteinizing hormone receptor knockout mice.</a> Endocrinology. 146, 596-606 (2005).</li>
<li>Taguchi, O., Kojima, A., Nishizuka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+autoimmune+prostatitis+after+neonatal+thymectomy+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+experimental+immunology%22%5BJournal%5D)">Experimental autoimmune prostatitis after neonatal thymectomy in the mouse.</a> Clinical and experimental immunology. 60, 123-129 (1985).</li>
</ol>

Keine Interessenskonflikte erklärt.

Infektion der Maus Prostata mit UPEC ermöglicht für die in vivo-Modellierung von Ereignissen, die an der Pathogenese von bakteriellen Prostatitis, CP / CPPS oder als prädisponierende Ereignis in chronischen Entzündung beteiligt sein können. Die Methoden für die bakterielle Vorbereitung und Instillation draw auf eine große Menge an Literatur beschrieben auf UPEC Modelle weiblichen Harnwegsinfektion 7,14. Das Modell verfügt über eine breite Anwendbarkeit für das Studium Pathogenese, Testung potentielle...

<table border="1"><tbody><tr><td> Name des Reagenzes </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td></tr><tr><td> Kulturröhrchen </td><td> BD Falcon </td><td> 352059 </td></tr><tr><td> LB Broth Miller </td><td> EMD </td><td> EM1.10285.0500 </td></tr><tr><td> Nalgene Zentrifugenröhrchen </td><td> Thermo </td><td> 3118-0050 </td></tr><tr><td> Isofluran </td><td> Butler Schein </td><td> NDC 11695-6776-1 </td></tr><tr><td> Katheternadel 30G </td><td> Hamilton </td><td> 91030 </td></tr><tr><td> PE10 Schlauch </td><td> BD Intramedic </td><td> 427400 </td></tr><tr><td> Von Frey Filaments </td><td> Stoelting </td><td> 58025-31 </td></tr></tbody></table>

messung der taktile allodynie in einem mausmodell der bakteriellen prostatitis

Measurement of Tactile Allodynia in a Murine Model of Bacterial Prostatitis

Uropathogenen Escherichia coli (UPEC) sind Erreger, die eine wichtige Rolle bei Harnwegsinfektionen und bakterielle Prostatitis 1 spielen. Wir haben kürzlich gezeigt, dass UPEC eine wichtige Rolle bei der Initiierung von chronischen Schmerzen im Beckenbereich 2, ein Merkmal Chronische Prostatitis / chronisches Schmerzsyndrom des Beckens (CP / CPPS) 3,4 haben. Infektion der Prostata durch klinisch relevante UPEC können initiieren und zu etablieren chronischen Schmerzen durch Mechanismen, die Gewebeschäden und die Einleitung von Mechanismen der Autoimmunität 5 verbunden sein können. Eine Herausforderung für das Verständnis der Pathogenese der UPEC in der Prostata ist die relative Unzugänglichkeit der Prostata zur Manipulation. Wir verwendeten ein zuvor beschriebenes intraurethrale Infektion Methode 6 eine klinische Stamm UPEC in männlichen Mäusen somit Gründung einer aufsteigenden Infektion der Prostata zu liefern. Hier beschreiben wir unsere Protokolle für die Standardisierung der bacterial Inokulum 7 sowie das Verfahren zur Katheterisiervorrichtung narkotisierten männlichen Mäusen zur Instillation von Bakterien. CP / CPPS wird hauptsächlich durch das Vorliegen von taktiler Allodynie 4 charakterisiert. Behavior-Tests auf dem Konzept der kutanen Hyperalgesie aus bezeichnet viszeralen Schmerzen 8-10 basiert. Ein gereizter Fokus der viszeralen Geweben reduziert kutanen Schmerzschwelle ermöglicht eine übertriebene Reaktion auf normalerweise nicht-schmerzhafte Reize (Allodynie). Anwendung normaler Kraft auf die Haut führen anormalen Reaktionen, die mit der Intensität des darunterliegenden viszeralen Schmerzen erhöhen neigen. Wir beschreiben Methoden in NOD / ShiLtJ Mäusen, die von Frey Fasern zu verwenden, um taktile Allodynie über die Zeit in Reaktion auf eine einzelne Infektion mit Bakterien UPEC quantifizieren.

<html> Wir untersuchten NOD / ShiLtj und C57BL/6J männlichen Mäusen auf das Vorhandensein von chronischen Schmerzen bei bakteriellen Infektion. Männliche Mäuse (5 bis 7 Wochen alt) wurden mit Kochsalzlösung oder Bakterien in die Harnröhre (Abbildung 1) zugetropft. Mechanische Stimulation des Beckenbodens mit von Frey Filamente Kochsalzlösung eingeflößt C57BL/6J-Mäuse und UPEC-infizierten C57BL/6J Mäusen führte zu einer Reaktion Frequenz, die nicht während der 28-tägigen Kurs des Experiments (Abbi...

Infektion der Prostata kann ein Faktor bei der Vermittlung Schmerzen im Beckenbereich bei chronischer Prostatitis sein. Wir beschreiben das Verfahren zur Herstellung von standardisierten bakteriellen Inokulums Instillation von Bakterien in die Harnröhre des männlichen Mäusen und Methodik zur Messung taktile Allodynie bei Mäusen über die Zeit.

Messung der taktile Allodynie in einem Mausmodell der bakteriellen Prostatitis

Uropathogenic Escherichia coli (UPEC) are pathogens that play an important role in urinary tract infections and bacterial prostatitis1. We have recently ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, die taktile Allodynie bei einer Maus zu messen, die auf eine bakterielle Infektion der Prostata zurückzuführen ist. Dies wird erreicht, indem zunächst eine bakterielle Suspension für den Einbau in eine männliche Maus vorbereitet wird, die unter Narkose gestellt wird. Der zweite Schritt besteht darin, den Penis der Maus sanft zu extrudieren, gefolgt von einer intraurethralen Katheterisierung.Als nächstes werden Bakterien eingeschleust, die eine aufsteigende Infektion der Prostata der Maus auslösen. Der letzte Schritt ist die Messung der taktilen Allodynie nach einer Infektion. Letztendlich wird eine erhöhte Reaktionsfrequenz auf Röntgenfasern, die auf den Beckenbereich aufgetragen werden, verwendet, um eine erhöhte taktile Elo-DIA der Beckenregion als Reaktion auf bakterielle Prostatitis zu zeigen.Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber bestehenden Methoden wie der hormoninduzierten Prostatitis oder der Autoimmunprostatitis besteht darin, dass klinisch irrelevante Bakterien und eine natürliche aufsteigende Infektionsmethode verwendet werden, die für die Pathogenese der Prostataerkrankung wirklich wichtig sind. Im Allgemeinen werden Personen, die neu in dieser Methode sind, Schwierigkeiten haben, da sie nicht in der Lage sind, konsistent positive Reaktionen auf die Stimulation von Röntgenfasern zu registrieren. Alle Verfahren in diesem Protokoll müssen gemäß den Richtlinien der Institution und der Regierung durchgeführt werden. Der Test auf übertragene Hyperalgesie und taktile Allodynie wird zu einer festen Tageszeit unter Verwendung der Standardmethodik durchgeführt, wobei ein einziger Experimentator alle Tiere testet.Blindtests von Gruppen sollten eingesetzt werden, um die Einschränkungen verhaltensbasierter Schmerztests in Tiermodellen zu überwinden. Um eine Basismessung für alle Tiere im Experiment zu erhalten, werden zunächst fünf bis sieben Wochen alte männliche Mäuse für 30 Minuten in den Testraum akklimatisiert und dann jede Maus in eine einzelne Plexiglaskammer mit einem Edelstahldrahtgitterboden gelegt, um sie auf taktile Allodynie zu testen. Bringen Sie einzelne von-Fray-Filamente mit Kräften von 0,04, 0,16, 0,4, 1,0 und 4,0 Gramm auf den unteren Bauchbereich in der allgemeinen Nähe der Prostata an.Wenden Sie jedes Filament in aufsteigender Reihenfolge der Kraft für ein bis zwei Sekunden an, mit mindestens fünf Sekunden Intervallen zwischen den Stimulationen, insgesamt 10 Mal. Achten Sie darauf, verschiedene Bereiche innerhalb dieser Region zu stimulieren, um Desensibilisierung oder Aufwicklungseffekte zu vermeiden. Drei Arten von Verhalten werden als positive Reaktion auf die Filamentstimulation angesehen.Ein scharfes Zurückziehen des Bauches, zweimaliges sofortiges Lecken oder Kratzen des Bereichs der Filamentstimulation. Drei. Beim Springen wird die Antworthäufigkeit als Prozentsatz der positiven Antwort berechnet, und die Berichtsdaten werden als mittlerer Prozentsatz der Antwort berechnet. Häufigkeit plus minus Standardfehler.Tiere mit mehr als 25 positiven Ausgangsreaktionen werden von der Studie ausgeschlossen, um die Spezifität der Allodynie-Reaktion zu untersuchen. Die taktile Allodyniereaktion der Porenregion wird unmittelbar nach der Beckenbereichsuntersuchung getestet, indem die von-Frey-Filamente auf die Pflanzregion der hinteren Pore aufgebracht werden, bis sich das Filament leicht biegt. Testen Sie die Filamente in aufsteigender Reihenfolge, bis eine positive Reaktion beobachtet wird, die entweder als scharfes Zurückziehen oder Lecken der Testpore definiert ist.Nachdem eine positive Reaktion beobachtet wurde, wenden Sie das schwächere Filament an, um die Faser mit der größten Kraft zu identifizieren, die keine Reaktion hervorruft. Bereiten Sie zunächst den Katheter vor, indem Sie einen Polyethylenkatheter in die Nabe einer 30-Gauge-Nadel einführen, die an einer 1,5 bis zwei Zentimeter großen Hamilton-Glasspritze befestigt ist, die nach der Betäubung mit einem bis 4 % Fluor in einer Plexiglaskammer mit der Bakteriensuspension beladen ist. Übertragen Sie die Beträge auf einen Nasenkegel mit der dorsalen Seite nach unten, um die Anästhesie aufrechtzuerhalten, extrudieren Sie den Penis durch sanften Druck.Tragen Sie dann mit einem Wattestäbchen eine großzügige Menge künstlicher Tränen als Gleitmittel auf den Eingang der Harnröhre des Penis auf. Führen Sie den Katheter vorsichtig in die Harnröhre ein. Führen Sie dann 10 Mikroliter PBS, das einmal 10 bis acht CP one Bakterien enthält, in die Harnröhre ein, indem Sie den Kolben der Spritze langsam dekomprimieren.Nachdem die Bakteriensuspension verabreicht wurde, entfernen Sie vorsichtig den Katheter. Bringen Sie die Maus für 15 Minuten in die Anästhesiekammer zurück, um die Anheftung von Bakterien zu ermöglichen und sofortiges Wasserlassen zu verhindern. Setzen Sie die Maus nach Ablauf der 15 Minuten wieder in den Heimkäfig ein und überwachen Sie sie für die nächsten 24 Stunden.Wiederholen Sie den Test auf übertragene Hyperalgesie und taktile Allodynie-Reaktionen in geeigneten Abständen. Tests an den Tagen 3, 7, 14, 21 und 28 nach der Infektion werden empfohlen. Taktile EALs maßen ihre Reaktionen auf mechanische Stimulation der Beckenregion mit Von-Fray-Filamenten von fünf kalibrierten Kräften.Die Daten werden als mittlere Prozentsätze positiver Antworten angegeben. Plus minus Standardfehler vor der Installation von Bakterien und an den Tagen nach der Infektion, 7, 14, 21 und 28 und darüber deutete auf einen signifikanten Anstieg der Ansprechfrequenz an den Tagen sieben bis 28 nach der Infektion im Vergleich zu zu Studienbeginn für alle Filamente hin, die bei UPEC-infizierten und nicht bei Mäusen getestet wurden. Die prozentuale Reaktion bei jeder PID wurde als Gesamtantwort auf alle Fasern im Verhältnis zu den Ausgangsantworten berechnet.Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man eine bakterielle Prostatitis bei männlichen Mäusen auslöst, gefolgt von Verhaltenstests, um die taktile Nia des Beckens bei diesen Mäusen zu messen.

measurement-tactile-allodynia-murine-model-bacterial

Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Elektronische von-Frey-Messungen sind eine effektive und verbesserte Alternative zu klassischen von-Frey-Filamenten, da sie eine schnelle und präzise Messung der Veränderungen der mechanischen Entnahmeschwellen von Nagetieren bei kontinuierlich angelegten Druckreizen vor und nach einem Entzündungsereignis ermöglichen.

Messung von Veränderungen in Taktile Empfindlichkeit in der Hinterpfote von Mäusen unter Verwendung eines elektronischen von Frey Apparat

Wir beschreiben ein Protokoll, um die Entwicklung von Opioid-induzierte Hyperalgesie und Toleranz in Mäusen zu untersuchen. Basierend auf der Messung der thermischen und mechanischen nozizeptiven Reaktionen von naiven und Morphin-behandelten Tieren, erlaubt es, die Steigerung der Schmerzempfindlichkeit (Hyperalgesie) zu quantifizieren und Abnahme der Analgesie (Toleranz) mit chronischer Opiat-Verwaltung verbunden.

Bewertung von Morphin-induzierte Hyperalgesie und Schmerztoleranz in Mäuse mit Thermal-und Maschinen Nozizeptive Modalitäten

Neuropathische Schmerzen sind die Folge einer Verletzung oder Erkrankung des somatosensorischen Systems. Die "Manschette Modell" von neuropathischen Schmerzen bei Mäusen besteht aus der Implantation einer Polyethylen Manschette um den Hauptzweig des Ischiasnervs. Mechanische Allodynie wird mit Hilfe von Frey Filamente getestet.

Der Ischiasnerv cuffing Modell von neuropathischen Schmerzen bei Mäusen

Wir messen perigenital mechanische Empfindlichkeit und Mastzellaktivierung in der Prostata von männlichen C57BL / 6-Mäuse, die eine frühe Leben Stress Paradigma erfuhr - Neugeborenen von Müttern Trennung, um einen präklinischen Modell der chronischen Prostatitis / chronischem Schmerzsyndrom des Beckens zu induzieren.

Bewertung der perigenital Sensitivität und Prostatic Mastzellaktivierung in einem Mausmodell der Neonatal Maternal Separation

Hier ist ein Protokoll, das Schritte zur Etablierung eines Tiermodells für chronische Post-Ischämie-Schmerzen (CPIP) beschreibt. Dies ist ein anerkanntes Modell, das das menschliche komplexe regionale Schmerzsyndrom Typ-I iiaht. Mechanische und thermische Überempfindlichkeiten werden weiter ausgewertet, sowie Capsaicin-induzierte nocifensive Verhaltensweisen, die im CPIP-Rattenmodell beobachtet wurden.

Chronisches Post-Ischemia Schmerzmodell für komplexes regionales Schmerzsyndrom Typ-I bei Ratten

Um neuartige therapeutische Interventionen zur Prävention und Behandlung von Rückenschmerzen zu entwickeln, sind Tiermodelle erforderlich, um die Mechanismen und die Wirksamkeit dieser Therapien aus einer translationalen Perspektive zu untersuchen. Das vorliegende Protokoll beschreibt den BMS-Test, eine standardisierte Methode zur Beurteilung der mechanischen Empfindlichkeit des Rückens bei der Ratte.

Beurteilung der mechanischen Empfindlichkeit des Rückens bei der Ratte zur mechanistischen Untersuchung chronischer Rückenschmerzen

Methoden zur einfachen, schnellen Induktion eines Rückenschmerzmodells bei Mäusen werden hier unter Verwendung einer intraligamenten Injektion eines Plasminogenaktivators im Urin bereitgestellt.

Urokinase-Typ-Plasminogen-Aktivator-induziertes Modell für Rückenschmerzen bei Mäusen

Die partielle Ligatur des Ischiasnervs induziert lang anhaltende chronische neuropathische Schmerzen, die durch übertriebene Reaktionen auf thermische und mechanische Reize gekennzeichnet sind. Dieses Mausmodell für neuropathische Schmerzen wird häufig verwendet, um innovative Therapien zur Schmerzbehandlung zu untersuchen. Dieser Artikel beschreibt detailliert das chirurgische Verfahren zur Verbesserung der Standardisierung und Reproduzierbarkeit.

Partielle Ischiasnervligatur: Ein Mausmodell für chronische neuropathische Schmerzen zur Untersuchung der antinozizeptiven Wirkung neuartiger Therapien

In dieser Arbeit stellen wir ein Protokoll zur Bewertung der Nozizeption bei Mäusen vor, die mit Trypanosoma evansi infiziert sind, wobei das elektronische von-Frey-Gerät als Werkzeug verwendet wird, um die mechanischen Schwellenwerte der Hinterpfote und der Eingeweide zu messen.

Elektronische von Frey-Studie in Verbindung mit der Maus-Grimasse-Skala zur Beurteilung von Allodynie und Schmerzen bei Trypanosoma evansi-infizierten Mäusen

Das Protokoll beschreibt, wie die Kniehyperalgesie bei Mäusen gemessen werden kann. Wir zeigen Beispiele in Mausmodellen für akute Knieschmerzen sowie in Modellen für Osteoarthritis (OA).

Beurteilung der Kniehyperalgesie bei Mäusen mittels Druckanwendungsmessung

Erfahren Sie, wie Sie taktile Allodynie in einem Mausmodell der bakteriellen Prostatitis mit UPEC-Infektion und von-Frey-Filamenten messen. Diese Methode ermöglicht die standardisierte Schmerzbewertung bei chronischem Beckenschmerzsyndrom.

Messung der taktile Allodynie in einem Mausmodell der bakteriellen Prostatitis

Weitere Videos entdecken