Name: Stereotaktische Injektion eines viralen Vektors für Conditional Gene Manipulation im Maus-Rückenmark (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-03-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 39 s
Description: Lernen Sie die stereotaktische Injektion eines viralen Vektors zur bedingten Genmanipulation im Maus-Rückenmark. Diese Methode ermöglicht präzise, räumlich begrenzte Genexpression im lumbalen Dorsalhorn.

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Wir danken Bakhos A. Tannous, Ph.D., Direktor des Vector Entwicklung und Produktion in der Neuroscience Center of Massachusetts General Hospital in Charlestown, Massachusetts, für die Bereitstellung der rAAV-EGFP Vektor, und John Whang für technische Unterstützung. Diese Arbeit wurde von grant R01 NS050408 (JS) aus dem National Institute of Neurological Disorders and Stroke unterstützt.

Das chirurgische Verfahren beschrieben wurde vom Institutional Animal Care und Use Committee (IACUC) der Columbia University genehmigt worden. Ein. Vorbereitung der Ausrüstung und Virus-Suspension <ol><li> Reinigen und desinfizieren Sie das Gerät, sterilisieren die chirurgischen Instrumente und die V-Kerbe Spikes, die verwendet werden, um Wirbel L1 beheben werden. </li><li> Ziehen und Kegel Glaspipetten. Wir verwenden Pipetten, die einen Durchmesser der Spitze von 40 um aufweisen und in einem Winkel von 20 ° abgeschrägt. Sterilisieren Sie die Glas-Pipetten. </li><li> Richten Sie den stereotaktischen Rahmen, montieren Sie die Mikrospritze Injektor auf dem Manipulator und verbinden Sie den Injektor mit dem Controller. </li><li> Bringen Sie einen der Glaspipetten der Mikrospritze mit der Klemmverschraubung Kit. </li><li> Entfernen Sie den Kolben aus der Mikroliterspritze und füllen Sie die Spritze mit Mineralöl. Oil Red O (1 - (2,5-Dimethyl-4-(2,5-dimethylphenylazo) phenylazo)-2-naphthol), zu dem Mineralöl zugegeben werden, um seine v erhöhenisibility. Setzen Sie den Kolben und schieben Sie es den ganzen Weg bis zur Spitze. Sorgfältig vermeiden damit eine Luftblase erzeugt. </li><li> Bereiten Sie die Viruspartikel Suspension in einer biologischen Sicherheitswerkbank. Auftauen des gefrorenen Virus auf Eis und kurz vor Gebrauch verdünnte mit steriler phosphatgepufferter Kochsalzlösung auf die gewünschte Teilchengröße Konzentration. </li><li> Legen Sie die Mikrospritze in die Halterung an der Einspritzdüse. </li><li> Pipette 5 ul der Virus-Suspension auf eine kleine Kunststoff-Folie, zB Parafilm. Senken Sie das Glas Pipettenspitze in dem Tropfen und ziehen Sie den Kolben, um die Mikrospritze füllen. Erstellen Sie eine kleine Luftblase an der Pipettenspitze, um ein Verstopfen zu verhindern. </li></ol> 2. Laminektomie <ol><li> Bereiten Sie den OP-Bereich durch Abwischen Bank und Heizkissen mit Desinfektionsmittel. </li><li> Anesthetize der Maus. Wir verwenden Inhalationsnarkose mit Isofluran (3% während der Induktion, 2% -3% bei Wartungsarbeiten). </li><li> Zeigen Schmiermittel auf jedes Auge, um die Augen vor dem Austrocknen während der Schutz derBetrieb. </li><li> Rasur das Fell von den unteren Rücken, um den Hals des Maus und desinfizieren die Haut mit wechselnden Tücher einer Antiseptikum wie Chlorhexidin oder PVP-Jod und 70% Ethanol. Isolierung des aseptisch vorbereitete Stelle mit Operationstuch und infiltrieren die Einschnittstelle mit Bupivacain (0,25%, 1:10 mit physiologischer Kochsalzlösung). </li><li> Einzuschneiden die Schale am caudalen Ende des Brustkorbs entlang der Mittellinie (2-3 cm) und trennen die Faszie Abdecken der Wirbelsäule. </li><li> Weil das Rückenmark aufhört zu wachsen früher während der postnatalen Entwicklung außer der Wirbelsäule liegt spinale Segment L4 unterhalb der ersten Lendenwirbel (L1). Wirbel L1 befindet kaudal des Wirbels, der die letzte Paar Rippen hält. Identifizieren und aufzudecken Wirbel L1, indem die kleinen Rückenmuskeln und Bänder an seiner dorsalen Oberfläche. </li><li> Leicht anheben und halten Wirbel L1 mit einer Adson Pinzette. Verwenden Sie einen dedizierten Laminektomie Zangen, um den dorsalen Portio entfernenn des Wirbels (Wirbelsäule und Lamina) und setzen das Rückenmark. Vermeiden Sie Schäden am Rückenmark. </li><li> Übertragen Sie die Maus auf der Heizplatte in der stereotaktischen Rahmen. Überwachen Sie die Temperatur der Maus im späteren Betrieb. </li></ol> 3. Injektion <ol><li> Fix Wirbel L1 mit V-Kerbe Spikes. Die Spitzen müssen stabilisieren die Wirbelsäule, so dass der Wirbel nicht während der Atmung bewegen. </li><li> Bringen Sie die Mikrospritze näher, so dass die Pipettenspitze oberhalb des Laminektomie Website ist. Senken Sie den Kolben, bis Sie die Virussuspension Verlassen der Pipette zu sehen. Nehmen Sie die Tropfen mit einem sterilen Wattestäbchen. </li><li> Positionieren der Pipettenspitze am rostralen äußersten Teil der freiliegenden Rückenmarks. Zentrieren Sie die Pipette über den hinteren Mittelfurche, dann bewegen Sie die Spitze 500 um seitlich. Senken Sie die Spitze an der Oberfläche des Rückenmarks und Punktion der Dura mater oder, wenn Sie mit einem unbeveled Glaspipette arbeiten, verwenden eine abgeschrägte Stahlkanüle zu durchstechen die dura. Senken Sie die Spitze der Glaspipette 300 um in das Rückenmark. </li><li> Inject 1 ul Virussuspension mit einer Rate von 200 nl / min. </li><li> Am Ende der Einspritzung, warten Sie mindestens 2 Minuten vor langsam Zurückziehen der Pipette. </li><li> Wiederholen Schritte 3.3 bis 3,5 bei der kaudalen äußersten Teil der freiliegenden Rückenmarks zur vollständigen Verteilung des viralen Vektors in Wirbelsegment L4 erreichen. Die beiden Injektionsstellen befinden rostralen und kaudal des L4-Segment zu Gewebeschäden in der Zielregion zu vermeiden. </li></ol> 4. Wundverschluss <ol><li> Release Wirbel L1 aus den V-Kerbe Klemmen und entfernen Sie die Maus aus dem stereotaktischen Rahmen. </li><li> Naht der Faszie mit 5,0 Vicryl. Die geschlossene Blende bietet Versicherungsschutz für die Laminektomie Ort. </li><li> Schließen Sie die Haut mit Nylon-Fäden oder chirurgische Klammern. </li></ol> 5. Postoperative Pflege <ol><li> Übertragen Sie die Maus, um eine Erholung Käfig mit weichen, nonparticular Betten. Legen Sie sie auf ter Seite für bequeme Atmung. Überwachen das Tier, bis sie vollständig wach, ambulant ist und fängt an zu trinken. </li><li> Wir bieten postoperativen Analgesie für 72 Stunden mit täglichen subkutanen Injektionen von Carprofen (5,0 mg / kg). </li><li> Überwachung postoperativen Erholung durch tägliche Inspektion für die ersten 3 Tage, dann jeden zweiten Tag oder 3 Tage pro Woche, bis das Experiment abgeschlossen ist. </li><li> Entfernen Sie die Haut Nähte oder Klammern 7 bis 10 Tage nach der Operation, wenn die Wundheilung abgeschlossen ist. </li><li> Euthanize das Tier nach Beendigung des Experiments. </li></ol>

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</ol>

Die Autoren erklären, dass sie keine finanziellen Interessen haben.

Stereotaktische Injektion ermöglicht Targeting-Vektor Rückenmarksneuronen für Anwendungen wie neuronale Netzwerk-Mapping basierend auf transsynaptische Virusverschleppung 6,7 oder optogenetische Dissektion 8, Axon Führung während der Regenerierung vor Verletzungen 9,10 oder Gentherapie zur Prävention oder Behandlung von Neurodegeneration 11, 12. Virale Vektoren sind für Genmanipulation worden im Rückenmark verwendet, um zu untersuchen somatosensorischen, Motor und vegetative B...

Fortgeschrittenen Technologien bedingter Genmanipulation in der Maus zu ermöglichen vielfältige Ansätze zur Exploration von synaptischen Bahnen und funktionelle Verbindungen im zentralen Nervensystem. Transgene können durch niedermolekulare Effektoren wie Doxycyclin Einwirken auf ein Tetracyclin-gesteuerten Transaktivator, die für den Einsatz als Repressor oder Aktivator der Gentranskription, oder Tamoxifen Erkennen eines mutierten Ligandenbindungsdomäne des Östrogenrezeptors 1 funktionieren kann geregelt werden . Irreversible Modifikation Transgen wird üblicherweise von Desoxyribonukleinsäure (DNA) Rekombinasen erreicht. Cre (Ursachen Rekombination) und Flp (Flippase Rekombinationsenzyms) katalysieren die Exzision, Inversion oder Translokation von DNA-Fragmenten, die von loxP (locus der Kreuzung x über, P1) oder Frt (Flippase Anerkennung target) Seiten bzw. 1 flankiert werden. Zu den Anwendungen gehören Gen-Aktivierung oder Inaktivierung und induzierbare Ribonukleinsäure (RNA) Störungen <sup&gt; 2. Bedingungsausdruck von fluoreszierenden oder enzymatischen Reporter wie β-Galactosidase oder alkalischer Phosphatase verwendet werden, um Neuronen beschriften und prüft ihre topische Organisation und Konnektivität 3 werden. Large-scale Mutagenese-Projekte in Nordamerika ( <a href="http://www.norcomm.org/index.htm" target="_blank">http://www.norcomm.org/index.htm</a> ) und Europa ( <a href="http://www.knockoutmouse.org/about/eucomm" target="_blank">http://www.knockoutmouse.org/about/eucomm</a> ) produzieren Bibliotheken embryonalen Stammzellen der Maus Zellklone mit bedingten Gen-Targets und Fallen, die letztlich auf das gesamte Maus-Genom. Mäuse aus diesen Klonen erzeugt werden, können mit einer wachsenden Zahl von Maus Linien gekreuzt werden, daß DNA-Rekombinasen exprimieren unter Promotoren oder Loci für eine bestimmte Population von Neuronen zur selektiven Genmanipulation ( <a href="http://nagy.mshri.on.ca/cre_new/index.php" target="_blank">http://nagy.mshri.on.ca/cre_new/index . php</a> ). <p class= &quot;Jove_content&quot;&gt; Allerdings kann die Beschränkung auf Genmanipulation unterschiedliche Populationen von Neuronen oder bestimmten Regionen von Interesse nicht durch genetische Targeting allein, wenn ein Promotor spezifisch für die Neuronenpopulation von Interesse nicht bekannt ist und nicht von allen Neuronen in der Region exprimiert erreicht werden von Interesse. Im Rückenmark können experimentellen Designs erfordern räumlichen Beschränkung der Genmanipulation ein oder zwei kraniokaudalen Segmente. Stereotaktische Injektion eines viralen Vektors, Cre oder Flp drückt ermöglicht Begrenzen Genrekombination in Regionen im Rückenmark von Mäusen, in denen DNA-Fragmente von loxP-oder FRT-Stellen flankiert sind, so genannte floxed oder flrted Allelen. Anders als konstitutive DNA-Umlagerung, die würde aus Kreuzungen der Tiere mit Rekombinase exprimierenden Mäusen führen, diese Strategie auch zeitliche Kontrolle über Gen-Aktivierung oder Inaktivierung. Virale Vektoren kodieren gefloxten oder geflirtet Transgene bieten eine umgekehrte Möglichkeit Genmanipulation in Mäusen, die corresponding Rekombinase stromabwärts eines Neuron-spezifischen Promotors. Mehrere rekombinante Vektoren mit Affinität zu Neuronen sind 4. Hochleistungs-(gutless) Adenovirus, Adeno-assoziiertes Virus, Herpes simplex-Virus und Lentivirus-Vektoren werden üblicherweise neurotropen verwendet. Die Auswahl des geeigneten Virus für eine Fragestellung ist ein wichtiger Teil des experimentellen Designs. Größe des Transgens, Lieferroute, Spezifität der Infektion mit Neuronen, um Gliazellen, Infektion Wirksamkeit, entzündlichen und toxische Nebenwirkungen müssen berücksichtigt werden 4 entgegengesetzt. Hier beschreiben wir die stereotaktische Injektion eines viralen Vektors in der dorsalen Horn des Rückenmarks, eine Technik, die wir verwenden zur bedingten Genregulation in unserer Forschung über die Neurobiologie von Schmerz. Das Hinterhorn erhält afferenten Input von primären somatosensorischen Neuronen einschließlich nozizeptiven Neuronen. Lokale Interneurone verarbeiten die Informationen vor der Projektion Neuronen vermitteln sie ausdas Hinterhorn des Gehirns 5. Wir demonstrieren die Infektion von Dorsalhorn spinalen Neuronen an Segmentebene L4 mit einem neurotropen rekombinanten Adeno-assoziierten Virus (rAAV), das verstärkt grün fluoreszierende Protein (EGFP) drückt unter einem konstitutiv aktiven CMV-Promotors.

<table border="1"><tbody><tr><td> Material Name </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td><td></td></tr><tr><td> Spinal Grundplatte </td><td> David Kopf Instruments </td><td> 912 </td><td></td></tr><tr><td> Kleintier stereotaktischen Instrument </td><td> David Kopf Instruments </td><td> 900 </td><td></td></tr><tr><td> Maus Gas Anästhesie Kopfhalter </td><td> David Kopf Instruments </td><td> 923-B </td><td></td></tr><tr><td> Verstellbare Basis mounts </td><td> David Kopf Instruments </td><td> 982 </td><td></td></tr><tr><td> V-Kerbe Spikes </td><td> David Kopf Instruments </td><td> 987 </td><td></td></tr><tr><td> Kleintier-Temperaturregelung </td><td> David Kopf Instruments </td><td> TCAT-2LV </td><td></td></tr><tr><td> Adson Pinzette </td><td> Fine Science Tools </td><td> 11006-12 </td><td></td></tr><tr><td> Laminektomie Zangen </td><td> Fine Science Tools </td><td> 11223-20 </td><td></td></tr><tr><td> UltraMicroPump (ein) mit SYS-Micro4-Controller </td><td> World Precision Instruments </td><td> UMP3-1 </td><td></td></tr><tr><td> Mikroliterspritze, 65RN </td><td> Hamilton </td><td> 7633-01 </td><td></td></tr><tr><td> RN Klemmverschraubung, 1 mm </td><td> Hamilton </td><td> 55750-01 </td><td></td></tr><tr><td> Borosilikatglas Kapillaren </td><td> World Precision Instruments </td><td> 1B100F-4 </td><td></td></tr><tr><td> Microgrinder </td><td> Narishige </td><td> EG-44 </td><td></td></tr></tbody></table>

stereotaktische injektion eines viralen vektors für conditional gene manipulation im maus-rückenmark

Stereotaxic Injection of a Viral Vector for Conditional Gene Manipulation in the Mouse Spinal Cord

Intraparenchymalen Injektion eines viralen Vektors ermöglicht bedingten Genmanipulation in unterschiedliche Populationen von Neuronen oder bestimmte Bereiche des zentralen Nervensystems. Wir demonstrieren eine stereotaktische Injektion Technik, gezielt Genexpression oder Silencing im dorsalen Horn des Rückenmarks Maus ermöglicht. Der chirurgische Eingriff ist kurz. Es erfordert Laminektomie eines einzelnen Wirbel, bietet für eine schnelle Wiederherstellung des Tieres und ungestörte Beweglichkeit der Wirbelsäule. Kontrollierte Injektion eines kleinen Vektor Suspensionsvolumen bei niedriger Drehzahl und die Verwendung eines Mikrospritze mit abgeschrägten Glaskanüle minimieren Gewebeläsion. Die lokale Immunantwort auf den Vektor, hängt von den spezifischen Eigenschaften des Virus eingesetzt; in unserer Erfahrung ist es kleinen und kurzlebigen wenn ein rekombinantes Adeno-assoziierten Virus verwendet wird. Ein Reportergen wie verstärkt grün fluoreszierende Protein erleichtert die Beobachtung räumliche Verteilung des Vektors oder der Wirksamkeit und zellulären Spezificity der Transfektion.

Erfolgreiche Transfektion ergibt robuste Genexpression in Nervenzellen des eingespritzten Dorsalhorn (Abbildung 1), Schonung der dorsalen Horn von der Gegenseite, Vorderhorn und der Spinalganglien. <img src="/files/ftp_upload/50313/50313fig1.jpg" alt="Abbildung 1" /> Abbildung 1. Transfektion von Hinterhorn-Neuronen. (A) Expression des fluoreszierenden Reporter eGFP (grün) in der linken Hinterhorn des L4 Rückenmark, zwei Wochen nach der stereotaktischen...

Virale Vektoren können für gezielte Genmanipulation. Wir demonstrieren, ein Verfahren zur bedingten Genexpression oder Ablation im Rückenmark der Maus, stereotaktische Injektion unter Verwendung eines viralen Vektors in der dorsalen Horn, ein bekannter Ort der synaptischen Kontakt zwischen primären somatosensorischen Afferenzen und Neuronen des zentralen Nervensystems.

Stereotaktische Injektion eines viralen Vektors für Conditional Gene Manipulation im Maus-Rückenmark

Intraparenchymal injection of a viral vector enables conditional gene manipulation in distinct populations of neurons or particular regions of the central ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, eine räumlich begrenzte Genexpression im Maus-Rückenmark durch stereotaktische Injektion eines viralen Vektors in das lumbale Hinterhorn zu erreichen. Der erste Schritt des Verfahrens ist die Lokalisation und Freilegung der Lendenwirbel. Der zweite Schritt besteht darin, den dorsalen Teil des Wirbels zu entfernen, um das Rückenmark freizulegen.Ein Verfahren, das als Laminektomie bezeichnet wird. Anschließend wird eine Glaspipette, die mit einer Mikrospritzpumpe verbunden ist, über den Hinterhorn positioniert und in das Rückenmark abgesenkt. Der letzte Schritt besteht darin, die Vektorsuspension langsam zu injizieren.Zwei Wochen später wird die Transfektion dorsaler Hornneurone durch die Expression von grünem Fluoreszenzprotein nachgewiesen, das die Verfolgung der Virendistribution ermöglicht. Diese Methode trägt dazu bei, die Funktion von Neuronen in bestimmten sensorischen Bahnen aufzuklären. Wir verwenden sie in Studien, die gezielt auf die Entstehung entzündlicher oder neuropathischer Schmerzen abzielen.Die visuelle Demonstration ist entscheidend, um das korrekte Positionieren der Maus im stereotaktischen Rahmen zu erlernen

stereotaxic-injection-viral-vector-for-conditional-gene-manipulation

Research

Forschung

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowissenschaften

Quelle: Porlan, E., et al. Stabile und effiziente genetische Modifikation von Zellen in der adulten Maus V-SVZ zur Analyse von autonomen und nicht-autonomen Effekten neuraler Stammzellen. J. Vis. Exp. (2016)Dieses Video zeigt eine stabile genetische Modifikation von neuralen Stammzellen (NSCs) in der ventrikulär-subventrikulären Zone (V-SVZ) durch stereotaktische Injektion eines virustragenden therapeutischen Gens in ein Mausmodell. Das Virus dringt in NSCs ein, durchläuft eine reverse...

Stereotaktische Injektion von Viren für eine stabile genetische Veränderung in einem Mausmodell

Quelle: Chen, S., et al., Stereotaxische Chirurgie zur genetischen Manipulation in striatalen Zellen von Neugeborenen-Mausgehirnen. J. Vis. Exp. (2018)Dieses Video zeigt die stereotaktische Injektion eines viralen Vektors, der für Cre-Rekombinase und grünes Fluoreszenzprotein (GFP) kodiert, in das Striatum eines genetisch veränderten Maus-Welpen, um eine Genmanipulation zu erreichen, indem eine loxP-flankierte STOP-Kassette herausgeschnitten und das rote Fluoreszenzprotein oder RFP als Reporter...

Stereotaktische Mikroinjektion eines viralen Vektors zur Genmanipulation in einem Striatum eines Maus-Jungtiers

Quelle: Tadokoro, T., et al. Subpiale Adeno-assoziierte Virus 9 (AAV9) Vektorverabreichung bei erwachsenen Mäusen. J. Vis. Exp. (2017)Dieses Video zeigt eine subpiale Injektionstechnik für die Genabgabe an das Rückenmark bei Mäusen. Das Verfahren umfasst die Freilegung der Dura mater, die Punktion der Pia mater und die Injektion eines rekombinanten Adeno-assoziierten Virus (rAAV), das ein fluoreszierendes Protein-exprimierendes Gen trägt, in den subpialen Raum. Nach der Injektion und Genesung...

Subpiale Genverabreichung im Rückenmark der Maus zur Bewertung der Genexpression

Quelle: Pereira, M. et. al., In vivo direkte Reprogrammierung von residenten Gliazellen in Interneuronen durch intrazerebrale Injektion viraler Vektoren. J. Vis. Exp. (2019)Dieses Video zeigt die stereotaktische Injektion eines Adeno-assoziierten Virus in die Großhirnrinde einer transgenen Maus, um Cre-abhängige neuronale Reprogrammierung und fluoreszierende Reportergene in Gliazellen zu bringen.

Stereotaktische Injektion von viralen Vektoren für die Reprogrammierung von Gliazellen in einem Mausmodell

Quelle: Fricano-Kugler, C. J., et al. Design, Verpackung und Verabreichung von CRISPR-Retro- und Lentiviren mit hohem Titer durch stereotaktische Injektion. J. Vis. Exp. (2016)Dieses Video zeigt die stereotaktische Virusinjektion zur präzisen neuronalen Geneditierung im Gehirn von Mäusen. Das Protokoll gewährleistet eine genaue Virusabgabe an den Gyrus dentatus und ermöglicht die Fluoreszenzmarkierung und den CRISPR-vermittelten Gen-Knockout, um neuronale Schaltkreise, Genfunktionen und...

Stereotaktische Virusinjektion zur gezielten neuronalen Geneditierung im Gehirn von Mäusen

Quelle: Li, D., et al. Direkte intrathekale Injektion von rekombinanten Adeno-assoziierten Viren in erwachsene Mäuse. J. Vis. Exp. (2019)Dieses Video zeigt das Verfahren zur intrathekalen Injektion von Adeno-assoziierten Viren (AAV) in die Zerebrospinalflüssigkeit (CSF) einer wachen Maus, einschließlich der Spritzenvorbereitung, der Ausrichtung der Wirbelsäule und des präzisen Einführens der Nadel. Diese Methode validiert die gezielte Verabreichung von Genen und unterstützt ihr Potenzial für...

Intrathekale Verabreichung von Viren in einem Mausmodell zur Behandlung von Erkrankungen des Zentralnervensystems

Der CRISPR / Cas9 System bietet das Potenzial, um gezielte Genom Bearbeitung zugänglich und erschwinglich für die wissenschaftliche Gemeinschaft. Dieses Protokoll soll zeigen, wie Viren zu schaffen, die ein Gen von Interesse unter Verwendung des CRISPR / Cas9 System Knockout wird, und sie dann stereotaxically in die erwachsenen Maus Gehirn zu injizieren.

Planung, Verpackung und Lieferung von hohen Titern CRISPR Retro und Lentiviren über stereotaktische Injektion

Intraspinal Injektion von Rekombinase abhängigen recombinant Adeno-assoziierte Virus (rAAV) kann verwendet werden, um jeden genetisch gekennzeichneten Zelltyp im Rückenmark zu manipulieren. Hier beschreiben wir, wie Neuronen im Hinterhorn des Rückenmarks lumbale transduzieren. Diese Technik ermöglicht funktionale Verhör des Subtyps manipulierten Neuron.

Adeno-assoziierten Virus-vermittelten Transgene Ausdruck in genetisch definierten Nervenzellen des Rückenmarks

Dieses Protokoll zeigt Injektion von Doppelthebel transportable viralen Vektoren in Ratte Rückenmark Gewebe. Der Vektor wird an der Synapse aufgegriffen und zum Zellkörper von Neuronen Ziel transportiert. Dieses Modell eignet sich für retrograde Tracing wichtige spinalen Bahnen oder gezielt Zellen für Gen-Therapie-Anwendungen.

Direkter Einspritzung von Lentivirale Vektor zeigt mehrere motorische Bahnen im Rückenmark Ratte

Dieses Protokoll demonstriert eine neuartige Methode zur Anwendung von Gentherapien auf Subpopulationen von Zellen bei neonatalen Ratten im postnatalen Alter von 5-10 Tagen durch Injektion eines anterograden chemogenetischen Modifikators in den somatomotorischen Kortex und einer retrograden transportablen Cre-Rekombinase in das zervikale Rückenmark.

Targeting des kortikospinalen Trakts bei neonatalen Ratten mit einem doppelviralen Vektor mittels kombinierter Gehirn- und Wirbelsäulenchirurgie

Eine lumbale intrathekale Injektion stellt einen translational relevanten Verabreichungsweg für die Verabreichung einer Gentherapie an das zentrale Nervensystem dar. Dieses umfassende standardisierte Protokoll für lumbale intrathekale Injektionen bei Neugeborenen, juvenilen und adulten Mäusen und Ratten soll Forscher bei der Übernahme dieser Technik für präklinische Gentherapiestudien unterstützen.

Lumbale intrathekale Injektion von Gentherapie-Vektoren für das Targeting des Zentralnervensystems bei Mäusen und Ratten

Lernen Sie die stereotaktische Injektion eines viralen Vektors zur bedingten Genmanipulation im Maus-Rückenmark. Diese Methode ermöglicht präzise, räumlich begrenzte Genexpression im lumbalen Dorsalhorn.

Stereotaktische Injektion eines viralen Vektors für Conditional Gene Manipulation im Maus-Rückenmark

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