Name: Angiogenese im ischämischen Rat Lung (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-02-08T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 36 s
Description: Lernen Sie die chirurgische Ligation der linken Pulmonalarterie bei Ratten zur Induktion bronchialer Neovaskularisation. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Angiogenese in der Lunge durch Fluoreszenzmessung und histologische Analyse.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Wir erkennen die Arbeit von Dr. Adlah Sukkar, MD bei der Unterstützung mit dem Gießen der Lunge. Diese Arbeit wurde von NHLBI, HL088005 finanziert.

Alle Protokolle an Ratten durchgeführt wurden von der Johns Hopkins University Animal Care und Use Committee und im Einklang mit NIH-Richtlinien zugelassen. Wenn möglich, sollte das Tier chirurgisch präpariert in einem Bereich getrennt von dem chirurgischen Gebiet zu Kontamination des chirurgischen Stelle zu minimieren. Ein. Anästhesie / Schmerztherapie <ol><li> Ort Ratte (Sprague Dawley männlichen Ratten, 125-150 g; Harlan, Indianapolis, IN) in einer Ansaugkammer mit 3% Isofluran infundiert. </li><li> Zeigen narkotisierten Ratte über Chirurgie Bord an Bugspitze und Ventilator mit 3% Isofluran Narkose. Verwenden Sie sterile Technik für alle Verfahren. Hängen Ratte sterile OP-Feld zu gewährleisten. </li></ol> 2. Intubation <ol><li> Immobilisieren Anhängsel in Rückenlage mit chirurgischen Band. </li><li> Entfernen Ratte aus Nasenkonus, erweitern Zunge mit gepolsterten Zange. </li><li> Verwenden Sie 14 gauge intracath mit abgestumpften Metall Stilett als Guide. Schieben hinter denNgue in Luftröhre. </li><li> Entfernen Metall Stilett verlassen weißem Kunststoff intracath in der Luftröhre. Sicherstellen, dass die Ratte atmet und die Luft wird durch das Rohr fließt. </li><li> Ersetzen Nasenkonus mit direktem Adapter Katheters verbinden Ratte zu Beatmungsgerät (90 Atemzüge / min; 8 ml / kg Atemzugvolumen; Nager Ventilator Modell 683, Harvard Apparatus, Holliston, Massachusetts). </li><li> Bewerben Puralube (Butler Schein, Dublin, OH) Veterinär-Salbe auf die Augen. </li></ol> 3. Thorakotomie <ol><li> Ort rat rechten Seite nach unten, immobilisieren Anhängsel mit chirurgischen Band. </li><li> Shave linken Brustkorb-Bereich. </li><li> Entfernen Sie überschüssiges Fell mit kleinen Vakuum. </li><li> Machen sterilen Bereich durch Abwischen mit Alkohol durch Povidon-Jod swabstick (Dynarex Corporation, Orangebur, NY) gefolgt. Wiederholen Sie diesen Vorgang zwei weitere Male (für insgesamt drei Peelings). </li><li> Machen Querinzision mit steriler Präparierscheren oder sterilen Skalpell in der Mitte des Feldes. </li><li> Blunt sezieren durch layers von Gewebe und Fett auf Rippen (letzte Schicht ist dünn Membran, die Rippen). </li><li> Graf Rippen 3 rd Interkostalraum bestimmen. </li><li> Mit einer sterilen 45 ° Graefe Pinzette machen stumpfen Schnitt zwischen 3. und 4 th Rippe. </li><li> Legen Sie Rippe Separatoren, ziehen Sie vorsichtig die Schaffung offener Hohlraum mit voller Visualisierung von Lunge, statt Klebeband auf Nähte offen zu halten. </li></ol> 4. Left Pulmonary Artery Ligation <ol><li> Mit 90 ° Graefe Pinzette bewegen linken Lunge wieder mit der rechten Hand. </li><li> Mit Dumont Muster # 5 gerade Pinzette greifen linken Lungenarterie und Atemwege mit der linken Hand. Linken Lungenarterie wird auf der Oberseite der Atemwege verlegen. Stellen Sie sicher, dass Pinzette direkt senkrecht auf den Tisch. Zusätzlich ist es am effektivsten, holen die linken Lungenarterie / linken Hauptbronchus am meisten distalen Position (am nächsten an Parenchym). Drücken Sie die Belüftung der linken Lunge beiseite mit dieser linken Hand manövrieren. </li><li> Verwenden DumontMuster Nr. 5 45 ° gebogenen Pinzette, um den linken Lungenarterie von den linken Hauptbronchus an ihrer natürlichen Grenzen trennen. Diese Trennlinie wird dünn und weiß zwischen den beiden einzelnen Strukturen. </li><li> Trennen Sie direkt unter Arterie ohne Umweg über das Schiff, sanft gleiten die Pinzettenspitzen zusammengehalten entlang der Trennung. </li><li> Weiter, bis die Spitzen der Pinzette sichtlich der linken Lungenarterie und die linke Hauptbronchus getrennt haben. Nur ein kleiner Punkt der Spitze muss vollständig durch sein. Wenn Blut auf der Spitze der Zange visualisiert werden, dann ist es nicht vollständig durch und Ligation nicht versucht werden. Sobald durch den Raum, wird die linke Pulmonalarterie auf der Kurve der Zange zu legen. In dieser Stellung halten. </li><li> Lösen Sie vorsichtig gerade stumpfen Pinzette Griff (links) und greifen Stück von einem Pre-Cut Naht (~ 2-3 Zoll, Polypropylen Nahtgröße 6-0; Myco Medical, Cary, NC). </li><li> Öffnen gebogenen Pinzette wiegte linken Lungenarterie und grab Naht. Ziehen Nahtmaterial durch den Raum zwischen der linken Lungenarterie und linken Hauptbronchus in einer Aufwärtsbewegung relativ zu der Kurve der Zange. </li><li> Binden Sie Verschließen der linken Lunge mit einem quadratischen Knoten, sorgfältig snip Rest des Fadens. </li><li> Schließen Rippen mit stumpfen Pinzette Rippe und Faden zweimal zu halten mit Polypropylen (blau Monofilament) Größe 4-0 an einem 19 mm, 3/8 Kreis umgekehrter Schneiden Nadel (Myco Medical, Cary, NC) in einer Gefäßklemme, man aufpassen, nicht Naht der Haut (nur Rippen). </li><li> Füllen Sie eine lockere Kreuzknoten, blasen die Lunge, am positiven endexspiratorischen Druck (PEEP; 2-5 cmH 2 O), hyperinflate Lungenkrebs dann sicher Knoten fest und eine weitere volle Knoten vor Schnippeln Rest des Fadens. Entfernen PEEP und visualisieren für 30 Sek., um sicherzustellen, dass die Lunge nicht zusammenfällt. Bewerben 5 Tropfen Bupivacain (APP Pharmaceuticals, Schaumbur, IL). </li><li> Schließen Haut, indem Gewebekleber auf Wunde und drücken Haut zusammen mit Back end Wattestäbchen. Geben Bupivacain (2,0 mg / kg subkutan) an der Stelle des Einschnitts anschließend alle 8 Stunden für 24 Stunden oder bis das Tier wieder in den normalen Aktivität. Da die subkutane Schicht in diesem Bereich sehr dünn ist, ist es nicht einfach auf eigenen vernähen. Wenn der Gewebekleber aufgetragen wird und die Haut wird zusammen schob es schließt auch die subkutane Schicht. </li><li> Schalten Sie Isofluran-Gas, aber weiterhin die Ratte für 1-2 min bei Raumluft bis freiwillige Bewegung kehrt zu lüften. Trennen Sie das Trachealtubus vom Beatmungsgerät und sicherzustellen, dass die Ratte spontan atmenden bevor Sie sie entfernen. </li><li> Wischen Sie Puralube von Augen mit Wattestäbchen und Monitor-Bewegung und Erholung. Inject Buprenorphinhydrochlorid (0,05 mg / kg intraperitoneal, Butler Schein, Dublin OH). Weiter Lieferung analgetische alle 12 Stunden für 48 Stunden nach der Operation. </li></ol> 5. Linke Halsschlagader Kanülierung Um die Größe der bronchialen perfus beurteilenIonen des ischämischen linken Lungenflügel an gewünschten Zeitpunkten nach linken Lungenarterie Ligation injizieren markierten Mikrokügelchen durch die linke Arteria Carotis in den Aortenbogen. Bereiten Ratten wie oben 1-2. <ol><li> Cut Mittellinie entlang Hals, stumpf sezieren Luftröhre und linke Halsschlagader (Mikrosphären an der Injektionsstelle) offenbaren. </li><li> Legen Katheter mit heparinisierter Kochsalzlösung, stumpfen Spitze PE20-Schlauch (Becton Dickinson, Sparks MD) in den Behälter verbunden zu 25 g Nadel, 4-Wege-Hahn, 1 ml Spritze gefüllt. </li><li> Ort Flasche Mikrokugeln (15 um hochrot Polystyrol fluoreszierenden Mikrokugeln, 1 x 10 6 Kügelchen / ml; Invitrogen, Eugene, OR) in Wasser Sonicator während 30 sek. </li><li> Entfernen Flasche, Wirbel und erarbeiten 0,5 ml (500.000 Mikrosphären) in eine 1 ml Hamilton Glasspritze (Hamilton Company, Reno, NV) durch eine 20 g Nadel. </li><li> Bringen Hamilton Spritze 4-Wege-Hahn und ziehen Mikrosphären mit Spritzenpumpe (Rate: 500 ul / min; Genie Plus, Kent Scientific, Torringtauf, CT). </li><li> Entfernen Hamilton-Spritze und Spülvorrichtung mit 1 ml Kochsalzlösung heparized bei 500 pl / min. </li><li> Führen voller Brust Thorakotomie und exsanguinate die Ratte durch Abtrennen der unteren Hohlvene. </li><li> Entfernen Sie die linke Lunge und anderen Geweben von Interesse. </li><li> Um Mikrosphären aus Gewebe extrahiert, nehmen die gesamte linke Lunge der Ratte nach Ausbluten und es in 2 M KOH (4-6 ml). In einem 55 ° C Wasserbad und lassen Sie über Nacht für Tissue Verdauung. Fügen Tween 80 (0,25%), um die Perlen zu waschen, Vortex (10 sec) und Zentrifuge (2.000 UpM, 20 ° C für 10 min). Entfernen Sie den Überstand, fügen 2-Ethoxyethylacetat (1 ml), Vortex und lassen Sie stehen für 1 Stunde. Vortex die Suspension und dann zentrifugiert (2000 rpm; (20 ° C für 10 min) Entfernen Sie die 2-Ethoxyethylacetat wässrige Schicht, die die Fluoreszenz in einer Küvette und messen unter Verwendung eines Hitachi F-2500 Fluoreszenz-Spektralphotometer (Anregung 612/emission 618. ; Digilab, Holliston, MA). </li></ol>

<ol><li>Weibel, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+stages+in+the+development+of+collateral+circulation+to+the+lung+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Early stages in the development of collateral circulation to the lung in the rat.</a> Circulation Research. 8, 353-376 (1960).</li>
<li>Li, X., Wilson, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+vascularity+of+the+bronchial+mucosa+in+mild+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Respir.+Crit.+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Increased vascularity of the bronchial mucosa in mild asthma.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 156, 229-233 (1997).</li>
<li>Turner-Warwick, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precapillary+systemic-pulmonary+anastomoses%5BTitle%5D)+AND+%22Thorax%22%5BJournal%5D)">Precapillary systemic-pulmonary anastomoses.</a> Thorax. 18, 225-237 (1963).</li>
<li>Muller, K. M., Meyer-Schwickerath, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bronchial+arteries+in+various+stages+of+bronchogenic+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Pathol.+Res.+Pract%22%5BJournal%5D)">Bronchial arteries in various stages of bronchogenic carcinoma.</a> Pathol. Res. Pract. 163, 34-46 (1978).</li>
<li>Remy-Jardin, M., Duhamel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+Collateral+Supply+in+Patients+with+Chronic+Thromboembolic+and+Primary+Pulmonary+Hypertension%3A+Assessment+with+Multi-Detector+Row+Helical+CT+Angiography%5BTitle%5D)+AND+%22Radiology%22%5BJournal%5D)">Systemic Collateral Supply in Patients with Chronic Thromboembolic and Primary Pulmonary Hypertension: Assessment with Multi-Detector Row Helical CT Angiography.</a> Radiology. , 274-281 (2005).</li>
<li>Karsner, H., Ghoreyeb, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+in+infarction%3A+The+circulation+in+experimental+pulmonary+embolism%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">Studies in infarction: The circulation in experimental pulmonary embolism.</a> J. Exp. Med. 18, 507-522 (1913).</li>
<li>Endrys, J., Hayat, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+bronchopulmonary+collaterals+and+collateral+blood+flow+in+patients+with+chronic+thromboembolic+and+primary+pulmonary+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Heart%22%5BJournal%5D)">Comparison of bronchopulmonary collaterals and collateral blood flow in patients with chronic thromboembolic and primary pulmonary hypertension.</a> Heart. 78, 171-176 (1997).</li>
<li>Virchow, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uber+die+Standpunkte+in+den+Wissenschaftlichen+Medizin%5BTitle%5D)+AND+%22Virchow+Archiv%22%5BJournal%5D)">Uber die Standpunkte in den Wissenschaftlichen Medizin.</a> Virchow Archiv. 1, 1-19 Forthcoming.</li>
<li>Fadel, E., Mazmanian, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+reperfusion+injury+after+chronic+or+acute+unilateral+pulmonary+artery+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Respir.+Crit.+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Lung reperfusion injury after chronic or acute unilateral pulmonary artery occlusion.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 157, 1294-1230 (1998).</li>
<li>Charan, N. B., Carvalho, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+in+bronchial+circulatory+system+after+unilateral+pulmonary+artery+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis in bronchial circulatory system after unilateral pulmonary artery obstruction.</a> J. Appl. Physiol. 82, 284-291 (1997).</li>
<li>Shi, W., Hu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+reactivity+of+pulmonary+vessels+in+postobstructive+pulmonary+vasculopathy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Altered reactivity of pulmonary vessels in postobstructive pulmonary vasculopathy.</a> J. Appl. Physiol. 88, 17-25 (2000).</li>
<li>Shi, W., Giaid, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+reactivity+to+endothelin+of+pulmonary+arteries+in+long-term+post-obstructive+pulmonary+vasculopathy+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Pulm.+Pharmacol.+Ther%22%5BJournal%5D)">Increased reactivity to endothelin of pulmonary arteries in long-term post-obstructive pulmonary vasculopathy in rats.</a> Pulm. Pharmacol. Ther. 11, 189-196 (1998).</li>
<li>Sukkar, A., Jenkins, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+CXCR2+Attenuates+Bronchial+Angiogenesis+in+the+Ischemic+Rat+Lung%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Inhibition of CXCR2 Attenuates Bronchial Angiogenesis in the Ischemic Rat Lung.</a> J. Appl. Physiol. 104, 1470-1475 (2008).</li>
<li>Mitzner, W., Lee, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+in+the+mouse+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis in the mouse lung.</a> Am. J. Pathol. 157, 93-101 (2000).</li>
<li>Wagner, E. M., Jenkins, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+and+vascular+function+during+chronic+severe+pulmonary+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Lung and vascular function during chronic severe pulmonary ischemia.</a> J. Appl. Physiol. 110, 538-544 (2011).</li>
<li>Remy-Jardin, M., Bouaziz, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bronchial+and+nonbronchial+systemic+arteries+at+multi-detector+row+CT+angiography%3A+comparison+with+conventional+angiography%5BTitle%5D)+AND+%22Radiology%22%5BJournal%5D)">Bronchial and nonbronchial systemic arteries at multi-detector row CT angiography: comparison with conventional angiography.</a> Radiology. 233, 741-749 (2004).</li>
<li>Baluk, P., Tammela, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+persistent+lymphatic+vessel+hyperplasia+in+chronic+airway+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of persistent lymphatic vessel hyperplasia in chronic airway inflammation.</a> J. Clin. Invest. 115, 247-257 (2005).</li>
<li>Bailey, S. R., Boustany, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Airway+vascular+reactivity+and+vascularisation+in+human+chronic+airway+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Pulm.+Pharmacol.+Ther%22%5BJournal%5D)">Airway vascular reactivity and vascularisation in human chronic airway disease.</a> Pulm. Pharmacol. Ther. 22, 417-425 (2009).</li>
</ol>

Keine Interessenskonflikte erklärt.

Linken Lungenarterie Ligation in allen untersuchten Spezies führt zu robusten systemische Neovaskularisation des ischämischen Lunge. Wir haben die Details des chirurgischen Ansatz in einem Ratten-Modell dargestellt. Unsere Ergebnisse durch vaskuläre Gießen, Histopathologie produziert und in vivo-Markierung zeigen, dass Bronchialarterien proliferieren und die Lungenparenchym perfundieren. Somit können die Mechanismen der bronchialen Angiogenese in einem Tiermodell, das den menschlichen Zustand chronischer pulmon...

Systemische Angiogenese in der Lunge ist gut erkannt. Bei Krankheitszuständen wie Asthma 2, interstitielle Lungenfibrose 3, Krebs 4 und chronischer pulmonaler Thromboembolie 5, die systemische Gefäßsystem in und rund um die Lunge proliferiert und dringt Lungenparenchym. Allerdings sind Tiermodelle diese differentielle Aktivierung der systemischen anstatt den Lungenkreislauf zu studieren wenige. Vielleicht ist die am besten reproduzierbare Modell systemische Neovaskularisierung in der Lunge des erwachsenen Säuger, was auftritt, nachdem Induzieren chronischer Ischämie Lungenarterie. Die Reaktion auf linken Lungenarterie Obstruktion beim Menschen 5-7, Hunde 8, 9 ist Schweinen, Schafen 10, 11 Meerschweinchen, Ratten 1, 12, 13, 14 und Mäusen die rasche Vermehrung der Arterie bronchiale sowie interkostalen Arterien. Die Mechanismen, die für die systemische neovascularisierung der Lunge nach pulmonalen Ischämie sind weitgehend unbekannt und wurden nicht umfassend untersucht. Der zeitliche Verlauf der bronchialen Angiogenese in der Ratte nach der linken Lungenarterie Obstruktion wurde sorgfältig in der Arbeit von histologischen Weibel 1 beschrieben. Erweiterung dieser Arbeit in der Ratte hat sich unser Labor auf beiden Wachstumsfaktoren wichtig in diesem Prozess sowie die physiologischen Ergebnis dieser Neovaskulatur in der Lunge konzentriert. Die Ergebnisse zeigen die CXC-Chemokin CINC-3 früh nach Ischämie und Behandlung von Ratten mit einem neutralisierenden Antikörper gegen CXCR2 erhöht ist, dämpft der Rezeptor für CINC-3, Angiogenese 13. Die neu eingerichtete bronchiale Vaskulatur 14 Tage nach dem Einsetzen der pulmonalen Ischämie wurde gezeigt, dass abnormale Protein mit erheblich erhöhter Permeabilität 15. Linken Lungenfunktion nicht normal war showing verringerte Diffusionskapazität und eine Abnahme Lungenvolumen 15. Obwohl die Neovaskulatur können contributed zum Erhalt von Lungengewebe bei chronischer pulmonaler Ischämie, erscheint es nicht normal zu sein und kann auf eine anhaltende Abnahme der Lungenfunktion bei. Vielleicht ist einer der merkwürdigsten Aspekte dieses Modells bezieht sich auf die räumliche Verteilung der proliferierenden Blutgefäße. Trotz der Freisetzung von Wachstumsfaktoren im Lungenparenchym durch Ischämie stammt das Neovaskulatur in relativ großen stromaufwärts Bronchialarterien. Die normale bronchiale Arterie entsteht so einem kleinen Zweig aus der Aorta und dringt in die Atemwege Baum am carina. So der Mechanismus, durch den Wachstumsfaktoren induzieren die Anfangsphase der Arteriogenese ist nicht klar. Wir schlagen vor, dass die Ratte mit einem Gefäßanatomie ähnlich wie beim Menschen, bietet eine einzigartige Gelegenheit, um die Mechanismen, die für die systemische Angiogenese während pulmonalen Ischämie zu studieren. Obwohl komplette Obstruktion der linken Lungenarterie ist ein seltenes Ereignis in der menschlichen Subjekte,erhöhte bronchiale Vaskularität scheint ähnlich bei Patienten induziert werden unabhängig von der Lage und Größe der Lungenarterie Behinderung 16. Somit stellen wir eine detaillierte Beschreibung der chirurgischen Ansatz zur linken Lungenarterie bei Ratten und ein Mittel, um die Größe der Angiogenese quantifizieren ligieren.

<table border="1"><tbody><tr><td> Reagenzien: </td><td> Firma </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Buprenorphinhydrochlorid, Puralube </td><td> Butler Schein </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Bupivacain </td><td> APP Pharmaceuticals </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Povidon-Iod swabstick </td><td> Dynarex Konzern </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Polypropylen Nahtgröße 6-0, 3/8 Kreis schneidender Nadelkörper </td><td> Myco Medical </td><td></td><td></td></tr><tr><td> PE20 Schlauch </td><td> Becton Dickinson </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 15 um Crimson Polystyrol Fluorospheres </td><td> Invitrogen </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 1 ml Hamilton Glasspritze </td><td> Hamilton Company </td><td> &lt;/ Td&gt; <td></td></tr><tr><td> Ausstattung: </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Genie Plus-Spritzenpumpe </td><td> Kent Scientific </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Fluoreszenz-Spektralphotometer </td><td> Digilab </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Rodent Ventilator Modell 683 </td><td> Harvard Apparatus </td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Tabelle 1. Tabelle spezifische Reagenzien und Ausrüstung. </td></tr></tbody></table>

angiogenese im ischämischen rat lung

Angiogenesis in the Ischemic Rat Lung

Das adulte Lunge wird sowohl durch die systemischen Arterie bronchiale und der gesamten venösen Rückstrom Durchströmen der Lungenarterien perfundiert. In den meisten Lunge Pathologien, ist es umso kleiner systemische Gefäßsystem, die einen Bedarf an verbesserten Lungenperfusion reagiert und zeigt robuste Neovaskularisation. Pulmonalen vaskulären Ischämie durch Lungenarterie Obstruktion induziert wurde gezeigt, dass im schnellen systemischen arteriellen Angiogenese im Menschen sowie in mehreren Tiermodellen führen. Obwohl die histologische Beurteilung des zeitlichen Verlaufs der bronchialen Arterie Proliferation in Ratten wurde sorgfältig von Weibel 1 beschrieben, sind Mechanismen, die für diese organisierte Wachstum neuer Gefäße nicht klar. Wir bieten chirurgische Details zu induzieren linken Lungenarterie Ischämie bei der Ratte, die bronchiale Neovaskularisation führt. Quantifizierung des Ausmaßes der Angiogenese stellt eine zusätzliche Herausforderung aufgrund der Anwesenheit der zwei Gefäßbetten innerhalb der Lunge. Methodenum funktionelle Angiogenese von markierten Mikrokügelchen Injektionen zu bestimmen sind.

Vaskuläre Druckguss: Ergebnisse der Wirkungen der linken Lungenarterie Ischämie in der Ratte sind in Abbildung 1 dargestellt. Dargestellt ist ein Methacrylat Besetzung der Bronchien Gefäßsystem und das umfangreiche Vaskularität des linken Atemwege Baum 28 Tage nach lpal. Um dieses gegossenen erhalten, wurde die systemische Gefäßsystem mit einer Methacrylat-Gemisch (rot) injiziert, retrograd in der absteigenden Aorta und die Trachea kanüliert wurde injiziert und mit einem weißen Silizium basierendes Mate...

Die Lunge wird sowohl durch die systemische bronchiale Arterie und Lungenarterien perfundiert. In den meisten Lunge Pathologien, ist es umso kleiner systemische Gefäßsystem, die robust Neovaskularisierung zeigt. Einstellung der pulmonalen Blutfluss fördert regen bronchiale Angiogenese. Wir bieten chirurgische Details zu induzieren linken Lungenarterie Ischämie, die bronchiale Neovaskularisation fördert.

Angiogenese im ischämischen Rat Lung

The  adult lung is perfused by both the systemic bronchial artery and the entire  venous return flowing through the pulmonary arteries. In most lung ...

Das übergeordnete Ziel dieses Eingriffs ist die Ligatur der linken Lungenarterie. Dies wird erreicht, indem zunächst eine anästhesierte Ratte intubiert und beatmet wird. Als nächstes wird eine Thorakotomie durchgeführt und die linke Lungenarterie ligiert.Nach der Ligatur wird die Brust verschlossen und die Ratte kann sich erholen. Letztendlich kann das Ausmaß der Neovaskularisation in der linken Lunge durch Messung des Fluoreszenzgrades im Gewebe oder durch andere histologische Methoden beurteilt werden. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie die Möglichkeit bietet, die In-vivo-Entwicklung und Neovaskularisation des Bronchialkreislaufs in der Lunge zu untersuchen.Dies bietet die Möglichkeit, die komplexe 3D-Struktur dieses neuen Gefäßsystems in einer beatmeten Lunge zu untersuchen. Nun, das unterscheidet sich sehr von dem, was derzeit von den meisten Forschern gemacht wird, die who bilden, die In-vitro-Studien durchführen, um die Proliferation von Endothelzellen und Chemotaxis oder Röhrenbildung zu untersuchen. Im Allgemeinen haben Personen, die mit diesem Verfahren noch nicht vertraut sind, Schwierigkeiten, die Dissektion zwischen der linken Lungenarterie und dem

Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Beginnen Sie mit einer Ratte, die einem Verschluss der mittleren Hirnarterie ausgesetzt ist, einem chirurgischen Eingriff, der den Blutfluss zum Hirngewebe vorübergehend blockiert.Dies führt zu einem ischämischen Schlaganfall, der zu einer Schädigung des Hirngewebes führt.Entfernen Sie anschließend die Verstopfung, um den Blutfluss wiederherzustellen.Wählen Sie Ratten aus, die neurologische Defizite aufweisen, um die Relevanz der Studie zu gewährleisten.Verabreichen Sie dann der Versuchsgruppe...

Bewertung der Angiogenese-Effekte eines Testmedikaments in einem Rattenmodell des ischämischen Schlaganfalls

Das Nagetier Retina wurde lange als eine zugängliche Fenster zum Gehirn erkannt. In diesem Fachbeitrag stellen wir ein Protokoll, das die Maus-Modell der Sauerstoff-induzierten Retinopathie, die Mechanismen, die zum Versagen der vaskulären Regeneration im zentralen Nervensystem nach einem ischämischen Verletzungen führen studieren beschäftigt. Das beschriebene System kann auch genutzt werden, um Strategien zu erkunden, um das Nachwachsen der funktionellen Blutgefäße in der Netzhaut und ZNS zu...

Beurteilung der Gefäß Regeneration im ZNS Verwenden der Maus Retina

Die isolierten durchbluteten Lungenpräparat macht es möglich, Mikrogefäßnetzwerken auf der Lungenoberfläche zu visualisieren. Hier beschreiben wir einen Ansatz zur Durchlässigkeit der einzelnen Mikrogefäße in isolierten Lungen quantifizieren mit Echtzeit-Fluoreszenz-Bildgebung.

Quantifizierung der Mikrogefäßdurchlässigkeit im Einzel isolierten Blutdurchbluteten Lungen Rat Vorbereitung

Die Rekapitulation der organspezifischen Mikroumgebung, die die lokale Angiogenese stimuliert, ist für eine erfolgreiche Regeneration von geschädigtem Gewebe unerlässlich. Dieser Bericht demonstriert eine neuartige Methode zur Implantation von Fibringelen auf die Lungenoberfläche lebender Mäuse, um zu untersuchen, wie die lungenspezifische Mikroumgebung die Angiogenese und Alveolärregeneration bei erwachsenen Mäusen moduliert.

Die Implantation von Fibrin Gel auf Maus Lung Lung spezifischen Angiogenese Studieren

Die Verabreichung von Medikamenten für die Wiederherstellung der Nierenfunktion erfordert die Kontrolle der Lokalisierung und Verteilung der therapeutischen Verbindung. Hier beschreiben wir im Detail eine einfache Technik für intrarenalen Abgabe von Arzneimitteln in Ratten. Dieses Verfahren kann ohne Mortalität und hoher Reproduzierbarkeit leicht durchgeführt werden.

Die intravaskuläre Lieferung von Biologics zur Rattenniere

Hier wird ein kritisches Hinterlimb Ischämie-Experimentalmodell vorgestellt, gefolgt von einer Batterie funktioneller, histologischer und molekularer Tests zur Beurteilung der Wirksamkeit angiogener Therapien.

Beurteilung der therapeutischen Angiogenese in einem Murine-Modell von Hindlimb Ischemia

Die sauerstoffinduzierte Retinopathie (OIR) kann verwendet werden, um ischämische Netzhauterkrankungen wie Retinopathie der Frühreife und proliferative diabetische Retinopathie zu modellieren und als Modell für Proof-of-Concept-Studien zur Bewertung antiangiogener Medikamente für neovaskuläre Erkrankungen zu dienen. OIR induziert eine robuste und reproduzierbare Neovaskularisation in der Netzhaut, die quantifiziert werden kann.

Sauerstoffinduzierte Retinopathie-Modell für ischämische Netzhauterkrankungen bei Nagetieren

Hier stellen wir Optimierungen an einem Rattenlungentransplantationsmodell vor, die dazu dienen, die Ergebnisse zu verbessern. Wir bieten eine Größentabelle für Manschetten basierend auf dem Körpergewicht, eine Messstrategie zur Bestimmung des 4. Interkostalraums sowie Methoden des Wundverschlusses und der BAL-Flüssigkeit (bronchoalveoläre Lavage) und Gewebeentnahme.

Ein Ratten-Lungentransplantationsmodell für warme Ischämie/Reperfusionsschäden: Optimierungen zur Verbesserung der Ergebnisse

Das Protokoll skizziert eine praktikable, zuverlässige und reproduzierbare Methode des linken pulmonalen hilären Klemmens, die zur Untersuchung von Ischämie-Reperfusionsschäden bei der Lunge in Mausmodellen verwendet werden kann.

Maus-Modell der linken pulmonalen hilaren Klemme der Lungenischämie-Reperfusionsverletzung

Eine detaillierte Methodik zur Etablierung eines minimal-invasiven Rattenmodells der Lungenembolie unter Verwendung autologer Blutgerinnsel wird beschrieben. Zusätzliche Methoden zur Quantifizierung des Infarktbereichs und zur Visualisierung des Lungenarterienbaums werden ebenfalls zur Verfügung gestellt.

Etablierung eines minimal-invasiven Rattenmodells der Lungenembolie mittels autologer Blutgerinnsel

Diese Studie beschreibt ein Modell der akuten Lungenschädigung nach viszeraler Ischämie-Reperfusion während suprazöliakie-Aorten-Cross-Clamping mittels Laparotomie bei Ratten. Es ermöglicht die Untersuchung sowohl der klinischen und biologischen Auswirkungen des Aortenklemmens als auch des Einflusses der Ischämie-Reperfusion auf darunter liegende Organe und entfernte Lungenverletzungen.

Ein Modell der akuten Lungenschädigung nach viszeraler Ischämie-Reperfusion durch suprazöliakie-Aortenkreuzklemmung bei Ratten

Lernen Sie die chirurgische Ligation der linken Pulmonalarterie bei Ratten zur Induktion bronchialer Neovaskularisation. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Angiogenese in der Lunge durch Fluoreszenzmessung und histologische Analyse.

Angiogenese im ischämischen Rat Lung

Weitere Videos entdecken