Name: Intubation bei Mäusen Über Direkte Laryngoskopie Mit einem Otoskop (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-04-05T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 58 s
Description: Lernen Sie die endotracheale Intubation bei Mäusen durch direkte Laryngoskopie mit einem Otoskop. Diese schonende Methode ermöglicht wiederholbare Messungen in chronischen Experimenten und ist weniger invasiv als eine Tracheotomie.

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Ein Merit Grant von der Department of Veteran Affairs und eine T32-HL098062 Zuschuss von der NHLBI von den National Institutes of Health unterstützt diese Arbeit. Wir wollen danken für die Beratung von Randolph H. Hasting, MD, Ph.D. und die Beratung und Unterstützung der Veterinärmedizinischen Einheit der VA San Diego Healthcare System.

1. Vorbereitung der Tiere <ol><li> Erhalten Mäuse, die älter als 8 Wochen und mehr als 20 g (kleiner Mäuse können von einem Fachmann intubiert werden) sind. </li><li> Anästhesie <ol><li> Injizieren Mäuse mit 20 mg / kg, jeweils, von Ketamin und Xylazin intraperitoneal als präanästhetische. (Diese Dosis reicht nicht aus, um die Maus komplett zu betäuben, aber erleichtert die sichere Übertragung, nach der Intubation, mechanische Belüftung.) Jedoch die Einstellung der Dosierungen können nach der Narkose Antwort in Absprache mit dem Tierarzt institutionellen erforderlich.) </li><li> Induzieren Narkose bei Mäusen mit 3,5% Isofluran / Sauerstoff in einer Induktionskammer für 90-120 Sekunden. </li><li> Beachten Sie die Atemfrequenz sorgfältig. Es sollte nach und nach auf nicht weniger als 45 bpm verlangsamen. </li></ol></li></ol> 2. Vorbereitung zur Intubation <ol><li> Entfernen Sie die Maus aus der Induktionskammer und Scruff fest. </li><li> Verwenden Sie gepolsterte feinen Pinzette nach Gently erweitern die Zunge aus dem Mund. </li><li> Pflegen Verlängerung der Zunge, indem die Zunge zwischen zwei Finger und Anwendung sanfter Gewalt. </li><li> Ziehen Sie die Maus auf dem Spekulum aus dem Otoskop mit einer vertikalen Bewegung. </li><li> Schauen Sie durch das Okular des Otoskop während Scruffing fest und ziehen Sie die Maus nach oben sanft mit der Zunge und das Genick. </li><li> Schauen Sie genau für die Stimmbänder. Sie sollten zu diesem Zeitpunkt leicht sichtbar sein. Die laryngis aditus (die Struktur der Kehlkopföffnung) sollte relativ weißen aussehen. Es sollte Bewegung der Schnüre mit jedem Atemzug sein. Wenn die Kabel nicht bewegen oder schlecht sichtbar, drehen Sie das Tier leicht und sanft den Hals überstrecken. </li><li> Mit der dominanten Hand, halten Sie die 20 G, 1 in Katheter, mit einem 1 cm Länge der PE10 Schlauch, der sich durch die Spitze des Katheters, wie ein Bleistift und legen Sie sie in die Seite des Speculum. Der PE-Schlauch dient als Sonde oder Bougie. </li><li> Richten Sie die PE10 tubing (Stilett) durch die Stimmbänder und vorab die 20 G-Katheter (Tubus) über den PE-Schlauch, bis der Hub ist auf der Ebene der unteren Schneidezähne. Entfernen Sie dieses Stilett schnell. </li><li> Nehmen Sie vorsichtig das Tier aus der Speculum und überprüfen Sie die Schlauchstelle, indem das Tier auf einem mechanischen Beatmungsgerät mit kontinuierlicher 2% Isofluran Vollnarkose während des Experiments zu erhalten. Visualisieren ausgeatmeten Luft (Blasen) gehen durch eine Falle, um PEEP Intubation bestätigen. Obwohl Ösophagusintubation kann in wenigen Blasen führen, wird es nicht so ausgeprägt oder als mit endotrachealer Intubation. Beachten Sie außerdem, eine Atemwegsdruck Verfolgung für negative Ausschläge (Abbildung 1). Diese bestätigen die richtige Platzierung der Röhre. Alternativ legen Sie eine kleine Menge Wasser in IV-Schlauch, und verbinden Sie es mit der ET-Tubus. Überprüfen der Bewegung zu und von der Maus mit 2 Atmung. Im Fall von Ösophagus Intubation pruck Verfolgung deutlich höhere Drücke und keine negativen Ausschläge zeigen. Obwohl endexspiratorischen CO 2 wäre hilfreich, technisch wäre dies sehr schwierig, da die kleinen Tidalvolumina (~ 200 ul) und die Ausrüstung zu tun, wäre dies sehr teuer werden. Die beschriebene einfache Verfahren sind völlig ausreichend und viel weniger teuer. Wenn Isofluran-Narkose nicht verfügbar ist, können alle Verfahren unter Verwendung von Ketamin 80-120 mg / kg Xylazin in Verbindung mit 10-20 mg / kg für die allgemeine Anästhesie durchgeführt werden. </li></ol> 3. Alternative Technik: Direkte Laryngoskopie mit dem Otoskop-Technik wird leicht für andere Zwecke verwendet, vor allem für Direkt Instillation von Studien Stoffe in die Lunge. <ol><li> Induzieren Anästhesie in der Tiere mit Isofluran allein für dieses Verfahren bei 3,5% für 90 bis 120 sec in der Induktionskammer. </li><li> Scruff das Tier dicht an der Basis des Schädels und verlängern die Zunge sanftmit feinen Pinzette. </li><li> Halten Sie die Zunge sanft, ziehen Sie das Tier gerade auf dem Speculum (unveränderte), bis das Tier kann nicht weiter gezogen werden. </li><li> Die Stimmbänder können häufig durch diese Technik allein visualisiert werden, aber drehen Sie die Tier-und überstreckt den Hals, um sie in Großansicht zu bringen. </li><li> Voraus ein Gel-loading Pipette, die die Instillat auf die Stimmritze und die Flüssigkeit einzuflößen. Da der Spiegel macht eine Dichtung mit dem Hypopharynx die Maus Restflüssigkeit, die nicht durch die Schnüre nicht gehen abzusaugen. Dies ist leicht durch die rhonchorous prüft klingt die Maus macht jetzt beim Atmen, bis die Flüssigkeit vollständig in der Lunge verteilt. </li><li> Alternativ verbinden PE10 Schlauch auf eine 0,5 ml Spritze mit 50 ul von Flüssigkeit mit einer Luft Bolus hinter der Flüssigkeit. Schieben Sie den PE-Schlauch vorsichtig durch die Stimmbänder 0,5 cm und entladen den Inhalt langsam in die Atemwege. , Gelegentlich Trauma der unteren Atemwege auftritt u jedochsingen, diese Technik ohne eine bessere Lieferung der Probe. </li></ol>

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</ol>

Die Autoren erklären, dass sie keine finanziellen Interessen konkurrieren.

In diesem Bericht beschreiben wir eine einfache, zuverlässige Technik, um Mäuse, die nichttrauma ist und wiederholt in der gleichen Tier verwendet werden intubieren. Diese Technik kann mit einfachen Labor-und medizinische Geräte, die für eine bescheidene Summe gekauft werden können, durchgeführt werden. Die Technik der direkten Laryngoskopie, die ursprünglich von Hastings und Kollegen 4 angegeben, können auch für eine Vielzahl von Zwecken verwendet werden, vor allem aber, um genau zu liefern Testsubstanzen au...

Die Labormaus hat nahezu alle Arten als Hauptsäugetiermodell der Biologie und Pathobiologie verdrängt. Die Labormaus ist die kleinste Säugetier-Spezies, die klar und ausführlich dargestellt worden ist, um der Wert als ein Modell der menschlichen Krankheit und wurde in Fortschritte der unser Verständnis der menschlichen Biologie und Krankheiten von unschätzbarem Wert erwiesen. Die kurze Tragzeit und wesentlich geringeren Kosten hat die Entwicklung und Untersuchung von null und transgenen Mäusen als alltäglich Werkzeug in der biomedizinischen Forschung erlaubt. Allerdings hat die Größe der durchschnittlichen Labormaus (20-25 g) in ihrer Studie physiologisch oder chirurgisch basierte Studien begrenzt und folglich untersuchen einige Forscher größeren Säugetieren. Ein Hindernis für die Verwendung von Mäusen in diesen Studien ist die Schwierigkeit, mit Intubation Techniken, die physiologischen Messungen oder umfangreiche chirurgische Eingriffe unter Narkose tief erlauben würde angetroffen. Tracheotomie 1 wurde als Standard verwendet technique statt Intubation wegen der leichteren Durchführung dieser Technik und bescheidenen Fähigkeiten erforderlich. Allerdings ist nicht förderlich für die Tracheotomie chronischen oder Wiederherstellung Chirurgie Studien; somit ist es begrenzt auf akute Experimenten. Tracheotomie, kann auch eine verwirrende Variable in der Forschung, in der Entzündung oder empfindliche physiologische Reflexe sind wichtig. Unser Labor hat die meisten der von anderen Forschern beschriebenen Techniken ausprobiert und fand sie nicht ausreichend für eine Vielzahl von Gründen. Tracheotomie ist zu traumatisch und induziert Blutungen und Entzündungen der Atemwege. Viel problematischer ist, dass es praktisch nicht wiederholt werden können. Viele relativ nicht-invasive Techniken, die eine bescheidene Investition in Ausrüstung erfordern, sind nicht zuverlässig genug. Andere Techniken erfordern teure Geräte, die schwierig, ohne zu wissen, ob das Gerät wird in einer bestimmten Anwendung arbeiten zu rechtfertigen ist. So haben wir versucht, eine nicht-traumatische Technik, die nicht mehr benötigt t entwickelnhan eine bescheidene Investition in Spezialausrüstung konnte schnell durchgeführt werden und zuverlässig, könnte bei chronischen Modellen wiederholt werden, und konnte in einer großen Anzahl von Tieren verwendet werden. Eine solche Technik Hier berichten wir.

<table><tbody><tr><td>Otoskopkopf</td><td>Welch Allyn</td><td>21700</td><td>$188.98</td></tr><tr><td>Otoskopgriff</td><td>Welch Allyn</td><td>71000</td><td>$112.20</td></tr><tr><td>Wiederverwendbares Spekulum</td><td>Welch Allyn</td><td>22002</td><td>$3.98</td></tr><tr><td>Feine Pinzette</td><td>Miltex</td><td>18-779</td><td>$107.18</td></tr><tr><td>Kleiner Klemmständer zum Halten des Otoskops</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isofluran-Verdampfer (Mehrfachkreislauf mit Vakuum-Abgasbehandlung)</td><td>Summit</td> <td>Medical3.000</td><td></td> $</tr><tr><td>Flexivent (Beatmungsgerät für Tiere)</td>SCIREQ35.000 <td></td><td></td><td>$</td></tr><tr><td>Intravenöser Katheter (20 G, 1 Zoll)</td><td>BD</td><td>381233</td> <td>9,62 $</td></tr><tr><td>Polyethylenschlauch (PE10) (0,011 Zoll ID, 0,024 Zoll Außendurchmesser) 100 ft</td><td>Intramedic, Clay-Adams</td><td>427401</td> <td>115,70 $</td></tr><tr><td>Ketamin 100 mg/ml (10 ml Flasche)</td><td>Butler</td><td>23061</td><td>$10.00</td></tr><tr><td>Xylazin (100 ml Flasche)</td><td>Vedco</td><td>24105</td><td>$20.00</td></tr><tr><td>Isofluran (250 ml Flasche)</td><td></td><td></td><td>$15.00</td></tr><tr><td>Vecuroniumbromid 10 mg/10 ml</td><td>Pfizer</td><td>NDC 0069-0094-01</td><td>$15.00</td></tr></tbody></table>

intubation bei mäusen<em&gt; Über</em&gt; direkte laryngoskopie mit einem otoskop

Endotracheal Intubation in Mice via Direct Laryngoscopy Using an Otoscope

Mäusen, sowohl Wildtyp-und transgenen, sind die wichtigsten Säugetiermodell in der biomedizinischen Forschung aktuell. Intubation und Beatmung sind für ganze Tierversuche, die eine Operation unter Vollnarkose oder tiefe Messungen der Lungenfunktion benötigen notwendig. Tracheotomie, hat den Standard für Intubation der Atemwege in diesen Mäusen die mechanische Belüftung zu ermöglichen. Orotracheale Intubation ist wegen der erheblichen technischen Schwierigkeiten oder eine Anforderung für hoch spezialisierte und teure Ausrüstung wurde berichtet, aber nicht erfolgreich in vielen Studien verwendet. Hier berichten wir über eine Technik der direkten Laryngoskopie mit einem Otoskop mit einem 2,0-mm-Spekulum ausgestattet und mit einer 20 G intravenösen Katheter als Endotrachealtubus. Wir haben diese Technik umfassend und zuverlässig zur intubieren und führen eine genaue Beurteilung der Lungenfunktion bei Mäusen. Diese Technik hat sich als sicher erwiesen, im Wesentlichen ohne Tierverlust in erfahrenen Händen. Darüber hinaus ist diese Technikkann für wiederholte Untersuchungen von Mäusen chronische Modelle verwendet werden.

Intubation mit dem obigen Verfahren ist zuverlässig und schnell. Die geeignete Platzierung des Endotrachealtubus ist am einfachsten durch die Beobachtung ausgeatmeten Gas aus dem Blasentaucht Ausatmungsglied verifizierter die des Beatmungskreislauf (in der Regel in einem PEEP-Falle) und negativen Auslenkungen auf einer Atemwegsdruck Verfolgung (Fig. 1). Die negativen Ausschläge auf Atemwegsdruck Verfolgung sind die zuverlässigsten. Andere haben die Bewegung einer kleinen Flüssigkeitströpfchen in intrave...

Wir haben eine einfache, zuverlässige und relativ kostengünstiges Verfahren zur Intubation bei Mäusen durch direkte Laryngoskopie mit einem Otoskop mit einem 2,0-mm-Spekulum entwickelt. Diese Technik ist atraumatisch und für wiederholte Messungen bei chronischen Experimente eingesetzt werden. Wir finden es besser als zuvor berichtet, Tracheostoma oder chirurgischen Techniken.

Intubation bei Mäusen<em&gt; Über</em&gt; Direkte Laryngoskopie Mit einem Otoskop

Mice, both wildtype and transgenic, are the principal mammalian model in biomedical research currently. Intubation and mechanical ventilation are ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, Mäuse zuverlässig oral zu intubieren. Dies wird erreicht, indem zunächst das anästhetisierte Tier sorgfältig in die richtige Position gebracht wird. Anschließend werden mit dem Otoskop-Spekulum die Stimmbänder sichtbar gemacht und der endotracheale Tubus mithilfe eines Stylets in den Rachen eingeführt.Als Nächstes wird die intubierte Maus auf ein Beatmungsgerät gesetzt, um die korrekte Platzierung des Tubus zu überprüfen. Alternativ kann das Otoskop verwendet werden, um Testsubstanzen in die Lunge zu verabreichen. Letztendlich können genaue Druck-Volumen-Beziehungen in der Lunge gemessen werden.Die Hauptvorteile dieser Technik im Vergleich zu bestehenden Methoden wie der Tracheotomie bestehen darin, dass sie schnell, blutlos, traumafrei ist und wiederholt werden kann. Eine visuelle Demonstration dieser Technik ist entscheidend, da die Intubationsschritte schwer zu erlernen sind und schriftliche Anweisungen ohne gleichzeitige Visualisierung der Anatomie und der mechanischen Abläufe der Intubation wenig aussagekräftig sind. Um eine endotracheale Intubation mit einem Otoskop durchzuführen, greifen Sie zunächst mit dem Nackengriff einen anästhesierten acht Wochen alten Maus und verwenden dann gepolsterte Feinzangen, um die Zunge vorsichtig aus dem Mund zu ziehen.Halten Sie die Extension aufrecht, indem Sie die Zunge mit der Pinzette festhalten und sanften Druck ausüben, und ziehen Sie dann die Maus mit einer vertikalen Bewegung auf das Spekulum des Otoskops. Blicken Sie durch das Okular des Otoskops, während Sie das Tier weiterhin fest am Nackenfell greifen, und ziehen Sie die Maus vorsichtig am Zungen- und Nackenfellgriff entlang der gesamten Länge des Spekulum des Otoskops nach oben. Achten Sie sorgfältig auf die Stimmbänder, die leicht sichtbar sein sollten und sich mit jedem Atemzug zusammen mit der Struktur der Kehlkopföffnung bewegen.Die laryngealen ATUs sollten relativ weiß erscheinen. Falls die Bänder sich nicht bewegen oder schlecht sichtbar sind, drehen Sie das Tier leicht und überstrecken Sie den Hals vorsichtig. Nehmen Sie dann mit der dominanten Hand eine 20-Gauge-Kanüle mit einer Zolllänge, die mit einem ein Zentimeter langen PE-10-Schlauch ausgestattet ist, der durch die Spitze der Kanüle verläuft, und führen Sie sie wie einen Bleistift.Danach führen Sie den Katheter an der Seite des Spekulum ein. Leiten Sie den PE-10-Schlauch durch die Stimmbänder und schieben Sie den Katheter über den Schlauch vor, bis das Hub auf Höhe des unteren Schneidezahns ist. Entfernen Sie anschließend den Schlauch schnell.Übertragen Sie das Tier anschließend vorsichtig vom Spekulum auf ein mechanisches Beatmungsgerät und überprüfen Sie die Tubusposition, indem Sie die ausgeatmeten Luftblasen beobachten, die durch die PEEP-Falle strömen. Überwachen Sie die Atemwegsdruckkurve auf negative Ausschläge, um die korrekte Tubuslage zu bestätigen. Im Fall einer ösophagealen Intubation zeigt die Druckkurve deutlich höhere Drücke und keine negativen Ausschläge an.Alternativ geben Sie eine kleine Menge Wasser in ein Stück Infusions-Schlauchsystem und verbinden dieses mit dem Intubationsrohr, wobei die Bewegung des Wassers mit der Atmung des Mäuschen nachweisbar ist. Eine alternative Anwendung der Otoskop-Methode besteht darin, Testsubstanzen in die Maus einzubringen. Verwenden Sie den Spekulum, um eine Gel-Ladepipette bis zu den Stimmbändern einzuführen, und geben Sie bis zu 50 µL der gewünschten Behandlungslösung ein.Die Maus saugt die Flüssigkeit durch die Sehnen, was durch das Ous verifiziert wird. Atemgeräusche sind zu hören, bis die Flüssigkeit vollständig in den Lungen verteilt ist. Nach der Verabreichung der Behandlung die Pipette vorsichtig entfernen und die Maus auf eine Heizplatte legen.Alternativ das Tier in einen Käfig stellen, der sich auf einem temperaturgeregelten Wärmetablett befindet. Wenn sich das Tier vollständig erholt hat, wird es in seinen Käfig zurückgebracht. Die Intubation über das Otoskop ist zuverlässig und schnell.In dieser repräsentativen Darstellung des Atemwegsdrucks spiegelt die blaue Linie den Atemwegsdruck wider, und die rote Linie zeigt die Kurve des Atemzugvolumens in der Maus unmittelbar nach der Intubation. Die negativen, nach unten gerichteten Ausschläge der Druckkurve weisen auf die Erzeugung eines negativen intrathorakalen Drucks in der Maus durch spontane Atemanstrengung sowie auf eine korrekte Platzierung des endotrachealen Tubus hin. Für diese repräsentative Druck-Volumen-Kurve wurde die Maus mit einem 20-Gauge-Intravenöskatheter intubiert, wie gerade gezeigt, mit Pantonium paralysiert und maschinell beatmet.Die Kurven zeigen, dass der Katheter bis zu einem Wasserdruck von 30 Zentimetern dicht bleibt und somit zur genauen Messung der Druck-Volumen-Beziehungen bei der Maus verwendet werden kann. In dieser Abbildung ist eine repräsentative Dosis-Wirkungs-Kurve dargestellt. In diesem Experiment zeigte das Kontrolltier bis zu einer Konzentration von 25 Milligramm pro Milliliter eine minimale Reaktion auf Methacholin, während die mit Albumin immunisierte und provozierte Maus eine Überempfindlichkeit gegenüber der Behandlung aufwies.Die Messungen wurden an Mäusen vorgenommen, die wie gerade gezeigt mit einem Katheter der Größe 20 Gauge intubiert worden waren, und unterschieden sich nicht von denjenigen, die mittels direkter Laryngoskopie an einer tracheotomierten Maus durchgeführt wurden. Die quantitative Applikation in die Lunge ist zuverlässiger und gleichmäßiger. Wie in diesem Bild veranschaulicht, kann die direkte Applikationstechnik beispielsweise verwendet werden, um präzise Antigene im unteren Respirationstrakt in einem Modell einer allergischen Entzündung abzugeben.Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie gut verstehen, wie man ein Otoskop verwendet, um eine direkte laryngoskopische Intubation bei einer Maus durchzuführen.

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Forschung

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Medizin

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Minimalinvasive murine Laryngoskopie zur Nahaufnahme der Kehlkopfbewegung beim Atmen und Schlucken

Hier stellen wir ein standardisiertes Verfahren für die endotracheale Intubation mittels Tracheotomie gefolgt von einer Thorakotomie bei Ratten vor, das darauf abzielt, die Präzision und Reproduzierbarkeit von Nicht-Überlebensanwendungen zu verbessern, die eine invasive Beatmung und Exposition von Thoraxorganen in in vivo Rattenmodellen erfordern.

Endotracheale Intubation mittels Tracheotomie und anschließender Thorakotomie bei Ratten für Anwendungen ohne Überleben

Dieses Protokoll zeigt, wie die optimale Positionierung einer Maus und das transorale Einsetzen eines kamerabasierten Otoskops die Visualisierung der Stimmritze, eine schnelle Intubation mit minimalem Gewebetrauma und eine gleichmäßige Flüssigkeitsabgabe an die Lunge ermöglicht.

Verbesserte Methodik für die Flüssigkeitsabgabe in die Lunge der Maus: Intubation mit einem Consumer-Otoskop

Lernen Sie die endotracheale Intubation bei Mäusen durch direkte Laryngoskopie mit einem Otoskop. Diese schonende Methode ermöglicht wiederholbare Messungen in chronischen Experimenten und ist weniger invasiv als eine Tracheotomie.

Intubation bei Mäusen

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