Trennung Plasmodium falciparum Late Stage-infizierten Erythrozyten durch magnetische Mittel

Plasmodium Falciparum ist ein menschlicher Parasit, der ausschließlich in den roten Blutkörperchen lebt. Während des Wachstumsprozesses verwendet es die Moleküle in den Erythrozyten, um sich von ihnen zu ernähren, und da die Eisenmoleküle im Hämoglobin für den Parasiten giftig wären, nimmt es sie und legt sie in einen inerten Kristall namens Hämin. Dieser Hämokristall verleiht den Parasiten einen gewissen Param-Magnetismus.

Es ist diese paramagnetische Eigenschaft, die genutzt wird, um infizierte Erythrozyten von denen zu trennen, die keinen Parasiten in sich tragen. Mit Hilfe eines Magneten kann eine Kultur, die einen sehr geringen Anteil an Parasiten aufweist, konzentriert werden, um fast hundertprozentige Paras zu erreichen. Diese Trennung von infizierten und nicht infizierten roten Blutkörperchen ist in einer Reihe von Experimenten sehr wünschenswert, bei denen ein bestimmtes Merkmal des Parasiten ohne die Störfaktoren überschüssiger Erythrozyten untersucht werden muss.

Die hier gezeigte Methodik ist schnell, unkompliziert und für den Parasiten ungefährlich. Heute werden wir das Verfahren der Trennung von Plasmodium falciparum im Chizenstadium beschreiben. Dieses Mehrkomponenten-Equipment muss für jeden Chant zusammengebaut werden. Isolation.

Setzen Sie zuerst den Säulenhalter auf den Metallständer, dann wird die Magnetsäule auf den Sethalter gelegt. Für unser Verfahren verwenden wir Ls, Spalten aus Milian. Als nächstes verwenden wir ein 50-ml-Röhrchen, um 23,2 ml RPMI 1640 und 750 Mikroliter einer 7,5%igen Natriumkarbonatlösung hinzuzufügen, die die Arbeitslösung sein soll, damit dieser Prozess erfolgreich ist, ist es notwendig, die Säule zu kalibrieren Bevor wir beginnen.

Fügen Sie dazu drei ml der Arbeitslösung hinzu und diese fließt in den mit dem Abfall beschrifteten 50-ml-Röhrchen. Geben Sie dann acht ml der Plasmodium FCI-Brennkultur in die Säule. Dabei wird darauf geachtet, dass, sobald der letzte Teil der Arbeitslösung durch die Kultur aus der Säule gedrückt wurde, das Röhrchen gegen das andere darunter liegende 50 ml Röhrchen ausgetauscht wird.

Um mit dem Sammeln der Kultur zu beginnen. Sobald der Fluss der Kultur durch die Säule aufgehört hat, geben Sie einen ml der Arbeitslösung in die Säule, um die verbleibenden nicht gebundenen roten Blutkörperchen herauszudrücken. Geben Sie aus dem nächsten drei ml der Arbeitslösung in die Säule und wechseln Sie zum Verwerfungsröhrchen, um die Proportionen der Kultur nicht zu verändern.

Sobald die drei mls durch die Säule gegangen sind, lösen Sie sie vom Ständer und setzen Sie ein beliebiges 15-ml-Röhrchen ein. Fügen Sie als Nächstes drei mls der Arbeitslösung hinzu. Dadurch werden die Chizen eluiert, die in den Perlen der Säule eingeschlossen sind.

Abhängig von dem Experiment, das durchgeführt wird, können wir so viele Parasiten sammeln, wie wir benötigen. Wenn unsere Kultur eine hohe Semia hat, können wir die Menge an Gesang erhalten, die in der ersten Sammlung benötigt wird. Wenn nicht, können wir unsere Kultur öfter durch die Säule leiten und mehr Parasiten sammeln, da die Bindungskapazität der Säule wahrscheinlich geringer ist als unser Shant-Gehalt.

Danach zentrifugieren wir das 15 ml Röhrchen fünf Minuten lang bei 150 Zentrifugalkräften. Nach der Zentrifugation können wir sehen, dass sich das Pellet am Boden des Rohrs bildet. Dann entfernen wir die SUP-natürliche Arbeitslösung, so dass genug übrig bleibt, um unsere Ausbeute durch Mikroskopie bestimmen zu können.

Wir können dann entscheiden, ob wir die Sammlung wiederholen oder an dieser Stelle stoppen, und wenn ja, mehr Chizen in derselben 15-ml-Tube sammeln. Dieses Verfahren kann für Invasionsaufsätze, die Synchronisierung der Parasiten und Wachstumsaufsätze angewendet werden.