Name: Nierenkapsel Xenografting und subkutane Implantation Pellet für die Beurteilung von Prostata-Karzinogenese und benigne Prostatahyperplasie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-08-28T14:45:00.000+00:00
Duration: 8 min 38 s
Description: Lernen Sie die Herstellung und subkutane Implantation von Hormonpellets bei Mäusen zur Untersuchung hormoneller Karzinogenese und benignen Prostatawachstums.

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Die Autoren bedanken sich alle Mitglieder der Ricke Labor, Vergangenheit und Gegenwart zu danken. Wir danken Calvin Patten, Jr., DVM und Brigitte Raabe, DVM, für hilfreiche Anmerkungen zum Protokoll. Wir möchten das NIDDK, NCI und NIEHS für ihre finanzielle Unterstützung für diese Studien bestätigen: R01DK093690, R01CA123199, RC2ESO18764. TMN ist Auszubildender in der Medical Scientist Training Program an der University of Rochester durch NIH T32 GM07356 finanziert, die NIH unter Ruth L. Kirschstein National Research Service Award F30DK093173 unterstützt auch dieses Projekt. CDV wird durch T32CA157322 und ABT unterstützt durch T32ES007015 an der Universität von Wisconsin-Madison unterstützt. Der Inhalt ist ausschließlich der Verantwortung der Autoren und nicht notwendigerweise die offizielle Meinung des National Institute of General Medical Sciences oder NIH.

1. Aufbereitung von Druck Hormone / Drug Pellet <ol><li> Dieses Verfahren sollte in einem Stoffsicherheitsabzug erfolgen, während das Tragen eines Labormantel, Handschuhe, Maske, Schutzbrille und Haube. Um eine Kreuzkontamination zu vermeiden, ist es entscheidend, dass die Pelletherstellung Ausrüstung wird gründlich mit 70% igem Ethanol vor und nach der Herstellung jeder Art von Pellet gereinigt. </li><li> Mit Hilfe eines analytischen Maßstab und wiegen Papier, messen gewünschte Menge des Hormons / Drogenpulver. Etwa 5% Extra-Material wird empfohlen, um den Verlust beim Pressen zubringen. </li><li> Einige Hormone / Medikamente erfordern ein Bindemittel oder Füllstoffe, die vor der Herstellung Pellet vermischt wird. Zum Beispiel, um eine 2,5 mg Tablette aus 17β-Östradiol herzustellen, verbinden das Hormon mit 22,5 mg Cholesterin, das in einer 25 mg Tablette führt. </li><li> Vorsichtig in Werkzeugsatz, Ort übertragen unter der Presse und schieben Hebel fest nach unten, um Pellets zu komprimieren. Verwenden Sie den Druck konstant zu halten sind konstante Oberflächenein Volumenverhältnis. </li><li> Die Stempelhalter Next umzukehren und drücken Sie den Hebel wieder nach unten, um das Pellet zu lösen. </li><li> Überprüfen Pellet für Integrität und festzustellen, ob endgültige Masse innerhalb gewünschten Bereich. Ein akzeptabler Bereich ist ± 5% Unterschied in der endgültigen Masse (beispielsweise ein akzeptabler Bereich für eine 25 mg Tablette ist von 23,8 bis 26,3 mg). </li><li> Pellets können vor der Operation gemacht und gespeichert (Bedingungen und die Dauer der Speicherung hängt von der Stabilität des Arzneimittels oder Hormons in Pelletherstellung verwendet) werden. Hormon Pellets können als Alternative zur Herstellung pelle erworben werden. Einkauf Pellets vermeidet die Verwendung von nicht-pharmazeutischer Qualität Medikamente, da sie formuliert und zusammengesetzt werden. </li></ol> 2. Herstellung von Zell Rekombinante Xenografts <ol><li> Ernte und Kultur primären Maus urogenitalen Mesenchym (UGM) Stromazellen für weniger als 4 Wochen vor dem für die Zählung gesammelt. </li><li> Kultur immortalisierten epithelialen Prostatazelllinien in der üblichen ModeIonen und sammeln für die Zählung. Für dieses Beispiel vorzubereiten rekombinante Zelltransplantate durch Mischen von 100.000 BPH-1-Epithel-Zellen pro Transplantat mit 250.000 UGM Stromazellen pro Graft in Suspension. </li><li> Pellet-Zellen zusammen und resuspendieren in genügend neutralisiert Typ 1 Rattenschwanzkollagen, um die gewünschte Anzahl von Transplantaten, die jeweils in einem Volumen von 25 &amp;mgr; l bis 50 &amp;mgr; l zu machen. </li><li> Eingestellt rekombinanten Transplantate bei 37 ° C für 15 Minuten und dann die Abdeckung mit Wachstumsmedium für die Lagerung bei 37 ° C für bis zu 48 Stunden vor der Transplantation. </li></ol> 3. Herstellung von Seiden Xenografts <ol><li> Pflegen universellen Vorsichtsmaßnahmen für durch Blut übertragbaren Krankheitserregern während der Gewebebeschaffung und chirurgischen Eingriff. Nach Institutional Review Board Genehmigung und Einwilligung, erhalten frische Prostatagewebe aus chirurgischen Resektion. Für Untersuchungen der Wachstums BPH kann Gewebe von transurethrale Resektion der Prostata oder einfach Prostatektomie geerntet werden. Primäre Xenografts von PRCA oder gutartige prostaß Gewebe kann von radikalen Prostatektomie Proben gewonnen werden. </li><li> Shop gewonnene Gewebe in isotonischer gepufferten Zellmedium oder physiologischer Kochsalzlösung auf Eis. Abhängig von den Gewebe-und Lagerbedingungen können die Proben für 24 Stunden vor der Herstellung der Gewebetransplantate gespeichert werden. Gängige Praxis ist es, die Probe in drei Stücke teilen, mit einem Abschnitt in Formalin fixiert und routinemäßig für die Histologie verarbeitet, Rast einem Stück für die molekulare Analyse eingefroren und ein Stück weiter in das Gewebe Xenografts (1-3 mm groß) eingeteilt. </li></ol> 4. Herstellung von Feuerpolierte Glaspipetten <ol><li> Das Tragen von Schutzbrille, Laborkittel und hitzebeständige Handschuhe, Ort Pasteur-Glaspipettenspitze in Bunsenbrenner-Flamme bei ca. 60 °-Winkel zu starten. </li><li> Halten Sie eine konstante, leichte Bewegung auf die Pipette, um Hotspots zu vermeiden. </li><li> Zeichnen Sie die Spitze dünn und Feuerpolitur mit dem Ziel, eine leicht gebogene Ende mit einem abgerundeten, geschlossenen Spitze. </li></ol&gt; 5. Vorbereitung der Instrumente und OP-Suite <ol><li> Autoklav alle Instrumente. Vor der Operation, kontrollieren alle Instrumente, wobei darauf zu sterilen Bereich zu halten. </li><li> Bis sterilen OP-Bereich mit saugfähigen Kissen, Dissektion Umfang, Anästhesie Nasenkegel, chirurgische Instrumente und zum Arbeitsbereich gerichtet Wärmelampe ein. Um Werkzeuge zwischen Mäusen, vorgewärmte Perle Sterilisator sterilisieren. </li><li> Bauen und Testnarkosegerät; wiegen Gasfänger. </li><li> Mit den Mikrowellen-, Wärme-Wachs-Pads für bis zu 5 min (in 1 min-Schritten, Kneten des Wachs-Pad, um geschmolzen und nicht geschmolzenen Wachs kombinieren) bei 70-80% der Leistung, bis alle das Wachs gleichmäßig geschmolzen. Durch Berührung, sicherzustellen, dass die Unterlage ist nicht zu heiß und Platz unter dem leeren Käfig Nager Erholung. </li><li> Don persönliche Schutzausrüstung für Nager chirurgische Verfahren, einschließlich OP-Maske, Haube, Handschuhen und Kleid. </li></ol> 6. Chirurgische Verfahren: Nierenkapsel Xenografting<ol><li> Alle Verfahren, die Forschung Tiere sollten mit Zustimmung des institutionellen Tierpflege und Verwendung Ausschüssen durchgeführt werden. Vor der Einleitung der Narkose, beachten Sie die Maus, um Gesundheit und Wohlbefinden zu gewährleisten. </li><li> Platzieren Sie die Maus in die Kammer für die Induktion der Isofluran-Narkose bei 3-5%. Wenn das Tier sich nicht mehr bewegt und die Atemfrequenz verringert hat, Transfer zum Nasenkegel in der Bauchlage und Aufrechterhaltung einer Narkose bei 1-3%. </li><li> Falls erforderlich, verwenden Knipser, die Rückseite der Maus zu rasieren. Dies ist nicht bei der Nutzung athymischer (nu / nu) Mäuse benötigt. </li><li> Festem Druck auf den Gurt des erweiterten Hinterfuß Angemessenheit der Narkose zu evaluieren. Wenn die Maus reagiert auf Druck wird mehr Zeit für die Anästhesie wirksam wird benötigt. Wenn nötig, Anästhesie Fluss einstellen leicht auf eine adäquate Anästhesie zu erreichen. </li><li> Wenn die Maus ausreichend betäubt Desinfektion des Operationsstelle mit chirurgischen Jod (Betadine)-Lösung, gefolgt von70% Alkohol. </li><li> Don sterile Handschuhe und ein Kleid, gelten sterilen Tüchern zur Operationsstelle. Heben Sie die Rückenhaut mit einem Paar von Zahnzange und mit den groben Schere einen 2-3 cm dorsalen Mittellinienschnitt. </li><li> Mit stumpfen Schere oder einer Sonde, trennen Sie die darunter liegenden Dermis von der Körperwand (auf beiden Seiten des Einschnitts für die bilaterale Pfropfen oder auf der einen Seite für die einseitige Transplantation). </li><li> Positionieren Sie die Maus in Seitenlage, und ermitteln die Lage der Niere, indem Sie die Nieren Profil durch den Muskel Wand. Mit leichtem Handdruck mit dem Daumen und Zeigefinger auf dem Bauch kann mit Visualisierung inneren Organe zu unterstützen. </li><li> Mit feinen Iris Schere, und kümmert sich um große Gefäße und Nerven der Wirbelsäule zu vermeiden, machen Sie einen 1 cm langer Schnitt in der Körperwand parallel zur Wirbelsäule. Widen diesen Einschnitt, um 1,5 bis 2,0 cm (etwas länger als der langen Achse der Niere) durch leichtes Öffnen der Schere weiter nach, indem sie in der ersten Einschnitt. </li><li> Exteriorisieren die Niere durch leichten Druck außerhalb der Muskelwand auf beiden Seiten der Niere mit dem Zeigefinger und Daumen. Tuck die Haut Kanten unterhalb der exteriorisierten Niere, die auf der Körperwand ruhen wird. Während die Niere exteriorisiert, pflegen Hydratation der Nierenkapsel durch die Anwendung steriler Kochsalzlösung. </li><li> Mit feinen Pinzette Nr. 5 heben die Nierenkapsel aus dem Parenchym der Niere und mit einem feinen Skalpell, machen Sie eine 2 -4 mm Schnitt in der Kapsel. Die Größe des Einschnitts wird durch die Größe des Transplantats bestimmt, sollte aber, um die Integrität der Kapsel zu halten, minimiert werden. </li><li> Bearbeiten Sie ein Glas Pasteur-Pipette, die mit einem geschlossenen Ende abgerundet unter der Kapsel tangential zur Oberfläche der Niere dünn und feuerpolierte gezogen worden ist. Öffnen Sie vorsichtig eine kleine Kapsel Tasche für Transplantate mit großer Sorgfalt nicht, das Nierenparenchym beschädigen. </li><li> Die Schnittkante der Nierenkapsel wird mit den feinen Pinzette angehoben und das Transplantat is unter der Kapsel mit der feuerpolierten Glaspipette in die Tasche eingesetzt. Mehrere Transplantate unter die Nierenkapsel platziert werden und gleichmäßig auf die Niere Oberfläche beabstandet. </li><li> Wenn im Verlauf der Pfropfung wird entwässert die Kapsel sollte durch Anwendung steriler Kochsalzlösung befeuchtet werden. </li><li> Beim Pfropfen abgeschlossen ist, heben Sie die Seiten der Muskelwand Einschnitt, um die Niere wieder in die Körperhöhle zu ersetzen. Beachten Sie, dass die Transplantate nicht aus unter der Kapsel rutschen. </li><li> Schließen Sie die Muskelwand mit einer einzigen Naht (4-0, FS-2 Vicrylnaht). Der chirurgische Eingriff kann auf der kontralateralen Niere durch Neupositionierung der Maus wiederholt werden. </li><li> Beim Pfropfen abgeschlossen ist, kann die Maus subkutane Implantation Pellet im gleichen chirurgischen Eingriff unterziehen (siehe Protokoll Schritt 7). </li><li> Mit Zahnzangen, richten Sie die Hautschnitt Kanten und gelten 2-3 chirurgische Wundklammern, um den Einschnitt zu schließen. Verwalten Analgesie (wir verwenden 5-10 mg / kg carprofen mit einer subkutanen Injektion) und platzieren Sie die Maus in die Seitenlage in der Wiederherstellungs Käfig. Stellen Sie sicher, Aufrechterhaltung der Körpertemperatur mit Wärme aus einer Lampe oder einem Heizkissen. Beachten Sie zur vollständigen Wiederherstellung der Maus, die in weniger als 15 Minuten auftreten sollte. </li><li> Mäuse sollte für die nächsten 24 Stunden auf Anzeichen von postoperativen Schmerzen beobachtet werden, Blutungen und / oder anderen Komplikationen. Kontrollieren Sie regelmäßig chirurgischen Schnitt für Anzeichen einer Infektion. </li><li> Wundklammern entfernen mit chirurgischer Wundklammer Entnahmevorrichtung 7-14 Tage nach der Operation. </li></ol> 7. Chirurgische Verfahren: Die subkutane Implantation Pellet <ol><li> Wiederholen Sie die Schritte 6.1-6.5 von Nierenkapsel xenografting chirurgischen Eingriff. </li><li> Heben Sie die Rückenhaut mit einem Paar von Hautzange und mit den groben Schere einen 1-2 cm dorsalen Mittellinienschnitt. </li><li> Mit stumpfen Schere oder einer Sonde, trennen Sie die darunter liegenden Dermis von der Körperwand kranial. </li><li> Mit Hautzangen,heben die Schädel Aspekt der Hautschnitt, und hält das Hormon Pellet vorsichtig mit geraden, gezahnten Pinzette, legen Sie die Pellet-und Release am Genick, in der Sie mit dem stumpfen Sonde erstellt Tasche. </li><li> Wiederholen Sie die Schritte von 6,18-6,20 Nierenkapsel xenografting chirurgischen Eingriff. Bei Durchführung subkutane Implantation nur Pellet, verwenden Sie ein chirurgischer Wundklammer, um den chirurgischen Eingriff zu schließen. </li></ol>

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</ol>

Die Autoren erklären, dass sie keine finanziellen Interessen konkurrieren.

Dieses Papier und die hierin beschriebenen Protokoll beschreiben die Herstellung von Druckhormon und / oder Drogen-Pellets und das chirurgische Verfahren für die subkutane Implantation von Pellets Mäusen. Je nach Fragestellung angegangen werden, kann diese Technik einzeln oder in Kombination mit Nierenkapsel xenografting der Prostatazelle rekombinante Transplantate oder Prostatagewebe Heterotransplantate, die Techniken weit in Prostata-Forschung verwendet werden, sind von 17 bis 19 durchgeführt werden. Zusamm...

Prostatakrebs (PRCA) und gutartige Prostata-Hyperplasie (BPH) sind erhebliche gesundheitliche Belastungen. PRCA ist die zweithäufigste Organkrebserkrankung bei Männern und eine der häufigsten Ursachen bei Krebserkrankungen ein. BPH ist auch sehr weit verbreitet unter älteren Männern, und es wird geschätzt, dass die klinische Manifestation der BPH, Symptome der unteren Harnwege (LUTS), wird von 50 bis 90% der Männer, 2 beeinflussen. Während Androgene und Östrogene bekannt, in PRCA BPH und wichtig zu sein, unser Verständnis der hormonellen Mechanismen, die Krebsentstehung und das Wachstum zugrunde liegen, ist noch unvollständig 3,4. Einfach und genetisch manipulierbaren Tiermodellen untermauern die Studien, die diese Prioritäten in Prostata-Forschung adressieren. In hormonabhängigen Krankheiten wie PRCA und BPH, die Verwendung von subkutanen, langsame Freisetzung Hormon Pellets, isoliert oder in Kombination mit Nierenkapsel xenografting (die Übertragung von Zellen, Geweben oder Organen von einer Spezies in eine andere) in die immunocompromised Mäusewirt, ein einfaches und reproduzierbares Verfahren zur Untersuchung der hormonellen Regulation des Wachstums und der Krebsentstehung. Die subkutane Implantation Hormon Pellet ist eine einfache und reproduzierbare Technik zur hormonellen Regulation der Krebsentstehung und gutartige Wachstum in der Prostata 5 zu studieren. Subkutane Implantation von erwachsenen männlichen Mäusen, die mit 25 mg Testosteron (T) und 2,5 mg 17β-Estradiol (E 2), bewirkt eine Erhöhung der Serum-E 2 und allmählichen Abnahme der T, wieder die dynamische hormonelle Milieu der alternden Männern 5,6. Zudem rekapituliert dieses Modell viele der klinischen Merkmale der BPH-LUTS 5,7. Alternative Methoden der Hormongabe orale / Magensonde Verwaltung oder intraperitoneale Injektion, die Leiden verursachen, um den Nager sind weniger konsequent bei der Bereitstellung der gleichen Menge der Droge im Laufe der Zeit, und sind arbeitsintensiver als eine einmalige chirurgische Implantation. Andere Modi für subkutane hormone und / oder Medikamentenabgabe sind Silastic Kapseln 8. Zwar haben wir auch Erfahrung mit der Nutzung der Silastic Kapseln, werden komprimiert Pellets für ihre Benutzerfreundlichkeit und Reproduzierbarkeit begünstigt. Außerdem Freisetzungsraten von Druckhormon Pellets besser imitieren die bei alternden Männern 5,7 beobachtet dynamische Sexualsteroidhormonverhältnisse. Seit der Entwicklung von genetisch immungeschwächten Mäusen wurden zahlreiche in-vivo-Modellsysteme, die xenografting Techniken für die Untersuchung einer Vielzahl von normalen und erkrankten Geweben entwickelt worden. Es gibt einige grundlegende Kategorien von xenografting. Gewebe Xenotransplantate bestehen aus einem kleinen Stück von intaktem Gewebe, das eine normale Struktur, bösartiger Tumor, oder gutartige Wachstum sein kann. Szot et al. (2007) haben vor kurzem beleuchtet Nierenkapsel xenografting der Langerhans-Inseln 9. Aamdal et al. (1985) beschrieben Nierenkapsel xenografting von 27 menschlichen Tumorzelllinien in immunocompromised Maus beherbergt 10. Grafts kann auch aus einem einzigen immortalisierten Zelllinie (Krebs oder nicht-tumor) bestehen, oder aus einer immortalisierten Zelllinie kombiniert mit Zellen aus Mesenchym (Zelltransplantat rekombinanten) isoliert bestehen. Wir bevorzugen xenografting von Zell Rekombinanten, die jeweiligen Rollen von Stroma und Epithel in der Entwicklung von PRCA und BPH zu sondieren. Cunha et al. (1980) war der erste, zu berichten, dass bei erwachsenen Mäuse-Blase Epithel mit embryonalen Urogenitalsinus Mesenchym (UGM) und xenografted unter die Nierenkapsel des männlichen Mäusen Gastgeber kombiniert, entwickelt das Gewebe in die Strukturen ähnlich Prostata acini 11. Norman et al. (1986) zeigten, dass erwachsenen Maus Prostata-duktalen Epithel und UGM, wenn im Gewebe Rekombinanten kombiniert, unterziehen duktalen Wachstum und Verzweigung Morphogenese 12. Hayward et al. (1988) zeigte, dass die menschliche Prostata-Epithel reagiert auf fetale m induktivesenchyme in ähnlicher Weise 13. Ein hormonelles Modell der Karzinogenese in der Prostata, indem die immortalisierte humane epitheliale Prostatazelllinie BPH-1 mit AWS, wurde zuerst von 14 (2001), Wang et al. Berichtet und wurde ausführlich in unserem Labor 15 verwendet. Dieses Modell ist für das Verständnis PRCA Progression gut geeignet, da die gutartigen Prostata-Epithel verwandelt, um Metastasen, erweiterte Modellierung PRCA bei Menschen 5. Da die spezifischen Komponenten können genetisch manipuliert werden, ist die Zelltransplantation rekombinanten besonders nützlich als ein Ansatz zur Stroma-Epithel-Wechselwirkungen zu beurteilen. Andere Websites sind für xenografting intradermale, subkutane und orthotopen 16 Standorten. Je nach Gewebe und Krankheitsverlauf von Interesse sind, können diese geeignete alternative Ansätze. Für die Studie von Prostata-Krebsentstehung und gutartige hormonelle Wachstumsregulation, wählen wir die NierenkapselStandort für xenografting aufgrund seiner höheren Graft nehmen Rate, reichlich Blutversorgung und die Fähigkeit, eine größere Anzahl von Fremdtransplantaten in einem geschlossenen Ort 16 implantieren. Außerdem hormonelle Manipulation der Wirtsmaus, die in Prostataatrophie Ergebnisse beschränkt die Verwendung von Prostata-orthotope Transplantation 16. Dieses Protokoll beschreibt Techniken der Druck Hormon / Arzneimittelpelletherstellung und chirurgische Implantation sowie Nierenkapsel xenografting der menschlichen Prostata Zell-und Gewebetransplantaten. Zusammen bilden diese Techniken bieten eine empfindliche Assays zu bestimmen, ob eine gentechnisch veränderte Maus ist anfälliger für PRCA und / oder BPH Initiierung als Kontrollstämme. Xenografting ist eine leistungsfähige Technik für die in vivo-Bewertung des Potentials der experimentellen Zellen histologischen und molekularen Eigenschaften von malignen Erkrankungen zu entwickeln, sowie ein Assay für neue Behandlungsstrategien für eine Vielzahl von gutartigen und bösartigen Erkrankungen.

<table><tbody><tr><td>Pelletpresse</td><td>PARR Industries</td><td>2815</td><td>3mm Stanze & Matrizensatz</td></tr><tr><td>Analysenwaage</td><td>Ohaus</td><td>1918302</td><td>Voyager oder anderer</td></tr><tr><td>Bunsenbrenner</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-962Q</td><td></td></tr><tr><td>Präpariermikroskop</td><td>Leica</td><td>L2</td><td></td></tr><tr><td>Deltaphase Pad Kit (aufwärmbares Wachs)</td><td>Braintree Scientific</td><td>39DP</td><td>Alternative zu einem elektrischen Heizkissen</td></tr><tr><td>Hot Bead Sterilisator</td><td>F.S.T.18000-45</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isofluran-Verdampfer</td><td>Supera Anästhesie Innov</td><td>VAP3000</td><td></td></tr><tr><td>Induktionskammer</td><td>Supera Anästhesie Innov</td><td>RES644</td><td></td></tr><tr><td>F/AIR Kanister</td><td>Supera Anästhesie Innov</td><td>80120</td><td></td></tr><tr><td>4-Port-Verteiler</td><td>Supera Anästhesie Innov</td><td>RES536</td><td></td></tr><tr><td>Rückatmungskreise</td><td>Supera Anästhesie Innov</td><td>CIR529</td><td></td></tr><tr><td>Einlass-/Auslassarmaturen</td><td>Supera Anesthesia Innov</td><td>VAP203/4</td><td></td></tr><tr><td>Druckregler / Manometer</td><td>Supera Anästhesie Innov</td><td>OXY508</td><td></td></tr><tr><td>Sauerstoff-Durchflussmesser</td><td>Supera Anästhesie Innov</td><td>OXY660</td><td></td></tr><tr><td>21mm Klarer Schlauch</td><td>Supera Anesthesia Innov</td><td>301-150</td><td></td></tr><tr><td>Kleine Mäuse Nasenkegel</td><td>Supera Anästhesie Innov</td><td>ACC526</td><td></td></tr><tr><td>Steriler OP-Kittel</td><td>Midwest Vet Supply</td><td>350.79866.2</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgische Maske</td><td>Midwest Vet Supply</td><td>350.50111.2</td><td>2-lagig mit Ohrschlaufen</td></tr><tr><td>Sterile Gaze</td><td>Midwest Vet Supply</td><td>001.14100.2</td><td>2 x 2 Zoll</td></tr><tr><td>sterile Handschuhe</td><td>Kimberly Clark</td><td>55092</td><td></td></tr><tr><td>Bouffant</td><td>Midwest Vet Supply</td><td>001.27100.2</td><td></td></tr><tr><td>Wattespitzen-Applikator</td><td>Midwest Vet Supply</td><td>001.06220.2</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgisches Peeling Wash</td><td>Midwest Vet Supply</td><td>733.80010.3</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Felder (gefenstert)</td><td>General Econopak, Inc</td><td>88VCSTF</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">REAGENTS</td></tr><tr><td>Cholesterol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C-3292</td><td></td></tr><tr><td>Testosteron Proprionat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T-1875</td><td></td></tr><tr><td>17&#946;-Estradiol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E-2758</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>Midwest Vet Supply</td><td>193.33161.3</td><td></td></tr><tr><td>Carprofen</td><td>Midwest Vet Supply</td><td>193.70200.3</td><td>Injizierbar (Rimadyl)</td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Webster Veterinary</td><td>07-836-3379</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Kochsalzlösung</td><td>Midwest Vet Versorgung</td><td>193.74504.3</td><td>NaCl 0.9%, Injectable</td></tr><tr><td colspan="4">SURGICAL INSTRUMENTS</td></tr><tr><td>Straight Sharp/Blunt Scissors</td><td>Fine Scientific Tools (F.S.T.)</td><td>14054-13</td><td></td></tr><tr><td>Graefe Zange (gezahnt, gezahnt, gebogen)</td><td>F.S.T.</td><td>11055-10</td><td></td></tr><tr><td>Feine Irisschere</td><td>F.S.T.</td><td>14090-09</td><td></td></tr><tr><td>Graefe Skalpell</td><td>F.S.T.</td><td>10071-12</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 Pinzette</td><td>F.S.T.</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>Glaspasteurpipetten</td><td>Fisher Scientific</td><td>S67050</td> 5<td>"</td></tr><tr><td>Länge Graefe Pinzette (gezahnt, gebogen)</td><td>F.S.T.</td><td>11052-10</td><td></td></tr><tr><td>Graefe Zange (gezahnt, gerade)</td><td>F.S.T.</td><td>11050-10</td><td></td></tr><tr><td>Vicryl Nahtmaterial</td><td>Midwest Vet Supply</td><td>295-92100.2</td><td>4-0, FS-2, Resorbierbarer</td></tr><tr><td>Nadelhalter mit Scherenmechanik</td><td>F.S.T.</td><td></td><td></td>12002012</tr><tr><td>Wundclips</td><td>Braintree Scientific</td><td>ACS CS</td><td>Kann 7mm oder 9mm Clips verwenden</td></tr><tr><td>Reflex Wound Clipper</td><td>F.S.T.</td><td>12031-09</td><td>Entspricht der gewickelten Clipgröße</td></tr><tr><td>Would Clip Remover</td><td>F.S.T.</td><td>12033-00</td><td></td></tr><tr><td>Universal-Sterilisationsbehälter</td><td>F.S.T.</td><td>20810-01</td><td>Jeder autoklavierbare Behälter eignet sich für</td></tr><tr><td>Spritze mit Nadel</td><td>BD</td><td>148292C 1cc</td><td>, 25Gx1</td></tr><tr><td>Ohrmarken-Applikator</td><td>National Band Tag Co.</td><td>1005s1</td><td>Alternative zum Einkerben</td></tr><tr><td>von Kleintieren Ohrmarken</td><td>National Band Tag Co.</td><td>Nr. 1005-1</td><td></td></tr></tbody></table>

nierenkapsel xenografting und subkutane implantation pellet für die beurteilung von prostata-karzinogenese und benigne prostatahyperplasie

Renal Capsule Xenografting and Subcutaneous Pellet Implantation for the Evaluation of Prostate Carcinogenesis and Benign Prostatic Hyperplasia

Neue Therapien für zwei gemeinsame Prostataerkrankungen, Prostata-Krebs (PRCA) und gutartige Prostata-Hyperplasie (BPH), hängen entscheidend von der Bewertung ihrer Experimente hormonellen Regulation. Sex Steroidhormone (vor allem Androgene und Östrogene) sind wichtig, PRCA und BPH, wir sondieren ihre jeweilige Rolle bei der Induktion Wachstum der Prostata und Krebsentstehung bei Mäusen mit Experimenten mit Druckhormon Pellets. Hormon-und / oder Drogen-Pellets sind leicht mit einer Pelletpresse hergestellt und operativ in das subkutane Gewebe der männlichen Maus Wirt implantiert. Wir beschreiben auch ein Protokoll für die Bewertung der hormonellen Karzinogenese durch Kombinieren subkutane Implantation Hormon Pellet mit xenografting Prostatazell Rekombinanten unter die Nierenkapsel von immungeschwächten Mäusen. Darüber hinaus subkutane Implantation Hormon Pellet, in Kombination mit Nierenkapsel xenografting der BPH Gewebe, ist nützlich, um die hormonelle Regulation der gutartigen prost besser zu verstehenaß Wachstum und neue Therapien, die auf Sexualsteroidhormon Wege zu testen.

<html> Abhängig von der Hypothese getestet werden soll, kann die Nierenkapsel xenografting von Gewebe-oder Zell Rekombinanten isoliert oder in Kombination mit subkutaner Implantation Hormon Pellets durchgeführt werden. Eine schematische Darstellung eines hypothetischen Experiment kombiniert Nierenkapsel xenografting Experiment mit subkutanen Implantation Hormon Pellet wird in 1 dargestellt. Eine Vielzahl von pulverförmigen und / oder kristallinen Substanzen bei der Herstellung von Druck Pellets mit dem P...

Wir beschreiben die Herstellung von Druckhormonpellets sowie subkutane chirurgischen Implantation in Mäuse. Diese Strategie kann mit dem Wachstum von Zellen und Geweben Xenotransplantate unter die Nierenkapsel von Nacktmäusen ohne Thymus hormonelle Regulation der Karzinogenese und der gutartigen Prostatawachstum zu beurteilen kombiniert werden.

Nierenkapsel Xenografting und subkutane Implantation Pellet für die Beurteilung von Prostata-Karzinogenese und benigne Prostatahyperplasie

New therapies for two common prostate diseases,  prostate cancer (PrCa) and benign prostatic hyperplasia (BPH), depend  critically on experiments ...

Die in diesem Video dargestellten Techniken sind nützlich für Experimente zur Untersuchung der hormonellen Regulation der Karzinogenese und des gutartigen Wachstums der Prostata. Zunächst werden Stempelpressen verwendet, um Hormonpellets herzustellen, die eine kontinuierliche Applikation ermöglichen. Danach werden Glaspipetten mit abgerundeten Spitzen vorbereitet, nachdem die Niere exponiert wurde.Die Pipettenspitze dient zur Unterstützung beim Einbringen des Transplantats. Anschließend werden die komprimierten Hormonpellets subkutan implantiert. Letztendlich werden Ergebnisse erzielt, die die Wirkung der Hormonbehandlung auf das Wachstum gutartiger Gewebexenotransplantate zeigen.Die in diesem Video vorgestellten Techniken sind einfach durchzuführen und reproduzierbar. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen in der Forschung zu beantworten, beispielsweise wie Hormone in die Umwandlung gutartiger Zellen in maligne Zellen involviert sind sowie wie das gutartige Wachstum der Prostata durch Hormone reguliert wird. Die Implikationen dieser Technik reichen bis hin zu potenziell neuen Therapieansätzen und Präventionsstrategien für die gutartige Prostatahyperplasie und Prostatakarzinom.

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Medizin

In diesem Video demonstrieren wir das Verfahren zur intraprostatischen Injektion von Prostatakrebszellen in ein Mausmodell. Orthotope Mausmodelle können verwendet werden, um die Entstehung der Krankheit und das Ansprechen auf Behandlungstherapien in einer nicht-invasiven und klinisch relevanten Umgebung zu untersuchen.

Intraprostatische Injektion von Krebszellen: Eine Technik zur Verabreichung von Krebszellen zur Etablierung eines orthotopen Prostatakrebs-Mausmodells

In diesem Video demonstrieren wir die Implantation von menschlichen Prostatakrebs-Gewebetransplantaten in die Nierenkapsel einer immungeschwächten Empfängermaus. Diese Technik kann verwendet werden, um die Tumorprogression zu beurteilen und neue therapeutische Strategien zu entwickeln.

Röntgentransplantation von Nierenkapseltumoren: Eine Technik zur Generierung eines experimentellen Tiermodells zur Bewertung der Prostatakarzinogenese

Um MR Krebs molekulare Bildgebung mit einem kleinen Peptid gezielte MRT-Kontrastmittel spezifischen geronnen Plasmaproteine ​​in Tumorstroma in einem Mausmodell zeigen, Prostata-Krebs.

MR Molekulare Bildgebung von Prostatakrebs mit einem kleinen Molecular Targeted CLT1 Peptid-Kontrastmittel

Dieses Modell der orthotopen menschlichen Prostatakrebs ermöglicht die Quantifizierung der Tumorgröße, zirkulierenden Tumorzellen und die Bildung von Metastasen in unterschiedlichen Lungen. Wie Zellen müssen das primäre Organ zu entkommen, in die Blutbahn, und implantieren in einem sekundären Standort dieses Modell effektiv rekapituliert das Szenario in den Menschen.

Ein orthotopen Mausmodell der menschlichen Prostatakrebs-Metastasen

Die etablierte Technik, um primäre invasive orthotopen Blasenkrebs Xenografts impfen erfordert Laparotomie und Mobilisierung der Blase. Dieses Verfahren verursacht eine signifikante Morbidität auf Mäuse, ist technisch anspruchsvoll und zeitaufwendig. Wir haben deshalb eine hohe Präzision, die perkutane Ansatz verwendet Ultraschallkontrolle.

Minimal Invasive Gründung von murinen orthotopen Blasen Xenografts

Dieses Manuskript beschreibt eine Methode, die zur Erzeugung von von Prostatakrebspatienten abgeleiteten Xenotransplantaten (PDXs) aus zirkulierenden Tumorzellen (CTCs) verwendet wird. Die Generierung von PDX-Modellen aus CTCs bietet ein alternatives experimentelles Modell zur Untersuchung von Prostatakrebs; Der am häufigsten diagnostizierte Tumor und eine häufige Todesursache durch Krebs bei Männern.

Generation von Prostatakrebs-Patienten gewonnen Xenograft-Modelle von zirkulierenden Tumorzellen

Prostatakrebs ist die zweithäufigste krebsbedingte Todesursache in den Vereinigten Staaten. Ein orthotopes Krebsmodell bietet einen nützlichen Ansatz, um die Biologie des Prostatakarzinoms zu verstehen und die Wirksamkeit von Therapieschemata zu bewerten. Dieses Protokoll beschreibt detaillierte Schritte, die zur Etablierung eines orthotopen Prostatakrebs-Mausmodells erforderlich sind.

Präklinische Orthotopische Mausmodell der menschlichen Prostata-Krebs

Das Ziel dieses Protokolls ist die Intra-Prostata Injektion von Prostata-Krebszellen, mit anschließenden Kastration zu demonstrieren. Orthotopen präklinische Modellen von Androgen-abhängigen und Kastration-resistenten Prostatakrebs sind entscheidend für die Krankheit im Zusammenhang mit einer klinisch relevanten Tumor Mikroumgebung und einem immunkompetenten Wirt zu studieren.

Eine Fluoreszenz und Biolumineszenz orthotopen Phänomen Mausmodell der Androgen-abhängige und Kastration-resistenten Prostatakrebs

Hier präsentieren wir Ihnen ein Protokoll zur Ultraschall-gesteuerte Injektion von Neuroblastom (NB) und Ewing Sarkom (ES) Zellen zu nutzen (gegründet Zelllinien und Patienten abgeleitet Tumorzellen) an biologisch relevanten Standorten erstellen zuverlässigere präklinische Modellen für Krebs Forschung.

Nutzung von Ultraschall geführte Gewebe gerichtet zellulären Implantation für die Einrichtung der biologisch relevanten metastasiertem Tumor Xenografts

In dieser Arbeit stellen wir ein Protokoll für die intrakardiale Injektion von humanen Prostatakrebszellen vor, um ein Mausmodell mit Knochenmetastasenläsionen zu erzeugen.

Intrakardiale Injektion menschlicher Prostatakrebszellen zur Erzeugung eines Knochenmetastasierungs-Xenograft-Mausmodells

Lernen Sie die Herstellung und subkutane Implantation von Hormonpellets bei Mäusen zur Untersuchung hormoneller Karzinogenese und benignen Prostatawachstums.

Nierenkapsel Xenografting und subkutane Implantation Pellet für die Beurteilung von Prostata-Karzinogenese und benigne Prostatahyperplasie (Video) | JoVE Journal

Nierenkapsel Xenografting und subkutane Implantation Pellet für die Beurteilung von Prostata-Karzinogenese und benigne Prostatahyperplasie

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