Name: Pharmakologische Induktion der epidermalen Melanin und Schutz vor Sonnenbrand in einem humanisierten Mausmodell (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-09-07T16:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 37 s
Description: Erfahren Sie, wie Forskolin die epidermale Melaninproduktion in einem humanisierten Mausmodell induziert und vor UV-induzierter Entzündung schützt. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung pharmakologischer Bräunungsstrategien.

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Die Autoren möchten Malinda Spry für die technische Unterstützung danken. Wir haben auch aktuelle und frühere Finanzierungsquellen zu bestätigen: das National Cancer Institute (R01 CA131075, R01 CA131075-02S1), der Wendy Will Fall Cancer Research Fund, der Markey Cancer Foundation, die Kinder-Wunder-Netz und die Jennifer und David Dickens Melanoma Research Foundation.

1. Herstellung von Forskolin für die topische Verabreichung von einem Rohöl-Wurzel-Extrakt der Plectranthus barbatus (Cohleus forskohlii) Pflanzen <ol><li> Protokolle für Maus-Experimente folgten die Leitlinien für ethisches Verhalten in der Pflege und Verwendung von Tieren und wurden von der Institutional Animal Care und Verwenden Ausschuss an der Universität von Kentucky (Protokoll # 00768M2004) zugelassen. Der Wurzelextrakt wird bei 40% Gewicht / Volumen in einem Standard dermatologische Grund 70% Ethanol, 30% Propylenglykol. </li><li> Wiegen Sie 200 g rohe Forskolin-Wurzel-Extrakt und übertragen sie in ein Becherglas. Zu 500 ml einer 40% (w / v) Lösung zu resuspendieren 200 g rohes Forskolin Wurzelextrakt durch Zugabe meisten, aber nicht das gesamte Volumen des Fahrzeugs (70% Ethanol, 30% Propylenglykol) und bringen die Lösung etwa 450 ml. </li><li> Rühre eine Stunde bei Raumtemperatur. Die Lösung wird etwas viskos sein und manuellen Rühren auf &quot;Lift&quot; der Extrakt in Lösung vor erforderlichder Rührstab in der Lage ist, zu übernehmen. </li><li> Nach einer Stunde Rühren wurde die Mischung in einen Meßzylinder und bringe das Volumen auf 500 ml mit Fahrzeug, das verwendet wurde, um &quot;ausspülen&quot; Becherglas, das verwendet wurde, um die Aufschlämmung zu rühren (zu Rückgewinnung von Forskolin aus dem Becherglas zu maximieren) . </li><li> Übertragen der Aufschlämmung auf 50 ml Zentrifugenröhrchen aus Polypropylen. Zentrifuge (1.500 g, Raumtemperatur, 15 min) mit einer Tischzentrifuge. An diesem Punkt wird das unlösliche Material ziemlich verdichtet werden, so dass der Überstand leicht abgegossen werden. </li><li> Die Lösung wird durch ein 0,22 um-Celluloseacetat-Membran, um restliches unlösliches Material aus dem Extrakt zu entfernen. Wir verwenden eine Flaschenaufsatz-System für die Zellkultur entwickelt, zusammen mit der Verwendung von Pre-Filter, die mit dem Gerät kommen, um ein vorzeitiges Verstopfen der Membran von unlöslichen Bestandteilen des Wurzelextrakt zu verhindern. Bei der Herstellung großer Mengen des Extraktes, das Filter etwa 100 ml in einer Zeit, die Änderung der Vorfilter Wetteschen jedes zusätzliche Volumen. </li><li> Wenn sie bei Raumtemperatur gelagert, der Extrakt hält biologische Aktivität für bis zu einem Jahr. </li></ol> 2. Vorbereitung der C57Bl / 6 K14-SCF-Mäuse für topische Behandlungen <ol><li> Entfernen dorsale Fell von den Tieren durch elektrische Scheren. Kurz gesagt, die Tiere zu betäuben mit inhalativen Isofluran Scher von Rückenfell mit Elektroschere mit einer 0,25 mm chirurgischen Vorbereitungs Kopf (Fisher Scientific) ausgestattet erleichtern. Vorzugsweise jeweils nur eine Art der Anästhesie (zB Ketamin / Xylazin) um das Risiko von Narkosedosis zu minimieren. Die gesättigte Inhalationskammer Berufsrisiko trägt, wenn sie außerhalb einer Abzugshaube verwendet und liefert unbekannten Mengen von Narkose zu Tieren. Idealerweise ein Präzisions Verdampfer verwendet werden. </li><li> Um Resthaarstoppeln zu entfernen, die Pflege der Tiere mit einem chemischen Enthaarungscremes. Anästhesie verabreichen, um das Tier mit einer ip Injektion von Ketamin 40 mg / kg Xylazin und 4 mg / kg </li&gt; <li> Sobald die Tiere angemessen (wie von Zehe Prise beurteilt) anästhesiert, gelten eine Fingerspitze große Menge Enthaarungscreme zu scherRückenHaut mit einem behandschuhten Finger. Reiben Sie die Creme in die Haut für 30-60 Sekunden oder bis Haare deutlich in der Creme zu sehen, wie es wird, bewegt werden. Lassen Sie die Creme auf die nur für die Mindestzeit für die Haarentfernung erforderlich, da bei längerer Exposition führt zu chemischen Verbrennungen der Haut, der Epidermis Zusammenbruch und Tod aus dem Verlust der epidermalen Integrität. </li><li> Wischen Sie die Rückenhaut mit Wasser getränkten Gaze-Pads wiederholt, bis alle Creme entfernt wurde. Trocken Tiere mit weichen Papierhandtücher, und es ihnen ermöglichen, in einem warmen abgeschiedenen Lage (z. B. saubere Käfige auf einem Erwärmung Pad platziert) zu erholen. Enthaaren die Tiere ein-by-one und während des gesamten Verfahrens sorgfältig überwachen. </li></ol> 3. Die topische Verabreichung von Forskolin oder Vehicle Control <ol><li> Die Tiere sollten behandelt ein zu einer Zeit werden. Kurz mit einatmen betäubend Isofluran indem Sie die Maus auf einer form-Nylon luftdurchlässige Filter, unter denen wurde eine Isofluran-gesättigten Papiertuch in einem gesättigten Isofluran-Deckel klare Glas in einem Abzug gebracht. Setzen Sie die Maus, um Isofluran für eine ausreichende Zeit, um freiwillige Muskelbewegungen zu unterdrücken, sondern um Spontanatmung (in der Regel 10 bis 20 sec) zu bewahren. Verlassen Sie das Tier in Isofluran zu lang wird in der Atemunterdrückung und zum Tod führen. Es ist besser, auf der Seite des &quot;going Licht&quot; und mit neu setzen die Maus kurz auf mehr Isofluran und nicht an überbelichtet, das Tier auf die Droge und Risiko Tod irren. </li><li> Entfernen Sie das Tier aus der Isofluran-Kammer und legen auf eine saubere, saugfähige Unterlage Bank. </li><li> Mit einer 1000 ul Mikropipette mit einem Einweg-Polypropylen-Spitze ausgestattet, erarbeiten 400 ul von 40% Rohprotein Forskolinextrakt (Fahrzeugkontrolltiere werden mit 70% Ethanol, 30% Propylenglykol allein zu empfangen). </li><li> Übertragen Sie das Extrakt auf dieRücken des Tieres durch Eintropfen es auf die Haut und dann unter Verwendung der Seite der Pipettenspitze, Abstrich der Extrakt über die Rückenhaut bis die gesamte Haut bedeckt. Es besteht keine Notwendigkeit, um die Haut nach der Anwendung auslöschen. </li><li> Bringen Sie die Maus, um seinem Käfig, und genau zu beobachten, bis er aus der Narkose erholt. </li><li> Damit nicht-Pigment cAMP Effekte sollten nicht verwechseln UV-Empfindlichkeit Experimente, brechen alle topische Behandlungen 2 Tage vor der UV-Exposition (Pigment Wirkung hält über mehrere Tage letzten topischen Behandlung). </li></ol> 4. Hautfarbe Messung durch reflektierende Farbmetrik <ol><li> Kurz betäuben die Maus mit inhalativen Isofluran (siehe oben). </li><li> Kalibrieren Sie einen Minolta-Kolorimeter, indem Sie den beweglichen Kopf auf dem standardisierten weiße Fläche mit dem Farbmessgerät zur Verfügung gestellt. </li><li> Setzen Sie den tragbaren Messkopf des Colorimeter bündig mit der Rückenhaut des Tieres sicherzustellen, dass die 1 cm 2 runde AperturE ist vollständig auf die Haut gedrückt. Nehmen Sie sich mindestens drei separate Messungen in verschiedenen Bereichen der Rückenhaut. </li><li> Berechnung der mittleren L *-Score ± SD pro Tier und pro Behandlungsgruppe. Reflexionsfarbmessung kann an jeder Stelle in dem Experiment durchgeführt werden. </li></ol> 5. Bestimmung der UV-Empfindlichkeit durch Berechnung der &quot;Minimal Erythematöse Dose&quot; (MED) <ol><li> Verwenden Sie Tiere, die entweder mit Fahrzeug oder Forskolin, wie oben beschrieben vorbehandelt wurden. Betäuben Tiere intraperitoneale Injektion einer Standardmischung von Ketamin und Xylazin (siehe oben). </li><li> Bereiten Sie ein Stück UV-Verschlussband für MED-Tests. Um Löcher in der Band zu erzeugen, verwenden Sie einen schweren Locher mit einem 1 cm 2 kreisförmigen Ausschnitt (2A und B). Löcher mit definierter Größe und symmetrische Anordnung in dem Band erleichtert das Erkennen von Veränderungen der Haut nach Bestrahlung. In jedes Loch in der Band, eine kleine, aber leicht lösbare Stück<html> der Band, die zu definierten Zeitpunkten während der UV-Belichtung entfernt kann die Verwaltung von verschiedenen UV-Dosen zu ermöglichen. </li><li> Sobald die Tiere ausreichend sediert, legen Sie das Band auf der Rückenfläche. Augen Schmiermittel sollte immer unter Vollnarkose eingesetzt werden. </li><li> Schalten Sie die UV-Quelle, die aus zwei Westinghouse F15T8UV-B-Lampen mit einer Spitzenleistung von 313 nm und einem Bereich von 280-370 nm liegt. Lassen Sie die Lampe auf eine konstante UV-Leistung ins Gleichgewicht wie von einem UV-Photometer mit einem UVB Sensor gemessen (dauert in der Regel ein paar Minuten für die Lampen, um sich aufzuwärmen). </li><li> Auf der Grundlage der UV-Durchlässigkeitsrate, wie durch die UV-Photometer gemessen wird, zu berechnen UV-Belichtungszeit für jede gewünschte Dosis. Zum Beispiel, UVB-Ausstoß Maßnahmen unserer Lampe 2,4 mW / cm 2. Daher zu verabreichen 5 kJ / m 2 wäre die Haut benötigen, um 208 sec der UVB-Strahlung (die 3 min und 28 s ist), wie nachstehend berechnet ausgesetzt werden: upload/50670/50670eq1.jpg &quot;/&gt; </li><li> Zeigen sediert Tiere (jeweils mit Verschlussband in place) Bauchfläche nach unten, auch UV-Bestrahlung zu gewährleisten. Um die gewählten Dosierungen von UV-Strahlung zu verabreichen, nacheinander entfernen Sie die kleine Verschlussbänder für die Löcher auf 1 cm an die richtigen Dosen von Strahlung aus zwei Bereichen der Haut. Daher kann unter Verwendung des obigen Beispiels, wenn 40 kJ / m 2 ist die größte Dosis in dem Experiment, dann das Tier unter der Lampe für 27 Min. und 47 Sek. insgesamt und der Haut in der 40 kJ / m 2 Zustand sein würde kein darüberliegenden Band die ganze Zeit. Jedoch würde Band über der 5 kJ / m 2 Zustand entfernt werden, wenn es in der Belichtungs restlichen 208 sek. Zeitpunkt der Bandentfernung sollte getan werden, so dass jeder Zustand Enden gleichzeitig. </li><li> Nach der UV-Exposition, ziehen Sie das Klebeband von der Rückenhaut vorsichtig, wobei nicht auf die Haut mit plötzlichen oder übermäßig kraftvolle Bewegungen rippen. Zeigen Tiere in einen warmen ruhigen Ort zu ermöglichenErholung von der Narkose. </li><li> Überwachung der Mäuse 24-48 h bis zur diskreten Bereichen Erythem (Rötung), Ödem oder schauen (Quellung) entsprechend den anatomischen Stellen auf die spezifische Dosis der UV-Bestrahlung ausgesetzt. Dokumentieren Hautbefunde fotografisch. </li><li> MED-Wert entspricht der minimalen Dosis von UV zu Entzündungen führt, wie durch Erytheme und / oder Ödeme der gesamten freiliegenden Kreis der Haut definiert. Beachten Sie, dass die Pigmentierung der Haut kann die Bestimmung der MED fordern jedoch, Erythem und Ödem kann immer noch in der Regel genau beurteilt, zum Teil dank der definierten Form der Öffnungen in der Band während der UV-Bestrahlung werden. </li></ol> 6. Statistische Analyse Analysieren von Daten zwischen Kohorten von Mäusen durch eine ANOVA mit Bonferroni Post-Test (Graph Pad PRISM). P-Werte &lt;0,05 werden als statistisch signifikant.

Die Autoren erklären, dass sie keine finanziellen Interessen konkurrieren.

Mit einem Tiermodell der hellhäutige Mensch, finden wir, dass die topische Anwendung einer Forskolin reichen rohen Wurzelextrakt robust dunkelt die Haut durch die Stimulierung der Melaninproduktion in der Haut. Epidermalen Melanin hängt von der Expression von Stammzellfaktor in der basalen Epidermis, wie es in der menschlichen Haut auftritt, aber nicht in genetisch nicht modifizierten Mäusehaut. Die Rückenhaut von Mäusen genetisch nicht modifizierten fehlt eine ausreichende Zahl von interfollikulären Melanozyten Pigment...

Die Inzidenz von Melanomen, die tödlichste Form von Hautkrebs, hat sich in den letzten Jahrzehnten in den Vereinigten Staaten vor allem bei hellhäutigen Personen gestiegen. Starke molekularen und epidemiologischen Beweise bringen UV-Strahlung als Hauptursache Umweltfaktor 2-5. Erhöhte UV-Strahlung in Form von Sonneneinstrahlung und Solarium Benutzung geeignet ist, für viel der Anstieg der Melanom-Inzidenz 6-7 verantwortlich zu sein. Melanom-Risiko scheint besonders mit Sonnenbrand 8, vor allem in frühen Lebens 9-10 verknüpft. Sonnenbrandgefahr verbunden ist, nicht nur Dosis und Intensität der UV-Belichtung, sondern auch durch Faktoren, die vererbte kutanen Reaktion auf UV-Strahlung beeinflussen. Pigmentierung der Haut ist eine der wichtigsten Determinanten der UV-Empfindlichkeit, Sonnenbrandrisiko und Krebsrisiko. Melanom im Vergleich zu dunkelhäutigen individua tritt etwa zwanzig mal häufiger bei hellhäutigen Personenls 11-13. Melanin, ein Pigment von Melanozyten in der Epidermis produziert wird, ist die wichtigste Determinante der Teint. Melanin wird in zwei Hauptarten: (1) Eumelanin, eine dunkelbraune / schwarze Pigment wirksam beim Absorbieren der Energie der UV-Strahlung, und (2) pheomelanin, eine rötlich / blonde Pigment weniger effektiv bei der Verhinderung des Eindringens der UV-Photonen in die Haut. Hautfarbe, UV-Empfindlichkeit und Melanom-Risiko weitgehend von epidermalen Eumelanin Inhalt 14-15 bestimmt. Je mehr Eumelanin in der Epidermis können die weniger UV-Photonen in die Haut eindringen. Wegen der niedrigen Niveaus der angeborenen Eumelanin sind hellhäutige Menschen viel anfälliger für akute und chronische Wirkungen von UV-Strahlung 16-18. Die Pigmentierung der Haut, Melanom Risiko und die Fähigkeit, &quot;tan&quot; nach UV-Belastung korrelierten mit der Signalisierung Fähigkeit des Melanocortin-1-Rezeptor (Mc1r), einen G S-gekoppelte sieben Trans surface Rezeptor auf Melanozyten 19-22. Wenn Mc1r bindet seinem verwandten hochaffinen Liganden α-Melanozyten-stimulierendes Hormon (α-MSH), gibt es die Aktivierung von Adenylatzyklase und die Produktion des second messenger cAMP-23. Die normale physiologische Reaktion der Haut nach UV-Exposition umfasst epidermalen Herstellung von α-MSH durch Keratinozyten 24-29. Wir und andere vermuten, dass Keratinozyten stamm α-MSH bindet an Mc1r auf epidermalen Melanozyten, die Einleitung nachgelagerten Produktion des second messenger cAMP durch Aktivierung von Adenylatzyklase 30. cAMP-Spiegel kontrollieren viele Bereiche des Melanozyten-Differenzierung, einschließlich Überlebenswege, DNA-Reparatur und Pigmentsynthese. Mc1r Signal-und cAMP-Pigment Eumelanin Enzymwerte und Produktion deutlich zu induzieren. Wenn Mc1r Signalisierung ist intakt und melanozytären cAMP-Spiegel robust sind, wird Eumelanin produziert und die Haut dunkler. Wenn jedoch Mc1r Signalisierungs defekt ist undcytoplasmatische cAMP-Spiegel niedrig bleiben, wird pheomelanin statt 1 hergestellt. Eumelanin-Synthese kann pharmakologisch durch Mittel, die cAMP-Spiegel erhöhen 1,14,31-35 stimuliert werden. Da die Mc1r Protein ist ein wichtiger Regulator der Melanom-Risiko bei Menschen von 36 bis 46, wir sind interessiert an Mechanismen, durch die Melanozyten Mc1r schützt vor UV-induzierten Krebsentstehung. Als Grundlage für unsere Studien erzielten wir eine transgene Mc1r-Variante Mausmodell auf einem reinen C57BL / 6 genetischen Hintergrund ein. In diesem Modell, Stammzellfaktor (SCF) wird konstitutiv in der basalen Epidermis und epidermale interfollikuläre Melanozyten in der Haut im Laufe des Lebens 47 gehalten wird, im Gegensatz zu den nicht-transgenen Mäusen, in denen Melanozyten zu lokalisieren, um die Dermis in den Haarfollikeln. Mit dem K14-SCF-Transgen integriert, wird die Epidermis mit der besonderen Eigenschaft der Melaninpigmente Pigments pigmentiertBelastung des Tieres ein. K14-SCF-Mäuse auf dem C57BL / 6 genetischen Hintergrund mit Wildtyp-Signal Mc1r haben tiefschwarze Haut, die durch sehr hohe Pigment Eumelanin charakterisiert. Nicht überraschend sind diese Tiere sehr UV-beständig. Im Gegensatz dazu genetisch angepasst K14-SCF C57BL / 6 Tiere, die eine mutierte inaktive Mc1r Hafen fast keine Eumelanin in der Epidermis. Stattdessen diese &quot;Erweiterung&quot; Tieren (Mc1r e / e) haben eine helle Haut Teint durch Ablagerung von Pigment Phäomelanin (Abbildung 1A) verursacht und sind viel mehr UV-empfindliche 48-49. Pharmakologische Verbindungen mit chemischen Eigenschaften, die das Eindringen in die Haut ermöglichen, haben nachweislich eine starke induzieren Eumelanin in der Verlängerung (Mc1r e / e) K14-SCF-Tiermodell durch direkte Manipulation cAMP-Spiegel in epidermalen Melanozyten in der Haut. Melanin Hochregulation in diesem Modell ist rvon Adenylylzyklase Aktivierung 1 sowie Phosphodiesterase-4-Hemmung 35 eported. In diesem Artikel zeigen wir die Vorbereitung und die topische Anwendung von Forskolin in Verlängerung (Mc1r e / e) K14-SCF Tiere, welches Modell die hellhäutigen UV-empfindliche Menschen. Wir zeigen, dass zweimal tägliche Anwendung des Medikaments fördert beschleunigte Melanisierung aufgrund epidermale Ablagerung von Melanin, dass die Haut dunkler ist, und dass induzierte epidermale Melanin schützt vor UV-bedingten Sonnenbrand durch Messung der &quot;minimal gerötete Dosis&quot; (MED) 48.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Reagenzien</td></tr><tr><td>Coleus Forskoli Extrakt 20%</td><td>Buckton Scott USA Inc.</td><td>n/a</td><td>Princeton, NJ</td></tr><tr><td>Isothesia, Isofluran, USP</td><td>Butler Schein</td><td>NCD 11695-6776-1</td><td>Dublin, OH, USA</td></tr><tr><td>Xylazin</td><td>Anased Injection</td><td>LA04612</td><td>Shenandoah, Iowa, USA</td></tr><tr><td>Ketamin HCl, USP</td><td>Putney</td><td>NDC 26637-411-01</td><td>St. Joseph, MO, USA</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Decon Labs.</td><td>2705</td><td></td></tr><tr><td>Propylenglykol</td><td>Adesco</td><td>05751L</td><td>Solon, OH, USA</td></tr><tr><td>Enthaarungscreme, Nair</td><td>Church Dwight</td><td>JF-11 4381322</td><td>Priceton, NJ</td></tr><tr><td colspan="4">EQUIPMENT</td></tr><tr><td>keimtötende Hg-Lampe UV-B</td><td>Westinghouse</td><td>F15T8UV-B</td><td></td></tr><tr><td>Radiometer Photometer</td><td>Internationales Licht</td><td>1LT400A</td><td>Peabody, MA,USA</td></tr><tr><td>Chromameter</td><td>Konica Minolta</td><td>CR-400</td><td>Ramsey, NJ, USA</td></tr><tr><td>Datenprozessor für Chromameter CR-400</td><td>Konica Monilta</td><td>DR-400</td><td>Ramsey, NJ, USA</td></tr></tbody></table>

pharmakologische induktion der epidermalen melanin und schutz vor sonnenbrand in einem humanisierten mausmodell

Pharmacologic Induction of Epidermal Melanin and Protection Against Sunburn in a Humanized Mouse Model

Fairness der Haut, UV-Empfindlichkeit und Hautkrebsrisiko alle korrelieren mit der physiologischen Funktion des Melanocortin-1-Rezeptor, einen G s-gekoppelten Signalprotein auf der Oberfläche der Melanozyten gefunden. Mc1r stimuliert Adenylatzyklase und cAMP-Produktion, die wiederum, up-reguliert melanozytären Produktion von Melanin in der Haut. Um die Mechanismen, durch die Signalisierung Mc1r schützt die Haut vor UV-Schädigung zu untersuchen, diese Studie basiert auf einem Maus-Modell mit &quot;humanisiert Haut&quot;, basierend auf epidermalen Expression von Stammzellfaktor (SCF). K14-SCF-transgenen Mäusen behalten Melanozyten in der Epidermis und haben daher die Fähigkeit, Melanin in der Epidermis abzuscheiden. In diesem Tiermodell, Wildtyp-Status Mc1r Ergebnisse in robuster Ablagerung von schwarzem Eumelanin Pigment und einem UV-geschützt Phänotyp. Im Gegensatz dazu K14-SCF Tiere mit defekt Mc1r Signal Fähigkeit zeigen eine rot / blonde Pigmentierung, sehr wenig Eumelanin in der Haut undein UV-sensitiven Phänotyp. Argumentation, dass Eumelanin Ablagerungen durch topische Mittel, die Mc1r Signalisierung imitieren verbessert werden, fanden wir, dass die direkte Anwendung von Forskolin Extrakt auf die Haut Mc1r mangel hellhäutigen Mäusen führte robust Eumelanin Induktions-und UV-Schutz ein. Hier beschreiben wir die Verfahren zur Herstellung und Anwendung eines Forskolin haltige Naturwurzelextrakt zur K14-SCF hellhäutigen Mäusen und berichten über eine Methode zur Messung der UV-Empfindlichkeit durch die Bestimmung minimale erythematöse Dosis (MED). Mit diesem Tiermodell ist es möglich zu untersuchen, wie cAMP epidermalen Induktion und Melanisierung der Haut beeinflussen physiologische Reaktionen auf UV-Exposition.

C57BL / 6 Mäuse wurden am eumelanotic, pheomelanotic oder amelanotischen Hinter Einbeziehung der K14-SCF Transgen, wie beschrieben (Fig. 1A) erzeugt. Kohorten von hellhäutigen Erweiterung (Mc1r e / e, Tyr + / +) wurden die Mäuse mit topisch zweimal täglich entweder Fahrzeug (70% Ethanol, 30% Propylenglykol) oder 40% Rohprotein Coleus forskohlii Wurzelextrakt (80 uM pro behandelt Dosis) für 5 Tage (Abb. 2B). Wirkungen der topischen Behandlungen auf...

Epidermal Melanin wird durch die topische Anwendung von Forskolin in einem murinen Modell der hellhäutigen UV-empfindliche Menschen verursachte. Pharmakologische Manipulation von cAMP-Konzentrationen in der Haut und Epidermis stark verdunkelt Schutz gegen UV-vermittelte Entzündungen (Sonnenbrand), wie durch die minimale erythematöse Dosis (MED)-Assay gemessen.

Pharmakologische Induktion der epidermalen Melanin und Schutz vor Sonnenbrand in einem humanisierten Mausmodell

Fairness of skin, UV sensitivity and skin cancer  risk all correlate with the physiologic function of the melanocortin 1  receptor, a Gs-coupled signaling ...

Das übergeordnete Ziel des folgenden Experiments besteht darin, die UV-Empfindlichkeit durch Bestimmung der minimalen Erythem-Dosis bei hellhäutigen Mäusen, die zuvor mit vier Hautbehandlungen vorbehandelt wurden, zu messen. Dies wird erreicht, indem zunächst die dorsale Haut der Mäuse durch Rasieren und Ablation für die Bestrahlung vorbereitet wird. Anschließend werden topische Behandlungen mit Forskolin auf die dorsale Haut aufgetragen.Dann werden die Mäuse unterschiedlichen Dosen an UV-Bestrahlung ausgesetzt, um die Wirkung von vier mittelbaren Melonen auf die durch UV induzierte Entzündung zu bestimmen. Es werden Ergebnisse erhalten, die zeigen, dass die topische Anwendung von Forline die Hautpigmentierung stark erhöht und dass Tiere mit pharmakologisch verstärktem Me aufgrund der MED-Untersuchung UV-resistent sind. Dies sind Konzeptnachweis-Studien, die belegen, dass es möglich ist, pharmakologisch eine Bräunung bei einer Person hervorzurufen, die aufgrund eines Defekts in einem sehr wichtigen Melanozyten-Gen, dem Melanocortin-1-Rezeptor oder MC1R, nicht in der Lage ist, sich zu bräunen. Bei menschlichen Populationen korreliert der Funktionsverlust von MC1R mit UV-Empfindlichk

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Forschung

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Medizin

In diesem Video werden vom Menschen stammende Melanomzellen subkutan in die Flankenregion einer immungeschwächten Maus implantiert. Das PDX-Modell ermöglicht die präklinische Untersuchung von Melanomzellen, die die in  vivo beobachtete Tumorheterogenität und Melanomaggressivität besser rekapitulieren.

Patienten-abgeleitete Xenotransplantat-Modellierung: Eine Technik zur Generierung von Melanom-Mausmodellen

Dieses Video beschreibt das Verfahren zur Induktion einer zweistufigen Hautkarzinogenese, um die Tumorinitiierung durch topische Anwendung von Chemikalien zu untersuchen. Im ersten Schritt wird ein Mutagen, DMBA, auf die Haut eines Mausmodells aufgetragen, das die Tumorbildung einleitet, indem es Mutationen in den Stammzellen verursacht, gefolgt von der Anwendung eines Wachstumsstimulators, TPA, der die Bildung von Hautpapillomen beschleunigt.

Chemisch induziertes zweistufiges Modell der Hautkarzinogenese: Ein experimentelles In vivo Mausmodell für Hautkrebs

Dieses Video beschreibt eine Methode zur Messung der UV-Empfindlichkeit in einem humanisierten Mausmodell – einem Mausmodell, das die menschliche Haut nachahmt. Wir bestimmen die minimale erythematöse Dosis (MED) der UV-Strahlung, die Erytheme oder Ödeme auf der Haut verursachen kann. Die Methode kann helfen, die Wirksamkeit von Medikamenten herauszufinden, die zur Verringerung der UV-Empfindlichkeit eingesetzt werden.

Minimaler erythematöser Dosis-Assay: Eine Methode zur Messung der UV-Empfindlichkeit in Mausmodellen

Wir beschreiben drei experimentelle Methoden zur Bewertung der Hypopigmentation Aktivität von Chemikalien, die in-vitro-: Quantifizierung der 1) zellulären Tyrosinase-Aktivität und Melanin (2) Inhalt und (3) Messung von Melanin durch zelluläre Melanin Färbung und Bildanalyse.

Quantifizierung der Hypopigmentation Aktivität In Vitro

Das folgende Verfahren beschreibt eine Methode zur räumlichen und zeitlichen Kontrolle der melanozytischen Tumorinitiation in der Murin-Sdorsal-Haut mit Hilfe eines gentechnisch veränderten Mausmodells. Dieses Protokoll beschreibt sowohl die makroskopische als auch die mikroskopische kutane Melanom-Annenentzündung.

Räumliche und zeitweilige Kontrolle der Murine Melanom-Initiation aus Mutant Melanocyte Stammzellen

Die zweistufige Hautkarzinogenese wird durch zwei topisch aufgetragene Chemikalien induziert. Ein Mutagen7,12-Dimethylbenz[a]anthracen) verursacht Mutationen in den epidermalen Zellen und eine kontinuierliche Anwendung des allgemeinen Wachstumsstimulators 12-O-Tetradecanoyl phorbol-13-Acetat beschleunigt die Bildung von Hautpapilloma.

Chemisch-induzierte Hautkarzinogenese Modell mit Dimethylbenz[a]Anthracen und 12-O-Tetradecanoyl Phorbol-13-Acetat (DMBA-TPA)

Das Ziel dieses Protokolls ist es, die vorübergehende In-vivo-Produktion von nicht-letalen Mengen an reaktiven Sauerstoffspezies (ROS) in der Haut von Mäusen zu induzieren und so die physiologischen Reaktionen im Gewebe weiter zu fördern.

Stimulation von Stammzellnischen und Geweberegeneration in der Haut von Mäusen durch schaltbare Protoporphyrin IX-abhängige Photogeneration reaktiver Sauerstoffspezies in situ

Hier beschreiben wir ein optimiertes Direktreprogrammierungssystem für Melanozyten und ein hocheffizientes, konzentriertes Virusverpackungssystem, das eine reibungslose direkte Reprogrammierung gewährleistet.

Direkte Reprogrammierung von Mausfibroblasten in Melanozyten

Das Protokoll beschreibt eine Studie über die systemischen und lokalen Auswirkungen der Exposition gegenüber ultraviolettem B auf die Haut bei Mäusen.

Untersuchung der chronischen Exposition von Mäusen gegenüber ultravioletter B-Strahlung 

Die Studie zeigt die Rolle der Haut bei der Modulation der Immunantwort bei Mäusen durch epikutane (EC) Immunisierung. Die EC-Immunisierung mit einem Proteinantigen kann in Kombination mit erregerassoziierten molekularen Mustern Immunantworten bei Kontaktüberempfindlichkeit unterdrücken oder die hautinduzierte Suppression rückgängig machen. Die EC-Immunisierung ist vielversprechend und bietet einen wirksamen, nadelfreien Ansatz für die Immuntherapie.

Mausmodell der epikutan induzierten Immunmodulation

Ein standardisiertes Protokoll zur Induzierung vorzeitiger Alterung bei HNM mittels tBHP, standardisierte Protokolle zur Analyse wichtiger Senezenzmarker, einschließlich Wachstumsstillstand, SA-β-Galaktosidase-Aktivität und SASP-Faktoren.

Ein standardisiertes Protokoll zur Induzierung stressbedingter vorzeitiger Seneszenz in primären menschlichen Melanozyten mittels Tert-Butylhydroperoxid

Erfahren Sie, wie Forskolin die epidermale Melaninproduktion in einem humanisierten Mausmodell induziert und vor UV-induzierter Entzündung schützt. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung pharmakologischer Bräunungsstrategien.

Pharmakologische Induktion der epidermalen Melanin und Schutz vor Sonnenbrand in einem humanisierten Mausmodell

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