Name: Hohe Auflösung Ganze Berge In Situ Hybridisierung innerhalb Zebrafischembryonen Gene Expression und Funktion zu untersuchen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-10-19T18:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 6 s
Description: Lernen Sie die hochauflösende Whole-Mount-In-Situ-Hybridisierung in Zebrafisch-Embryonen zur Untersuchung der Genexpression. Diese Methode ermöglicht die präzise Visualisierung räumlich-zeitlicher Expressionsmuster mit verbesserter Sensitivität.

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<ol><li>Lieschke, G. J., Currie, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+human+disease%3A+zebrafish+swim+into+view%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Genet%22%5BJournal%5D)">Animal models of human disease: zebrafish swim into view.</a> Nat. Rev. Genet. 8, 353-367 (2007).</li>
<li>Wolman, M., Granato, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+genetics+in+larval+zebrafish%3A+learning+from+the+young%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Behavioral genetics in larval zebrafish: learning from the young.</a> Dev. Neurobiol. 72, 366-372 (2010).</li>
<li>Lawson, N. D., Wolfe, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Forward+and+reverse+genetic+approaches+for+the+analysis+of+vertebrate+development+in+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Cell%22%5BJournal%5D)">Forward and reverse genetic approaches for the analysis of vertebrate development in the zebrafish.</a> Dev. Cell. 21, 48-64 (2011).</li>
<li>Arkhipova, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+and+regulation+of+the+hb9%2Fmnx1+beta-cell+progenitor+specific+enhancer+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Characterization and regulation of the hb9/mnx1 beta-cell progenitor specific enhancer in zebrafish.</a> Dev. Biol. 365, 290-302 (2012).</li>
<li>Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn%22%5BJournal%5D)">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Dev. Dyn. 203, 253-310 (1995).</li>
<li>Chitramuthu, B. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+cloning+and+embryonic+expression+of+zebrafish+PCSK5+co-orthologues%3A+functional+assessment+during+lateral+line+development%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn%22%5BJournal%5D)">Molecular cloning and embryonic expression of zebrafish PCSK5 co-orthologues: functional assessment during lateral line development.</a> Dev. Dyn. 239, 2933-2946 (2010).</li>
<li>Liao, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SCL%2FTal-1+transcription+factor+acts+downstream+of+cloche+to+specify+hematopoietic+and+vascular+progenitors+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">SCL/Tal-1 transcription factor acts downstream of cloche to specify hematopoietic and vascular progenitors in zebrafish.</a> Genes Dev. 12, 621-626 (1998).</li>
<li>Stainier, D. Y., Weinstein, B. M., Detrich, H. W. 3rd, Zon, L. I., Fishman, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cloche%2C+an+early+acting+zebrafish+gene%2C+is+required+by+both+the+endothelial+and+hematopoietic+lineages%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Cloche, an early acting zebrafish gene, is required by both the endothelial and hematopoietic lineages.</a> Development. 121, 3141-3150 (1995).</li>
<li>Detrich, H. W. 3rd, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraembryonic+hematopoietic+cell+migration+during+vertebrate+development%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Intraembryonic hematopoietic cell migration during vertebrate development.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 92, 10713-10717 (1995).</li>
<li>Liao, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+gene+cloche+acts+upstream+of+a+flk-1+homologue+to+regulate+endothelial+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The zebrafish gene cloche acts upstream of a flk-1 homologue to regulate endothelial cell differentiation.</a> Development. , 124-381 (1997).</li>
<li>Krauss, S., Concordet, J. P., Ingham, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+functionally+conserved+homolog+of+the+Drosophila+segment+polarity+gene+hh+is+expressed+in+tissues+with+polarizing+activity+in+zebrafish+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A functionally conserved homolog of the Drosophila segment polarity gene hh is expressed in tissues with polarizing activity in zebrafish embryos.</a> Cell. 75, 1431-1444 (1993).</li>
<li>Akimenko, M. A., Ekker, M., Wegner, J., Lin, W., Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combinatorial+expression+of+three+zebrafish+genes+related+to+distal-less%3A+part+of+a+homeobox+gene+code+for+the+head%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Combinatorial expression of three zebrafish genes related to distal-less: part of a homeobox gene code for the head.</a> J. Neurosci. 14, 3475-3486 (1994).</li>
<li>Alexander, J., Rothenberg, M., Henry, G. L., Stainier, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((casanova+plays+an+early+and+essential+role+in+endoderm+formation+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">casanova plays an early and essential role in endoderm formation in zebrafish.</a> Dev. Biol. 215, 343-357 (1999).</li>
<li>Milewski, W. M., Duguay, S. J., Chan, S. J., Steiner, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conservation+of+PDX-1+structure%2C+function%2C+and+expression+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Conservation of PDX-1 structure, function, and expression in zebrafish.</a> Endocrinology. 139, 1440-1449 (1998).</li>
<li>Argenton, F., Walker, M. D., Colombo, L., Bortolussi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+characterization+of+the+trout+insulin+promoter%3A+implications+for+fish+as+a+favorable+model+of+pancreas+development%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">Functional characterization of the trout insulin promoter: implications for fish as a favorable model of pancreas development.</a> FEBS Lett. 407, 191-196 (1997).</li>
<li>Biemar, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreas+development+in+zebrafish%3A+early+dispersed+appearance+of+endocrine+hormone+expressing+cells+and+their+convergence+to+form+the+definitive+islet%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Pancreas development in zebrafish: early dispersed appearance of endocrine hormone expressing cells and their convergence to form the definitive islet.</a> Dev. Biol. 230, 189-203 (2001).</li>
<li>Thisse, C., Thisse, B., Schilling, T. F., Postlethwait, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+of+the+zebrafish+snail1+gene+and+its+expression+in+wild-type%2C+spadetail+and+no+tail+mutant+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Structure of the zebrafish snail1 gene and its expression in wild-type, spadetail and no tail mutant embryos.</a> Development. 119, 1203-1215 (1993).</li>
<li>Cadieux, B., Chitramuthu, B. P., Baranowski, D., Bennett, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+progranulin+gene+family+and+antisense+transcripts%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">The zebrafish progranulin gene family and antisense transcripts.</a> BMC Genomics. 6, 156(2005).</li>
<li>Chitramuthu, B. P., Bennett, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+zebrafish+and+knockdown+technology+to+define+proprotein+convertase+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Use of zebrafish and knockdown technology to define proprotein convertase activity.</a> Methods Mol. Biol. 768, 273-296 (2011).</li>
<li>Thisse, C., Thisse, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+resolution+in+situ+hybridization+on+whole-mount+zebrafish+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">High resolution in situ hybridization on whole-mount zebrafish embryo.</a> Nat. Protoc. 3, 59-69 (2008).</li>
</ol>

Die Autoren erklären, dass sie keine finanziellen Interessen haben.

Wir haben Methoden entwickelt, um eine verbesserte RNA mit hoher Auflösung sichtbar zu machen. Die in-situ-Hybridisierung Verfahren werden mit einfachen maßgeschneiderte Körbe mit porösen Böden (Abbildung 1). Die Embryonen werden unter Verwendung RNase-freien Lösungen in 6-Well-Platten bei Raumtemperatur unter sterilen Bedingungen. Zu trennen Embryonen Körbe sind aus verschiedenen farbigen Eppendorf-Röhrchen gemacht. Körbe mit oder ohne Rand sind für eine einfache O...

Der Zebrafisch (Danio rerio) als leistungsfähige Tiermodell für die Untersuchung der Entwicklung von Wirbeltieren, Krankheiten, Verhalten entstanden, und in-Wirkstoff-Screening 1-3. Zebrafisch-Embryonen können in großer Zahl aus einer einzigen Kreuzung erreicht werden. Befruchtung und Entwicklung tritt ex utero und die optisch klar Embryonen schnell zu entwickeln. Critical Entwicklungsstörungen Ereignissen während der ersten 48 Stunden nach der Befruchtung (hpf). Dazu gehören das Auftreten von Organprimordien und die Einleitung cytodifferentiation. Knockdown oder Überexpression von Proteinen durch die Mikroinjektion von Embryonen mit Antisense-Morpholino (MO) Oligonukleotiden oder mRNA, die jeweils an der einen oder zwei Zell-Stadium (0,75 HPF). Der Wunsch Zebrafischembryonen erleichtert die Untersuchung der räumlich-zeitliche Expression spezifischer Gene von Interesse. Anwendung des Wunsches Technik nach Mikroinjektion von Embryonen mit mRNA oder MO über-express oder Knockdown spezifische Protein-Ebene zeigt differentielle Regulation anderer Gene. Veränderungen in der Genexpression Muster können mit phänotypische Veränderungen korreliert werden und zeigen die Funktion der Zielgene während der frühen Organogenese. Seit Sonden hergestellt und gelagert werden im Voraus, können die ISH-Technik angewendet, um die Genexpression Muster für mindestens 20 Gene zeigen in einer Zeit mit Sechs-Well-Platten und maßgefertigt Körbe werden.

<table><tbody><tr><td>Taq Polymerase</td><td>Invitrogen</td><td>10342053</td><td></td></tr><tr><td>TopoTA Klonierungskit - Dualer Promotor pCRII-TOPO</td><td>Invitrogen</td><td>K4650-01</td><td></td></tr><tr><td>HQ Mini-Plasmid-Aufreinigungskit</td><td>Invitrogen</td><td>K2100-01</td><td></td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Roche</td><td>11 685 660 001</td><td></td></tr><tr><td>Not1 und HindIII Restriktionsenzyme</td><td>Invitrogen</td><td>15441-025, 15207-012</td><td></td></tr><tr><td>Puffer Gesättigtes Phenol, ultrareines</td><td>Invitrogen</td><td>15513039</td> Bei <td>4 & C lagern. Augen-, Haut- und Atemwegsreizend und im Verdacht auf Karzinogen. Bei der Handhabung ist Vorsicht geboten.</td></tr><tr><td>Chloroform</td><td>Fisher</td><td>C607-1</td><td>Giftig und im Verdacht stehend, krebserregend zu sein. Arbeiten Sie unter Abzug.</td></tr><tr><td>RNase-freie DNAse I</td><td>Roche</td><td>4716728001</td><td>Kleine Aliquoten vorbereiten und bei -20°C lagern.</td></tr><tr><td>DIG-RNA-Markierungsmischung mit Sp6-, T7- und T3-RNA-Polymerase</td><td>Roche</td><td>11277073910</td><td></td></tr><tr><td>RNase-Inhibitor</td><td>Roche</td><td>10777-019</td><td></td></tr><tr><td>3,0 M Natriumacetat (pH 5,5)</td><td>Fisher</td><td>50-751-7355</td><td></td></tr><tr><td>100 % Ethanol</td><td>Kommerzielle Alkohole</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Diethylpyrocarbonat (DEPC)</td><td>Sigma</td><td>40718-25ML</td><td>DEPC ist ein Reizmittel für Augen, Haut und Atemwege. Vermeiden Sie den Kontakt mit Haut und Augen. Verwenden Sie eine Schutzbrille, Handschuhe und eine Maske.</td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Fisher</td><td>SS255-1</td><td></td></tr><tr><td>EDTA 0,5 M (pH 8,0)</td><td>Fisher</td><td>50-751-7404</td><td></td></tr><tr><td>Instant Ocean Salt</td><td>Aquarium Systems</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS)</td><td>Fisher</td><td>FL-03-0900</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyd (PFA)</td><td>Sigma</td><td>P6148-1KG</td><td>Vorbereiten und lagern bei -20°; C als 40 ml Aliquots für die spätere Verwendung. PFA ist giftig. Verwenden Sie eine Schutzbrille, Handschuhe und eine Staubmaske.</td></tr><tr><td>Phenylthiocarbomid (PTC)</td><td>Sigma</td><td>P7629-25G</td><td>PTC ist hochgiftig. Verwenden Sie eine Schutzbrille, Handschuhe und eine Staubmaske.</td></tr><tr><td>Methanol</td><td>Fisher</td><td>A947-4</td><td></td></tr><tr><td>Dumont (Uhrmacher) s) Pinzettenmuster Nr. 5</td><td>Fine Science Tools</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Six-Well-Zellkulturcluster</td><td>Sarstedt</td><td>83.1839</td><td></td></tr><tr><td>Körbe aus Nylonnetz und Eppendorf-Röhrchen</td><td>Hauseigene Vorbereitung</td><td></td><td>Zur Herstellung der Körbe Eppendorf-Röhrchen (1,5 ml) mit oder ohne Rand schneiden, um das konische Ende zu entfernen. Nylonnetz in kleine Stücke schneiden, die der Größe von&nbsp; die abgeschnittenen Enden der Eppendorf-Rohre. Platzieren Sie die Schläuche mit dem Nylonnetz, das das abgeschnittene Ende bedeckt, auf einer elektrischen Leitung. Heizen Sie die Platte, bis sowohl der Schlauch als auch das Nylonnetz zusammenkleben (im Abzug durchführen). Schneiden Sie das überschüssige Netz von den Körben ab und lagern Sie sie bis zur Verwendung in 100% Methanol.</td></tr><tr><td>Polyoxyethylenorbitan-Monolaurat (Tween 20)</td><td>Sigma</td><td>P1379-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Proteinase K</td><td>Fermentas</td><td>EO0491</td><td></td></tr><tr><td>Essigsäureanhydrid</td><td>Sigma</td><td>242845</td><td></td></tr><tr><td>Triethanolamin</td><td>Sigma</td><td>90279-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Formamid, hochreine Qualität</td><td>Sigma</td><td>F9037</td><td></td></tr><tr><td>AG501-X8 Harz</td><td>Bio Rad</td><td>142-6424</td><td></td></tr><tr><td>Zitronensäure-Monohydrat</td><td>Sigma</td><td>C0706-500G</td><td></td></tr><tr><td>Heparin-Natriumsalz</td><td>Sigma</td><td>H3393-25KU</td><td></td></tr><tr><td>Kochsalz-Natriumcitrat-Puffer (SSC)</td><td>Sigma</td><td>S6639</td><td></td></tr><tr><td>tRNA aus Backhefe Typ X</td><td>Sigma</td><td>R5636-1ML</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Fisher</td><td>S640-500</td><td></td></tr><tr><td>Tris-HCl</td><td>Fisher</td><td>BP153-1</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2</td><td>Fisher</td><td>S25403</td><td></td></tr><tr><td>Levamisolhydrochlorid</td><td>Sigma</td><td>31742</td><td></td></tr><tr><td>N,N-Dimethylformamid wasserfrei (DMF)</td><td>Sigma</td><td>227056</td><td>Reizend, giftig, brennbar und mutmaßlich teratogen. Greifen Sie mit der richtigen Sicherheitskleidung wie Handschuhen und Schutzbrille.</td></tr><tr><td>5-Brom-4-chlor-3-indolylphosphat (BCIP)</td><td>Sigma</td><td>N6639</td><td>Schützen Sie diese Lösung vor Licht.</td></tr><tr><td>Nitroblue tetrazolium (NBT)</td><td>Sigma</td><td>840W</td><td>Schützen Sie diese Lösung vor Licht.</td></tr><tr><td>Albumin aus Rinderserum, gereinigte Fraktion V (BSA)</td><td>Sigma</td><td>A8806</td><td></td></tr><tr><td>Schafe Anti-Digoxigenin-AP Fab Fragmente Roche</td><td></td><td>1093274910</td><td></td></tr><tr><td>Glycerin</td><td>Sigma</td><td>G5516-500ML</td><td></td></tr><tr><td>96-Well-Zellkulturplatten</td><td>Sarstedt</td><td>83.1835</td><td></td></tr><tr><td>Tg(mnx1:GFP)ml2/Tg(hb9:GFP)ml2</td><td>ZIRC</td><td>Tg(mnx1:GFP)ml2</td><td></td></tr><tr><td>Instant Ocean</td><td>Aquarium Systeme</td><td>N/A</td><td></td></tr></tbody></table>

hohe auflösung ganze berge<em&gt; in situ</em&gt; hybridisierung innerhalb zebrafischembryonen gene expression und funktion zu untersuchen

High Resolution Whole Mount In Situ Hybridization within Zebrafish Embryos to Study Gene Expression and Function

Dieser Artikel konzentriert sich auf whole-mount in situ Hybridisierung (WISH) von Zebrafisch Embryonen. Der Wunsch-Technologie erleichtert die Beurteilung der Genexpression sowohl in Bezug auf Verteilung im Gewebe und Entwicklungsstadium. Protokolle sind für die Nutzung der Wunsch Zebrafischembryonen Verwendung von Antisense-RNA-Sonden mit Digoxigenin beschrieben. Die Sonden werden durch den Einbau von Digoxigenin-linked Nukleotide durch in vitro-Transkription von Gen-Vorlagen, die geklont wurden und linearisiert generiert. Die Chorions von Embryonen in bestimmten Entwicklungsstadien geerntet werden, bevor die Inkubation mit spezifischen Sonden entfernt. Nach einem Waschvorgang, überschüssige Sonde zu entfernen, werden Embryonen mit anti-Digoxigenin-Antikörper, konjugiert mit alkalischer Phosphatase inkubiert. Durch die Verwendung eines chromogenen Substrat für alkalische Phosphatase kann Genexpression zu beurteilen. Abhängig von der Höhe der Genexpression das gesamte Verfahren kann innerhalb 2-3 Tagen abgeschlossen sein.

Verwendung des Protokolls mit 50 Embryos pro Korb (pro Gen / pro experimentellen Bedingungen) die Expression dieses Gens in einem Experiment erreicht werden kann. Fast alle Embryonen zeigen ähnliche Expressionsmuster für ein bestimmtes Gen. Repräsentative Beispiele für die in-situ-Hybridisierung Färbung sind in den Figuren 3-6 gezeigt. Sowohl der Sinn und anti-sense Ribosonden wurden aus den entsprechenden cDNAs PC5.1, PC5.2 6, 7 SCL/tal-1, GATA-1 8,...

Der Zebrafisch, einem kleinen tropischen Fischen, hat sich zu einem beliebten Modell zum Studium der Genfunktion während Wirbeltiere Entwicklung und Krankheit. Die zeitliche und räumliche Expression von Zielgenen kann bestimmt werden durch<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisierung. Unsere verbesserte Protokoll erlaubt den Nachweis von niedrigen reichlich Transkripte mit geringen unspezifischen Hintergrund Signal.

Hohe Auflösung Ganze Berge<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisierung innerhalb Zebrafischembryonen Gene Expression und Funktion zu untersuchen

This article focuses on whole-mount in situ hybridization (WISH) of zebrafish embryos. The WISH technology facilitates the assessment of gene expression ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, die räumlich-zeitliche Expression spezifischer Gene von Interesse in stadienartigen Zebrafischembryonen zu bewerten. Dies wird erreicht, indem zunächst CD-NA-Sonden erzeugt werden, indem Digo-Sauerstoff in verknüpfte Nukleotide mittels In-vitro-Transkription eingebaut wird. Anschließend werden die Embryonen in definierten Entwicklungsstadien entnommen.Die Hornhaut wird entnommen und die Embryonen werden in Methanol bei minus 20 Grad Celsius gelagert. Nach der Verdauung und nach der Fixierung werden die Embryonen mit den entsprechenden Sonden hybridisiert. Schließlich werden die Embryonen mit dem Antide-Gen und Antikörpern gefärbt und das Signal mit Substraten für die alkalische Phosphatase entwickelt.Letztendlich können Ergebnisse erzielt werden, die die Gewebeverteilung der Genexpression in einem bestimmten Entwicklungsstadium durch Whole Mount in situ Hybridisierung und Bildgebung zeigen. Obwohl diese Methode viel bessere Einblicke in die normale Expression des Zielgens liefern kann, kann sie auch auf andere Erkrankungen angewendet werden, wie z. B. die Expression von Zielgenen im Krankheitsmodell und wenn andere Gene über- oder un

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Whole mount in situ Hybridisierung ist eine der am häufigsten verwendeten Techniken in der Entwicklungsbiologie. Hier präsentieren wir ein hochauflösendes Doppel-Fluoreszenz-in situ-Hybridisierung Protokoll zur Analyse der genauen Expressionsmuster eines einzelnen Gens und zur Bestimmung der Überlappung der Ausdruck Domains von zwei Genen. Wir gehören eine Propidiumiodid nukleare Gegenfärbung des Gewebes Organisation hervorzuheben.

Zebrafisch Whole Mount High-Resolution Doppel Fluorescent In-situ Hybridisierung

Mit Whole Berg In situ Hybridisierung zu Molecular Biology und Organismal Link-

Eine schnelle Weg zur Immunfärbung von Zebrafisch-Embryonen Herzen Verhalten beschrieben wird. Im Vergleich zu der ganze Berg Immunfärbung Ansatz, diese Methode drastisch erhöht die Penetration der Antikörper, die die Erzielung einer hohen Auflösung, dass zelluläre / subzelluläre Strukturen offenbaren sich im Herzen innerhalb von einer deutlich reduzierten Bearbeitungszeit ermöglicht.

Immunfärbung von Dissected Zebrafisch embryonale Herz

Hier beschrieben ist ein Protokoll zur halbautomatischen Bilderzeugungsgewebespezifischer Fluoreszenz in Zebrafischembryos.

Semi-Automated Imaging von Gewebespezifische Fluoreszenz-in Zebrafischembryonen

Die Zebrafischembryo ist ein hervorragendes Modell für Entwicklungsbiologie Forschung. Während der Embryogenese entwickeln Zebrafisch mit einem Dottermasse, die dreidimensionale Herausforderungen für die Proben Beobachtung und Analyse präsentiert. Dieses Protokoll beschreibt, wie man zweidimensionale Flachmontage Zubereitungen der ganze Berg in situ (WISH) gefärbt Zebrafischembryo Proben erstellen.

Wohnung Berge Vorbereitung für Beobachtung und Analyse der Zebrafisch-Embryo Proben von Bunt Ganze Berge<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisierung

Es sind Techniken beschrieben Phospho-Epitope in ganz Zebrafischembryonen zu Immunfärbung und dann leiten zweifarbige Leuchtstoff konfokalen Lokalisierung in zellularen Strukturen so klein wie primäre Zilien. Die Techniken zur Fixierung und Bildgebung können die Position und die Kinetik des Erscheinens oder Aktivierung spezifischer Proteine ​​definieren.

Immunfärbung Phospho-Epitope in Ciliated Organe Ganze Berge Zebrafischembryonen

Zilien Entwicklung ist wichtig, richtige Organogenese. Dieses Protokoll beschreibt eine optimierte Methode zum Beschriften und ciliated Zellen der Zebrafisch zu visualisieren.

Visualisierung von Multiciliated Zellen in der Zebrabärbling durch ein kombiniertes Protokoll der ganze Berg Leuchtstofflampen In Situ Hybridisierung und Immunfluoreszenz

Dieses Protokoll demonstriert sequenzielle Immunfluoreszenz und Immunhistochemie an Kryosektionen von Zebrafischembryonen im Frühstadium, die präzise Kolokalisierungsanalysen in bestimmten Zellpopulationen ermöglichen.

Sequenzielle Immunfluoreszenz und Immunhistochemie an kryosektionierten Zebrafisch-Embryonen

Dieser Artikel beschreibt eine Methode zur Montage zerbrechlicher Zebrafischembryonen für eine längere konfokale Zeitraffermikroskopie. Diese kostengünstige Methode ist einfach mit normalen Glasbodenmikroskopie-Geschirr für die Bildgebung auf jedem invertierten Mikroskop durchzuführen. Die Montage erfolgt in Agaroseschichten in unterschiedlichen Konzentrationen.

Eine geschichtete Montagemethode für die verlängerte Zeitraffer-Konfokalmikroskopie ganzer Zebrafisch-Embryonen

Hier stellen wir ein Protokoll zum fluoreszierenden Antikörper-vermittelten Nachweis von Proteinen in ganzen Präparaten von Zebrafischembryonen und Larven vor.

Ganzer Berg Immunhistochemie in Zebrafisch Embryonen und Larven

Dieses Protokoll beschreibt, wie Bilder durch die Kombination von In-situ-Hybridisierung und Immunhistochemie von Zebrafisch-Embryonalschnitten erhalten werden können. Vor der Kryosektion wurde eine In-situ-Hybridisierung durchgeführt, gefolgt von einer Antikörperfärbung. Es ist nützlich, die Expressionsmuster zweier Gene im Zebrafisch nachzuweisen, wenn ein Mangel an Antikörpern vorliegt.

In situ Hybridisierung kombiniert mit Immunhistochemie in kryogeschnittenen Zebrafischembryonen

Lernen Sie die hochauflösende Whole-Mount-In-Situ-Hybridisierung in Zebrafisch-Embryonen zur Untersuchung der Genexpression. Diese Methode ermöglicht die präzise Visualisierung räumlich-zeitlicher Expressionsmuster mit verbesserter Sensitivität.

Hohe Auflösung Ganze Berge

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