Name: Vorbereitung des Mgm101 Rekombinationsprotein von MBP-based Tagging-Strategie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-06-25T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 40 s
Description: Erfahren Sie die Reinigung des mitochondrialen Rekombinationsproteins Mgm101 aus Hefe mit MBP-Tagging, Kationenaustausch- und Größenausschlusschromatographie. Diese Methode liefert homogene Proteinringe für strukturelle und funktionelle Studien.

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Wir danken Stephan Wilkens für Hilfe in Transmissions-Elektronenmikroskopie. Diese Arbeit wurde von den National Institutes of Health Grants R01AG023731 unterstützt.

Frühere Studien haben gezeigt, dass die ersten 22 aminoterminalen Reste von Mgm101 nach dem Import in Mitochondrien 19 gespalten werden. Zur Expression in Escherichia coli, wird das MGM101 offenen Leserahmen ohne die ersten 22 Codons durch PCR amplifiziert und hinter die männlichen Sequenz, die das Maltose-bindende Protein (MBP) in einer modifizierten Version des Expressionsvektors pMAL-C2E platziert. Dies erzeugt die MBP-Mgm101 Fusion mit einem Linker, der eine Spaltstelle für die Protease PreScission (Abbildung 3). Das Plasmid wird zunächst durch Auswahl E. konstruiert coli Transformanten ohne IPTG und X-Gal blau / weiß-Selektion. Das resultierende Plasmid pMAL-C2E-MGM101 wird dann in den E. eingeführt coli-Stamm BL21-CodonPlus (DE3)-RIL indem Sie Ampicillin und Chloramphenicol-resistenten Kolonien. 1. Expression, Induktion, Cell Lysis und DNase I Behandlung <ol><li> InocUlate frisch Transformanten in 10 ml LB-Medium (1% Bacto Trypton, 0,5% Hefeextrakt, 1% NaCl) mit Glucose (0,2%), Ampicillin (100 ug / ml) und Chloramphenicol (50 ug / ml) ergänzt. Bei 37 ° CO / N unter Schütteln bei 200 rpm inkubiert. </li><li> Impfen die 10 ml Vorkultur in 2 Liter des ergänzten LB-Medium wie oben. Wachsen die Zellen bei 37 ° C unter Schütteln bis OD 600 erreicht 0,5. </li><li> Induzieren der Expression von MBP-Mgm101 Fusionsproteins durch Zugabe von Isopropyl-β-D-1-thiogalactopyranosid (IPTG) in einer Endkonzentration von 0,3 mM. Wachsen die Zellen unter Schütteln bei 30 ° C für 5 Stunden. </li><li> Sammeln der Zellen durch Zentrifugation unter Verwendung eines Beckman JA-10-Rotor (5.500 × g, 4 ° C, 10 min). Nachdem der Überstand verworfen, das Zellpellet in 30 ml Lysepuffer (20 mM Tris-HCl, pH 7,4 und 1 mM EDTA, pH 7,4), der Protease-Inhibitoren (25 uM Leupeptin, 1 uM Pepstatin A und 1 mM PMSF). </li><li> Beschallen Zellsuspension auf Eis für 20sec mit einem Ultraschall-Prozessor (Heat Systems; Modell W-385) bei 50% ED, ermöglichen, sich auf Eis für 30 sec abkühlen und 2x wiederholen. </li><li> 1 ml DNAse 1 stock bei 2 mg / ml. Rock the Zelllysat bei 4 ° C für 2 Stunden. </li><li> Stellen NaCl bis zu einer Endkonzentration von 500 mM. </li><li> Entfernen der Zelltrümmer durch Zentrifugation bei 10.000 × g bei 4 ° C für 30 min. </li></ol> 2. Reinigung mit Amylose-Affinitätschromatographie <ol><li> Äquilibrieren 1,5 ml Amylose-Harz (50% Suspension) in dem Lysepuffer. Fügen Sie das Gleichgewicht Amyloseharz dem Zelllysat. Schaukeln sanft bei 4 ° CO / N. </li><li> Legen Sie das Lysat-Harz-Mischung auf einer Econo-Column Chromatographie-Säule in einem kalten Raum installiert. Lassen Sie die ungebundenen Proteine, um die Spalte durch die Schwerkraft passieren. </li><li> Waschen der Amylose-Harz mit 300 ml Waschpuffer I (20 mM Tris-HCl, pH 7,4, 400 mM NaCl, 1 mM EDTA, pH 7,4 und 0,2 mM PMSF). </li><li> Wiederholen Sie die Wäsche mit 150 ml Waschpuffer II (20 mM Tris-HCl, pH 7,4, 200 mM NaCl, 1 mM EDTA, pH 7,4 und 0,2 mM PMSF). </li><li> 5 ml Elutionspuffer (20 mM Tris-HCl, pH 7,4, 200 mM NaCl, 1 mM EDTA, pH 7,4 und 0,2 mM PMSF, 10 mM Maltose) auf die Säule bei 4 ° C inkubiert für 10 Minuten, Sammeln das Eluat und wiederholen Sie für weitere Male. </li><li> Kombinieren der Eluate, bestimmen die Ausbeute und Reinheit der MBP-Mgm101 durch Laden eines Aliquots des Eluats auf einem SDS-PAGE-Gel von Coomassie-Färbung (Abbildung 4). </li></ol> 3. PreScission Proteasespaltung und Kationenaustausch-Chromatographie <ol><li> In 50 Einheiten PreScission Protease an die MBP-Mgm101 Eluat. Führen die Spaltung bei 4 ° CO / N und lassen es während der Dialyse gegen Dialysepuffer weiter (20 mM Tris-HCl, pH 7,4; 100 mM NaCl; 2 mM DTT, 1 mM EDTA, pH 7,4 und 0,2 mM PMSF) </li><li> Prüfen Sie die Effizienz der Spaltung auf einem SDS-PAGE-Gel (Abbildung 5A). </li><li> Legen Sie das gespaltene MBP-Mgm101 von mehreren injizierenIonen auf einem Bio-Maßstab Mini Macro-Prep Hohe S Patrone zu einem Bio-Rad Biologic DuoFlow FPLC-System verbunden. </li><li> Starten Sie den Kationenaustauscherchromatographie durch Anlegen einer Schritt Salzgradient von 5 mm, 300 mm, 500 mm, 750 mm und 1000 mM NaCl, die durch Mischen von Puffer A (5 mM NaCl erstellt wird; 10 mM Na-Phosphat, pH 7,2; 1 mM PMSF) und Puffer B (1 M NaCl; 10 mM Na-Phosphat, pH 7,2; 1 mM PMSF). Stellen Sie den Durchfluss bei 0,5 ml / min. Sammeln Sie die Mgm101 Fraktion und überprüfen Sie die Reinheit des Proteins auf einem SDS-PAGE-Gel (Abbildung 5B). </li></ol> 4. Size Exclusion Chromatography <ol><li> Kombinieren Sie die Proteinfraktionen aus Kationenaustauscherchromatographie. Dialyse des Proteins in GF Äquilibrierungspuffer (20 mM MOPS, pH 7,0; 150 mM NaCl; 1 mM EDTA, pH 7,4, 5 mM 2-Mercaptoethanol, 0,2 mM PMSF). </li><li> Konzentrieren des Proteins mit VIVASPIN 15R Ultrafiltration Spin-Säule, um die Lautstärke zu ~ 1 ml durch Spinnen bei 3.000 xg bei 4 ° C reduzieren </li><li> Legen Mgm101 ona kalibriert Superose 6 prep Grad Säule, die mit dem Chromatographie-Puffer (20 mM MOPS, pH 7,0; 150 mM NaCl; 5 mM β-Mercaptoethanol, 1 mM EDTA, pH 7,4, 0,2 mM PMSF). </li><li> Starten des Größenausschluss-Chromatographie mit dem Puffer bei einer Flussrate von 0,5 ml / min ausgeführt. </li><li> Sammeln Sie die Fraktionen der gereinigten Mgm101 Gipfeln. Legen Aliquots der Fraktionen auf einem 12% SDS-PAGE zur Überprüfung der Qualität des fertigen Protein. </li><li> Konzentrieren des Proteins mit VIVASPIN 6, dann schnell frieren die Proben in flüssigem N2 und bei -80 ° C </li><li> Verwenden Sie die Mgm101 Proben innerhalb von 6-12 Monaten für ssDNA-Bindungs-Assay (Abbildung 8) und für strukturelle Visualisierung mittels Transmissions-Elektronenmikroskopie (Abbildung 9). </li></ol>

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<li>Bishop, D. K., Park, D., Xu, L., Kleckner, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DMC1%3A+a+meiosis-specific+yeast+homolog+of+E.+coli+recA+required+for+recombination%2C+synaptonemal+complex+formation%2C+and+cell+cycle+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">DMC1: a meiosis-specific yeast homolog of E. coli recA required for recombination, synaptonemal complex formation, and cell cycle progression.</a> Cell. 69, 439-456 (1992).</li>
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</ol>

Die Autoren erklären, dass sie keine finanziellen Interessen haben.

Es war eine Herausforderung, um eine stabile, nativen rekombinanten Protein aus E. Mgm101 produzieren coli möglicherweise aufgrund seiner Unlöslichkeit in Bakterienzellen. In diesem Bericht zeigen wir, dass die MBP-Fusion-Strategie das Protein zu einem angemessen hohen Niveau exprimiert werden können. Durch negative Färbung Transmissionselektronenmikroskopie und Größenausschlusschromatographie, haben wir bereits gezeigt, dass die MBP-Fusionsprotein einheitliche Oligomere bildet in vitro 1...

Homologe Rekombination ist für die Reparatur von Doppelstrangbrüchen (DSB) und Interstrang Vernetzungen und für die Wiederaufnahme der DNA-Replikation von eingestürzten Replikationsgabeln 1 wichtig. In konventionellen homologen Rekombination ist die zentrale Reaktion der ATP-abhängigen Rekombinasen wie RecA in Prokaryoten und Rad51 und Dmc1 in Eukaryonten 1-3 katalysiert wird. Diese Rekombinase bilden nucleoprotein Filamente auf ssDNA, die unerlässlich für die Einleitung Homologiesuche und Stranginvasion innerhalb duplex DNA-Templates (Abbildung 1, links) 4-7 sind. Zusätzlich zu den herkömmlichen Schema kann homologe Rekombination auch in einer Weise RecA/Rad51-independent (Abbildung 1, rechts). Zum Beispiel kann die Hefe Rad52 und Rad59 Proteine ​​direkt katalysieren die Anlagerung komplementäre ssDNA-Stränge, die durch Resektion von dsDNA Unterbrechungen ausgesetzt sind. Diese Rekombination Prozess, da singen bekanntle Banddurchlaufanlagen, hat in der Regel nicht um homologe Paarung mit dsDNA Vorlagen. Nach dem Glühen werden heterologe Schwänze durch Exonucleasen entfernt und Kerben sind ligiert Genom Kontinuität 8-10 wiederherzustellen. Reparatur durch den einzigen Banddurchlaufanlagen Mechanismus wird oft durch Deletionen von genomischen Sequenzen zwischen direkt wiederholt Regionen begleitet. Rad52 gehört zu einer vielfältigen Gruppe von Proteinen, die Rekombination verbreitet unter 11 Bakteriophagen sind. Diese Proteine ​​sind auch als Single Strand Annealing Proteine ​​(SSAPs) bekannt, auf der Grundlage ihrer Aktivität in der Förderung der Anlagerung homologen einzelsträngige DNA-Moleküle. Die am besten charakterisierten Bakteriophagen SSAPs sind Redβ und Erf vom Bakteriophagen λ und P22, RecT vom Prophagen rac und der Sak-Protein aus der Lactococcus-Phagen UL36. Die SSAPs sind strukturell durch eine typische β-β-β-α fach dadurch, obwohl Ähnlichkeit praktisch Nichterfassungssignal wirdkönnen in ihrer primären Sequenzen. Sie alle bilden große homooligomeren Ringe von 10 - 14 fache Symmetrie in vitro 12-14. Die funktionellen Auswirkungen dieser Eigenschaft höherer Ordnung strukturelle Organisation ist nicht gut verstanden. Wir sind daran interessiert, zu verstehen, den Mechanismus der homologen Rekombination in der mitochondrialen Genoms. Wir haben zuvor die MGM101 Gen, das für die Aufrechterhaltung der mtDNA in Saccharomyces cerevisiae 15 identifiziert. MGM101 anschließend wurde festgestellt, dass mitochondriale Nukleoide an und ist für die Toleranz der mtDNA auf DNA-schädigende Mittel 16 erforderlich. Allerdings wurde in der Studie von Mgm101 wurde zurück in den letzten zehn Jahren durch die Schwierigkeit gehalten rekombinanten Mgm101 erzeugen. Wir haben vor kurzem in der Herstellung von löslichen Mgm101 bei großen Mengen aus E. gelungen coli mit dem MBP-Fusion-Strategie. Dies hat es uns ermöglicht, dass Mgm101 Aktien demonstrierenbiochemische und strukturelle Ähnlichkeiten mit dem Rad52-Familie von Proteinen 17,18. In diesem Bericht wird eine dreistufige Reinigungsverfahren beschrieben, die produziert homogene Mgm101for biochemische und strukturelle Analysen (Abbildung 2).

<table><tbody><tr><td>Expressionsvektor pMAL-c2E</td><td>New England Biolabs</td><td>#N8066S</td><td></td></tr><tr><td>PreScission Protease</td><td>GE Healthcare Life Sciences</td><td>#27-0843-01</td><td></td></tr><tr><td>BL21-CodonPlus(DE3)-RIL cells</td><td>Strategene</td><td>#230245</td><td></td></tr><tr><td>Leupeptin</td><td>Roche Applied Science</td><td>#11034626001</td><td></td></tr><tr><td>Pepstatin</td><td>Roche Applied Science</td><td>#11359053001</td><td></td></tr><tr><td>Phenylmethylsulfonylfluorid (PMSF)</td><td>Roche Applied Science</td><td>#10837091001</td><td></td></tr><tr><td>DNAse I</td><td>Sigma</td><td>#DN25-1G</td><td></td></tr><tr><td>Isopropyl &#946;-D-1-thiogalactopyranosid (IPTG)</td><td>Roche Applied Science</td><td>#11411446001</td><td></td></tr><tr><td>Amylose-Harz</td><td>New England Biolabs</td><td>#E8021L</td><td></td></tr><tr><td>Econo-Säulen-Chromatographie-Säule</td><td>BIO-RAD</td><td>#7372512</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Scale Mini Macro-Prep High S Kartusche (1 ml)</td><td>BIO-RAD</td><td>#732-4130</td><td></td></tr><tr><td>VIVASPIN 15R Ultrafiltration Spin Säule (10.000 MWCO)</td><td>Sartorius Stedium</td><td>#VS15RH02</td><td></td></tr><tr><td>Superose 6 Prep Grade Säule</td><td>Amersham Bioscirnces</td><td>#17-0489-01</td><td></td></tr><tr><td>VIVASPIN 6 Ultrafiltration Spin Säule (5.000 MWCO)</td><td>Sartorius Stedium</td><td></td><td></td>#VS0611</tr></tbody></table>

vorbereitung des mgm101 rekombinationsprotein von mbp-based tagging-strategie

Preparation of the Mgm101 Recombination Protein by MBP-based Tagging Strategy

Die MGM101 Gen wurde vor 20 Jahren für seine Rolle bei der Aufrechterhaltung der mitochondrialen DNA identifiziert. Studien aus mehreren Gruppen haben vorgeschlagen, dass das Protein in der Mgm101 recombinational Reparatur der mitochondrialen DNA beteiligt ist. Neuere Untersuchungen haben gezeigt, dass Mgm101 der Rad52-Typ Rekombinationsprotein Familie verwandt ist. Diese Proteine ​​bilden große oligomere Ringe und fördern die Anlagerung homologen einzelne DNA-Moleküle. Allerdings hat die Charakterisierung von Mgm101 der Schwierigkeit bei der Herstellung des rekombinanten Proteins behindert. Hier wird ein zuverlässiges Verfahren zur Herstellung von rekombinantem Mgm101 beschrieben. Maltose Binding Protein (MBP)-markierten Mgm101 zunächst in Escherichia coli exprimiert. Das Fusionsprotein wird zunächst durch Amylose-Affinitätschromatographie gereinigt. Nach der Begrüßung durch proteolytische Spaltung freigesetzt wird Mgm101 von MBP durch Kationenaustauschchromatographieschritt getrennt. Monodispersen Mgm101 erhält danndurch Größenausschlusschromatographie. Eine Ausbeute von ~ 0,87 mg Mgm101 pro Liter Bakterienkultur kann routinemäßig erhalten. Das rekombinante Mgm101 eine minimale Verunreinigung der DNA. Die vorbereiteten Proben werden erfolgreich für biochemische, strukturelle und Single Particle-Image-Analysen von Mgm101 verwendet. Dieses Protokoll kann auch zur Herstellung von anderen großen oligomere DNA-bindende Proteine ​​falsch gefaltet und giftig für Bakterienzellen verwendet werden.

Mgm101 ist ein Rad52-bezogenen Rekombinationsprotein in Mitochondrien. Rad52 wurde ausgiebig für seine Rolle in der mitochondrialen DNA-Rekombination (Abbildung 1) untersucht. Rekombinante Mgm101 kann durch eine Drei-Schritt-Verfahren (Abbildung 2) hergestellt werden. Dies wird durch die Verwendung des MBP-Tagging Strategie Mgm101 in eine lösliche Form exprimiert werden und anschließend von dem Tag durch proteolytische Spaltung freigesetzt (Fig. 3) kann erleichtert. </p...

Die Hefe-Mitochondrien nucleoid Protein, Mgm101, ist ein Rad52-Typ Rekombinationsprotein die große oligomere Ringe bildet. Ein Protokoll wird beschrieben, dass lösliches rekombinantes Mgm101 vorzubereiten mit dem Maltose Binding Protein (MBP)-Tagging-Strategie mit Kationenaustausch und Größenausschlusschromatographie gekoppelt.

Vorbereitung des Mgm101 Rekombinationsprotein von MBP-based Tagging-Strategie

The MGM101 gene was identified 20 years ago for its role in the maintenance of mitochondrial DNA. Studies from several groups have suggested that the ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, große oligomere DNA-bindende Proteine wie MGM 1 0 1 mithilfe der Maltose-Bindeprotein- oder MVP-Tagging-Strategie herzustellen. Dies wird erreicht, indem zunächst der offene Leserahmen von MGM 1 0 1 downstream von MVP in den PMLC zwei E-Vektor kloniert wird, um eine Expression in e coli zu ermöglichen. Das M-V-P-M-G-M 1 0 1-Fusionsprotein wird anschließend aus e coli mittels AMLO-Affinitätschromatographie gereinigt.MGM 1 0 1 wird anschließend durch proteolytische Spaltung von MVP freigesetzt und mittels Kationenaustauschchromatographie von MVP getrennt. Schließlich werden die MGM 1 0 1-Ringe durch Größenauschlusschromatographie auf Homogenität gereinigt. Letztendlich erhält man etwa 0,8 Milligramm lösliches MGM 1 0 1.Aus einem Liter Bakterienkultur kann die biochemische und strukturelle Charakterisierung dieses Proteins durchgeführt werden, das für die DNA-Reparatur in Mitochondrien wichtig ist. Der Hauptvorteil der Verwendung einer mit einem sterblichen Bindungsprotein markierten Version von MGM 1 0 1 liegt darin, dass diese Version weniger toxisch, löslicher und stabiler ist als die nicht-markierte Version. Dadurch können wi

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Forschung

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Biologie

Dieses Video beschreibt BiFC-PALM ― eine Kombination aus photoaktivierter Lokalisationsmikroskopie und bimolekularer Fluoreszenzkomplementierung ― zur Beurteilung von Protein-Protein-Wechselwirkungen. BiFC beinhaltet die Fusion von zwei fluoreszierenden Proteinfragmenten mit zwei interagierenden Proteinen von Interesse. Wenn die beiden Proteine interagieren, werden die Fragmente in die Nähe gebracht, wodurch die beiden Teile zusammenkommen und ein funktionsfähiges fluoreszierendes Protein...

Bimolekulare Fluoreszenz-Komplementierungs-gekoppelte photoaktivierte Lokalisationsmikroskopie

Hier berichten wir ein Verfahren zur Verwendung von Typ I und Typ...

Genetische Manipulation in<em&gt; Δku80</em&gt; Die Stämme für Funktionelle Genomanalyse<em&gt; Toxoplasma gondii</em

Gen-Targeting-Methoden können verwendet werden, um transgene Mäuse mit Knockout-, Knock-in- und getaggten Allelen zu erzeugen.  Hier beschreiben wir eine verbesserte Methode der Rekombination in E. coli, die wir als "Subklonierung plus Insertion" bezeichnen und die zur schnellen Generierung benutzerdefinierter Gen-Targeting-Vektoren verwendet werden kann.

Subklonierung Plus-Insertion (SPI) - A Novel Recombineering Verfahren zur schnellen Bau der Gene Targeting Vektoren

Protein-Wechselwirkungen werden in Zellen mit räumlicher Auflösung im Nanometerbereich visualisiert, indem die bimolekulare Fluoreszenzkomplemmentierung (BiFC) mit der photoaktivierten Lokalisationsmikroskopie (PALM) kombiniert wird. Beschrieben wird hier die Verwendung von BiFC-PALM zur Abbildung von Ras-Raf-Wechselwirkungen in U2OS-Zellen zur Visualisierung des nanoskaligen Clusterings und der Diffusion einzelner Ras-Raf-Komplexe.

Photoaktivierte Lokalisationsmikroskopie mit Bimolekulare Fluoreszenzkomplementation (BIFC-PALM)

Dieser Bericht beschreibt ein Bioengineering Verfahren zu entwerfen und neuartige Künstliches Spleißfaktoren (ASFs) zu konstruieren, die das Spleißen von Zielgenen in Säugetierzellen spezifisch modulieren. Dieses Verfahren kann weiter ausgebaut werden, um verschiedene künstliche Faktoren zu konstruieren, andere Aspekte des RNA-Metabolismus zu manipulieren.

Engineering künstliche Faktoren zur Speziellen Manipulation alternativen Spleißen in menschlichen Zellen

Diese Studie beschreibt Methoden für die T7-vermittelte Co-Expression von mehreren Genen aus einem einzigen Plasmid in Escherichia coli unter Verwendung des pMGX-Plasmidsystems.

Induzierbares T7-RNA-Polymerase-vermitteltes Multigen-Expressionssystem, pMGX

Die gruppierten regelmäßig dazwischen kurze palindromische Wiederholungen/CRISPR verbundenen Protein 9 (CRISPR/Cas9) System bietet ein viel versprechendes Instrument für Gentechnik und eröffnet die Möglichkeit, gezielte Integration der transgene. Wir beschreiben eine Homologie-vermittelte Ende verbinden (HMEJ)-basierte Strategie für effiziente DNA Integration in Vivo gezielte und gezielte Gentherapien verwenden CRISPR/Cas9.

CRISPR/Cas9-vermittelten gezielte Integration In Vivo mit einer Homologie-vermittelte Ende verbinden-basierte Strategie

Diese Arbeit stellt die Methode der Entwicklung, Charakterisierung und Verfolgung in Echtzeit der Tumormetastasierung im Zebrafischmodell des Neuroblastoms vor, insbesondere in der transgenen Zebrafischlinie mit Überexpression von MYCN und LMO1, die spontan Metastasen entwickelt.

Zebrafisch-Modell der Neuroblastom-Metastasierung

Die AviTag-spezifische standortbeschränkte Beleuchtungsverstärkte Biotinylierung (ALIBi) ist eine neuartige optogenetetisch aktivierte Methode, die zur Markierung und Affinitätsreinigung subzellulärer Populationen von Ribosomen für die nachgelagerte Sequenzierung und proteomische Analyse entwickelt wurde.

Isolierung subzellulärer Ribosom-Subpopulationen basierend auf rekombinanten, peptid-tag-spezifischer, ortsbeschränkter Beleuchtungsverstärkter Biotinylierung

Charles Taylor und John Marshall erläutern den Nutzen der mathematischen Modellierung zur Bewertung der Wirksamkeit der Bevölkerung Ersatz-Strategie. Insight ist in, wie Rechenmodelle können Informationen über die Populationsdynamik von Moskitos und die Ausbreitung von Transposons durch A. gambiae Unterarten eingeräumt werden. Die ethischen Überlegungen der Freisetzung von gentechnisch veränderten Moskitos in die freie Wildbahn werden diskutiert.

Die Vorhersage der Wirksamkeit der Bevölkerung Replacement-Strategie mittels mathematischer Modellierung

Erfahren Sie die Reinigung des mitochondrialen Rekombinationsproteins Mgm101 aus Hefe mit MBP-Tagging, Kationenaustausch- und Größenausschlusschromatographie. Diese Methode liefert homogene Proteinringe für strukturelle und funktionelle Studien.

Vorbereitung des Mgm101 Rekombinationsprotein von MBP-based Tagging-Strategie

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