Real-time Analyse von Retinol Transport durch die Membran-Rezeptor von Plasma Retinol Binding Protein

Dieses Protokoll zeigt die Produktion von hochwertigem Plasma-Retinol-Bindungsprotein, das verwendet wird, um die Aktivitäten des Retinol-Bindungsproteinrezeptors in Echtzeit zu untersuchen. Dies wird erreicht, indem zunächst eine große Menge an Retinol-Bindungsprotein aus Bakterien exprimiert und gereinigt wird. Das gereinigte Retinol-Bindungsprotein wird vollständig denaturiert und in Gegenwart seines Liganden Retinol langsam wieder gefaltet.

Dann wird das korrekt gefaltete Retinol-Bindungsprotein mittels HPLC aufgereinigt, um falsch gefaltete Proteine und bakterielle Verunreinigungen zu entfernen. Sobald ein hochwertiges Retinol-Bindungsprotein erhalten ist, kann es verwendet werden, um die Aktivitäten seines Membranrezeptors bei der Katalyse der Retinolfreisetzung, der Retinol-Beladung oder des Retinol-Transports zum zellulären Retinol-Bindungsprotein eins zu untersuchen. In Echtzeit.