Eine effektive Methode, um Manuelle Zerlege Intact Maus Nasengewebe mit erhaltener Anatomische Organisation vorbereiten

Hallo, ich bin David Dunton aus dem Labor von Dr. Wung Lynn an der UMBC. In diesem Video stellen wir eine effektive Technik zur Herstellung von Mausenasengewebe mit erhaltener anatomischer Organisation vor. Diese Technik ermöglicht es, eine einzelne Probe zu erhalten, die nahezu das gesamte Nasengewebe einschließlich des respiratorischen und olfaktorischen Gewebes sowie des epithelialen und subepithelialen Gewebes enthält.

Wir zeigen das schrittweise Entfernen verschiedener Gesichtsbeine, die das Nasengewebe umgeben, wobei selbst das empfindlichste Gewebe erhalten bleibt, beispielsweise die Endabschnitte des Hauptgeruchsepithels. Unsere Methode bietet erhebliche Vorteile gegenüber Dekalzinierungsmethoden, da sie aggressive chemische Behandlungen vermeidet und die Knochenentfernung in 20 bis 30 Minuten abgeschlossen sein kann. Weitere Vorteile dieser Technik sind, dass sie nicht durch das Alter der Maus begrenzt ist und dass sie an fixiertem oder frischem Gewebe durchgeführt werden kann.

Diese Vorteile machen unsere Technik ideal für morphologische, immunhistochemische und physiologische Untersuchungen. Hier zeigen wir ein schematisches Diagramm der dorsalen Ansicht der Knochen des Schädels und der Nase. In diesem Video konzentrieren wir uns auf die Dissektion der Knochen der Nase.

Dies ist ein schematisches Diagramm der ventralen Ansicht der Knochen des Schädels und der Nase. Dargestellt ist eine dorsale Ansicht mit einem unzerschnittenen Schädel und einer unzerschnittenen Nase oben sowie einer präparierten Nase unten. Gezeigt sind nun die Endabschnitte des Hauptgeruchsepithels.

Hier zeigen wir die Knochen der Nase, beginnend von der dorsalen Seite. Dies ist der dorsale Teil der Jochplatte, gefolgt vom Jochbogen. Dies ist der Nasenbein, und als Nächstes wird die kaudal gelegene Siebplatte gezeigt.

Weit vorne befindet sich das Gruenberg-Ganglion. Aus lateraler Ansicht zeigen wir den Teil des Siebbeins, der das Turbinat des menschlichen Riechepithels, das Gruenberg-Ganglion, den Oberkieferknochen und die vorderen Schneidezähne bedeckt. In der ventralen Ansicht zeigen wir die Molaren, die vorderen Schneidezähne, den Gaumenbein und das Vomerbein.

Beginnen Sie mit der Entfernung des Vomerbeins, indem Sie die ventrale Seite der Nase betrachten. Um das Vomerbein zu entfernen, verwenden Sie eine Pinzette, um das Vomerbein entlang seiner Länge zu durchbrechen, und entfernen Sie anschließend die Knochenstücke, indem Sie sie von dem darunterliegenden Gewebe wegklappen, um Schäden am RO-Nasenorgan zu vermeiden. Verwenden Sie für diese Aufgabe Pinzetten, um den ventralen Teil der Schneidezähne zu durchbrechen.

Verwenden Sie eine Klemmbewegung und brechen Sie die Schneidezähne in Richtung des Ulmer-Knochens. Sobald die Schneidezähne gebrochen sind, entfernen Sie die verbleibenden Knochenfragmente, die mit dem Gewebe verbunden sind, mithilfe einer Pinzette. Um den Oberkiefer zu lösen, beginnen Sie an der ventralen Seite und brechen Sie den Oberkiefer direkt ventral zu den Jochbögen.

Drehen Sie die Nase auf die dorsale Seite und brechen Sie den Oberkieferknochen direkt vor dem Jochbogen durch. Um den Oberkieferknochen zu lösen und die rechte Seite des Nasenbeins zu entfernen, entfernen Sie den Rest des Stirnbeins, der sich an der rechten Seite des Nasenbeins befindet. Für diese Aufgabe verwenden Sie Ron-Jurors.

Bei der Verwendung der Ron-Juraten ist Vorsicht geboten, um die dünne lamina cribrosa nicht zu beschädigen, da eine Schädigung der lamina cribrosa dazu führen kann, dass die Nase in der Mitte auseinanderbricht. Klappen Sie den gebrochenen Knochen nach oben und entfernen Sie ihn. Danach klappen Sie den dorsalen Teil der Jochplatte von dem darunterliegenden Gewebe weg.

Trennen Sie das Nasenbein entlang seiner Mittellinie. Greifen Sie das Bein mit einer Pinzette oder einem Radiergummi und bewegen Sie es vorsichtig hin und her, während Sie es anheben. Dieser Vorgang sollte mit etwas Feingefühl durchgeführt werden, da das darunterliegende Gewebe beim Entfernen des Knochens leicht beschädigt werden kann. Sobald der Knochen entfernt ist, können Sie das darunterliegende Gewebe getrennt sehen, wie in diesem Standbild dargestellt.

Um den Knochen zu entfernen, schneiden Sie ihn einfach mit einer Pinzette oder Schere ab. Entfernen Sie nun die vordere Oberkieferregion. Falls sie zu diesem Zeitpunkt noch nicht entfernt wurde, ist die vordere Oberkieferregion bereits locker, brechen Sie daher alle verbleibenden Verbindungen zum Gewebe und entfernen Sie sie.

Entfernen Sie aus einer dorsalen U-Perspektive das Stirnbein, das sich direkt an der linken Seite des Nasenbeins befindet. Verwenden Sie die Ron-Juris, um das Stirnbein zu durchtrennen. Zum Entfernen dieses Stirnbeinstücks können Sie rohe Kiefer oder eine Pinzette verwenden.

Sie können den Oberkiefer zu diesem Zeitpunkt ebenfalls lockern, obwohl dies nicht notwendig ist. Um die linke Seite des Nasenbeins zu entfernen, verwenden Sie die Pinzette und lösen vorsichtig das Nasenbein von vielen der umgebenden Knochen. Greifen Sie dann mit der Pinzette dieses Knochenstück und bewegen es allgemein hin und her, während Sie leicht anheben, um das Nasenbein vom darunterliegenden Gewebe zu trennen.

Wenn sich das darunterliegende Gewebe vom Knochen löst, können Sie manchmal aus einer seitlichen Ansicht das am Knochen befestigte Gewebe erkennen. Benutzen Sie die Pinzette, um das am Knochen befestigte Gewebe vorsichtig zu lösen, und entfernen Sie anschließend den Knochen mit der Schere oder der Pinzette. Nachdem das Nasenbein entfernt wurde, entfernen Sie das vordere Maxillare auf der linken Seite der Nase mit derselben Technik wie das vordere Maxillare auf der rechten Seite der Nase.

Der nächste Schritt besteht darin, die Jochplatte auf der linken Seite der Nase zu entfernen. Möglicherweise besteht noch eine Verbindung zwischen der Jochplatte und dem darunterliegenden Gewebe; in diesem Fall können Sie die rohen Juryinstrumente verwenden, um vorsichtig den dorsalen Teil der Jochplatte zu klemmen und zu lösen. Betrachten Sie die ventrale Seite der Nase.

Um die Molaren und den Gaumenbein zu identifizieren, können entweder die Molaren oder das Gaumenbein entfernt werden. Zunächst zeigt diese Ansicht die laterale Seite der Nase, und diese Ansicht veranschaulicht die Entfernung der Molaren auf der rechten Seite der Nase. Unter Verwendung des Präparats mit der rechten Seite des Oberkiefers entfernt, wird das Gaumenbein entfernt.

Anschließend das verbleibende Oberkieferbein und die Molaren zerbrechen und alle großen Knochenfragmente vom Gaumenbein oder vom Oberkiefer entfernen. Alle verbliebenen Teile des Siebbeins, die in Richtung des manufakturierten Epithels vorstehen, abbrechen und entfernen. Die feine Pinzette unter den Knochen schieben und den Knochen anheben, um ihn vom darunterliegenden Gewebe zu lösen.

Alternativ verwenden Sie den Rogers, wie hier gezeigt, um den Knochen zu durchtrennen, und benutzen Sie dann die feine Pinzette, um den Knochen vom darunterliegenden Gewebe zu lösen. So sieht das Concha des menschlichen Riechepithels aus. Nachdem der moidale Knochen entfernt wurde, wird dieser Knochen entfernt.

Danach liegt es geschützt und medial zum Nasenbein, und dieses Knochenstück wird mithilfe einer Pinzette entfernt. Achten Sie darauf, im Verlauf des Schritts die Lamina cribrosa nicht zu beschädigen. Sobald der Knochen gebrochen ist, verwenden Sie eine Pinzette, um den Knochen zu entfernen.

Als Nächstes folgt eine Ansicht der Nase. Sobald dieser Knochen entfernt wurde, bleibt noch ein letzter Bereich zur Überprüfung übrig, und zwar um das Jacobson’sche Organ herum. Denn es befindet sich ein Knochen zwischen den paarigen Röhren des Jacobson’schen Organs, den ich in dieser Präparation gerade entferne.

Dies ist die dorsale Ansicht einer Nase, die mit unserer Technik präpariert wurde. Als Nächstes haben wir die Nase gedreht, um ihre verschiedenen Aspekte zu zeigen. Dies ist die dorsale Ansicht, gefolgt von der lateralen Ansicht der linken Seite der Nase und der ventralen Ansicht.

Nun zeigen wir detailliert die Merkmale einer vollständig mit unserer Technik präparierten Nase, beginnend mit der dorsalen Seite der Nase. Der erste dargestellte Teil sind die Conchae des Hauptgeruchsepithels. Es befinden sich Luftblasen im Gewebe unterhalb der Nasenbeine, und diese Luftblasen werden durch Absaugen der Probe aus lateraler Sicht entfernt.

Wir zeigen die intakte Muschel des menschlichen Riechepithels. Beachten Sie, dass sich Luftblasen innerhalb der Muscheln befinden. Drüsengewebe liegt anterior zur Muschel, und das respiratorische Epithel ist aus dieser seitlichen Ansicht sichtbar.

Von der ventralen Ansicht ist das empfindliche Nasenorgan sichtbar. Dieses Bild zeigt eine Erweiterung unserer Dissektionstechnik, bei der die Riechkolben des Gehirns und die Nase in einer Probe entfernt werden. Um das Gewebe für den Schnitt vorzubereiten, nehmen Sie zunächst eine Plastikform und füllen diese mit Medium für optimale Schneidetemperatur.

Legen Sie das gewünschte Gewebe in die gefüllte Form und stellen Sie die Form auf einen Kreis aus Silikonfett in eine Plastikschale; ein Kolben wird auf den Kreis aus Silikonfett gesetzt, um eine Dichtung für das Vakuum zu erzeugen. Unser Labor verwendet ein Vakuum, das durch fließendes Wasser erzeugt wird. Sobald das Vakuum durch den Wasserfluss erzeugt ist, werden die Luftblasen aus dem Gewebe gezogen.

Das Vakuum wird gestoppt, indem das Wasser abgeschaltet und die Schläuche entleert werden. Danach wird die Kunststoffform entnommen. Hier bringe ich das Gewebe in die gewünschte Orientierung, bevor ich es einfriere.

Unser Labor verwendet Trockeneis, um Gewebe einzufrieren. Dies sind dargestellte Ergebnisse des Schneidens einer Nase mit unserer Dissektionstechnik und Färbung mit Neutralrot. Dies ist ein horizontaler Schnitt, der die Conchae des menschlichen Effektorepithels, Drüsengewebe und Atemepithel zeigt.

Der zweite Abschnitt ist ein koronarer Schnitt, der das gewundene Faltungsmuster der Conchae des Hauptgeruchsepithels zeigt. In diesem Video stellen wir eine Technik vor, um die Nase manuell zu entknochen und eine Probe zu gewinnen, die ideal für morphologische, immunhistochemische oder physiologische Untersuchungen ist.