Name: Ein In-vitro- Modell zur Heterogenität des menschlichen Makrophagen Differenzierung und Polarisierung Studieren (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-06-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 42 s
Description: Lernen Sie die Isolierung und Differenzierung humaner Monozyten zu polarisierten Makrophagen mittels Dichtegradientenzentrifugation und negativer Magnetabtrennung. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Makrophagenheterogenität und inflammatorischen Erkrankungen.

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Wir danken Nadine Wambsganss für hervorragende technische Assistenz. Diese Arbeit wurde durch ein Stipendium der Deutschen Forschungsgemeinschaft (GL599/1-1) und zum Teil durch einen Zuschuss von der Innovation Fund GRENZE (Universität Heidelberg) zu CAG unterstützt

1. Protokoll <ol><li> Planen Sie Puffer wie folgt: <ol><li> Planen Sie Puffer für PBMC Trennung: &quot;Waschpuffer&quot; = 0,02% EDTA in PBS (0,5 M EDTA Nutzung). </li><li> Planen Sie Puffer für Monozyten Trennung: &quot;MACS Spülpuffer&quot; = 0,5% BSA (250 mg) + 2 mM EDTA (200 ul) + PBS (50 ml). Degas der Puffer. </li><li> Planen Sie Puffer für FACS-Färbung und Lagerung der Zellen: &quot;FACS-Puffer&quot; = 10% FCS in PBS und &quot;Fixierung Puffer&quot; = 1% PFA in PBS. </li></ol></li><li> Unentschieden 30 ml Vollblut von einem Unterarm Vene. Verwenden EDTA als Antikoagulans. </li><li> Isolieren PBMC (Histopaque) wie folgt: <ol><li> Bereiten Sie zwei sterile 50 ml Röhrchen (kein Poly-Styrol). </li><li> Verdünnen das Blut aus Schritt 2 mit PBS 1:1 beträgt. </li><li> 25 ml + 25 ml Histopaque Vollblut / PBS pro Röhrchen. Stellen Sie sicher, dass Histopaque und Blut nicht mischen. </li><li> Zentrifuge bei 400 xg für 30 min bei RT, keine Bremse. </li><li> Saugen Plasma und entsorgen. </li><li> Saugen undurchsichtig Schnittstelle und Pipette in sauberen 50 ml Wannee. </li><li> 20 ml 0,02% EDTA in PBS. </li><li> Zentrifuge bei 250 xg für 5 min bei 4 ° C. </li><li> Überstand verwerfen. </li><li> 10 ml 0,02% EDTA in PBS. </li></ol></li><li> Zählen von Zellen wie folgt: <ol><li> Gut mischen durch Vortexen für 10 sec. </li><li> Nehmen Sie 200 ul Zellsuspension + 300 ul 0,02% EDTA in PBS + 500 ul Trypanblau (200-500 Zellen/10 Quadrate, sonst ändern Verdünnungsfaktor). </li></ol></li><li> Führen negativen Isolierung von Monozyten wie folgt: <ol><li> Zentrifuge Zellen in Schritt 3,10 für 10 min, 120 x g erhalten. Überstand verwerfen. </li><li> Waschen Zellpellet 2x durch Zugabe von 10 ml PBS + 0,02% EDTA und Zentrifuge für 10 min, 120 x g. </li><li> In 9 ml sterilem Wasser für 3 Sekunden, 1 ml 10X PBS. </li><li> Waschen Sie noch einmal mit PBS + 0,02% EDTA und Zentrifuge 10 min, 120 x g. </li><li> Zählen Sie während der Zentrifugation. </li><li> Verdünnen Sie in EasySep Puffer bei 5 x 10 7 / ml. </li><li> In 50 ul / ml Monozyten Bereicherung SchwanzSchwanz. </li><li> Inkubieren für 10 min bei 4 ° C. </li><li> Vortex Perlen für 30 sek. </li><li> In 50 ul / ml Perlen. </li><li> Inkubieren für 5 min bei 4 ° C. </li><li> Füllen Sie EasySep Puffer Volumen von 2,5 ml abzuschließen. Die Lösung scheint nun bräunlich. </li><li> Setzen Sie in Magneten. </li><li> Warten 2.5 min bei RT. Während dieser Zeit nicht Monozyten, gebunden an die magnetischen Kügelchen werden mit der Rohrwand bewegen und bleiben dort haften. </li><li> Gießen Puffer mit unverbindlichen Monozyten in frischen sterilen Röhrchen. Diese Lösung sieht weißlich. </li><li> Waschen einmal mit PBS + 0,02% EDTA und zentrifugieren für 10 min, 120 x g. </li></ol></li><li> Platte Zellen in einer Kunststoffschale oder mehrwandigen Platte mit einer Dichte von 0,5 x 10 6 / cm 2. 1 ml der Kultur media / 1 x 10 6 Zellen. </li><li> Kultur Zellen unter Bedingungen von Interesse für 6-14 Tage. </li><li> Ändern Medien nach 3 Tagen durch Austausch 50% der Medien mit frischem Medium (siehe Tabelle 1 für weitere Details). </li><li>Nach sechs Tagen Ernte Zellen zur mRNA-Isolierung, Durchflusszytometrie, Western Blot, etc. </li></ol>

<ol><li>Gordon, S., Taylor, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monocyte+and+macrophage+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Monocyte and macrophage heterogeneity.</a> Nat. Rev. Immunol. 5, 953-964 (2005).</li>
<li>Gordon, S., Mantovani, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diversity+and+plasticity+of+mononuclear+phagocytes%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Diversity and plasticity of mononuclear phagocytes.</a> European Journal of Immunology. 41, 2470-2472 (2011).</li>
<li>Martinez, F. O., Sica, A., Mantovani, A., Locati, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+activation+and+polarization%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Biosci%22%5BJournal%5D)">Macrophage activation and polarization.</a> Front. Biosci. 13, 453-461 (2008).</li>
<li>Ingersoll, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+gene+expression+profiles+between+human+and+mouse+monocyte+subsets%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Comparison of gene expression profiles between human and mouse monocyte subsets.</a> Blood. 115, 10-19 (2010).</li>
<li>Gleissner, C. A., Sanders, J. M., Nadler, J., Ley, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Upregulation+of+aldose+reductase+during+foam+cell+formation+as+possible+link+among+diabetes%2C+hyperlipidemia%2C+and+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler.+Thromb.+Vasc.+Biol%22%5BJournal%5D)">Upregulation of aldose reductase during foam cell formation as possible link among diabetes, hyperlipidemia, and atherosclerosis.</a> Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 28, 1137-1143 (2008).</li>
<li>Gleissner, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CXCL4+downregulates+the+atheroprotective+hemoglobin+receptor+CD163+in+human+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">CXCL4 downregulates the atheroprotective hemoglobin receptor CD163 in human macrophages.</a> Circ. Res. , (2009).</li>
<li>Gleissner, C. A., Shaked, I., Little, K. M., Ley, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CXC+chemokine+ligand+4+induces+a+unique+transcriptome+in+monocyte-derived+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">CXC chemokine ligand 4 induces a unique transcriptome in monocyte-derived macrophages.</a> J. Immunol. 184, 4810-4818 (2010).</li>
<li>Martinez, F. O., Gordon, S., Locati, M., Mantovani, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+profiling+of+the+human+monocyte-to-macrophage+differentiation+and+polarization%3A+New+molecules+and+patterns+of+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Transcriptional profiling of the human monocyte-to-macrophage differentiation and polarization: New molecules and patterns of gene expression.</a> J. Immunol. 177, 7303-7311 (2006).</li>
<li>Verreck, F. A. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+il-23-producing+type+1+macrophages+promote+but+il-10-producing+type+2+macrophages+subvert+immunity+to+%28myco%29bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Human il-23-producing type 1 macrophages promote but il-10-producing type 2 macrophages subvert immunity to (myco)bacteria.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 101, 4560-4565 (2004).</li>
<li>Rey-Giraud, F., Hafner, M., Ries, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+generation+of+monocyte-derived+macrophages+under+serum-free+conditions+improves+their+tumor+promoting+functions%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">In vitro generation of monocyte-derived macrophages under serum-free conditions improves their tumor promoting functions.</a> PLoS One. 7, e42656(2012).</li>
<li>Boyle, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+intraplaque+hemorrhage+evokes+a+novel+atheroprotective+macrophage+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Coronary intraplaque hemorrhage evokes a novel atheroprotective macrophage phenotype.</a> American Journal of Pathology. 174, 1097-1108 (2009).</li>
<li>Cho, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+dendritic+cell-like+phenotype+in+macrophages+during+foam+cell+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Genomics%22%5BJournal%5D)">Induction of dendritic cell-like phenotype in macrophages during foam cell formation.</a> Physiol Genomics. 29, 149-160 (2007).</li>
<li>Vogt, G., Nathan, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+differentiation+of+human+macrophages+with+enhanced+antimycobacterial+activity%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">In vitro differentiation of human macrophages with enhanced antimycobacterial activity.</a> The Journal of Clinical Investigation. 121, 3889-3901 (2011).</li>
<li>Mikita, T., Porter, G., Lawn, R. M., Shiffman, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidized+low+density+lipoprotein+exposure+alters+the+transcriptional+response+of+macrophages+to+inflammatory+stimulus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Oxidized low density lipoprotein exposure alters the transcriptional response of macrophages to inflammatory stimulus.</a> Journal of Biological Chemistry. 276, 45729-45739 (2001).</li>
<li>Qin, Z. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+THP-1+cells+as+a+model+for+mimicking+the+function+and+regulation+of+monocytes+and+macrophages+in+the+vasculature%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">The use of THP-1 cells as a model for mimicking the function and regulation of monocytes and macrophages in the vasculature.</a> Atherosclerosis. 221, 2-11 (2012).</li>
<li>Daigneault, M., Preston, J. A., Marriott, H. M., Whyte, M. K. B., Dockrell, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+identification+of+markers+of+macrophage+differentiation+in+pma-stimulated+THP-1+cells+and+monocyte-derived+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The identification of markers of macrophage differentiation in pma-stimulated THP-1 cells and monocyte-derived macrophages.</a> PLoS One. 5, e8668(2010).</li>
<li>Wahl, L. M., Wahl, S. M., Smythies, L. E., Smith, P. D. Isolation of human monocyte populations. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWahl%2C+LM+%22Current+Protocols+in+Immunology%22">Current Protocols in Immunology</a>. , John Wiley & Sons, Inc. (2001).</li>
<li>Waldo, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneity+of+human+macrophages+in+culture+and+in+atherosclerotic+plaques%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Heterogeneity of human macrophages in culture and in atherosclerotic plaques.</a> Am. J. Pathol. 172, 1112-1126 (2008).</li>
<li>Martín-Fuentes, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Individual+variation+of+scavenger+receptor+expression+in+human+macrophages+with+oxidized+low-density+lipoprotein+is+associated+with+a+differential+inflammatory+response%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Individual variation of scavenger receptor expression in human macrophages with oxidized low-density lipoprotein is associated with a differential inflammatory response.</a> The Journal of Immunology. 179, 3242-3248 (2007).</li>
</ol>

Die Autoren haben nicht zu einem Interessenkonflikt offen zu legen.

Monozyten abgeleiteten Makrophagen sind der Schlüssel Zelltyp des angeborenen Immunsystems. Sie spielen eine wichtige Rolle in vielen entzündlichen Erkrankungen einschließlich Arteriosklerose oder Krebs 2. So studieren Makrophagen Biologie ist für die Erhöhung unserer Kenntnisse über die Pathophysiologie vieler Krankheiten wesentliche und für die Entwicklung neuer Therapien zu ermöglichen. Viele Studien gelten von Mausmodellen Überexpression oder fehlen bestimmte Gene von Interess...

Monozyten abgeleiteten Makrophagen eine wichtige zelluläre Komponente der angeborenen Immunsystems und zur viele akute oder chronische entzündliche Prozesse 1. Makrophagen spielen eine wichtige Rolle in vielen entzündlichen Erkrankungen wie Arteriosklerose oder Krebs 2. Makrophagen zeigen einen hohen Grad an Plastizität und sind in der Lage, verschiedene Phänotypen in Abhängigkeit von der lokalen Mikromilieus 3 übernehmen. So studieren Makrophagen Differenzierung und Heterogenität ist für die Erhöhung unserer Kenntnis der Pathophysiologie vieler Krankheiten unerlässlich und Identifizierung neuer therapeutischer Targets und Entwicklung neuartiger Therapien zu ermöglichen. In vielen Fällen sind murine Modelle verwendet werden, um die Pathophysiologie von bestimmten Krankheiten zu untersuchen. Allerdings ist das Studium der Biologie mit Makrophagen Mausmodelle durch mehrere Unzulänglichkeiten begleitet: (1) Der Anteil der Leukozyten Teilmenge Zahlen (dh Monozyten und Granulozyten) in peripHeral Blut von Mäusen oder Menschen unterscheidet sich deutlich darauf hindeutet, verschiedene Rollen von Monozyten in murinen und humanen Pathophysiologie. (2) Es gibt erhebliche Unterschiede in der Genexpression zwischen Maus und Mensch Monozyten im peripheren Blut hindeutet erhebliche Unterschiede in ihrer Funktion während Gesundheit und Krankheit 4. (3) Eine Reihe von Markern, die verwendet werden, um murine Monozyten und Makrophagen (F4/80, LyC, etc.) Identifizieren nicht in menschlichen myeloischen Zellen existieren, so dass die Übertragung von Erkenntnissen in Maus-Modellen der menschlichen Situation ziemlich schwierig werden. So, um unser Verständnis der Makrophagen-Differenzierung und Heterogenität in der menschlichen Krankheit zu erhöhen, müssen wir die Verwendung von Modellen der Arbeit mit humanen Makrophagen zu machen. Daher beschreiben wir hier ein Modell der humanen primären Makrophagen Generation, die einfach zu bedienen ist und ermöglicht Untersuchung der menschlichen Monozyten-Makrophagen in vitro unter verschiedenen Bedingungen, die sich in verschiedenen Makrophagen poPolarisation Typen. In mehreren Studien haben wir die in-vitro-Modell von Monozyten abgeleiteten primären humanen Makrophagen verwendet, um Makrophagen Biologie und ihre mögliche Bedeutung für die menschliche Arteriosklerose 5-7 zu analysieren. Obwohl nicht vollständig ersetzen Experimente mit Tieren oder menschlichen Geweben erhalten post mortem, ermöglicht die hier beschriebene Modell Identifizierung und Validierung von Krankheitsmechanismen und therapeutische Ziele, die von großer Bedeutung für verschiedene menschliche Krankheiten können.

<table><tbody><tr><td>50 ml Zentrifugenröhrchen (steril)</td><td>Fisher</td><td>055398</td><td></td></tr><tr><td>D-PBS (1X), flüssig (kein Calcium oder Magnesium)</td><td>Invitrogen</td><td>14190-250</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma</td><td>T9285</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma</td><td>A-8806</td><td></td></tr><tr><td>FCS</td><td>Invitrogen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>EasySep Humanes Monozyten-Anreicherungskit</td><td>StemCell Technologies</td><td>19059</td><td></td></tr><tr><td>EasySep Magnet</td><td>StemCell Technologies</td><td>18000</td><td></td></tr><tr><td>FACS-Röhrchen</td><td>Fisher</td><td>352008</td><td></td></tr><tr><td>Makrophagen-SFM (1X)</td><td>Invitrogen</td><td>12065-074</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin</td><td>Sigma</td><td>P-4458</td><td></td></tr><tr><td>Nutridoma-SP</td><td>Roche</td><td>11011375001</td><td></td></tr><tr><td>humanes M-CSF 10 &mu; g</td><td>Peprotech</td><td>300-25</td><td></td></tr><tr><td>Zellkulturplatten 6 Wells</td><td>Fisher</td><td>07-200-80</td><td></td></tr></tbody></table>

ein<em&gt; in-vitro-</em&gt; modell zur heterogenität des menschlichen makrophagen differenzierung und polarisierung studieren

An In vitro Model to Study Heterogeneity of Human Macrophage Differentiation and Polarization

Monozyten abgeleiteten Makrophagen eine wichtige Zelltyp des angeborenen Immunsystems. Mausmodelle Studium Makrophagen Biologie leiden unter den phänotypische und funktionelle Unterschiede zwischen Maus und Mensch Monozyten-Makrophagen. Daher beschreiben wir hier ein in vitro-Modell zu erzeugen und zu studieren primären humanen Makrophagen. Kurz nach Dichtegradientenzentrifugation von peripheren Blut von einem Unterarm Vene gezogen werden Monozyten aus peripheren mononukleären Zellen mit negativen magnetischen Kügelchen Isolierung isoliert. Diese Monozyten werden dann sechs Tage lang unter speziellen Bedingungen kultiviert werden, um verschiedene Arten von Makrophagen-Differenzierung oder Polarisation zu induzieren. Das Modell ist einfach zu bedienen und umgeht die Probleme von artspezifischen Unterschiede zwischen Maus und Mensch verursacht. Weiterhin ist es näher an der in vivo-Bedingungen als die Verwendung von immortalisierten Zelllinien. Zusammenfassend ist die hier beschriebene Modell geeignet, um zu studieren macrophage Biologie, identifizieren Krankheitsmechanismen und neue therapeutische Targets. Obwohl nicht vollständig ersetzen Experimente mit Tieren oder menschlichen Geweben erhalten post mortem, ermöglicht die hier beschriebene Modell Identifizierung und Validierung von Krankheitsmechanismen und therapeutische Ziele, die von großer Bedeutung für verschiedene menschliche Krankheiten können.

Mit dem oben beschriebenen Protokoll, wir routinemäßig erhalten 25,1 x 10 6 ± 2,2 x 10 6 ml Blut monocytes/100 (Mittelwert ± Standardabweichung aus 26 unabhängigen Experimenten, 1A). Monozyten Reinheit durch durchflusszytometrische Färbung für CD14 bestimmt wird routinemäßig von mehr als 95% (97,1 ± 0,4%, mittlere ± Standardabweichung von 3 unabhängigen Experimenten, 1B). Die Lebensfähigkeit der Zellen von frisch isolierten Monozyten durch Trypanblau-Färbung bestim...

Monozyten abgeleiteten Makrophagen sind wichtige Zellen des angeborenen Immunsystems. Hier beschreiben wir eine einfach zu bedienende<em&gt; In vitro</em&gt; Modell, um diese Zellen zu erzeugen. Mit Zentrifugation, negativen Wulst Isolierung und bestimmten Zellkulturbedingungen kann Monozyten abgeleiteten Makrophagen für phänotypischen und funktionellen Studien erzeugt werden.

Ein<em&gt; In-vitro-</em&gt; Modell zur Heterogenität des menschlichen Makrophagen Differenzierung und Polarisierung Studieren

Monocyte-derived macrophages represent an important cell type of the innate immune system. Mouse models studying macrophage biology suffer from the ...

Das übergeordnete Ziel des folgenden Experiments ist es, Monozyten aus humanem peripherem Blut zu isolieren und sie in verschiedene Makrophagen-Polarisationstypen zu differenzieren. Dies wird erreicht, indem zunächst mononukleäre Zellen des menschlichen peripheren Blutes durch Dichtegradientenzentrifugation isoliert werden. In einem zweiten Schritt wird die Isolierung negativer Kügelchen durchgeführt, um reine CD 14-positive Monozyten zu erhalten.Anschließend werden Monozyten unter bestimmten Bedingungen kultiviert, um spezifisch polarisierte Makrophagen zu induzieren. Letztendlich kann die differentielle Expression von Makrophagen-Polarisationsmarkern als Reaktion auf ihre Kulturbedingungen durch quantitative PCR bestimmt werden. Diese Methode kann helfen, die Differenzierung von Makrophagen in verschiedene Polarisationstypen zu entschlüsseln.Eine Eigenschaft, die bei entzündlichen Erkrankungen wie Arteriosklerose äußerst wichtig ist. Nachdem Sie einem Freiwilligen 30 Milliliter Vollblut aus der Unterarmvene entnommen haben, teilen Sie das Blut gleichmäßig in zwei konische 50-Milliliter-Röhrchen ohne Polystyrol auf. Verdünnen Sie dann das Blut in jedem Röhrchen mit 10 Millilitern

an-vitro-model-to-study-heterogeneity-human-macrophage

Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Dieses Video zeigt das Priming von primären Monozyten in Makrophagen. Primäre humane Monozyten können isoliert und unter Verwendung des Granulozyten-Makrophagen-Kolonie-stimulierenden Faktors (GM-CSF) zu einem M1-ähnlichen proinflammatorischen Phänotyp oder unter Verwendung des Makrophagen-Kolonie-stimulierenden Faktors (M-CSF) zu einem M2-ähnlichen entzündungshemmenden Phänotyp differenziert werden.

In vitro Kultur und Differenzierung von primären Monozyten zu Makrophagen

In diesem Video demonstrieren wir ein Verfahren zur Induktion der Differenzierung und Polarisation von Monozyten aus peripherem Blut in M1- oder M2-Makrophagen. Die Inkubation mit Granulozyten-Makrophagen-Kolonie-stimulierendem Faktor, Lipopolysaccharid und Interferon-gamma ergibt proinflammatorische M1-Makrophagen, während die Inkubation mit Makrophagen-Kolonie-stimulierendem Faktor und Interleukin-4 die entzündungshemmende Produktion von M2-Makrophagen induziert.

Differenzierung und Polarisation von Monozyten-abgeleiteten Zellen in Makrophagen-ähnliche Zellen

Der Artikel beschreibt eine leicht einfach...

Untersuchung von Makrophagen-Polarisation mit Knochenmark-Makrophagen

Wir stellen ein einfaches und effizientes Protokoll für die Herstellung von menschlichen Makrophagen. Buffy Coats werden durch Doppel Dichtegradientenzentrifugation isoliert verarbeitet und Monozyten werden dann an Makrophagen in Teflon-beschichtete Zellkulturbeutel differenziert. Dies maximiert Makrophagen-Renditen und erleichtert die Zellernte für nachfolgende Experimente.

Isolierung humaner Monozyten durch Doppel-Zentrifugation und ihre Differenzierung zu Makrophagen in Teflon-beschichteten Zellkultur-Taschen

Hier wird ein Protokoll zum Nachweis der Produktion extrazellulärer Makrophagen (MET) in der Lebendzellkultur mittels Mikroskopie und Fluoreszenzfärbung vorgestellt. Dieses Protokoll kann weiter erweitert werden, um spezifische MET-Proteinmarker durch Immunfluoreszenzfärbung zu untersuchen.

In Vitro Stimulation und Visualisierung der extrazellulären Trap-Freisetzung in differenzierten menschlichen Monozyten-abgeleiteten Makrophagen

Dieses Protokoll beschreibt die robuste Erzeugung von Makrophagen aus humaninduzierten pluripotenten Stammzellen und Methoden für deren anschließende Charakterisierung. Zelloberflächenmarkerexpression, Genexpression und funktionelle Assays werden verwendet, um den Phänotyp und die Funktion dieser iPSC-abgeleiteten Makrophagen zu bewerten.

Produktion und Charakterisierung menschlicher Makrophagen aus pluripotenten Stammzellen

Dieses Protokoll bietet eine Methode zur Untersuchung der Mycobacterium tuberculosis-Infektion bei menschlichen M1- oder M2-polarisierten Makrophagen auf der Grundlage der Differenzierung von peripheren Blutmonozyten zu Makrophagen-ähnlichen Zellen, die mit dem GFP-markierten virulenten Stamm H37Rv infiziert und mit Durchflusszytometrie mit einem 10-Farben-Panel einschließlich der Expression ausgewählter M1/M2-Marker analysiert werden.

Polarisation von M1 und M2 Human Monocyte-Derived Cells und Analyse mit Durchflusszytometrie bei Mycobacterium tuberculosis Infection

M2-ähnliche tumorassoziierte Makrophagen (TAM) sind mit Tumorprogression und schlechter Prognose bei Krebs assoziiert. Dieses Protokoll dient als detaillierte Anleitung, um THP-1-Monozyten-ähnliche Zellen innerhalb von 14 Tagen reproduzierbar in M2-ähnliche Makrophagen zu differenzieren und zu polarisieren. Dieses Modell ist die Grundlage, um die entzündungshemmende Wirkung von TAM in der Tumormikroumgebung zu untersuchen.

Makrophagendifferenzierung und Polarisation in einen M2-ähnlichen Phänotyp unter Verwendung einer humanen Monozyten-ähnlichen THP-1-Leukämie-Zelllinie

Hier stellen wir ein detailliertes Protokoll zur Bewertung des immunmodulatorischen Potenzials von Implantatoberflächen in vitro vor, um die Zuverlässigkeit und Reproduzierbarkeit aktueller Protokolle zu verbessern und die weitere Forschung zu fördern. Sekretorische Zytokinprofile, mRNA-Expression und Zelloberflächenmarker wurden mit Hilfe von Blutmonozyten-abgeleiteten Makrophagen überwacht, um die Makrophagenpolarisation auf Titan zu untersuchen.

Polarisation und Charakterisierung von M1- und M2-humanen Monozyten-abgeleiteten Makrophagen auf Implantatoberflächen 

Monozyten und Makrophagen sind sehr plastische und reprogrammierbare Immunzellen, die für Gesundheit und Krankheit entscheidend sind. Sie spüren und reagieren auf ein breites Spektrum von Reizen, indem sie spezifische Differenzierungsprogramme und Phänotypen übernehmen. Wir haben ein In-vitro-Modell standardisiert, um die Polarisation und Reprogrammierung von Makrophagen zu untersuchen, was ein wertvolles Werkzeug für die Forschung darstellt.

Reprogrammierungsmodell von humanen Monozyten-abgeleiteten Makrophagen für In-vitro-Assays

Lernen Sie die Isolierung und Differenzierung humaner Monozyten zu polarisierten Makrophagen mittels Dichtegradientenzentrifugation und negativer Magnetabtrennung. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Makrophagenheterogenität und inflammatorischen Erkrankungen.

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