Name: Photothrombotic Ischämie: eine minimal-invasive und reproduzierbare photochemische kortikale Läsion Modell für Mouse Stroke Studies (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-06-09T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 40 s
Description: Erfahren Sie die photothrombotische Ischämie für Schlaganfallforschung bei Mäusen. Diese minimal-invasive Methode mit Rose Bengal ermöglicht reproduzierbare kortikale Läsionen zur Untersuchung zellulärer und molekularer Mechanismen der Hirnverletzung.

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Wir danken Annalisa Buffo für aufschlussreiche Anregungen und Kommentare, und Maurizio Grassano, Marina Boido und Ermira Pajaj für die Dreharbeiten. Diese Arbeit wurde von FP7-MC-214003-2 (Marie Curie Initial Training Network AXREGEN) und der Compagnia di San Paolo, gliarep Projekt finanziert.

1. Pre-Chirurgie <ol><li> Wiegen Rose Bengal in einer 1,5-ml-Röhrchen und lösen sich in steriler Kochsalzlösung bis zum Erreichen einer Endkonzentration von 15 mg / ml. Man filtriert durch ein 0,2 um Filter zu sterilisieren und speichern sie in der Dunkelheit bei Raumtemperatur bis zu zwei Monate. </li><li> Sterilisieren alle chirurgischen Instrumente durch Autoklavieren. Der OP-Bereich sollte weniger als eine Stunde vor dem Start der Operation sterilisiert werden. </li><li> Notieren Sie die Maus Körpergewicht, die Dosis von Rose Bengal injiziert werden anzupassen. Wir injizierten 10 ul / g Gewicht des Tieres in der weiblichen CD1-Mäusen 12 Wochen alt in der vorliegenden Protokoll. Die Höhe der Rose Bengal benötigt um die gewünschte kortikalen Läsion Größe leicht in einer separaten Reihe von Vorversuchen werden durch das Testen verschiedener Dosierungen (in der Regel 2 ul / g, 5 ul / g oder 10 ul / g Körpergewicht) bestimmt. Beachten Sie, dass die Menge von Rose Bengal injiziert werden stark von den experimentellen Bedingungen ist, insbesondere der Art der Lichtquellesowie die Dauer der Belichtung. In der vorliegenden Studie wurden 10 ul / g (150 g / g) Dosis erwies sich als notwendig, Photothrombose bei Einwirkung von Licht für 15 Minuten zu induzieren, während andere Gruppen berichtet, dass entweder 50 ug / g 6,8 und 100 ug / g 10 intraperitoneale Injektion war ausreichend zur Induktion einer photothrombotic Läsion. </li></ol> 2. Anästhesie Vorgehen <ol><li> Anesthetize Mäuse mit Isofluran in einem transparenten Ansaugkammer (3,5-4% für die Induktion, 1.5-2% zur Aufrechterhaltung) in 50% (v / v) oxygen/50% (v / v) Distickstoffmonoxid Gasgemisch. Gasförmige Anästhesie ermöglicht eine schnelle Aufwachen der Tiere und das Niveau der Narkosegas kann leicht angepasst werden. Alternativ können Mäuse auch betäubt werden durch eine Ketamin-Xylazin Mischung. </li><li> Wenn tiefe Narkose erreicht ist, entfernen Sie den narkotisierten Tier aus der Induktion Kammer, legen Sie es in den stereotaktischen Rahmen und Aufrechterhaltung einer Narkose mit einer Gesichtsmaske. Stellen Sie die isoflurane Dosis eine ausreichende Anästhesie Niveau zu erreichen. Überwachen Sie die Atemfrequenz während des gesamten Verfahrens und stellen Sie sicher, es ist konstant (40 - 60 Atemzüge pro Minute). </li><li> Verwenden Zeh drückt, um sicherzustellen, das Tier tief narkotisiert. </li><li> Bewerben Augensalbe, um die Augen vor dem Austrocknen zu verhindern. </li><li> Schieben Sie die rektale Sonde, um die Temperatur in den chirurgischen Verfahren zu überwachen. Stellen Sie die zugehörigen rückkopplungsgesteuerten Heizkissen für die Aufrechterhaltung der Maus Körpertemperatur bei 37 ± 0,5 ° C. </li></ol> 3. Chirurgie für die Illumination der Zielfläche <ol><li> Rasur der Maus Kopfhaut mit einem elektrischen Rasierer. </li><li> Fest sichern den Kopf und legen Sie die Ohr Bars in äusseren Gehörgang. Seien Sie vorsichtig, nicht zu beschädigen Trommelfelle. </li><li> Desinfizieren Sie die Haut auf der Oberfläche mit wechselnden Seitenhiebe von 70% Ethanol und betadine mit Wattestäbchen. </li><li> Mit einem Skalpell einen Schnitt entlang der Mittellinie machen aus dem Auge leVel bis in den Nacken. Wenden Sie Haut Aufrolleinrichtungen zu halten, der Schädel freigelegt. </li><li> Vorsichtig einfahren Periost zu den Rändern des Schädels mit einem Skalpell und lassen den Schädel Oberfläche trocknen mit sterilen Wattestäbchen. Identifizieren Sie die Bregma und Lambda. Legen Sie eine Glasmikropipette am Bregma als Bezugspunkt, dann verschieben Sie sie in den Koordinaten der Region von Interesse. Die Region von Interesse für diesen Artikel ausgewählt ist etwa rundweg geformt, zentriert etwa 2 mm lateral der Bregma und bedeckt eine Fläche von etwa 30 mm 2, die einen großen Teil des sensomotorischen Kortex umfasst nach der Maus Gehirn Atlas von Franklin und Paxinos 11. </li><li> Markieren Sie die Position von Interesse mit Bezugspunkten und legte einen Lichtwellenleiter in engem Kontakt mit dem Schädel Oberfläche der Lichtstreuung zu vermeiden, aber achten Sie nicht, um Druck auf sie auszuüben. Der beleuchtete Bereich durch Aufbringen auf den Schädel einer Maske mit kleinen Öffnung oder eine Kappe an der Spitze der optischen Faser GUI eingeschränktde. </li></ol> 4. Rose Bengal Injection und Aktivierung <ol><li> Laden der Rose Bengal Lösung in einer 1 ml Spritze und berechnen die nach einer Dosis von 10 ul / g Körpergewicht injiziert werden. </li><li> Gehen Sie zu einem langsamen intraperitoneale Injektion. </li><li> Lassen Sie den Farbstoff diffus und in die Blutbahn eindringen. Nach 5 min auf dem Kaltlichtbeleuchtung wechseln. Vermeiden Beleuchtung des Tieres durch eine andere Lichtquelle. Wir verwendeten Glasfaser-Beleuchtung von 150 W Intensität. </li><li> Nach 15 min der Beleuchtung, Bremslicht Belichtung und vernähen die Wunde. Fünf Minuten Beleuchtung produzieren bereits Infarkt und 10 min dürfte ausreichen, um eine maximale Wirkung zu erhalten 12. Um die Variabilität zu minimieren, wählen wir für 15 min zu beleuchten. </li></ol> 5. Naht <ol><li> Entfernen Sie die Haut Gurtstraffer und gelten steriler Kochsalzlösung, um eine Dehydratation zu vermeiden. </li><li> Schließen Sie die Wunde mit Reverse Schneiden needle und Seide oder Nylon Faden. </li><li> Unterbrechen Anästhesie, entfernen Sie vorsichtig mit der Maus aus dem stereotaktischen Apparat und legte es auf einen vorgewärmten Heizkissen, bis es vollständig wach ist, dann wieder in seinen Käfig. Die Körpertemperatur sollte sorgfältig im Laufe der Verfahren überwacht werden, um die Variabilität in der Infarkt-Erweiterung zu begrenzen. Nach der Konzentration und der Art der Verabreichung, Rose Bengal immer noch in den Blutstrom über mehrere Stunden nach der Injektion 13 detektiert werden. Ziehe die Heizdecke an Wärmelampe potenziellen Folgeschäden (Rose Bengal Absorption Wellenlänge im grünen Spektrum) zu vermeiden. </li></ol>

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</ol>

Keine Interessenskonflikte erklärt.

Modifikationen und Substitutionen Wegen seiner Absorptions-Peak bei 562 nm, wurde ein grünes Licht Laser aus einer gefilterten Xenonbogenlampe ursprünglich gewählt, um die lichtempfindliche Rose Bengal bestrahlen. Obwohl Laser-vermittelte Erregung wurde noch recently5 verwendet, kann es durch Kaltlichtlampe ersetzt werden, auch dafür sorgen, Farbstoffanregung 10,15. Kaltlicht optischen Fasern sind leichter zu manipulieren und weniger teuer als Laserquellen. Es sollte jedoch bemerkt, ...

Zu Beginn des 21. Jahrhunderts, ist ischämischem Schlaganfall eine verheerende Krankheit, die die zweite Ursache für langfristige Behinderung 1 und die zweithäufigste Todesursache weltweit, in denen Schlaganfall etwa 5,7 Millionen Todesfälle im Jahr 2004 entfielen 2 darstellt. Trotz der vielen Anstrengungen, die gesetzt wurden in, gibt es noch keine wirksame Behandlung zur Verfügung funktionelle Erholung nach einem Schlaganfall verbessern. Tiermodelle von Schlaganfall sind weit verbreitet im Bereich der Hub Forschung verwendet, da sie Modellierung der Pathophysiologie des ischämischen Schadens und damit Prüfung der Wirksamkeit verschiedener neuroprotektive Strategien in vivo. Die meisten dieser Modelle sollen umfangreiche Infarkte durch Unterbrechung (vorübergehend oder dauerhaft) den Blutfluss in der Arteria cerebri media, während andere Modelle wurden entwickelt, um Läsionen der geringen Größe in bestimmten Bereichen, in der Regel der Motor und somatosensorischen Kortex studieren zu induzieren. Allerdings können mehrere Faktoren beitragen, ac erzeugenn eingetragen Maß an Variabilität in experimentellem Schlaganfall Studien, einschließlich der Maus-Stamm verwendet, dem Alter und Geschlecht der Tiere in die Studie eingeschlossen und vor allem hat die Technik, um die ischämische Schädigung induzieren. Im Hinblick auf den letztgenannten Punkt, der Dauer und Invasivität der Operation (dh die Notwendigkeit einer Kraniotomie) sowie der chirurgischen Geschick erforderlich, um den Bediener zuverlässig induzieren einen ischämischen Läsion sind kritische Faktoren für eine erfolgreiche und unvoreingenommene in vivo Studie Schlaganfall . Das Konzept wurde ursprünglich von Photothrombose Rosenblum und El-Sabban 1977 3 vorgeschlagen und wurde berühmt durch ihre Anwendung im Rattenhirn von Watson et al 1985 4, in dem die Technik wurde weitgehend verbessert und stellen die Basis des aktuellen Modells 3. - 6. Die photothrombotic Ansatz zielt auf eine kortikale Infarkt durch die Foto-Aktivierung eines lichtempfindlichen Farbstoff zuvor in Blutsystem, wh geliefert induzierenich ergibt lokalen Gefäß Thrombose in den Bereichen die dem Licht ausgesetzt. Wenn der zirkulierenden Farbstoff bei der geeigneten Wellenlänge wird von einer Kaltlichtquelle beleuchtet, gibt es Energie, um Sauerstoff-Moleküle, die wiederum erzeugen eine große Menge von hochreaktiven Singulettsauerstoff Produkte. Diese Sauerstoff-Zwischenstufen induzieren Endothelzellmembran Peroxidation führt zu Blutplättchen-Adhäsion und-Aggregation und schließlich zur Bildung von Thromben lokalen zerebralen Flussunterbrechung 7 zu bestimmen. Photothrombose ist ein nicht-kanonischen ischämischen Modell, das nicht verstopfen nicht oder brechen nur eine Arterie, wie es geschieht in der Regel in der menschlichen Schlaganfall, sondern induziert Läsionen in mehr oberflächlichen Gefäße, die in selektive Unterbrechung des Blutflusses in den Bereichen Licht ausgesetzt ergibt. Aus diesem Grund kann dieser Ansatz für Zell-und molekularbiologische Untersuchungen der kortikalen Plastizität. Der Hauptvorteil dieses Verfahrens liegt in seiner Einfachheit der Ausführung.1 min, um die Kopfhaut rasieren;; 3-5 min, um das Tier auf der stereotaktischen Gerät zu platzieren; Darüber hinaus können Photothrombose leicht in ca. 40 Minuten pro Tier, einschließlich zwanzig Minuten Wartezeit (3 min für Anästhesie durchgeführt werden 2 min auf die schrubben Kopfhaut mit einer antiseptischen Lösung, einen Einschnitt machen und reinigen Sie den Schädel; 2 bis 4 min, um die kalte Licht Faser platzieren; 1 min bis die Rose Bengal Lösung zu injizieren; 5 Minuten Wartezeit für die intraperitoneale Diffusion; 15 min von Beleuchtung und 5 min auf Reinigen Sie die Wunde und Naht das Tier). Darüber hinaus ist keine chirurgische Know-how benötigt, um diese Technik durchzuführen, wie die Läsion durch einfache Beleuchtung des intakten Schädel induziert wird. Im Gegensatz zu klassischen Arterienverschluss Diese Methode ermittelt selektive Verschlüsse Pia und intraparenchymal microvessels innerhalb der bestrahlten Zone und verringert die Variabilität unter Läsionen keine Sicherheiten Behälter gelassen wird Sauerstoff in dem Zielgebiet zu liefern. Trotz seiner besonderen Art, derphotothrombotic Schäden Aktien wesentlichen Mechanismen auftretenden Hirnschlag. Ähnlich wie in der menschlichen Arteria Schlaganfall bestimmen Thrombozytenaggregation und Gerinnselbildung Unterbrechung des Blutflusses in der bestrahlten Fläche 7. Ebenso auch dieses Modell teilt wesentliche Entzündungsreaktionen wie in Mitte Zerebralarterie 8. Da jedoch der gut abgegrenzt Grenzen ist die Penumbra-Zone, die zu einem Bereich des teilweise erhaltenen Stoffwechsel entspricht, sehr reduzierten oder existiert nach einem photothrombotic Läsion. Diese klare Grenze kann die Untersuchung von zellulären Reaktionen innerhalb ischämischen oder intakten kortikalen Bereich zu erleichtern. Photothrombose Mausmodell eignet sich besonders für Untersuchungen Hub in eine Vielzahl von transgenen Tieren. Tatsächlich klassischen Modelle können nicht an allen Stämmen und längere Studien in C57BL / 6 Maus-Stamm berichtet eine hohe Sterblichkeit Verhältnis, das Bias 9 führen kann passen.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Lösungen und Chemikalien</td></tr><tr><td>Rose Bengal </td><td>Sigma, Italien</td><td>330000</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran Vet </td><td>Merial</td><td>103120022</td><td></td></tr><tr><td>Betadine </td><td>Asta Medica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyd </td><td>Sigma-Aldrich</td><td>158127</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Chirurgisches Material und Ausrüstung</td></tr><tr><td>Fluosorber Filter </td><td>Havard Apparat</td><td>340415</td><td></td></tr><tr><td>150W faseroptische Beleuchtung</td><td>Photonic</td><td>PL3000</td><td></td></tr><tr><td>Temperaturregler für Platte TCAT-2DF </td><td>Havard Apparat</td><td>727561</td><td></td></tr><tr><td>Stereotaktisches Instrument </td><td>Stoelting</td><td>51950</td><td></td></tr><tr><td>Operationsmikroskop </td><td>Takagi</td><td>OM8</td><td></td></tr><tr><td>Heizkissen </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sauerstoff- und Stickstoffgas</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Chirurgie Werkzeuge</td><td>Weltpräzisionsinstrument</td><td></td><td>Lichtwellenleiter und Maske sind Sonderanfertigungen </td></tr></tbody></table>

photothrombotic ischämie: eine minimal-invasive und reproduzierbare photochemische kortikale läsion modell für mouse stroke studies

Photothrombotic Ischemia: A Minimally Invasive and Reproducible Photochemical Cortical Lesion Model for Mouse Stroke Studies

Die photothrombotic Hubmodell zielt auf eine ischämische Schädigung innerhalb einer bestimmten kortikalen Bereich mittels Foto-Aktivierung eines zuvor injizierten lichtempfindlichen Farbstoff induzieren. Nach der Belichtung wird der Farbstoff aktiviert und Singulett-Sauerstoff, die Schäden Komponenten Endothelzellen Membranen mit anschließender Thrombozytenaggregation und Thrombenbildung, die schließlich bestimmt, die Unterbrechung der lokalen Durchblutung. Dieser Ansatz, der ursprünglich von Rosenblum und El-Sabban 1977 vorgeschlagen, wurde später von Watson im Jahr 1985 verbesserte sich im Rattenhirn und stellen die Grundlage für das aktuelle Modell. Auch die zunehmende Verfügbarkeit von transgenen Mauslinien weiter dazu beigetragen, das Interesse an der Photothrombose Modell zu erhöhen. Kurz gesagt, wird eine lichtempfindliche Farbstoff (Rose Bengal) intraperitoneal injiziert und gelangt in den Blutkreislauf. Wenn von einer Kaltlichtquelle beleuchtet wird, wird der Farbstoff aktiviert und induziert Endothelschädigung mit Thrombozytenaktivierung und Thrombose, was zu lokalenBlutfluss Unterbrechung. Die Lichtquelle kann auf dem intakten Schädel ohne Notwendigkeit der Kraniotomie, die ein Targeting jeder kortikalen Bereich von Interesse in einer reproduzierbaren und nicht-invasive Art und Weise angewendet werden können. Die Maus wird dann vernäht und erlaubt aufzuwachen. Die Auswertung der ischämischen Schädigung schnell von Triphenyl-Tetrazoliumchlorid oder Kresylviolett Färbung durchgeführt werden. Diese Technik erzeugt Infarkt der geringen Größe und gut abgegrenzt Grenzen, was sehr vorteilhaft für die präzise Charakterisierung Zelle oder funktionelle Studien ist. Weiterhin ist es besonders geeignet für die Untersuchung zellulären und molekularen Reaktionen zugrunde Plastizität des Gehirns in transgenen Mäusen.

Dieses Protokoll wird einen kortikalen Läsionen, die bereits sichtbar auf Dissektion der Rinde mit dem bloßen Auge (1A bis 1C). Die photothrombotic Läsion entwickelt in oberflächlichen und tiefen kortikalen Schichten, in denen das Gewebe ausreichend durchscheinend ist, um das Foto-Aktivierung des Rose Bengal zu ermöglichen. Messung des Ausmaßes der Hirninfarkt schnell durch histologische Färbung durchgeführt werden mit Triphenyl-Tetrazoliumchlorid (TTC) auf einem Gewebe oder Kresylviolett nach Fixierung...

Photothrombose ist eine schnelle, minimal-invasive Technik zur Induktion von kleinen und gut abgegrenzt Infarkt in Bereiche von Interesse in sehr reproduzierbar. Es ist besonders geeignet für die Untersuchung zellulären und molekularen Reaktionen zugrunde Plastizität des Gehirns in transgenen Mäusen.

Photothrombotic Ischämie: eine minimal-invasive und reproduzierbare photochemische kortikale Läsion Modell für Mouse Stroke Studies

The photothrombotic stroke model aims to induce an ischemic damage within a given cortical area by means of photo-activation of a previously injected ...

Das allgemeine Ziel dieses Verfahrens besteht darin, durch photochemische Aktivierung eines zuvor injizierten lichtempfindlichen Farbstoffs eine vaskuläre Thrombose und ischämische Schädigung in einem bestimmten kortikalen Areal hervorzurufen. Dies wird erreicht, indem zunächst ein Schnitt in die Haut gemacht wird, um den Schädel freizulegen. Danach wird ein lichtempfindlicher Farbstoff, Rose Bengal, intraperitoneal injiziert.Fünf Minuten später wird die Zielregion der Großhirnrinde 15 Minuten lang einer kalten Lichtquelle ausgesetzt. Rose Bengal zirkulierte in die Blutgefäße. Bei Beleuchtung wird Rose Bengal aktiviert und erzeugt singulettes Sauerstoff. Die Schädigung betrifft Bestandteile der Endothelzellenmembranen, die ihrerseits Thromben auf der gesamten belichteten Oberfläche bilden und so zu einer lokalen Unterbrechung des RA-Blutflusses führen. Am Ende des Verfahrens wird die Haut genäht, um die Öffnung zu schließen. Die Identifizierung ischämischer Bereiche kann schneller durch TTC- oder C-Kristall-Färbung erfolgen.Hallo, ich bin v Abes. Hallo, mein Name ist Mon Maze. Die photothrombotische Methode ist eine schnelle und nichtinvasive Technik zur Erzeugung reproduzierbarer kortikaler ischämischer Läsionen bei Mäusen.Es eignet sich für eine Reihe experimenteller Schlaganfallstudien, insbesondere zur Untersuchung kortikaler Plastizität als Reaktion auf Hirnverletzungen auf zellulärer und molekularer Ebene. Cheming-Modi werden üblicherweise an Ratten durchgeführt, die leichter zu handhaben sind als Mäuse. Mäuse sind jedoch kostengünstiger, und eine große Anzahl kongener Stämme steht zur Verfügung.Die Modelle, die wir verwenden, sind technisch einfach durchzuführen. Nun werden wir Ihnen zeigen, wie man ein Romble Deion induziert. Bei Mäusen lösen wir Rose Bengal in einem OV-Röhrchen in steriler Zelllösung auf, bis eine Endkonzentration von 15 Milligramm pro Milliliter erreicht ist. Lagern Sie es dunkel bei Raumtemperatur bis zu zwei Monate lang und notieren Sie das Körpergewicht der Maus.Die Dosis von Rose Bengal, die wir verwenden werden, beträgt 10 Mikroliter pro Gramm Körpergewicht. Für die Photothrombose benötigen Sie eine stereotaktische Vorrichtung und eine Kaltlichtquelle. Wir empfehlen außerdem, die Körpertemperatur des Tieres während der Operation mit einem rektalen Thermometer in Kombination mit einer Heizplatte zu überwachen.Für die chirurgische Vorbereitung benötigen Sie eine Pinzette, ein Skalpell, einige Hautretraktoren, eine Schere, ein CI-Kit, Betadine-Ethanol und Wattestäbchen zur Desinfektion sowie eine Heizdecke für die chirurgische Rekonvaleszenz. Desinfizieren Sie den Operationsbereich, falls während der Operation die Sterilität verloren geht, stoppen Sie sofort das Verfahren und beginnen Sie erneut, um das Infektionsrisiko zu vermeiden. Anästhesieren Sie die Mäuse mit in einem Gemisch aus 50 % Sauerstoff und 50 % Stickstoffmonoxid verdampftem Isofluran und stellen Sie die Maus in eine Induktionskammer, in der Isofluran mit einer Anfangsdosis von 3,5 % zugeführt wird. Wenn die tiefe Anästhesie eingetreten ist, nehmen Sie das Tier aus der Induktionskammer und platzieren Sie es im stereotaktischen Rahmen.Halten Sie die Oph-Florankonzentration während der gesamten Operation bei 2 %. Verwenden Sie Zehenquetschungen, um sicherzustellen, dass das Tier ausreichend sediert ist. Tragen Sie Augensalbe auf, um zu verhindern, dass das Auge des Tieres austrocknet.Führen Sie eine rektale Sonde, die mit einer rückgekoppelten Heizplatte verbunden ist, ein und halten Sie die Körpertemperatur der Maus bei 37 Grad. Formen Sie die Maus und befestigen Sie den Kopf fest am stereotaktischen Gerät, indem Sie die Ohrstifte in die äußeren Gehörgänge einsetzen. Desinfizieren Sie die Haut des Schädels durch abwechselndes Abwischen mit 70 % Ethanol und Betadine, verwenden Sie dazu das Skalpell.Führen Sie einen Schnitt entlang der Mittellinie durch, um den Knochen vollständig freizulegen. Positionieren Sie die Hautretraktoren, um den Schädel freiliegen zu lassen. Lösen Sie das Periost mit dem Skalpell und trocknen Sie die Knochenoberfläche mit sterilen Wattestäbchen ab.Identifizieren Sie das BMA und das Lamm. Platzieren Sie eine Glasmikropipette auf dem Referenzknochen des BMA und bewegen Sie sie zu den Koordinaten Ihres Interessenbereichs. Markieren Sie die Positionen mit vier Referenzpunkten, um die Ausrichtung der optischen Faser mit dem Bereich von Interesse sicherzustellen.Bevor Sie beleuchten, bringen Sie eine Maske mit einer Öffnung auf der Schädeloberfläche an, um den interessierenden Bereich einzuschränken und zu verhindern, dass Licht streut, oder setzen Sie die Kappe direkt auf die Faser Spitze auf, um das Ture zu reduzieren. Positionieren Sie mithilfe der Referenzpunkte eine optische Faser so nah wie möglich an der S-Schädeloberfläche, achten Sie jedoch darauf, keinen Druck darauf auszuüben. Füllen Sie die Rose-Bengal-Lösung in eine Ein-Milliliter-Spritze und berechnen Sie das entsprechend dem Körpergewicht zu injizierende Volumen.Bei einer Dosis von 10 Mikrolitern pro Gramm erfolgt die intraperitoneale Injektion von Rosenrot. Nach fünf Minuten beginnen Sie mit der Beleuchtung mittels Kohlelichtfasern. 15 Minuten später tauschen Sie die Fasern aus und nähen den Applikator zu. Tragen Sie eine sterile Zelllösung auf die Schädeloberfläche auf, um eine Wiederbefeuchtung zu ermöglichen.Entfernen Sie die Hautretraktoren. Nähen Sie die Öffnung mit einer umgekehrten Schneidnadel und Seiden- oder Nylon-Nahtfaden zu. Entfernen Sie vorsichtig die Rektalsonde und die Ohrbügel.Entfernen Sie die Maus aus der stereotaktischen Vorrichtung und legen Sie sie auf eine vorgewärmte Heizdecke, bis sie vollständig wach ist. Danach kehren Sie sie in ihren Käfig zurück. Die Bestimmung des Ausmaßes der zerebralen Infarktion kann durch histologische Färbung mit RIF, Tealiumchlorid oder TTC an frischem Hirngewebe durchgeführt werden, wobei die Färbung rot erscheint.Bei intaktem Gewebe färbt sich infarktiertes Gewebe mittels der Wasserstoff-Reaktion typischerweise blass. Das Fehlen einer Färbung beruht auf dem Mangel an Dehydrogenase-Aktivität und zeigt den Verlust der Zellintegrität in den geschädigten Bereichen an. Alternativ kann der ischämische Schaden durch CR-Violett-Färbung an fixierten Gehirnschnitten sichtbar gemacht werden.Verschiedene Software-Programme können sowohl zur Messung als auch zur dreidimensionalen Rekonstruktion des infarzierten Bereichs verwendet werden, darunter nma J und neuro elucidate. Wir haben Ihnen gezeigt, wie man photothrombotische Läsionen bei Mäusen durchführt, wobei jeder spezifische kortikale Bereich mit hoher Reproduzierbarkeit gezielt behandelt werden kann. Darüber hinaus ist dieses Modell nicht invasiv und einfach durchzuführen, da keine Kollektomie erforderlich ist.Jedoch sollten zunächst eine Reihe vorläufiger Experimente durchgeführt werden, um die minimale Menge der zu injizierenden Diät zu bestimmen, die erforderlich ist, um eine Läsion zu erzeugen, die ausschließlich den Zielbereich betrifft, oder um ein signifikantes Verhaltensdefizit hervorzurufen. Vielen Dank fürs Zuschauen. Bei Fragen kontaktieren Sie uns bitte. Viel Erfolg bei Ihrem Experiment. Auf Wiedersehen.

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Dieses Video zeigt das Verfahren zur Erzeugung eines photothrombotischen Schlaganfalls in einem Mausmodell durch Laserbeleuchtung eines intakten Schädels nach Verabreichung von lichtempfindlichem Farbstoff.

Modellierung eines photothrombotischen Schlaganfalls im Mausmodell: Eine Laserbeleuchtungstechnik durch den Schädel der Maus nach Verabreichung von lichtempfindlichem Farbstoff zur Induktion von Photothrombose

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Modellierung Schlaganfall bei Mäusen: Permanent Koagulation der distalen A. cerebri media

Hier beschreiben wir einen semi-invasiven optischen Mikroskopie-Ansatz zur Induktion eines photothrombotischen Gerinnsels in der somatosensorischen Hirnrinde einer Maus in vivo.  Es werden die technischen Aspekte des bildgebenden Verfahrens von der Induktion eines photothrombotischen Ereignisses über die Anwendung bis hin zur Datenerhebung beschrieben.

Rose Bengal Photothrombosis von konfokalen optischen Imaging<em&gt; In Vivo</em&gt;: Ein Modell des Einzelfahrzeug Stroke

Photothrombose ist ein minimalinvasives und hochgradig reproduzierbares Verfahren zur Induktion einer fokalen Ischämie im Rückenmark und dient als Modell für Rückenmarksverletzungen bei Mäusen.

Photothrombosis induzierte fokale Ischämie als ein Modell der Rückenmarksverletzungen in Mäusen

Wir beschreiben ein Mausmodell für einen Schlaganfall, der durch den Verschluss der mittleren Hirnarterie mit einer silikonbeschichteten Naht induziert wird. Das Protokoll kann angewendet werden, um einen dauerhaften Verschluss oder eine vorübergehende Ischämie mit anschließender Reperfusion zu induzieren.

Die Induktion von ischämischem Schlaganfall und Ischämie-Reperfusion bei Mäusen die Mittel Artery Occlusion Technik und Visualisierung von Infarktbereich verwenden

Traditionelle photothrombotische Schlaganfallmodelle (PTS) induzieren hauptsächlich dichte Thrombozytenaggregate mit einer hohen Resistenz gegen eine lytische Behandlung mit Gewebeplasminogenaktivator (tPA). Hier wird ein modifiziertes murines PTS-Modell durch Co-Injektion von Thrombin und lichtempfindlichem Farbstoff zur Photoaktivierung eingeführt. Das Thrombin-verstärkte PTS-Modell erzeugt gemischte Thrombozyten-Fibrin-Gerinnsel und ist hochempfindlich gegenüber tPA-Thrombolyse.

Ein mit Fibrin angereichertes und tPA-sensitives photothrombotisches Schlaganfallmodell

Hier wird das photothrombotische Schlaganfallmodell beschrieben, bei dem ein Schlaganfall durch den intakten Schädel erzeugt wird, indem eine permanente mikrovaskuläre Okklusion mittels Laserbeleuchtung nach Verabreichung eines lichtempfindlichen Farbstoffs induziert wird.

Modellierung von Schlaganfällen bei Mäusen: Fokale kortikale Läsionen durch Photothrombose

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Gleichzeitige Photothrombose und Faserphotometrie zur Induktion und Überwachung eines ischämischen Schlaganfalls bei Mäusen, die sich verhalten

Dieses Protokoll bietet eine integrierte Methode, die virale Abgabe, Optrodenimplantation, photothrombotische Induktion, gleichzeitige Aufzeichnung der Astrozyten- und neuronalen Aktivität sowie optogenetische Stimulation von Astrozyten umfasst. Diese integrierte Methode zielt darauf ab, eine parallele Untersuchung der Astrozyten-Neuron-Beziehung über die akuten bis chronischen Stadien des ischämischen Schlaganfalls zu ermöglichen.

Eine integrierte Methode zur photothrombotischen Schlaganfallmodellierung und zur in-vivo-Optrodenerfassung neuronaler und astrozytischer Aktivität bei sich wirkenden Mäusen

Erfahren Sie die photothrombotische Ischämie für Schlaganfallforschung bei Mäusen. Diese minimal-invasive Methode mit Rose Bengal ermöglicht reproduzierbare kortikale Läsionen zur Untersuchung zellulärer und molekularer Mechanismen der Hirnverletzung.

Photothrombotic Ischämie: eine minimal-invasive und reproduzierbare photochemische kortikale Läsion Modell für Mouse Stroke Studies (Video) | JoVE Journal

Photothrombotic Ischämie: eine minimal-invasive und reproduzierbare photochemische kortikale Läsion Modell für Mouse Stroke Studies

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