Tibialisnerv Durchtrennung - ein standardisiertes Modell für Denervation-induzierte Skelettmuskelatrophie in Mice

Das übergeordnete Ziel dieses Videos ist es, das Modell der Durchtrennung des Nervus tibialis bei Mäusen bei Mäusen zu demonstrieren. Dies wird erreicht, indem der Ischiasnerv und seine drei Äste, der Nervus tibialis, der Nervus syl und der Nervus peroneus, isoliert werden. Nach der Isolierung wird der Nervus tibialis durchtrennt.

Nach der Denervierung wird die Wunde verschlossen und der Zustand des Tieres engmaschig überwacht. Letztendlich werden Proben gewonnen, die eine fortschreitende Abnahme der Muskelmasse nach der Denervierung zeigen. Das Tibianerv-Durchtrennungsmodell der Denervierungs-induzierten Skelettmuskelatrophie wird häufig in einem gut validierten Modell bei Ratten eingesetzt, und es hat eine viel geringere Morbidität als die mit der Durchtrennung des Ischiasnervs.

Wir haben dieses Modell für den Einsatz an Mäusen adaptiert, was wir hier demonstrieren werden. Dies ermöglicht es dem Forscher, die Existenz von gentechnisch veränderten Mäusen zu nutzen und den Prozess der Muskelatrophie in Abwesenheit von Proteinen zu untersuchen, die für die Regulierung der Skelettmuskelmasse entscheidend sind, während sie bei den Tieren eine minimale Morbidität hervorrufen. Erfassen Sie zunächst das Gewicht der Maus nach Bestätigung der adäquaten Anästhesie durch Zehenkneifen, identifizieren Sie die Ischiaskerbe durch Abtasten und rasieren Sie den seitlichen Oberschenkel und das Gesäß von dort bis zum Knie.

Reinigen Sie anschließend den Bereich mit wiederholten Anwendungen von Alkohol und Projod. Legen Sie die Maus mit sterilen Handschuhen auf die Seite unter ein Operations- oder Präpariermikroskop. Identifiziere die Ischiaskerbe durch Abtasten.

Schnitten Sie die Haut des seitlichen Oberschenkels von der Ischiaskerbe bis zum Knie ein. Verteilen Sie die Haut sanft offen. Identifizieren Sie mit einer feinen Schere den Musculus biceps femoris, d. h. den flachen oberflächlichen Muskel des seitlichen Oberschenkels unmittelbar unter der Haut.

Spalte den Musculus biceps femoris entlang der Muskelfasern und setze einen Federhaken ein. Um den Ischiasnerv und seine Äste freizulegen, identifizieren Sie den Ischiasnerv unmittelbar unterhalb des Musculus biceps femoris. Er ist an seiner charakteristischen glänzenden weißen Farbe zu erkennen und hat einen Durchmesser von etwa 0,8 Millimetern.

Sie verläuft von der Ischiaskerbe bis zum Knie und verzweigt sich in den Nervus tibia, peroneus und sal auf Höhe der Kniekehle. Trennen Sie die Äste des Schienbeins vorsichtig mit einer ultrafeinen Pinzette und einer Feder-Mikropräparierschere von den Ästen des Peroneus- und des Salnervs. Der Nervus tibialis ist der größte Ast und liegt in der Regel in der Mitte.

Ein schonender Umgang mit dem Ischiasnerv und seinen Ästen ist essentiell für den Erfolg dieses Eingriffs. Achten Sie darauf, dass die Äste des Nervus sal und des Nervus perineus nicht beschädigt oder gedehnt werden. Sollten diese Äste beschädigt oder gedehnt werden, wird dies auch ihre Ziele vernichten.

Wenn Sie den Nerv mit der ultrafeinen Pinzette nur auf der äußeren Adventitialschicht halten und den Nerv locker halten, werden Nervenquetschungen und Traktionsverletzungen für eine vorübergehende Denervation vermieden. Bei erwarteter vollständiger Regeneration in zwei bis vier Wochen zerquetschen Sie den Tibianerv mit einer ultrafeinen Pinzette für 15 Sekunden für eine vollständige und dauerhafte Denervierung. Schneiden Sie den Nervus tibialis mit der Mikros-Präparierschere so distal wie möglich ab. Sorgfältige Vermeidung der Kniekehlengefäße, wenn eine vollständige Denervierung erforderlich ist.

Nähen Sie das Ende des durchtrennten Nervus tibialis mit 10 T Nylon an die vordere Oberfläche des Musculus biceps femoris und nähern Sie sich dem Bizeps femoris mit fünf T Vicryl, um eine abberante Reation der Musculus gastros und des Musculus soleus zu verhindern. Sobald die Denervierung abgeschlossen ist, verschließen Sie die Haut mit einer laufenden Fünf-Liter-Vicryl-Naht. Wenn Sie bereit sind, schalten Sie das Inhalationsanästhetikum aus, aber halten Sie den Sauerstofffluss aufrecht.

Nachdem Sie ein Analgetikum einzeln verabreicht haben, halten Sie die Maus in einem warmen, sauberen Käfig ohne Einstreu. Halten Sie die Maus unter direkter Beobachtung, bis sie gehfähig ist. Wenn die Maus vollständig wiederhergestellt ist, bringen Sie sie in einen sauberen, festen Bodenkäfig mit reichlich weicher Einstreu.

Untersuchen Sie die operative Extremität und den Fuß täglich auf die Entwicklung von Dekubitus, Fersengeschwüren oder Anzeichen von Kauen, kleinere Probleme können mit topischen Antibiotika oder Antiseptika wie Odin behandelt werden. Endpunktindikatoren, die eine Euthanasie des Tieres erfordern, sind Gewichtsverlust, Hinweise auf schlechte Selbstfürsorge und gebeugte Körperhaltung. Darüber hinaus sollten auch Tiere mit Wundstörungen oder Geschwüren, die sie mit ein- bis zweiwöchiger Wundversorgung nicht heilen, getötet werden.

Darüber hinaus werden alle Tiere, die übermäßige Schmerzen haben Zum postoperativen Zeitpunkt wird das gewünschte Gewebe zur Analyse entnommen. Nach der Euthanasie wird die mediale Seite sowohl des operativen als auch des kontralateralen Kontrollbeins rasiert und unter einem Präpariermikroskop mit Alkohol gereinigt, die mediale Wadenhaut mit einem Skalpell vom Knöchel bis zum Knie und umlaufend um den Knöchel an der operierten Extremität eingeschnitten. Ziehen Sie dann die Haut vorsichtig vom Muskel weg und proximal in Richtung Oberschenkel.

Um alle Muskeln des Beins freizulegen, identifizieren Sie den Gastro-Muskel, d. h. den Wadenmuskel, der vom Knie bis zum Knöchel an der hinteren Seite des Beins verläuft. Als nächstes lokalisieren Sie den distalen Ansatz des Musculus biceps femoris proximal des Musculus gastro auf der medialen Seite des Knies. An seiner distalen Insertion erscheint der Bizeps femoris dünn und filmig und liegt mit einer Schere und einer stumpfen Enddissektion über dem proximalsten Teil des Gastros.

Trennen Sie vorsichtig den distalen Ansatz des Bizeps femoris vom Musculus gastros. Fügt man seinen distalen Ansatz in den Fersenbein hinzu, verjüngt sich der Musculus gastros in die Achillessehne. Identifizieren Sie die Achillessehne, die weiß und sehnig erscheint.

Halten Sie die Achillessehne mit einer Pinzette. Achten Sie darauf, den Magenmuskel nicht zu halten oder zu quetschen und die Achillessehne vom Fersenbeinansatz zu trennen. Heben Sie mit einer Schere, die die Sehne noch hält, den blassroten Gastro-Muskel sanft vom tieferen roten Soleus vom distalen Ansatz in Richtung seines Ursprungs am Knie an, und zwar mit sehr sanftem Zug.

Um den Prozess zu erleichtern, trennen Sie den Gastro vom Bein, indem Sie den Ursprung des Magens von den medialen und lateralen Femurkondylen trennen. Mit einer Schere. Achte darauf, dass du den Muskel nicht zerquetschst.

Der Soleus wird nun unmittelbar unter dem Anblick der Gastros deutlich sichtbar sein. Heben Sie den Sous von seinem Ansatz an der Achillessehne bis zu seinem Ursprung an der hinteren Wade. Nach der Entnahme wiegen Sie die Muskeln separat auf einer Präzisionswaage

Als nächstes teilen Sie die Muskeln vertikal auf, zur Hälfte für das Einfrieren und den flüssigen Stickstoff und zur Hälfte für die Histologie. Wiederholen Sie abschließend diese Verfahren auf der unbewerteten Kontrollseite, um die Gastro- und Soleus-Muskeln zu kontrollieren. Gastro-Muskeln wurden nach einer, zwei oder vier Wochen aus denervierten und kontralateralen Kontrollhintergliedmaßen entnommen und als Verhältnis ausgedrückt.

Die Denervierung führte im Laufe der Zeit zu einem fortschreitenden Verlust von Muskelmasse. Die Querschnittsfläche der Myofasern wurde nach Immunfärbung gemessen, wie hier zu sehen. Schnell zuckende Fasern vom Typ zwei färben braun und langsam zuckende Fasern vom Typ eins, färben weiße Fasern vom Typ zwei schnell.

Twitch-Fasern zeigten eine fortschreitende Abnahme der Querschnittsfläche im denervierten Muskel. Über vier Wochen Nach dem Ansehen dieses Videos sollten Sie in der Lage sein, die Durchtrennung des Nervus tibialis bei Mäusen durchzuführen. Dies bietet ein reproduzierbares, robustes und gut validiertes Modell der Denervierungs-induzierten Skelettmuskelatrophie.